牦牛bta-miR-1434-5p和Smad1基因组织表达谱及荧光素酶报告载体构建

为探索牦牛Smad1基因与bta-miR-1434-5p是否存在靶向关系,探究bta-miR-1434-5p分子调控可能机制,利用RT-PCR技术对bta-miR-1434-5p和Smad1 mRNA在牦牛组织中的表达谱进行检测,并构建pmiR-RBREPORTTM双荧光素酶报告载体对牦牛Smad1基因3′端非翻译区(3′UTR)与bta-miR-1434-5p的靶向关系进行研究。结果表明:Smad1基因mRNA在牦牛下丘脑、垂体、心、肝、脾、肺、肾、骨骼肌、淋巴结、卵巢、输卵管、子宫组织中均有广泛表达;bta-miR-1434-5p除在牦牛输卵管中没有表达外,在其他组织均与Smad1基因mRNA共表达;获得牦牛Smad1基因3′UTR序列并成功构建野生型及突变型pmiR-RB-REPORTTM双荧光素酶报告质粒;荧光素酶活性检测发现bta-miR-1434-5p mimics对Smad1野生型质粒报告荧光没有明显的下调作用,由此推测btamiR-1434-5p与牦牛Smad1基因的该段3′UTR之间未发现明显互作。

bta-mir-423-5p在胎衣不下奶牛母体胎盘中的差异表达分析及验证

目的分析及验证bta-mir-423-5p在胎衣不下奶牛母体胎盘中的差异表达。方法选取各种因素无明显差异,且排除其他疾病影响的胎衣正常排出奶牛(对照组)和胎衣不下奶牛(试验组)各3头,对照组在奶牛产后胎衣排出后,立即采集母体胎盘组织约150 mg,试验组在奶牛产后12 h,收集母体胎盘组织约150 mg。采用Solexa高通量测序技术对两组母体胎盘组织间bta-mir-423-5p的差异表达进行分析;利用Real-time Q-PCR法进行验证。结果试验组奶牛母体胎盘中bta-mir-423-5p的表达量明显低于对照组(P<0.01)。结论 bta-mir-423-5p在胎衣不下奶牛母体胎盘中异常表达,表明其可能参与胎衣不下的发生,为奶牛胎衣不下发病机理的研究提供了实验依据。

奶牛乳腺上皮细胞来源外泌体中bta-miR-126-5p靶基因及调控功能的生物信息学分析

目的对奶牛乳腺上皮细胞来源外泌体中bta-miR-126-5p的候选靶基因进行预测,利用相关生物信息学技术对靶基因进行功能分析,为bta-miR-126-5p的功能验证奠定基础。方法应用Targetscan和miRWalk在线分析系统预测bta-miR-126-5p的候选靶基因,利用DAVID、STRING、KEGG等生物信息分析系统对靶基因进行GO富集、蛋白质互作、KEGG富集分析。结果bta-miR-126-5p成熟区序列在不同物种间高度保守,共筛选出203个bta-miR-126-5p的候选靶基因,候选靶基因主要参与金属离子结合(尤其是锌离子结合)以及ATP结合等细胞内部分子功能过程,富集的信号通路集中于脂肪酸生物合成及降解、嘌呤代谢、丙酸盐代谢、磷酸肌醇代谢。结论bta-miR-126-5p可能通过调节候选靶基因参与相关生物学进程,在奶牛炎症反应过程和生理性代谢活动中发挥重要作用。