银杏叶提取物对人乳腺癌MCF7细胞脂肪酸合酶的抑制作用

目的 研究银杏叶提取物对人乳腺癌MCF7细胞脂肪酸合酶 (fattyacidsynthase ,FAS)的抑制作用。方法 MTT法测定人乳腺癌MCF7细胞增殖速度 ,采用超速离心技术部分纯化人乳腺癌MCF7细胞FAS。不同浓度银杏叶提取物与FAS相互作用不同时间后 ,加入底物 ,用分光光度法观察银杏叶提取物对FAS的抑制作用。结果 银杏叶提取物对人乳腺癌MCF7细胞的增殖有一定的抑制作用。人乳腺癌MCF7细胞FAS被部分纯化 ,三种浓度银杏叶提取物 (0 .1,0 .5 ,1g L)与FAS在催化前相互作用 0、5和 10min ,对FAS活性的抑制率分别为 14 .6 0 %、2 0 .30 %和 32 .75 % (0 .1g L) ;33.5 0 %、4 0 .30 %和 84 .0 3% (0 .5 g L) ;90 .6 0 %、88.30 %和 88.0 5 % (1g L)。结论 银杏叶提取物对人乳腺癌MCF7细胞FAS具有抑制作用 ;作用强度既依赖于抑制剂浓度 。

miR-302b-3p靶向SQSTM1调控乳腺癌MCF7细胞的自噬

目的探讨miR-302b-3p靶向SQSTM1调控乳腺癌MCF7细胞的自噬。方法运用TargetScan在线分析miR-302b-3p与SQSTM1的相关性;将SQSTM1的3′UTR构建进PMIR-RB-REPORT质粒,利用luciferase assay检测miR-302b-3p是否靶向调控SQSTM1;用RNA转染试剂转染miR-302b-3p mimics或miR-302b-3p inhibitor进乳腺癌MCF7细胞,通过Western blot检测SQSTM1的表达量和乳腺癌MCF7细胞自噬标志蛋白表达情况。单丹磺酰尸胺染色检测细胞自噬发生水平。结果 miR-302b-3p靶向SQSTM1的3′UTR的584-590的位置;过表达miR-302b-3p时,SQSTM1的表达量明显下降(P<0.05),细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin1的表达量明显上升(P<0.05),MCF7自噬发生水平降低(P<0.05);敲低miR-302b-3p时,SQSTM1的表达量明显上升(P<0.05),细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin1的表达量明显下降(P<0.05),MCF7自噬发生水平升高(P<0.05)。结论 miR-302b-3p靶向SQSTM1的3′UTR后降低SQSTM1的蛋白水平,最终抑制乳腺癌细胞MCF7的自噬。

乳腺癌相关成纤维细胞对MCF7细胞调控效应的研究

目的研究乳腺癌相关成纤维细胞(CAFs)对MCF7细胞的调控效应,探讨肿瘤微环境在乳腺癌发展中的作用。方法采用Ⅰ型胶原酶法分离并培养CAFs。DCFHDA法进行活性氧自由基(ROS)检测。应用鸡胚卵黄囊尿囊膜进行血管生成实验。结果共培养乳腺癌MCF7细胞和CAFs能促进二者增殖,并可促进ROS生成。在共培养体系中加入过氧化物酶能抑制ROS生成。另外,共培养能明显促进乳腺癌细胞新生血管的生成,而在CAFs中过表达过氧化物酶能显著抑制该过程。结论 CAFs对乳腺癌MCF7细胞的ROS表达具有调节作用,并可促进肿瘤新血管生成。

黄酮类化合物与阿霉素联用对乳腺癌细胞MCF7凋亡的影响

为了考察6种不同结构黄酮类化合物(5-OH-3′-OCH3黄酮,7-OH-3′-OCH3黄酮,7-OH-2′-OCH3黄酮,3,5,7,4′-4OH黄酮,5,7,3′,4′-4OH黄酮,Neodiosmin)对乳腺癌细胞MCF7的药物敏感性,综合运用MTT法,Hoechst 33342染色法以及流式细胞术评价黄酮类化合物与阿霉素联用对MCF7的抑制效果。结果表明,部分黄酮类化合物细胞毒性较低,其中5-OH-3′-OCH3黄酮,7-OH-3′-OCH3黄酮,3,5,7,4′-4OH黄酮能明显增强阿霉素对MCF7细胞的抑制作用。同时发现黄酮类化合物与阿霉素联用在MFC7细胞上所表现出来的协同作用可能与黄酮类化合物A环上5位与7位的羟基取代相关。

海绵来源的smenospongine诱导乳腺癌MCF7细胞凋亡机制研究

目的研究海绵Spongia pertusa Esper来源的smenospongine(Sme)诱导乳腺癌细胞MCF7凋亡的作用机制。方法使用CCK-8法检测Sme对MCF7细胞活力的影响;DAPI染色检测凋亡细胞的细胞核形态;使用流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位;Western blotting检测Sme对Bax、Bcl2、细胞色素C(cytochorome C)、p-p38和p38蛋白水平表达的影响。结果 CCK-8法检测结果表明,Sme抑制MCF7增殖,IC50值为(16.46±0.88)μmol/L;DAPI染色结果和Annexin VFITC/PI染色结果显示Sme诱导细胞凋亡。随着加药浓度的增加,细胞凋亡率从4.18%逐渐升至21.49%;流式细胞仪检测结果表明Sme引发MCF7细胞内线粒体膜电位下降;Western blotting结果显示Sme激活了内源性凋亡途径和p38丝裂源活化蛋白激酶(MAPK)信号通路。结论 Sme可能通过激活p38 MAPK通路,诱导细胞内源性凋亡发挥抗乳腺癌作用。

野鸢尾黄素对人乳腺癌细胞MCF7增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨野鸢尾黄素对人乳腺癌细胞MCF7增殖、侵袭和迁移的影响及其可能的作用机制。方法将MCF7细胞分为低剂量组、高剂量组和对照组。低、高剂量组分别加入40μmol/L和80μmol/L野鸢尾黄素,对照组不加任何药物。用CCK-8实验检测细胞增殖能力,用细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,用Tranwell小室实验检测细胞的侵袭能力,用蛋白质印迹法检测β-catenin蛋白及p-GSK-3β-ser9的表达水平。结果干预48 h后,对照组和低、高剂量组的细胞增殖率分别为(100±4.00)%、(62.9±2.60)%、(32.2±6.25)%,迁移的距离分别为(392±7.32)μm、(272±17.45)μm和(92±5.36)μm,侵袭细胞数量分别为(130±3.33)个、(96±3.33)个和(66±2.66)个,β-catenin相对GAPDH的相对表达量分别为0.567±0.06、0.312±0.06和0.243±0.05,p-GSK-3β-ser9相对GAPDH的相对表达量分别为0.501±0.06、0.236±0.04和0.166±0.03。低、高剂量组的上述指标分别与对照组比较,以及高剂量组与低剂量组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论野鸢尾黄素可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路,从而抑制MCF7细胞的增殖、迁移及侵袭。

miR-134-5p靶向MRPL58调控乳腺癌细胞MCF7的凋亡研究

目的:探讨miR-134-5p靶向MRPL58调控乳腺癌细胞MCF7凋亡的潜在分子机制。方法:通过高通量测序检测正常乳腺上皮细胞MCF10A与乳腺癌细胞MCF7中的差异miRNA。在乳腺癌细胞MCF7中过表达差异倍数大于7的miRNA,检测其凋亡水平。通过miRDB在线分析miRNA潜在的靶标基因。通过过表达或敲低miRNA和荧光素酶报告实验确定miRNA的靶标基因。结果:正常乳腺上皮细胞MCF10A与乳腺癌细胞MCF7的总miRNA高通量测序结果发现,MCF10A细胞中miRNA比乳腺癌细胞MCF7表达量大于7倍的有30种。过表达上述miRNA后,miR-134-5p增强了乳腺癌细胞MCF7的凋亡水平(P<0.05)。敲低miR-134-5p后,乳腺癌细胞MCF7的凋亡水平下降(P<0.05)。miR-134-5p在癌旁组织中的表达水平高于乳腺癌组织(P<0.05)。过表达miR-134-5p后,KIAA0040,ZMAT5,RAB27A,TESMIN,MRPL58,ZFPM2,NUP98的表达水平下降(P<0.05)。敲低上述基因后,敲低MRPL58时乳腺癌细胞MCF7的凋亡水平上升(P<0.05)。过表达MRPL58后,乳腺癌细胞MCF7的凋亡水平下降。敲低miR-134-5p后,MRPL58的表达水平上升。过表达miR-134-5p后,MRPL58的表达水平下降。同时,miR-134-5p靶向MRPL58的3端非编码区(P<0.05)。同时敲低miR-134-5p和MRPL58后,乳腺癌细胞MCF7的凋亡水平没有显著改变(P>0.05)。同时过表达miR-134-5p和MRPL58后,乳腺癌细胞MCF7的凋亡水平没有显著改变(P>0.05)。结论:miR-134-5p通过靶向MRPL58 mRNA的3端非编码区以降低MRPL58的翻译水平,最终促进了乳腺癌细胞MCF7的凋亡。

缺氧对乳腺癌细胞MMP-2、u-PAR、FN表达的影响

目的研究体外缺氧对乳腺癌细胞系MCF7浸润能力及其细胞表面金属蛋白酶MMP-2、丝氨酸蛋白酶u-PA受体u-PAR和细胞基质蛋白FN的表达的影响。方法本实验模拟体外缺氧环境,观察缺氧对乳腺癌细胞MCF7浸润穿透Metrigel的能力;以及采用半定量RT-PCR检测细胞表面MMP-2、u-PAR和FN表达情况。结果缺氧状态下MCF7细胞的浸润能力明显增强;其表面的MMP-2、u-PAR、FN基因表达升高。结论缺氧可以上调与乳腺癌浸润转移有关的基因的表达,缺氧条件促进乳腺癌细胞的浸润转移。

大黄素对乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7/Adr的耐药逆转作用

目的 :探讨中药成分大黄素 (Emodin ,EMD)对乳腺癌多药耐药细胞株MCF 7/Adr的耐药逆转作用。方法 :药物敏感试验采用四唑氮盐 (MTT)比色法 ,P糖蛋白以Western blot法检测。结果 :EMD在 0～ 2 0 μmol/L浓度时作用 14天后对MCF 7/Adr未见明显毒性作用 ;EMD在 10 μmol/L浓度时 ,其耐药逆转倍数为 1 7倍。EMD在 2 0 μmol/L浓度时 ,处理MCF 7/Adr 2、4、6和 11天后 ,检测P糖蛋白发现自第 4天起P糖蛋白表达下降 ,至第 11天无法检测到P糖蛋白的表达。结论 :EMD具有逆转MCF 7/Adr多药耐药性的作用 ,可明显下调P糖蛋白的表达 ,且逆转作用持久。

水飞蓟宾抑制乳腺癌细胞增殖和促进其凋亡的作用及机制

目的:探讨水飞蓟宾抑制乳腺癌细胞增殖和促进其凋亡的作用及机制。方法:MCF7细胞分为对照组和SIL组(处理浓度分别为10、20、40mg/L),各组细胞分别处理24、48、72h。MTT法检测不同浓度SIL对乳腺癌MCF7存活率的影响,TUNEL法(DNA断裂的原位末端标记法)检测各组细胞凋亡率,caspase-Glo83/7定量试剂盒测定细胞caspase3/7的表达情况,Western blot法检测PUMA蛋白表达水平。结果:MTT结果显示SIL对MCF7细胞增殖有抑制作用(P<0.01),其中用40mg/L SIL处理MCF7细胞72h时抑制效果最明显,结果呈药物浓度时间依赖效应。TUNEL法显示(48h)SIL可以显著增加MCF7细胞的凋亡率(P<0.01)。caspase3/7结果示SIL可以使caspase3/7活性显著升高(P<0.01)。Western blot示SIL可以诱导PUMA蛋白的表达升高。结论:水飞蓟宾能抑制乳腺癌细胞增殖和促进其凋亡,其作用机制之一可能是诱导PUMA蛋白表达。

硼替佐米和3-甲基腺嘌呤对人乳腺癌细胞株MCF-7的抑瘤效应

目的:研究蛋白酶体活性抑制剂硼替佐米(Bortezomib)对人乳腺癌细胞株MCF-7的自噬诱导和增殖抑制作用,以及自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)与Bortezomib联合应用对MCF-7细胞自噬及增殖的影响。方法:采用MTT法检测细胞增殖,蛋白质印迹法检测蛋白酶体活性及自噬相关蛋白LC3的表达。结果:Bortezomib能明显抑制MCF-7细胞增殖并诱导其自噬,3-MA与Bortezomib联合应用,可逆转Bortezomib诱导的细胞自噬,并增强Bortezomib对MCF-7细胞增殖的抑制(P<0.05)。结论:联合应用Bortezomib和3-MA可能对乳腺癌细胞自噬和增殖具有协同抑制作用。

miR-145-5p的过表达对乳腺癌细胞凋亡作用的研究

目的探讨miR-145-5p靶向调控激活转录因子1(ATF1)对人乳腺癌MCF7细胞凋亡的影响。方法运用TargetScan在线分析miR-145-5p与ATF1的相关性;将ATF1的3’UTR构建进PMIR-RB-REPORT质粒,利用荧光素酶报告实验检测miR-145-5p是否靶向调控ATF1;用HiPerFect Transfection Reagent转染miR-145-5p模拟物或miR-145-5p抑制物进乳腺癌MCF7细胞,通过Western blot检测ATF1的表达量和乳腺癌MCF7细胞凋亡标志蛋白表达情况。通过MTT实验和Annexin-V染色分别检测MCF7的增值水平和凋亡水平。结果 miR-145-5p靶向ATF1的3’UTR的193-200区域;过表达miR-145-5p时,ATF1和BCL-2的表达量明显减少,而细胞凋亡相关蛋白P21和BAX则显著增加(P<0.05),同时CASPASE9/CLEAVED-CAS9比值显著下降(P<0.05),MCF7细胞增殖水平降低、凋亡水平上升(P<0.05);敲低miR-145-5p后,ATF1和BCL-2的表达量显著增加(P<0.05),而细胞凋亡相关蛋白P21以及BAX的表达量明显减少(P<0.05),同时CASPASE9/CLEAVED-CAS9的比值明显增加(P<0.05),MCF7细胞增殖水平增加、凋亡水平下降(P<0.05)。结论 miR-145-5p可能靶向调控ATF1促进乳腺癌细胞MCF7凋亡。

何首乌提取物对人乳腺癌细胞脂肪酸合酶的抑制研究

目的 研究何首乌提取物对人乳腺癌MCF7细胞脂肪酸合酶 (fattyacidsynthase,FAS)的抑制作用。方法 MTT法测定人乳腺癌MCF7细胞增殖速度 ,采用超速离心技术部分纯化人乳腺癌MCF7细胞FAS。不同浓度何首乌提取物与FAS相互作用不同时间后 ,加入底物 ,用分光光度法观察何首乌提取物对FAS的抑制作用。结果 何首乌提取物对人乳腺癌MCF7细胞的增殖有一定的抑制作用。人乳腺癌MCF7细胞FAS被部分纯化 ,三种浓度何首乌提取物 (0 .1,0 .5 ,1g/L)与FAS在催化前相互作用 0、5和 10min ,对FAS活性的抑制率分别为 2 4 .6 0 %、2 7.30 %、and 4 2 .75 % (0 .1g/L) ;4 3.5 0 %、5 0 .30 %、and 94 .0 3% (0 .5 g/L) ;98.6 0 %、97.30 %and 97.0 5 % (1g/L)。结论 何首乌提取物对人乳腺癌MCF7细胞FAS具有抑制作用 ;作用强度既依赖于抑制剂浓度 。

miR-1468-3p靶向JAK2调控乳腺癌细胞的凋亡

目的探讨miR-1468-3p分子通过Janus激酶2(JAK2)蛋白调控乳腺癌细胞的凋亡。方法运用TargetScan在线分析miR-1468-3p与JAK2的相关性;将JAK2的3′UTR构建进PmirGLO质粒,利用luciferase assay检测miR-1468-3p是否靶向调控JAK2;用脂质体梯度转染miR-1468-3P mimics或miR-1468-3P inhibitor转入乳腺癌MCF7细胞,通过Western blot检测JAK2的表达量和乳腺癌MCF7细胞凋亡标志蛋白表达情况。结果通过TargetScan分析,miR-1468-3p在3个区域与JAK2具有较高匹配度;通过luciferase assay发现,miR-1468-3p靶向JAK2的3′UTR;梯度转染miR-1468-3P mimics时,JAK2的表达量梯度下降,细胞凋亡标志蛋白cleaved-caspase3/caspase3、cleaved-caspase9/caspase9、BAX表达量上升,Bcl-2表达量下降(P<0.05);而用梯度转染miR-1468-3P inhibitor进乳腺癌MCF7细胞时,JAK2的表达量梯度上升,cleaved-caspase3/caspase3、cleaved-caspase9/caspase9和BAX表达量下降,Bcl-2表达量上升(P<0.05)。结论 miR-1468-3p能通过降低JAK2的表达来促进乳腺癌MCF7细胞的凋亡。

瘦素激活肿瘤相关巨噬细胞促进乳腺癌细胞MCF7的迁移及侵袭

该文探讨瘦素(leptin)激活肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)对乳腺癌细胞MCF7迁移及侵袭的影响及其作用机制。RT-PCR、FQ-PCR及Western blot检测THP1分化的巨噬细胞中CD206、TGF-β及IL-10的表达。RT-PCR检测TAMs中leptin长受体Ob-Rb及短受体Ob-Rt的表达。细胞划痕试验和Transwell侵袭试验检测MCF细胞的迁移及侵袭能力。Western blot检测TAMs中p-STAT3、p-ERK 1/2和p-AKT的表达。RT-PCR及Western blot检测TAMs中MMP2、MMP9的表达。结果表明,经100 nmol/L PMA及20 ng/mL IL-4诱导成的巨噬细胞分子表型为CD206+TGF-βHighIL-10High。TAMs中leptin长受体Ob-Rb及短受体Ob-Rt均为高表达。经leptin刺激的TAMs条件培养基能明显增强MCF细胞的迁移及侵袭能力。Leptin能显著提高TAMs中p-STAT3、p-ERK 1/2和p-AKT的表达(P<0.05),且leptin能上调TAMs中MMP2和MMP9的表达;而MAPK/ERK 1/2信号通路抑制剂PD98059能抑制MMP2的表达,JAK/STAT信号通路抑制剂AG490能抑制MMP9的表达(P<0.05)。以上结果表明,leptin能通过激活TAMs促进MCF7细胞的迁移和侵袭,其机制可能与leptin通过MAPK/ERK 1/2信号通路上调TAMs中MMP2及通过JAK/STAT信号通路上调MMP9的表达有关。

沉默葡萄糖调节蛋白94对乳腺癌MCF7细胞的影响及可能的机制

目的探讨沉默葡萄糖调节蛋白94(GRP94)对乳腺癌MCF7细胞的影响及可能的作用机制,旨在对GRP94在乳腺癌发生发展中的作用及机制提供数据参考。方法将人乳腺癌细胞株MCF7细胞随机分为空白对照组、空白转染组和实验组,其中空白转染组和实验组分别转染siRNA和siRNA-GRP94,采用CCK8实验检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡,qRT-PCR检测GRP94 mRNA表达,Western blot检测GRP94、c-myc、CyclinD1、Survivin蛋白表达。结果实验组GRP94 mRNA和蛋白表达量分别为(0.106±0.031)和(0.211±0.068),明显低于空白对照组的(0.984±0.122)和(0.943±0.117)及空白转染组的(0.980±0.120)和(0.946±0.121),差异有统计学意义(P<0.05)。实验组培养24 h、48 h MCF7细胞增殖A值分别为(0.426±0.120)和(0.547±0.114),明显低于空白对照组的(0.864±0.121)和(1.064±0.117)及空白转染组的(0.870±0.119)和(1.060±0.110),差异有统计学意义(P<0.05)。实验组MCF7细胞凋亡率为(8.92±1.01)%,明显高于空白对照组的(3.16±0.64)%和空白转染组的(3.20±0.59)%,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组MCF7细胞c-myc、CyclinD1、Survivin蛋白相对表达量分别为(0.813±0.104)、(0.214±0.067)和(0.511±0.121),明显低于空白对照组和空白转染组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 GRP94可抑制乳腺癌MCF7细胞增殖、诱导凋亡,可能与其下调c-myc、CyclinD1、Survivin蛋白表达有关。

抑癌基因p27在肿瘤细胞MCF7中的表达

抑癌基因 p2 7是一个细胞周期依赖性激酶抑制子CKI(CDKinhibitor) ,对细胞周期起着负调控的作用 .将 p2 7基因克隆到表达载体 pcDNA ,转染到肿瘤细胞MCF7中 ,筛选到稳定表达株 .p2 7基因的过量表达确实对肿瘤细胞的生长产生了抑制作用 ,并且引发了部分肿瘤细胞的凋亡 .

PUMA基因在水飞蓟宾诱导乳腺癌细胞凋亡的作用

目的:探讨凋亡相关基因PUMA在体外水飞蓟宾(silybin,SIL)诱导乳腺癌MCF7细胞凋亡过程中的作用。方法:MCF7细胞分为二组:对照组和SIL组,SIL组处理浓度分别为10、20、40 mg/L,各组细胞分别培养24、48及72 h。MTT法检测SIL对乳腺癌MCF7杀伤率,TUNEL法(DNA断裂的原位末端标记法)测定各组细胞凋亡率,Caspase-Glo⑧3/7定量试剂盒测定细胞Caspase3/7的表达情况,Western blot法检测PUMA蛋白表达水平。结果:上述浓度下的SIL对MCF7细胞增殖均具有抑制作用(P<0.01),其中浓度为40mg/LSIL处理的MCF7细胞在72h时抑制效果最明显,结果呈药物浓度及时间依赖效应;TUNEL法检测显示(48h)SIL可以显著增加MCF7细胞的凋亡率(P<0.01);Caspase3/7检测显示SIL可以使Caspase3/7活性显著升高(P<0.01);Western blot法检测显示SIL可以诱导PUMA蛋白的表达升高。结论:凋亡相关基因PUMA在水飞蓟宾诱导乳腺癌MCF7细胞凋亡过程中具有显著作用,诱导PUMA蛋白表达可能是水飞蓟宾抗癌作用的机制之一。

驱动蛋白分子Kif18A各功能域细胞定位的研究

目的探讨人驱动蛋白分子Kif18A的各功能域在真核细胞中的定位。方法构建驱动蛋白分子Kif18A野生型及各功能域(马达区、杆状区、尾区和马达区含部分杆状区)的绿色荧光蛋白表达质粒,分别转染人乳腺癌细胞MCF7,运用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹法验证各蛋白的表达,免疫荧光染色法分别对细胞进行微管蛋白和DNA染色,荧光显微镜下观察各绿色荧光融合蛋白的具体亚细胞定位。结果有丝分裂间期,Kif18A蛋白分子的马达区绿色荧光沿微管分布,尾区在细胞核和微管上均有分布,杆状区则散在分布在胞质中;有丝分裂末期,Kif18A的马达区仍沿微管分布,而马达区含部分杆状区主要集中在中体部位。结论 Kif18A蛋白分子的马达区和尾区与微管共定位;尾区含核定位序列;马达区和杆状区共同作用才能使该蛋白在有丝分裂末期定位于中体。