Brd2通过Wnt/β-catenin信号通路调控小鼠C2C12成肌细胞的分化

目的 探究溴结构域蛋白2(bromodomain containing 2,Brd2)对小鼠C2C12成肌细胞分化能力的影响及作用机制。方法 通过GEO数据库分析Brd2在肌营养不良患者和健康人骨骼肌组织中的表达水平。用含2%马血清的分化培养基体外诱导C2C12成肌细胞分化,利用Western blot检测分化过程中Brd2的表达。利用慢病毒介导的过表达和RNA干扰技术在C2C12成肌细胞中分别过表达和敲低Brd2,诱导后用细胞免疫荧光实验检测肌管形成情况,通过Western blot检测分化标志物蛋白表达水平的变化。通过转录组测序及相关实验探究Brd2在上述过程中发挥调控作用的分子机制。结果 Brd2在肌营养不良患者的骨骼肌中低表达;体外诱导C2C12成肌细胞分化,第2天时Brd2表达升高,第8天时表达降低;敲低Brd2可以抑制成肌细胞的分化,过表达Brd2则可以促进成肌细胞分化;Wnt/β-catenin信号通路的活性受到Brd2的调控。结论 Brd2通过Wnt/β-catenin信号通路调控成肌细胞的分化,初步提示Brd2可能有利于骨骼肌的再生。

鸡BRD2亚细胞定位及其组织表达特性分析

【目的】明确含溴结构域蛋白2(BRD2)的亚细胞定位及其表达特征,为后续研究BRD2基因调控鸡组织发育的作用机制提供参考依据。【方法】通过构建鸡BRD2基因重组真核表达载体pEGFP-BRD2,转染人胚胎肾细胞(HEK-293T)后检测重组蛋白EGFP-BRD2的表达情况及亚细胞定位;利用实时荧光定量PCR分别检测鸡胚14胚龄(E14 d)、鸡出壳后1日龄(1 d)、7日龄(7 d)和14日龄(14 d)4个时间点各组织中BRD2基因的表达情况。【结果】重组真核表达载体pEGFP-C1-BRD2转染HEK-293T细胞获得的融合蛋白EGFP-BRD2约115.00 kD,且主要定位在细胞核。实时荧光定量PCR检测结果表明,鸡BRD2基因在E14 d和1 d肌胃中的相对表达量最高,在7和14 d肺脏中的相对表达量最高。BRD2基因在各组织的表达规律为:在眼球内E14 d到14 d的表达先下降后趋于稳定;在脑组织和心脏内的表达在E14 d至14 d间呈先下降后上升的变化趋势;在肝脏内E14 d表达稳定,1 d后开始逐渐增加,至14 d时达最高值;在肺脏中E14 d的表达下降,1 d后急剧上升,至14 d时达最高值;在肌胃和胸肌中,均在7 d时最高,1 d时最低,E14 d和14 d时有较高表达,整体上呈倒N表达模式;在腿肌中,从E14 d到1 d表达减少,而后略有增加,7 d后开始下降,至14 d时降到最低值。【结论】鸡BRD2基因重组真核表达载体能在HEK-293T细胞中正确表达,且融合蛋白主要定位在细胞核;BRD2基因在鸡不同发育阶段的各组织中均有表达,但其表达量呈现不同的变化趋势。

dBET1降解溴结构域蛋白4抑制α突触核蛋白寡聚体的神经毒性作用研究

目的探究用dBET1降解溴结构域蛋白4(BRD4)能否抑制α突触核蛋白(α-syn)寡聚体导致的神经炎症及氧化应激。方法dBET1与α-syn寡聚体共同处理BV2细胞或SH-SY5Y细胞,分为对照组、α-syn组、α-syn+500 nmol/L dBET1组,α-syn+1000nmol/L dBET1组,1000nmol/L dBET1组。定量聚合酶链反应检测炎性因子及抗炎因子,蛋白质免疫印迹检测BRD4、核因子E2相关因子2(Nrf2)、磷酸化核转录因子κB(p-NF-κB)及磷酸化α-syn(p-α-synuclein)等。结果α-syn+1000nmol/L dBET1组炎性因子mRNA、BRD4、p-NF-κB、p-α-synuclein表达低于α-syn组,而抗炎因子mRNA、细胞核Nrf2表达显著高于α-syn组[(2.02±0.14)vs(0.96±0.24),P<0.05]。结论dBET1通过p-NF-κB及Nrf2在一定程度上能抑制α-syn导致的神经炎症及氧化应激等,为进一步运用于治疗帕金森病等疾病提供理论基础。

超声引导下甲状腺结节细针穿刺活检组织中BRD4、Skp2表达量与结节病理特征的相关性

目的:研究超声引导下甲状腺结节细针穿刺活检组织中溴样结构域蛋白4(BRD4)和S期激酶相关蛋白2(Skp2)表达量与结节病理特征的相关性。方法:选择2015年3月~2018年3月本院超声引导下甲状腺结节细针穿刺活检获取的组织,根据病理结果分为恶性组和良性组,检测BRD4、Skp2及增殖基因、血管新生基因的表达量。结果:恶性组甲状腺结节中BRD4、Skp2的mRNA表达量明显高于良性组且恶性组中TNMⅢ~Ⅳ期、有包膜侵犯、存在淋巴结转移的甲状腺结节中BRD4、Skp2的mRNA表达量明显高于TNMI~Ⅱ期、无包膜侵犯、无淋巴结转移的甲状腺结节;恶性组甲状腺结节中细胞周期蛋白D1(CCND1)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞核增殖抗原(PCNA)、血管内皮生长因子(VEGF)、内皮细胞特异分子-1(ESM-1)、生存素(Survivin)、环氧合酶2(COX2)的mRNA表达量明显高于良性组且与BRD4、Skp2呈正相关,细胞周期蛋白G2(CCNG2)、内皮抑素(ES)的mRNA表达量明显低于良性组且与BRD4、Skp2呈负相关。结论:甲状腺恶性结节中BRD4、Skp2的高表达与病理特征的改变相关且能够改变增殖基因、血管新生基因的表达。

含溴结构域蛋白2在抗肿瘤免疫调控中的作用及机制研究

目的研究含溴结构域蛋白2(BRD2)在抗肿瘤免疫调控中的作用及机制,探索新的免疫治疗靶点。方法利用REMBRANDT胶质瘤数据库分析、GlioVis和TIMER网站在线分析,比较BRD2在肿瘤组织与正常组织中表达水平的差异、BRD2的表达水平与多形性胶质母细胞瘤(GBM)患者预后的相关性,并比较其与GBM肿瘤中免疫细胞浸润的相关性。构建靶向BRD2基因的干涉质粒,包装慢病毒并感染小鼠胶质瘤细胞GL261,灭瘟素筛选感染阳性细胞6 d,Western印迹法检测BRD2蛋白表达水平。CellTiter-Glo试剂盒检测敲低BRD2后GL261的细胞活力。将敲低BRD2的GL261细胞移植入C57BL/6J小鼠皮下形成皮下肿瘤,定期测量肿瘤的体积,并在肿瘤接种后第28天将其取出并分离肿瘤细胞,利用流式细胞术和免疫组化的方法分析皮下瘤组织内CD8+T细胞的浸润情况。结果BRD2在多种肿瘤组织中高表达,高表达BRD2的胶质瘤患者的预后较差,且BRD2表达水平与肿瘤中CD8+T细胞浸润呈负相关。敲低BRD2后的GL261细胞形成的小鼠皮下移植瘤生长速度减慢,且皮下瘤组织内CD8+T细胞的浸润水平增加。结论BRD2高表达抑制GBM肿瘤组织内CD8+T细胞的浸润并促进肿瘤的生长。

含溴结构域蛋白2结构与功能的研究进展

含溴结构域蛋白2(bromodomain-containing protein 2,BRD2)具有两个串联的溴结构域和一个末端外结构域,是溴结构域和末端外结构域蛋白家族成员之一。BRD2蛋白能够特异性结合组蛋白乙酰化赖氨酸,参与基因的转录调控、染色质重塑和细胞增殖与凋亡等生物学活动。近年来研究表明,BRD2蛋白通过溴结构域和乙酰化组蛋白之间的表观遗传相互作用来调控基因转录和细胞周期、神经发育、炎症和脂肪生成,并且在肿瘤细胞增殖以及病毒感染和复制过程中也有着重要作用。该文主要从BRD2蛋白的结构特征、细胞功能和参与病毒复制的作用机制等方面进行综述,以期为深入研究BRD2蛋白的功能提供参考。

溴结构域包含蛋白2对大鼠活化肝星状细胞PPAR-γ活性和TGF-β介导的信号转导的影响

目的探讨大鼠活化肝星状细胞(HSC)中溴结构域包含蛋白2(BRD2)功能对过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)活性和转化生长因子β(TGF-β)介导的相关信号转导的影响。方法构建pcDNA3.1(+)-BRD2真核表达质粒并在HSC-T6中高表达BRD2;运用BRD2基因特异性siRNA,敲低HSC-T6中BRD2表达。Western blot法检测BRD2高表达及特异性敲低表达对PPAR-γ、Smad2/3、Smad7蛋白表达以及Smad3磷酸化的影响,荧光素酶报告基因技术分析敲低BRD2表达对PPAR-γ或TGF-β调控的荧光素酶报告基因表达的影响,Western blot法检测BRD2高表达和低表达对Ⅰ型胶原蛋白表达的影响。结果成功构建pcDNA3.1(+)-BRD2重组真核表达质粒,在HSC-T6中高表达BRD2;筛选出BRD2特异性siRNA(BRD2 siRNA-1、BRD2 siRNA-2、BRD2 siRNA-Mix)有效敲低BRD2表达。在HSC-T6细胞中敲低BRD2表达,可促进PPAR-γ活性(P<0.05),对PPAR-γ蛋白表达无明显影响(P> 0.05);可下调Smad3蛋白表达并抑制其磷酸化,同时上调Smad7蛋白表达(P<0.05,P <0.01);显著抑制了HSC中Ⅰ型胶原蛋白的表达(P <0.05,P <0.01)。结论BRD2可能通过抑制活化HSC中PPAR-γ活性、促进TGF-β下游Smad3的磷酸化、抑制Smad7表达而促进TGF-β介导的信号转导,发挥促纤维化作用。