基于线粒体自噬PINK1/Parkin信号通路的枳实、麸炒枳实和烫枳实对功能性消化不良大鼠治疗作用比较

目的基于线粒体自噬PINK1/Parkin信号通路对比枳实、麸炒枳实和烫枳实对功能性消化不良(FD)大鼠的治疗作用。方法将36只大鼠随机分为正常组、模型组、多潘立酮组、枳实组、麸炒枳实组、烫枳实组。除正常组外其他各组采用碘乙酰胺灌胃结合夹尾刺激法制作FD大鼠模型。造模结束后各给药组给予相应药液灌胃,模型组和正常组给予等体积生理盐水灌胃,持续14 d。造模和给药时,记录大鼠饮食量、饮水量和体质量。给药结束后,测定大鼠小肠推进率,苏木-伊红(HE)染色观察胃组织损伤情况,Western blot检测自噬相关蛋白PINK1、Parkin、Beclin-1、p62的表达。结果与模型组比较,各给药组小肠推进率提高。在造模期间,与正常组比较,各组大鼠的体质量增长减慢,平均日饮食量降低,模型组大鼠平均日饮水量降低。在给药期间,与模型组比较,多潘立酮组、麸炒枳实组和烫枳实组平均日饮食量增加;与模型组比较,麸炒枳实组PINK1、Parkin蛋白表达增加,烫枳实组p62蛋白表达提高、Beclin-1蛋白表达降低,枳实组Beclin-1蛋白表达降低。结论枳实、麸炒枳实和烫枳实治疗FD的作用机制可能与抑制PINK1/Parkin信号通路激活有关,麸炒枳实对FD大鼠的治疗效果优于枳实和烫枳实。

气质联用法分析麸炒对枳实生、鲜品挥发油成分的影响

目的:比较研究枳实生、鲜品及其麸炒品挥发油化学成分及含量的变化。方法:采用GC-MS联用技术分析样品的挥发油化学成分,归一法分析挥发油各成分的相对含量。结果:枳实生、鲜品经麸炒后,挥发油含量及主要组分含量均有一定变化,其中柠檬烯的含量较生品增加了10.4%。共鉴定出26个化合物,各样品主要成分均为柠檬烯,β-芳樟醇,β-蒎烯,1R-α-蒎烯,左旋-β-蒎烯。结论:枳实生、鲜品麸炒前后挥发油化学成分大部分相似,由于加热及辅料影响,挥发油部分组分消失。

枳实生品与麸炒品中4个黄酮类成分表观油水分配系数的比较研究

目的：比较枳实生品和麸炒品中芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷4个黄酮类成分油水分配系数。方法：采用摇瓶法和高效液相色谱相结合方法，比较枳实和麸炒枳实水煎液中4个黄酮类成分芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷在正辛醇-水／缓冲盐溶液中的油水分配系数。结果：各个pH点，枳实生品和麸炒品水煎液中4个黄酮类成分的油水分配系数的大小没有规律性变化。但是4个黄酮类成分在pH5、pH7等条件下，麸炒品中的油水分配系数高于生品。结论：枳实麸炒后除新橙皮苷外均有利于其他3个黄酮类成分的分布吸收，这一结果也在一定程度上说明了枳实麸炒后健脾和胃作用增强的机制。

不同贮存期麦夫炒枳实的质量研究

采用理化和薄层鉴别方法对不同贮存期麦夫炒枳实进行了定性研究，用ＨＰＬＣ法测定了样品中辛弗林的含量，并对样品中的挥发油、浸出物作了定量分析。结果表明：随着贮存期的延长，麦夫炒枳实中辛弗林、挥发油、浸出物含量明显下降。

枳实生制品提取液中黄酮类成分及其单体在Caco-2细胞模型中的吸收转运研究

目的比较研究枳实和麸炒枳实中黄酮类成分橙皮苷、新橙皮苷及其单体在Caco-2细胞模型中的吸收转运机制,从而解析炮制原理。方法利用Caco-2细胞模型研究枳实和麸炒枳实中黄酮类成分橙皮苷、新橙皮苷及其单体的双向跨膜转运特征,通过高效液相色谱法测定和分析枳实炮制前后橙皮苷、新橙皮苷经细胞转运后的含量变化,计算表观渗透系数(Papp),考察时间对二者吸收和转运的影响。结果麸炒枳实的橙皮苷和新橙皮苷双侧表观渗透系数值总体上大于枳实,各药液双侧转运速率均在60 min较高,之后随着时间的延长,呈现降低趋势。结论枳实和麸炒枳实中的黄酮类成分橙皮苷、新橙皮苷及其单体具有良好的肠吸收特性,麸炒能够增加枳实内这两种黄酮类成分口服后的肠吸收,且在麸炒后橙皮苷的变化较为明显。

麸炒枳实炮制工艺研究及质量分析

目的多指标优选麸炒枳实最佳炮制工艺。方法以特征图谱为定性指标,饮片性状为炮制程度判断指标,辛弗林、柚皮苷、新橙皮苷的质量分数为定量指标,选取炒制时间、炒制温度、加麸量为麸炒枳实炮制主要因素,采用正交实验设计与主成分分析法优选麸炒枳实炮制工艺。结果对15批麸炒枳实建立特征图谱,标定共有峰7个,并指认了柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷和辛弗林4个化合物。通过正交方差分析与主成分分析,确定麸炒枳实最佳炮制工艺为:每100 kg麸炒枳实用麦麸量为10 kg,炒制温度为220℃,炒制时间为5 min。不同产地生品与其炮制品特征色谱概貌一致,整体分离度较好。结论优选的麸炒枳实炮制工艺切实可行。

麸炒枳实对功能性消化不良大鼠肠道菌群的影响

目的采用16S rDNA高通量测序技术研究麸炒枳实对功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)大鼠肠道菌群的影响。方法以复合因素造模法建立FD大鼠模型,以一般状态、体质量变化、胃排空率及肠推进率验证模型;采用Illumina Hiseq对大鼠盲肠粪便进行16S rDNA基因V4可变区检测,以Alpha多样性、Beta多样性、门、属水平的物种组成进行分析。结果与空白组相比,模型组大鼠一般状态差,体质量、胃排空率及肠推进率明显降低,肠道菌群多样性、均匀度降低,模型组大鼠在门、属水平的物种组成及相对丰度发生了一定变化,给予多潘立酮、枳实治疗后可明显逆转这些现象。结论功能性消化不良大鼠肠道菌群紊乱,服用枳实可扶植肠道有益菌生长,抑制有害菌繁殖而发挥治疗作用。

用气相色谱质谱联用仪(GC-MS)分析枳实麸炒前后挥发油化学成分的变化

目的:建立枳实挥发油化学成分的气相色谱质谱联用仪(GC-MS)分析方法,并比较麸炒前后挥发油变化。方法:采用水蒸汽蒸馏法提取枳实挥发油,并用GC-MS对挥发油化学成分进行分离鉴定,用色谱峰面积归一化法计算各成分的相对百分含量。结果:枳实生品挥发油含量为1.87%,麸炒品挥发油含量为0.46%,共鉴定出化学成分24个,其中生品22个,麸炒品24个,各占挥发油总量的99.08%、98.98%。主要成分为柠檬油精(67.09%、67.46%)、γ-松油烯(9.09%、9.41%)、芳樟醇(5.38%、5.03%)、4-松油醇(4.90%、4.67%)。结论:枳实麸炒后挥发油含量大大降低,但化学成分组成及主要成分的相对百分含量变化不大。

枳实麸炒前后对功能性消化不良大鼠内质网应激相关因子的影响

目的研究枳实麸炒前后对功能性消化不良大鼠胃组织内质网应激相关因子的影响。方法将60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、2.7 mg·kg^(-1)多潘立酮组、9 g·kg^(-1)枳实生品组(RFAI)、9 g·kg^(-1)枳实麸品组(FFAIWB),采用“郭海军夹尾法”加以改进,刺激21 d复制功能性消化不良大鼠模型,造模结束后,灌胃给药14 d。采用定量法测定大鼠的肠推进率和胃排空率;HE染色法检测大鼠胃窦的病理情况;ELISA法检测血清中胃泌素的含量;RT-PCR法检测胃窦GRP78、IRE1、JNK的表达;Western Blot法检测Bcl-2、Bax的表达。结果与空白组比较,模型组大鼠的肠推进率、胃排空率和血清中胃泌素的含量显著下降;胃窦IRE1、GRP78、JNK mRNA的表达和Bax蛋白的表达明显增加,Bcl-2蛋白的表达下降;HE染色发现各组大鼠胃组织无明显器质性病变,但模型组大鼠的胃窦炎性浸润明显。与模型组比较,多潘立酮、枳实生品和枳实麸品组大鼠的消化不良症状有显著改善。结论枳实治疗模型大鼠与调控IRE1/GRP78/JNK信号通路有关,且麸炒后效果更佳。

基于化学计量学的麸炒枳实与烫枳实比较研究

目的利用指纹图谱与化学计量学进行麸炒枳实和烫枳实的质量评价及比较研究,为临床选择使用枳实2种饮片提供部分科学依据。方法依据中国药典2020年版和《北京市中药饮片炮制规范》(2008年版)炮制麸炒枳实与烫枳实2种饮片,采用超高效液相色谱法分别建立2种饮片的指纹图谱,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件进行相似度分析,利用化学计量学进行2种饮片指纹图谱中14个共有成分及辛弗林的比较研究,并对2种饮片中已指认的9个成分进行定量分析与比较。结果麸炒枳实和烫枳实与各自对照指纹图谱相似度>0.9,同一批次麸炒枳实与烫枳实相似度>0.9。与对照品比对指认出芸香柚皮苷、柚皮苷、野漆树苷、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素、橙皮素、川陈皮素8个共有峰。聚类分析结果显示2种饮片无明显聚类。PCA分析显示麸炒枳实与烫枳实不能完全区分为2类。VIP法筛选出对区分麸炒枳实和烫枳实影响较大的7个成分,分别是柚皮素、柚皮苷、野漆树苷、X8、橙皮素、川陈皮素、X1。定量分析结果显示,与麸炒枳实组比较,烫枳实组中柚皮苷含量较低,野漆树苷、柚皮素含量较高,且有显著性差异。结论本研究建立了麸炒枳实与烫枳实的定量指纹图谱及黄酮类多成分含量测定的质量评价方法,研究结果可为临床选择使用枳实2种饮片提供部分科学依据。

基于UPLC-Q-TOF-MS^E技术分析麸炒前后枳实及其辅料麦麸化学成分的差异

目的:应用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱法(UPLC-Q-TOF-MS^E)技术结合UNIFI数据库筛查方法快速分析和鉴定枳实麸炒前后的差异性化学成分以及辅料麦麸的化学成分。方法:采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流速0.3 mL·min^-1,进样量2μL,流动相0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)梯度洗脱(0~11 min,98%~70%B;11~15 min,70%~55%B;15~16 min,55%~35%B;16~20 min,35%~5%B;20~20.5 min,5%~98%B;20.5~22 min,98%B);选择电喷雾离子源(ESI),正离子检测模式,质量扫描范围m/z 50~1 500;结合主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)寻找枳实炮制前后的差异性成分,并检测炮制后麦麸的化学成分。结果:初步鉴定枳实中含有64种化学成分,麸炒枳实58种化学成分,炮制后麦麸18种化学成分,枳实与麸炒枳实差异性成分19个,主要为挥发油、黄酮类、酚酸类、香豆素类和皂苷类成分。结论:从麸炒前后差异性成分和辅料麦麸携带的化学成分结果分析,麸炒能够缓和枳实的峻烈之性,证实了麸炒对于枳实炮制工艺的必要性,可为枳实的炮制机制研究提供较为全面的实验依据。