miR-20a-5p靶向调控BRMS1L对人结直肠癌细胞株SW480增殖、凋亡能力的影响及其机制探讨

目的观察微小RNA-20a-5p(miR-20a-5p)靶向调控乳腺癌转移抑制基因1(BRMS1L)对人结直肠癌细胞株SW480增殖、凋亡能力的影响,并探讨其可能机制。方法取SW480细胞,分别将miR-20a-5p抑制物(anti-miR-20a-5p)、miR-20a-5p抑制物阴性对照(anti-miR-NC)、BRMS1L过表达载体(pcDNA-BRMS1L)、BRMS1L过表达载体阴性对照(pcDNA-NC)、miR-20a-5p模拟物(miR-20a-5p mimics)、miR-20a-5p模拟物阴性对照(miR-NC)转染至细胞中,CCK-8法测算细胞存活率,流式细胞术测算细胞凋亡率,Western blotting法检测细胞周期素D1(CyclinD1)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved-Caspase-3)、β-catenin蛋白。取SW480细胞,分别将miR-20a-5p mimics、miR-NC与WT-BRMS1L或MUT-BRMS1L共转染至细胞中,采用双荧光素酶报告基因检测系统检测细胞荧光素酶活性;另取SW480细胞,分别将miR-20a-5p mimics、miR-NC、anti-miR-20a-5p、anti-miR-NC分别转染至细胞中,采用Western blotting法检测细胞BRMS1L蛋白。结果抑制miR-20a-5p表达或过表达pcDNA-BRMS1L,SW480细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,CyclinD1蛋白表达降低,Cleaved-Caspase-3蛋白表达升高(P均<0.05);抑制BRMS1L表达部分逆转anti-miR-20a-5p对SW480细胞增殖和凋亡的影响(P均<0.05)。抑制miR-20a-5p表达后SW480细胞中β-catenin蛋白的表达较低,抑制BRMS1L表达部分逆转anti-miR-20a-5p对β-catenin蛋白表达的影响(P均<0.05)。miR-20a-5p靶向BRMS1L,并负性调控其表达(P均<0.05)。结论miR-20a-5p靶向调控BRMS1L抑制SW480细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与抑制β-catenin蛋白表达有关。

miR-17-5p通过下调BRMS1L表达调控鼻咽癌CNE2细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡

目的:探讨miR-17-5p通过调控乳腺癌转移抑制基因1相似基因(breast cancer metastasis suppressor 1 like,BRMS1-like或BRMS1L)表达调控鼻咽癌细胞增殖和侵袭的分子机制。方法:收集2014年1月至2017年12月间平煤神马医疗集团总医院收治的40例鼻咽癌患者切除的鼻咽癌组织及其相应的癌旁组织标本,以及鼻咽癌细胞系CNE 2、HONE 1、C666-1和鼻咽部永生化上皮细胞株NP69,采用qPCR检测miR-17-5p在癌组织和癌细胞系中的表达水平。通过StarBase数据库预测BRMS1L与miR-17-5p的靶向关系,采用双荧光素酶报告基因实验进行验证。WB检测转染miR-17-5p模拟物和抑制物对CNE2细胞中BRMS1L表达的影响;CCK-8、Transwell和流式细胞术检测miR-17-5p/BRMS1L分子轴对CNE2细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。结果:miR-17-5p在鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞系中呈高表达(P<0.05或P<0.01),下调miR-17-5p显著抑制CNE2细胞增殖、侵袭、迁移但促进细胞凋亡(P<0.05或P<0.01)。miR-17-5p靶向作用于BRMS1L并下调其表达水平。过表达BRMS1L可显著抑制CNE2细胞增殖、侵袭、迁移而促进细胞凋亡(均P<0.01);而同时过表达miR-17-5p和BRMS1L可逆转上述作用(均P<0.01)。结论:miR-17-5p通过靶向下调BRMS1L的表达,进而促进CNE2细胞增殖、侵袭和迁移而抑制细胞凋亡。

乳腺癌转移抑制基因1对乳腺癌细胞运动能力的影响

目的:研究乳腺癌转移抑制基因1(breast cancer metastasis suppressor gene1,BRMS1)对人乳腺癌细胞运动能力的影响。方法:构建BRMS1真核表达载体,利用Lipofectin2000转染肺高转移潜能乳腺癌细胞MDA-MB-231-HM,荧光实时定量PCR检测目的基因表达,Transwell实验检测细胞运动能力。同时,设计3对针对BRMS1的特异小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),通过荧光实时定量PCR筛选出最有效的siRNA,干扰人乳腺癌细胞MDA-MB-231,观察干扰后细胞运动能力的变化。结果:与转染空载体的细胞相比,稳定转染BRMS1的MDA-MB-231-HM细胞穿过膜的数量减少51.9%。筛选出1对有效siRNA能明显下调BRMS1,用此siRNA干扰MDA-MB-231细胞后,其穿过膜的细胞数量增加17.9%。结论:BRMS1能抑制人乳腺癌细胞的运动,提示其可能通过抑制人乳腺癌细胞运动而抑制肿瘤远处转移。

乳腺癌转移抑制基因1和核因子相关κB结合蛋白50在宫颈癌变中的表达

目的：探讨乳腺癌转移抑制基因1（BRMS1）、核因子相关κB结合蛋白50（NF-κB p50）在宫颈癌变过程中的表达及其临床意义。方法：采用免疫组化（Super Sensitive TM IHC）法分别检测慢性宫颈炎组织、CINⅠ组织、CINⅡ～Ⅲ组织和宫颈癌组织中BRMS1、NF-κB p50的表达，分析两者的表达水平与宫颈癌临床病理特征的关系。结果：①宫颈癌、CINⅡ～Ⅲ及CINⅠ组组织中BRMS1蛋白的表达低于慢性宫颈炎组，差异有统计学意义（均P＜0.05），且BRMS1蛋白在ⅡB～Ⅳ期、浸润深度＞1/2、有淋巴结转移者中表达降低甚至缺失（均P＜0.05）。②NF-κB p50蛋白在宫颈癌组、CINⅠ和CINⅡ～Ⅲ组中的阳性表达率高于慢性宫颈炎组（均P＜0.05），且在瘤体直径≥4 cm、低分化癌、浸润深度＞1/2、有淋巴结转移者中NF-κB p50蛋白表达升高，差异有统计学意义（均P＜0.05）。③宫颈癌中BRMS1与NF-κB p50蛋白表达水平呈负相关（rs=0.426，P＜0.001）。结论：宫颈癌中BRMS1蛋白与NF-κB蛋白的阳性表达呈负相关，BRMS1蛋白阳性表达逐渐下降、甚至缺失，而NF-κB蛋白阳性表达逐渐升高，与癌细胞的发展、浸润转移密切相关。

结直肠癌组织中BRMS1 mRNA的表达及意义

目的:探讨乳腺癌转移抑制基因1(BRMS1)mRNA在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法:采用RT-PCR法分别检测40例结直肠癌组织和20例正常结直肠组织中BRMS1 mRNA的表达,并分析其与各临床病理特征之间的关系。结果:BRMS1 mRNA在结直肠癌组织中低表达0.420±0.133,在正常结直肠组织中高表达0.836±0.102,差异有统计学意义(P<0.01)。结直肠癌组织中BRMS1 mRNA的表达水平与病人年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤分化程度及浸润深度无关(P>0.05),而与淋巴结转移呈负相关关系(P<0.01)。结论:BRMS1 mRNA在结直肠癌组织中呈低表达,并有可能成为反映结直肠癌转移潜能的参考指标之一。

乳腺癌组织KiSS-1、MMP-2表达水平与老年乳腺癌患者改良根治术预后的关系

目的探讨乳腺癌组织肿瘤转移抑制基因KiSS-1、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达水平与老年乳腺癌患者改良根治术预后的关系。方法回顾性分析该院2012年3月至2017年3月接受改良根治术治疗且完成1年随访的115例老年乳腺癌患者资料,采集患者相关基线资料,检测血清癌胚抗原(CEA)水平及乳腺癌组织KiSS-1、MMP-2表达水平。根据预后情况将患者分为预后不良组和预后良好组,比较两组的基线资料、血清CEA水平及乳腺癌组织KiSS-1、MMP-2表达水平,分析乳腺癌组织KiSS-1、MMP-2表达水平与老年乳腺癌患者改良根治术预后的关系。结果115例老年乳腺癌患者中预后不良组26例,预后良好组89例。两组基线资料比较,差异无统计学意义(P>0.05)。预后不良组血清CEA水平、乳腺癌组织MMP-2表达水平高于预后良好组,乳腺癌组织KiSS-1表达水平低于预后良好组,差异均有统计学意义(P<0.05)。经一般线性双变量Spearman直线相关检验,乳腺癌组织KiSS-1表达水平与MMP-2呈负相关(r=-0.327,P<0.05)。Logistic回归模型分析结果显示,KiSS-1高表达可能是老年乳腺癌患者改良根治术预后不良的保护因素(OR=0.271,P<0.05),CEA、MMP-2高表达可能是老年乳腺癌患者改良根治术预后不良的危险因素(OR=3.619、16.436,P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示,KiSS-1、MMP-2单独和联合检测预测老年乳腺癌患者改良根治术预后不良的曲线下面积均大于0.800,均有一定预测价值。结论老年乳腺癌组织KiSS-1、MMP-2表达水平与老年乳腺癌患者改良根治术预后不良有关。

乳腺癌转移抑制基因1(BRMS1)与宫颈癌变临床病理参数的关系研究

目的探讨乳腺癌转移抑制基因1(BRMS1)与宫颈癌变临床病理参数的关系。方法选取2017年4月22日~2018年4月22日期间我院收治的100例具有完整病理资料的宫颈疾病患者为实验对象,其中29例为轻度慢性宫颈炎,11例为CINⅠ级,10例为CINⅡ~Ⅲ级,50例为宫颈癌,对所有患者均进行BRMS1基因检测。结果从宫颈组织中的BRMS1表达角度分析,CINⅡ~Ⅲ期和CINⅠ期患者表达率无差异性(P>0.05),宫颈癌、CINⅡ~Ⅲ期、CINⅠ期患者与慢性宫颈炎患者相比,BRMS1蛋白阳性表达率下降(P<0.05)。从BRMS1表达的临床病理特征角度分析,不同浸润程度、FIGO分期、有无淋巴转移患者BRMS1表达阳性率存在明显差异(P<0.05),不同组织学分型、分化程度、肿瘤大小、年龄患者的BRMS1表达阳性率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论宫颈癌变与BRMS1表达可呈负相关性,当BRMS1蛋白表达下降时,则意味着癌细胞处于转移、浸润、发展趋势。

5-杂氮-2′-脱氧胞苷对乳腺癌MCF-7细胞体外迁移能力的影响及机制探讨

目的观察5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对非浸润性人乳腺癌MCF-7细胞体外迁移能力的影响,并探讨其机制。方法将MCF-7细胞分两组,观察组用含5.0μM5-Aza-CdR的培养液处理4 d,对照组加入等体积的DMSO。采用细胞划痕实验观察细胞体外迁移能力,采用RT-PCR、甲基化特异性PCR(MSP)法检测CXC趋化因子受体-4(CXCR4)、乳腺癌转移抑制基因-1(BRMS1)mRNA及其启动子区甲基化状态。结果与对照组比较,观察组36、48 h细胞划痕愈合率明显升高,MCF-7细胞的CXCR4 mRNA表达量明显增加(P<0.05);5-Aza-CdR使CXCR4启动子区甲基化的CpG岛1完全去甲基化,BRMS1启动子区CpG岛B的非甲基化状态亦无明显改变。结论 5-Aza-CdR增强了MCF-7细胞的体外迁移能力,可能与其去甲基化机制上调了促转移基因CXCR4表达有关。

鼻咽癌细胞株中乳腺癌转移抑制基因表达的研究

目的:检测乳腺癌转移抑制(BRMS1)基因在不同转移习性的人鼻咽癌细胞株中的表达情况。方法:应用免疫组织化学法和逆转录聚合酶链式反应法在m RNA和蛋白2方面检测人鼻咽癌细胞株高分化磷癌、低分化磷癌、低分化细胞株、高成瘤高转移性细胞株、低成瘤低转移性细胞株中BRMS1的表达。结果:5种细胞株中BRMS1的蛋白表达皆为阳性,在不同转移习性的细胞株中其表达强度明显不同。4种细胞株中扩增出BRMS1 m RNA,而BRMS1 m RNA在高转移性细胞株中未扩增出,高分化鳞癌、低分化鳞癌、低分化细胞株BRMS1 m RNA表达水平均显著高于低成瘤低转移性细胞株(P<0.01)。结论:BRMS1的表达与细胞株的转移能力有明显相关性,表明BRMS1可能作为鼻咽癌细胞转移的重要指标。

BRMS1基因对卵巢癌细胞侵袭转移作用及其机制的探讨

目的:研究BRMS1基因对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞侵袭、转移的作用及可能机制。方法:应用脂质体介导法将BRMS1-siRNA转染人卵巢癌细胞株OVCAR3细胞内(实验组),设转染不干扰任何基因的NC-siRNA的OVCAR3细胞为阴性对照组,未进行任何转染的为空白对照组。BRMS1基因有效沉默后,用Tr-answell侵袭、迁移实验检测OVCAR3细胞侵袭、迁移能力的变化,并采用蛋白质印迹法及免疫细胞化学法检测蛋白NF-κB p65、uPA表达的变化。结果:人卵巢癌细胞OVCAR3中BRMS1基因成功沉默。Tr-answell侵袭实验中,实验组转入底层膜的细胞数〔(190±8.5)个〕明显高于阴性对照组和空白对照组〔分别为(144±7.8)和(146±6.8)个,P<0.05〕。Transwell迁移实验中,实验组转入底层膜的细胞数〔(231±8.9)个〕明显高于阴性对照组和空白对照组〔分别为(177±9.7)和(182±7.9)个,P<0.05〕。在实验组中NF-κBp65、uPA蛋白表达均显著增强。结论:BRMS1基因可抑制卵巢癌细胞的转移,机制可能与NF-κB信号转导通路有关,通过抑制NF-κB的表达,下调uPA的表达,从而实现抑制卵巢癌的远处转移。

BRMS1基因对人直肠癌裸鼠成瘤性及转移能力的影响

目的探讨转移抑制BRMS1基因对人直肠癌裸鼠成瘤性以及抑制肿瘤细胞远处转移的影响。方法通过将BRMS1基因导入人直肠癌细胞株LOVO中,建立裸鼠实验性转移模型和自发性转移模型,观察转染组(A组)、空载体组(B组)、未转染组(C组)裸鼠的生长状态和肿瘤远处转移状况。结果自发性转移模型:A1组转染组细胞、B1组转染空载体组细胞和C1组转染组癌细胞接种后裸鼠的体质量及肿瘤平均直径无统计学差异(P>0.05)。实验性转移模型:转染空载体组B2和未转染组C2的裸鼠肺脏转移率为100%;转染组A2组肺脏和肝脏转移灶的病理分级标准较B2组和C2组降低,A2组肺转移分级以II级为主,B2组、C2组以II级、III级为主;A2组未见肝转移灶,而B2组、C2组肝转移分级以I级、II级为主。结论 BRMS1基因能够明显抑制直肠癌LOVO细胞的远处转移的能力,但并不影响肿瘤细胞本身的生长,提示BRMS1基因可能成为抑制直肠癌远处转移的新靶点。

过表达乳腺癌转染抑制基因1提高骨肉瘤细胞对紫杉醇敏感性的研究

目的探讨过表达乳腺癌转染抑制基因1(BRMS1)对骨肉瘤紫杉醇敏感性的影响机制。方法将人骨肉瘤MG-63细胞分为空白组、pcDNA3.1-BRMS1组、紫杉醇组和pcDNA3.1-BRMS1+紫杉醇组,其中空质粒pcDNA3.1(+)和重组质粒pcDNA3.1(+)-BRMS1转染参照Lipofectamine™2000转染说明。蛋白质印迹法(Western blot)检测BRMS1、核因子-κB(NF-κB)p65、增殖细胞核抗原(PCNA)和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)蛋白表达;噻唑蓝(MTT)法、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)双染法分别检测细胞活力和凋亡率。应用SPSS 21.0统计软件分析,计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示,组间比较采用t检验。结果pcDNA3.1-BRMS1转染后MG-63细胞BRMS1蛋白表达(0.216±0.018)明显升高,与空白组(0.018±0.004)比较差异有统计学意义(t=33.956,P<0.05)。与空白组比较,pcDNA3.1-BRMS1组和紫杉醇组细胞活力(0.603±0.051、0.536±0.04)明显降低(t=8.311、11.914,P<0.05),凋亡率[(17.18±0.89)%、(20.02±1.07)%]明显升高(t=48.437、48.924,P<0.05),NF-κBp65表达(0.307±0.029、0.257±0.026)明显降低(t=16.580、19.403,P<0.05),PCNA表达(0.222±0.021、0.167±0.016)明显降低(t=7.121、12.203,P<0.05),bax表达(0.091±0.012、0.131±0.013)明显升高(t=14.352、22.476,P<0.05)。联合使用pcDNA3.1-BRMS1和紫杉醇对细胞活力、凋亡及NF-κBp65、PCNA和bax蛋白表达影响强于单独使用。结论过表达BRMS1可抑制骨肉瘤细胞活力,诱导细胞凋亡,增强紫杉醇敏感性,机制与抑制NF-κB信号通路有关。

BRMS1基因启动子甲基化修饰及其表达与三阴性乳腺癌转移的相关性

目的探讨三阴性乳腺癌（TNBC）中乳腺癌转移抑制基因1（BRMS1）DNA启动子甲基化修饰及其表达对癌细胞生物学行为的影响。方法采用免疫组织化学法检测BRMS1在TNBC及癌旁组织标本中的表达情况。通过反转录PCR（reverse transcription—PCR，RT—PCR）和Western印迹法检测TNBC细胞及正常乳腺上皮细胞中BRMS1 mRNA及蛋白表达情况，应用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测各细胞中BRMS1的甲基化状态，去甲基化制剂5-Aza-dc处理使BRMS1表达再活化，侵袭实验检测BRMS1去甲基化对癌细胞侵袭能力的影响，将数据进行统计学分析。结果BRMS1蛋白在TNBC组织中的阳性表达率为29．9％（20／67）明显低于其在癌旁组织中的阳性表达率61．2％（41／67），差异具有统计学意义（χ2=6．635，P〈0．05），有淋巴结转移者BRMS1mRNA的表达水平低于无淋巴结转移者（P=0．018〈0．05），BRMS1表达下调与DNA启动子甲基化有关，差异有统计学意义（χ2=14．68，P〈0．05）。BRMS1mRNA及蛋白表达与肿瘤大小及TNM分期亦有相关性（P=0．000。0．003〈0．05）。经5-Aza-dC处理后，侵袭细胞数目较对照组显著减低，差异有统计学意义（t=3．262—10．72，P〈0．05）。结论TNBC中存在BRMS1表达下调，并与该基因DNA启动子甲基化修饰有关，去甲基化可使BRMS1表达再活化从而抑制细胞侵袭能力。

乳腺癌转移抑制基因1抑制肿瘤转移的作用机制

乳腺癌转移抑制基因1（BRMS1）在多种恶性肿瘤细胞中表达降低或缺失，具有明显降低癌细胞侵袭和转移的作用。BRMS1基因通过磷酸肌醇信号及核转录因子-κB（NF-κB）信号通路等调节基因转录和蛋白翻译，还可与mSin3-组蛋白去乙酰化酶（HDAC）复合体、雌激素受体等蛋白相互作用、修复细胞间隙通讯等途径抑制肿瘤细胞的侵袭及转移。BRMS1基因将可能成为有效抑制肿瘤转移基因治疗的新靶点。