胆盐水解酶基因结构与功能研究现状

胆盐水解酶是微生物生长、繁殖过程中产生的一种胞内酶,因其可能与降低血胆固醇、预防心血管疾病有关而受到广泛关注。本文从胆盐水解酶的特性出发,综述了胆盐水解酶的生理功能、酶学活性、微生物菌群的来源及特征,以及胆盐水解酶的氨基酸结构等方面的研究进展,以期为进一步深入研究胆盐水解酶的作用机理及相关制品的开发利用提供参考。

植物乳杆菌体外降解结合胆盐与去除胆固醇能力研究

目的探讨并筛选植物乳杆菌的胆固醇去除和降解结合型胆汁盐的机理和性能。方法以来自健康人肠道的6株植物乳杆菌为对象。结果植物乳杆菌Lp501、Lp529和LS12具有较高的体外去除胆固醇和降解结合胆盐能力,且降解结合胆盐能力与去除胆固醇能力并不是完全相关的,还存在别的影响因素。同时本实验设计了一对针对植物乳杆菌bsh基因的特异性较好的引物,PCR实验结果表明,6株植物乳杆菌都携带bsh基因,这对引物可用于植物乳杆菌是否携带bsh基因的检验,也可辅助植物乳杆菌的分子鉴定。

胆盐水解酶基因在毕赤酵母中的表达

目的在毕赤酵母中表达胆盐水解酶(Bile salt hydrolase,BSH)基因。方法以重组质粒pMD18-BSH为模板,PCR扩增BSH基因,克隆至毕赤酵母表达载体pGAPZαA上,经AvrⅡ线性化,电转化至毕赤酵母SMD1168,PCR筛选阳性重组子,诱导表达,表达产物经Western blot进行分析。结果重组表达质粒pGAPZαA-BSH经双酶切及测序证明构建正确;经PCR鉴定阳性的重组酵母菌的诱导表达产物经SDS-PAGE分析,可见相对分子质量约35000的目的蛋白表达条带;表达的重组蛋白可与兔抗植物乳杆菌多克隆抗体发生特异性反应。结论在毕赤酵母中成功表达了BSH,为BSH结构与相关功能及高效降解胆固醇的基因工程菌株的研究奠定了基础。