关岭牛MSTN基因3'-UTR与bta-miR-27b的靶向验证

【目的】明确关岭牛bta-miR-27b与肌肉生长抑制素基因(MSTN)的结合位点及靶向调控关系,为通过调控miRNA改良关岭牛产肉量提供理论依据,也为贵州地方黄牛分子遗传改良工作提供新的切入点。【方法】通过TargetScan预测牛MSTN基因3'端非翻译区(3'-UTR)的潜在miRNA结合区域及互作miRNA,对比关岭牛与不同关岭牛杂交品种的生理表型及MSTN基因和3'-UTR端miRNA表达差异,并分析bta-miR-27b在不同关岭牛杂交群体中的靶位点特异性。将MSTN基因3'-UTR序列野生型(WT)和3'-UTR序列突变型(MUT)分别克隆至pMIR-REPORT Luciferase(H306)载体构建重组双荧光素酶报告基因载体,与bta-miR-27b共转染293T细胞以验证bta-miR-27b与MSTN基因的作用关系,并利用实时荧光定量PCR验证bta-miR-27b对MSTN基因表达的影响。【结果】在牛MSTN基因3'-UTR端发现7个miRNA结合位点;关岭牛各系杂交品种的3个miRNA(bta-miR-27a-3p、bta-miR-27b和bta-miR-128)相对表达量均极显著高于关岭牛(P<0.01,下同),MSTN基因相对表达量极显著低于关岭牛,体质量、体高、体斜长、胸围等生长指标却明显优于关岭牛。关岭牛及其杂交牛MSTN基因3'-UTR端的bta-miR-27b结合区域均无突变、无缺失;MSTN-3'-UTR(WT)与bta-miR-27bmimics共转染293T细胞后其相对荧光值下降53.80%,极显著低于MSTN-3'-UTR(MUT)+bta-miR-27bmimics共转染;转染bta-miR-27b mimics后,bta-miR-27b在关岭牛原代成肌细胞株(N2)中成功超表达,而MSTN基因相对表达量呈极显著下调趋势,表明bta-miR-27b能抑制MSTN基因表达。【结论】bta-miR-27b与MSTN基因的结合区域位于3'-UTR端第62~69位碱基处,且靶位点保守性较高。bta-miR-27b对MSTN基因有很强的靶向调控作用,表现为bta-miR-27b能抑制MSTN基因表达。

miR-27a通过TLR4/NF-κB信号通路对类风湿关节炎滑膜细胞生物学行为的影响

目的:探讨miR-27a通过Toll样受体(TLR)4/NF-κB信号通路对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞生物学行为的影响。方法:选择行膝关节置换术的30例RA患者(RA组)和同期因创伤急诊截肢的18例患者(对照组)的滑膜组织,采用qRT-PCR法检测miR-27a的表达。将RA成纤维样滑膜细胞MH7A分为4组:空白对照组,不进行任何处理;TNF-α组,加入终浓度为20μg/L的TNF-α处理24 h;TNF-α+miR-NC组,加入终浓度为20μg/L的TNF-α处理后转染miR-NC;TNF-α+miR-27a mimic组,加入终浓度为20μg/L的TNF-α处理后转染miR-27a mimic,采用qRT-PCR法检测组织或细胞中miR-27a的表达量,CCK-8法检测细胞增殖情况,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡情况,双荧光素酶报告实验验证TLR4 mRNA与miR-27a的靶向关系,Western blot法检测细胞中TLR4、NF-κB、磷酸化TLR4(p-TLR4)和磷酸化NF-κB(p-NF-κB)蛋白的表达情况。结果:对照组和RA组滑膜组织中miR-27a的表达量分别为(1.00±0.08)和(0.36±0.05),RA组低于对照组(P<0.001)。与空白对照组比较,TNF-α组和TNF-α+miR-NC组细胞中miR-27a表达量下降,TNF-α+miR-27a mimic组miR-27a表达量升高;与TNF-α组和TNF-α+miR-NC组比较,TNF-α+miR-27a mimic组细胞中miR-27a表达量升高(P<0.05)。与空白对照组比较,TNF-α组和TNF-α+miR-NC组细胞增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力增强,细胞凋亡率降低;与TNF-α组和TNF-α+miR-NC组比较,TNF-α+miR-27a mimic组细胞增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力减弱,细胞凋亡率升高(P<0.05)。双荧光素酶报告实验证实TLR4是miR-27a的靶基因。与空白对照组比较,TNF-α组和TNF-α+miR-NC组p-TLR4/TLR4、p-NF-κB/NF-κB升高;与TNF-α组和TNF-α+miR-NC组比较,TNF-α+miR-27a mimics组p-TLR4/TLR4、p-NF-κB/NF-κB降低(P<0.05)。结论:miR-27a可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,降低RA成纤维样滑膜细胞的增殖、侵袭和迁移能力,促进其凋亡。

CD19^(+)CD27^(+)IgD^(+)B细胞与甲状腺相关性眼病患者疾病活动度相关性研究

目的:探讨甲状腺相关性眼病(thyroid-associated ophthalmopathy,TAO)患者外周血CD19^(+)CD27^(+)IgD^(+)B细胞比例变化与病情活动度的关系。方法:采用流式细胞术检测TAO患者和健康对照组CD19^(+)CD27^(+)IgD^(+)B细胞比例,分析TAO患者CD19^(+)CD27^(+)IgD^(+)B细胞比例与健康对照组的差异,并分析CD19^(+)CD27^(+)IgD^(+)B细胞比例与TAO疾病活动度之间的相关性。结果:TAO患者CD19^(+)CD27^(+)IgD^(+)B细胞比例明显低于健康对照(P<0.05);活动性TAO患者CD19^(+)CD27^(+)IgD^(+)B细胞比例细胞显著低于非活动性TAO患者;CD19^(+)CD27^(+)IgD^(+)B细胞比例与TAO患者CAS评分呈显著负相关(r=-0.7128,P<0.001)。结论:TAO患者CD19^(+)CD27^(+)IgD^(+)B细胞比例降低,与疾病活动度呈负相关。

急性脑梗死患者血清miR-27b和miR-146a表达及其与颈动脉狭窄的相关性分析

目的 探讨急性脑梗死(ACI)患者血清miR-27b和miR-146a表达并分析其与颈动脉狭窄的相关性。方法 选取120例ACI患者作为观察组,再选取同期65名健康体检者作为对照组。根据颈动脉狭窄程度将ACI患者分为轻度狭窄组、中度狭窄组、重度狭窄组、完全闭塞组。检测被试者血清miR-27b和miR-146a表达,分析ACI患者血清miR-27b和miR-146a的表达,绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估血清miR-27b和miR-146a表达对ACI的诊断价值,再以Pearson相关性分析法分析血清miR-27b和miR-146a表达与颈动脉狭窄的相关性,行多因素Logistic回归分析探讨影响ACI发生的危险因素。结果 观察组患者血清miR-27b表达高于对照组,血清miR-146a表达低于对照组(P<0.01)。血清miR-27b和miR-146a表达对ACI诊断价值的ROC曲线显示,单独检测时血清miR-27b的敏感度最高,miR-146a的特异度最高,两者联合检测时曲线下面积可达0.986。不同颈动脉狭窄程度ACI患者血清miR-27b和miR-146a表达水平不同,其中轻度狭窄组miR-27b表达最低,miR-146a表达最高,而完全闭塞组miR-27b表达最高,miR-146a表达最低,各组间比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,血清miR-27b表达与颈动脉狭窄程度呈正相关(r=0.775,P<0.01),血清miR-146a表达与颈动脉狭窄程度呈负相关(r=-0.622,P<0.01)。多因素Logistic回归分析显示,血清miR-27b、miR-146a表达为ACI患者发生中、重度颈动脉狭窄的影响因素(P<0.01)。结论 ACI患者血清miR-27b表达升高,miR-146a表达降低,可作为临床诊断ACI的潜在指标,且两者联合检测的价值高于单独检测。

结直肠癌患者血清miRNA-21、miRNA-27b表达水平及其与预后的相关性分析

目的研究结直肠癌患者血清微小RNA(miRNA)-21、miRNA-27b表达水平及其与预后的相关性。方法选取2021年1-5月在该院接受治疗的结直肠癌患者60例作为观察组。另选取同期在该院参加体检的健康志愿者60例作为对照组。检测并对比两组血清miRNA-21及miRNA-27b表达水平,不同病理特征患者的血清miRNA-21及miRNA-27b表达水平,比较不同血清miRNA-21及miRNA-27b表达水平患者的生存预后。结果观察组血清miRNA-21及miRNA-27b表达水平明显高于对照组(P<0.05)。TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期及有淋巴结转移的患者血清miRNA-21及miRNA-27b表达水平分别较Ⅰ~Ⅱ期及无淋巴结转移者更低(P<0.05)。随访2年,miRNA-21高表达组平均生存时间(15.36±2.32)个月,miRNA-21低表达组平均生存时间(21.54±2.46)个月;miRNA-27b高表达组平均生存时间(16.11±3.20)个月,miRNA-27b低表达组平均生存时间(21.37±2.55)个月;miRNA-21高表达组及miRNA-27b高表达组的1、2年生存率均分别明显低于miRNA-21低表达组及miRNA-27b低表达组(P<0.05)。血清miRNA-21及miRNA-27b水平与患者的生存预后均呈负相关(P<0.05)。结论结直肠癌患者的血清miRNA-21及miRNA-27b均呈高表达,且二者表达与患者预后均呈负相关,可用于临床监测患者的病情及预后情况,值得重视。

HLA-B27阳性脊柱关节炎相关眼部疾病

脊柱关节炎(SpA)是与人类白细胞抗原B27(HLA-B27)关系密切的一种炎症性风湿性疾病,可累及骶髂关节、脊柱、外周关节、关节周围附着点,往往还伴有关节外的多系统受累。眼部疾病是HLAB27阳性SpA常见的关节外表现,其中较为常见的为急性前葡萄膜炎,还包括表层巩膜炎、巩膜炎、结膜炎、角膜炎等。HLA-B27阳性SpA并发眼部疾病的病因及发病机制尚不完全清楚,目前的研究发现与遗传易感性、肠道菌群改变、细胞因子失衡有关。本文就HLA-B27阳性SpA相关眼部疾病的发病机制、流行病学、临床特点以及治疗予以综述。

miR-27b对心力衰竭大鼠心肌细胞自噬、心肌能量代谢及PPARα信号的作用机制

目的 研究miR-27b对心力衰竭大鼠心肌细胞自噬、心肌能量代谢及过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)α信号的作用机制。方法 清洁级SD健康雄性大鼠40只,随机分为4组,每组10只,由于建模时意外死亡3只,因此健康组10只、模型组9只,miR-27b-NC组9只、miR-27b组9只,miR-27b-NC组及miR-27b组于腹主动脉分别注射5μl(20 nmol/L)拮抗剂阴性对照、5μl(20 nmol/L)miR-27b拮抗剂,其余大鼠注射等体积生理盐水,1次/d,共4 w。苏木素-伊红(HE)染色及Masson染色观察大鼠心肌组织病理形态及纤维化,实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-27b、磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)mRNA、PPARα mRNA指标水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测心肌细胞能量代谢指标,TUNEL检测心肌细胞凋亡,免疫印迹检测微管相关轻链蛋白(LC)3Ⅱ、LC3Ⅰ、自噬相关蛋白(Beclin)-1、组织蛋白酶(Cath)D表达。结果 HE染色:健康组心肌细胞形态正常,结构清晰;模型组与miR-27b-NC组心肌细胞水肿并有大量炎性细胞浸润,此外还产生大量的成纤维细胞;miR-27b组与模型组相比,成纤维细胞增生及炎性细胞浸润减少。Masson染色:胶原纤维呈现蓝紫色,心肌细胞及肌纤维呈现红色。健康组心肌组织结构正常,心腔附近有少量胶原纤维;模型组与miR-27b-NC组胶原纤维显著增加;与模型组相比,miR-27b组胶原纤维增生有所减少。上述结果均提示建模成功。与健康组相比,模型组与miR-27b-NC组N末端B型脑钠肽前体(NT-proBNP)、游离脂肪酸(FFA)、心肌细胞凋亡、LC3Ⅱ、Beclin-1、CathD、miR-27b水平显著升高,LC3Ⅰ、AMPK、PPARα水平显著降低(P<0.05),在经过抑制miR-27b后,NT-proBNP、FFA、心肌细胞凋亡、LC3Ⅱ、Beclin-1、CathD、miR-27b水平显著降低,LC3Ⅰ、AMPK、PPARα水平显著升高(P<0.05)。结论 沉默miR-27b表达后可抑制心力衰竭大鼠心肌细胞自噬,减少心肌细胞凋亡,同时通过调控AMPK/PPARα通路改善心肌能量代谢水平,从而起到心保护的作用。

白藜芦醇单用或与miR-27b激动剂联合应用对脑出血大鼠脑组织继发性病理损伤的防治作用观察

目的观察白藜芦醇(Res)单用或与miR-27b激动剂联合应用对脑出血(ICH)大鼠脑组织继发性病理损伤的防治作用。方法将180只雄性SD大鼠随机分为假手术组、ICH组、Res组、Res+miR-27b agomir组、NC组,每组36只。ICH组、Res组、Res+miR-27b agomir组以及NC组大鼠采用胶原酶注射尾状核法制备ICH模型。Res组、Res+miR-27b agomir组、NC组大鼠在造模前连续7 d腹腔注射Res,假手术组及ICH组采注射等体积DMSO。Res+miR-27b agomir组大鼠在造模前3 d将miR-27b激动剂miR-27b agomir注入大鼠右侧脑室,NC组大鼠注射agomir阴性对照试剂,假手术组、ICH组、Res组注射等量生理盐水。各组大鼠造模成功后继续喂养24 h,使用mNSS评分量表评估神经功能。各组大鼠处死后取脑组织,采用TUNEL法测算脑组织神经细胞凋亡率,采用ELISA法检测大鼠脑组织炎症因子、氧化应激相关因子,采用qRT-PCR法检测大鼠脑组织中miR-27b、核因子相关因子2(Nrf2)mRNA,采用Western Blotting法检测大鼠脑组织中Nrf2/ARE信号通路相关蛋白Nrf2、血红素加氧酶(HO-1)、醌氧化还原酶1(Nqo1)。结果假手术组大鼠mNSS评分、脑组织神经细胞凋亡率和TNF-α、IL-1β、MDA表达水平均低于其余各组(P均<0.05),SOD活力均高于其余各组(P均<0.05);ICH组大鼠mNSS评分、脑组织神经细胞凋亡率和TNF-α、IL-1β、MDA表达水平均高于其余各组(P均<0.05),SOD活力均低于其余各组(P均<0.05);且Res+miR-27b agomir组大鼠mNSS评分、脑组织神经细胞凋亡率和TNF-α、IL-1β、MDA表达水平均高于Res组和NC组(P均<0.05),SOD活力均低于Res组和NC组(P均<0.05)。与假手术组相比,ICH组、Res组、Res+miR-27b agomir组、NC组大鼠脑组织中miR-27b相对表达量均降低,Nrf2mRNA和蛋白、HO-1蛋白、NQO1蛋白相对表达量均升高(P均<0.05);与ICH组相比,Res组、Res+miR-27b agomir组、NC组大鼠脑组织中miR-27b相对表达量均降低,Nrf2 mRNA和蛋白、HO-1蛋白、NQO1蛋白相对表达量均升高(P均<0.05);与Res+miR-27b agomir组相比,Res组、NC组大鼠脑组织中miR-27b相对表达量均降低,Nrf2 mRNA和蛋白、HO-1蛋白、NQO1蛋白相对表达量均升高(P均<0.05)。结论Res单用或联合miR-27b激动剂可对ICH大鼠脑组织继发性病理损伤起防治作用,其防治作用可能与激活Nrf2/ARE信号通路有关。

银杏内酯B通过阻抑PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制胃癌HGC-27细胞的恶性生物学行为

目的:探讨银杏内酯B(GKB)是否通过阻抑PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制胃癌HGC-27细胞的增殖、凋亡、迁移及侵袭。方法:将HGC-27细胞分为对照、GKB低剂量(100 mg/L)、GKB高剂量(200 mg/L)、GKB高剂量(200 mg/L)+740Y-P(PI3K激活剂)、Ly294002(PI3K抑制剂)组。采用MTT、Edu、FCM、Transwell实验分别检测各组细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭能力,q PCR和WB法分别检测各组细胞中PI3KmRNA、AktmRNA、mTOR mRNA和Ki-67、caspase-3、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白的表达。构建胃癌HGC-27细胞裸鼠移植瘤模型,观察GKB对移植瘤生长的影响,WB法检测移植瘤组织中Ki-67、caspase-3、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白的表达。结果:体外实验结果表明,与对照组相比,GKB低剂量组、GKB高剂量组、Ly294002组HGC-27细胞的增殖活力及细胞增殖率、迁移和侵袭细胞数,PI3K、Akt、mTOR mRNA表达,以及Ki-67、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达均显著降低(均P<0.05);细胞凋亡率、caspase-3蛋白表达均显著升高(均P<0.05);740Y-P可部分逆转GKB对HGC-27细胞的抑制作用(均P<0.05)。荷瘤裸鼠实验结果显示,GKB可显著抑制HGC-27细胞裸鼠移植瘤的生长(P<0.05),且可下调PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白的表达。结论:GKB可通过阻抑PI3K/Akt/mTOR信号通路而抑制胃癌HGC-27细胞增殖、迁移与侵袭并促进其凋亡。

血清miR-27b、Hcy评估老年重症心力衰竭患者随访1年预后的临床价值

目的 探讨血清miR-27b、同型半胱氨酸(Hcy)评估老年重症心力衰竭患者随访1年预后的临床价值。方法 前瞻性纳入86例老年重症心力衰竭患者,检测患者血清miR-27b、Hcy水平,并收集患者年龄、性别、饮酒吸烟史、既往病史、体质量指数及相关实验室检查资料。所有患者接受为期1年的跟踪随访,根据其预后情况分为预后不良组(n=23)和预后良好组(n=63),通过单因素分析对影响患者疾病预后的风险因素筛选,采用Logistic回归分析明确危险因素,并通过受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)分别评价血清miR-27b、Hcy水平及联合检测对老年重症心力衰竭患者预后风险的预测价值。结果 随访1年后,23例(26.74%)预后不良。预后不良组左室射血分数(LVEF)、血清Hcy及miR-27b水平均较预后良好组明显偏高(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,LVEF数值偏低、血清Hcy水平及miR-27b水平偏高均是影响老年重症心力衰患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线显示,血清Hcy、miR-27b及两项指标联合检测的AUC分别为0.838(95%CI为0.721~0.955)、0.823(95%CI为0.694~0.952)、0.968(95%CI为0.925~0.999),联合诊断的AUC较各项指标单因子预测价值较高(P<0.05)。结论 血清Hcy、miR-27b水平均是影响老年重症心力衰竭患者预后不良的独立危险因素,且两项指标均对患者发生不良预后结局的预测效能较高,联合检测的预测价值更高。

miR-27b/PPARγ2轴对小鼠胚胎成骨前体细胞增殖和成骨细胞分化的意义

背景:先前的研究证实了miR-27b在脂质水平的作用,可以控制多个对血脂异常有重要影响的基因,推测miR-27b可能通过靶向PPARγ2在骨质疏松症中发挥作用。目的:探讨miR-27b/PPARγ轴在地塞米松诱导小鼠胚胎成骨细胞前体细胞MC3T3-E1细胞建立骨质疏松症细胞模型中的影响及相关作用机制。方法:体外地塞米松诱导MC3T3-E1细胞后,通过Lipofectamine^(■)2000转染miR-27b模拟物、miR-27b抑制剂、NC-模拟物、NC-抑制剂、siPPARγ2、siNC,使用二甲基亚砜处理作为对照。细胞诱导培养后,检测细胞活性、碱性磷酸酶活性以确定细胞成骨、分化水平;实时荧光定量PCR法和Western blot法检测成骨分化基因miR-27B、PPARγ2、Runx2、骨形态发生蛋白2和骨钙素的mRNA及蛋白表达水平;生信分析预测miR-27b下游靶基因,并用双荧光素酶基因报告实验验证。结果与结论:①地塞米松处理显著降低了MC3T3-E1细胞的活力和miR-27b表达水平;与二甲基亚砜相比,地塞米松处理在24和48 h显著抑制MC3T3-E1细胞的活力并显著下调了miR-27b的表达水平;②miR-27b可直接调控PPARγ2;与相应的NC相比,miR-27b模拟物显著上调了miR-27b的表达水平,而miR-27b抑制剂显著下调了miR-27b的表达水平;与相应的NC相比,PPARγ2 mRNA和相应蛋白质表达被miR-27b模拟物抑制,并被miR-27b抑制剂显著增强;③miR-27b过表达减弱了地塞米松抑制MC3T3-E1细胞的增殖和成骨分化;与二甲基亚砜+NC-mimic组相比,地塞米松显著抑制成骨细胞分化;而地塞米松介导的抑制作用则被miR-27b模拟物所逆转,细胞碱性磷酸酶活性和骨形态发生蛋白2、Runx2和骨钙素蛋白表达水平部分恢复;④抑制miR-27b通过上调PPARγ2抑制MC3T3-E1细胞的增殖和成骨分化;miR-27b的敲除明显增加了PPARγ2的表达,并降低了细胞活力、成骨细胞分化、碱性磷酸酶活性以及骨形态发生蛋白2、Runx2和骨钙素的表达水平;PPARγ2可能是miR-27b的直接作用靶点。

HLA-B27、ANA和ANCA检测对类风湿性关节炎的诊断价值

目的探讨人类白细胞B27抗原(HLA-B27)、抗核抗体(ANA)和抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)在诊断类风湿性关节炎(RA)的临床价值。方法选取2018年9月至2020年9月在我院风湿科住院的患者,其中RA组132例,并随机选取同期治疗的非RA组患者132例,比较两组一般资料和维生素D(VitD)、白细胞介素33(IL-33)、白细胞介素35(IL-35)水平;分析HLA-B27、ANA和ANCA的阳性率,相关性分析IL-33、IL-35和VitD水平与HLA-B27、ANA和ANCA阳性率的关系,判断HLA-B27、ANA和ANCA诊断RA的准确性。结果两组一般资料无显著差异(P>0.05);RA组IL-33水平高于非RA组患者(P<0.05),IL-35和VitD显著低于非RA组(P<0.05);RA组HLA-B27、ANA和ANCA阳性率均高于非RA组(P<0.05);RA组患者IL-33水平与HLA-B27(+)、ANA(+)和ANCA(+)呈正相关(r=0.356、0.321和0.290,P<0.05),IL-35水平与HLA-B27(+)、ANA(+)和ANCA(+)呈负相关(r=-0.299、-0.357和-0.301,P<0.05),VitD水平与HLA-B27(+)、ANA(+)和ANCA(+)呈负相关(r=-0.407、-0.335和-0.371,P<0.05)。HLA-B27诊断RA灵敏度、特异度和kappa系数分别为77.78%、97.36%和0.697;ANA诊断RA灵敏度、特异度、和kappa系数分别为80.56%、92.68%和0.648;ANCA诊断RA灵敏度、特异度和kappa系数值分别为79.49%、95.06%和0.715;HLA-B27、ANA和ANCA联合诊断RA灵敏度、特异度和kappa系数分别为81.82%、96.00%和0.785。结论HLA-B27、ANA和ANCA联合检测可以提高RA诊断的准确度,值得临床推广使用。

胃癌组织内miR-34a与miR-27b表达及其抑制胃癌生长与血管生成的机制

目的探究胃癌组织中miR-34a与miR-27b表达水平及其对胃癌生长和血管生成的影响。方法通过实时荧光定量PCR检测胃癌组织及癌旁组织中miR-34a和miR-27b表达,免疫组织化学染色检测胃癌组织及癌旁组织中血管内皮生长因子(VEGF)表达;通过脂质体介导法将miR-34a mimic、miR-27b mimic及对应的阴性对照转染至胃癌细胞SGC-7901,CCK-8法和5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)实验检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移与侵袭,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液VEGF与血管内皮生长因子受体(VEGFR)2水平,荧光素酶报告系统检测miR-34a、miR-27b与VEGF的靶标关系,Western印迹检测细胞中含激酶插入区受体(KDR)、胎肝激酶(FLK)-1蛋白表达,静脉内皮细胞成管实验检测血管形成能力。结果胃癌组织中miR-34a、miR-27b相对表达水平均低于癌旁组织,而胃癌组织VEGF阳性表达率高于癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.01);与空白对照组比较,SGC-7901细胞转染miR-34a mimic、miR-27b mimic后,细胞增殖活性下降,细胞迁移与侵袭数目均减少,细胞上清液中VEGF与VEGFR2含量均降低,差异均具有统计学意义(P<0.01);miR-34a、miR-27b分别与VEGF 3′-UTR在特定区域存在碱基互补现象,且负调控VEGF表达,细胞中KDR、FLK-1蛋白表达较空白对照组也明显降低,同时,经过miR-34a mimic与miR-27b mimic细胞上清液处理的细胞形成小管数目均减少,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论miR-34a与miR-27b在胃癌组织中表达下降,两者均能抑制胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭及血管形成,从而影响胃癌进程,其机制可能与靶向调控VEGF表达相关。

结直肠癌患者血清lncRNA SNHG11及miRNA-27b水平分析及与预后的关系

目的探讨结直肠癌患者血清长链非编码RNA(lncRNA)小核RNA宿主基因11(SNHG11)及微小RNA(miRNA)miR-27b的表达及与预后的关系。方法将2016年1月至2018年1月广州市增城区中医医院收治的94例结直肠癌患者纳入研究作为结直肠癌组,将同期于该院就诊的94例结直肠良性疾病患者纳入研究作为结直肠癌良性疾病组,另选取94例体检健康者作为对照组。比较3组血清lncRNA SNHG11、miR-27b水平。结直肠癌组患者根据临床特征分为不同的亚组,比较亚组间lncRNA SNHG11、miR-27b水平。随访3年,根据患者存活情况分为存活组和死亡组,比较两组lncRNA SNHG11、miR-27b水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析lncRNA SNHG11、miR-27b水平用于评估患者预后的价值。以结直肠癌患者lncRNA SNHG11、miR-27b水平平均值为界将患者分为高、低表达组,采用K-M生存曲线分析两组患者累积存活率。结果相较于对照组及结直肠良性疾病组,结直肠癌组患者血清lncRNA SNHG11水平更低,而miR-27b水平更高(P<0.05);亚组分析结果显示:患者lncRNA SNHG11、miR-27b水平与淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05)。相较于存活组,死亡组lncRNA SNHG11水平更低,而miR-27b水平更高(P<0.05)。ROC曲线分析显示:lncRNA SNHG11用于评估患者生存预后的最佳截断值为3.883,曲线下面积为0.868;miR-27b用于评估患者生存预后的最佳截断值为3.971,AUC为0.851。随访3年,lncRNA SNHG11高表达组(54例)中36例存活,累积存活率为66.67%,lncRNA SNHG11低表达组(40例)中16例存活,累积存活率为40.00%,两组累积存活率比较差异有统计学意义(P<0.05);miR-27b高表达组(43例)中18例存活,累积存活率41.86%,miR-27b低表达组(51例)中34例存活,累积存活率为66.67%,两组累积存活率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论结直肠癌患者血清lncRNA SNHG11水平下降,而miR-27b水平升高,二者水平与患者淋巴结转移、TNM分期有关,可作为患者生存预后评估的辅助指标。

长链非编码RNA NEAT1靶向miR-27b调控RA-FLS细胞生物学功能机制研究

目的研究长链非编码RNA NEAT1靶向miR-27b调控类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)细胞生物学功能机制。方法选取2021年1月至2022年12月在南昌大学第一附属医院东湖院区风湿免疫科确诊的类风湿关节炎(RA)患者40例作为观察组,同期行膝关节手术的健康创伤患者40例作为对照组开展研究。分别采集观察组和对照组研究对象的膝关节滑膜组织中进行培养,培养成功之后将RA-FLS细胞根据免疫荧光分为对照组以及观察组。其中观察组待细胞汇合度达至80%时转入si-NEAT1,对照组则转入对照组-siRNA。比较两组NEAT1、miR-27b的表达,RA-FSL细胞生物学功能,炎症因子表达水平,并行Pearson相关性分析。结果观察组NEAT1、miR-27b相对表达量分别相较于对照组均更低,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组RA-FSL细胞增殖率、迁移细胞数、侵袭细胞数分别相较于对照组均更低,而细胞凋亡率相较于对照组更高,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平分别相较于对照组均更低,差异有统计学意义(P<0.05)。经Pearson相关性分析发现:NEAT1、miR-27b与IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平均呈正相关(P<0.05)。结论长链非编码RNA NEAT1靶向miR-27b调控炎症因子,进而影响RA-FLS细胞生物学功能。

miR⁃27b⁃3p通过靶向SSRP1调控骨肉瘤细胞的生长

目的:探究miR⁃27b⁃3p对骨肉瘤(osteosarcoma,OS)细胞生长的影响及其潜在的分子机制。方法:①采用实时荧光定量PCR(RT⁃qPCR)分析miR⁃27b⁃3p在骨肉瘤细胞系中的表达;②CCK⁃8实验、集落形成实验及流式细胞术检测miR⁃27b⁃3p以及SSRP1对骨肉瘤细胞生长的影响;③使用在线数据库预测miR⁃27b⁃3p的靶基因并进行筛选,使用双荧光素报告酶实验测定miR⁃27b⁃3p与结构特异性识别蛋白1(structure⁃specific recognition protein⁃1,SSRP1)的关系;④干扰效率以及过表达效率使用Western blot实验验证。结果:①miR⁃27b⁃3p在骨肉瘤细胞和临床样本中低表达,过表达miR⁃27b⁃3p会抑制骨肉瘤细胞的生长;②生物信息学分析和双荧光素报告酶实验证实SSRP1为miR⁃27b⁃3p的靶基因,SSRP1表达受miR⁃27b⁃3p的直接调控;③干扰SSRP1的表达会抑制骨肉瘤细胞的增殖,促进凋亡;④过表达SSRP1会部分逆转miR⁃27b⁃3p对骨肉瘤细胞生长的抑制效应。结论:miR⁃27b⁃3p在骨肉瘤细胞中低表达,通过靶向SSRP1从而影响骨肉瘤细胞的生长。miR⁃27b⁃3p可能是骨肉瘤的一个潜在的分子靶点,靶向miR⁃27b⁃3p/SSRP1轴可能成为骨肉瘤治疗的新策略。

基于HSP27-TLR4/NF-κB通路的芪参颗粒对大鼠心肌梗死后炎症反应的影响

目的基于HSP27-TLR4/NF-κB通路探讨芪参颗粒对大鼠心肌梗死后炎症反应的影响及潜在机制。方法48只雄性SD大鼠分别进行左冠状动脉前降支结扎术造模或假手术,将假手术大鼠分为对照组、芪参颗粒对照组,造模大鼠分为模型组和芪参颗粒组。术后24 h予芪参颗粒(2.352 g/kg)或蒸馏水灌胃,每日1次,连续1周。超声检测大鼠心功能,免疫荧光、HE和Masson染色评估心肌结构、炎症及纤维化改变,ELISA检测血浆热休克蛋白27(HSP27)含量,Western blot检测心肌组织Toll样受体(TLR)4和核因子-κB(NF-κB)蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠左室舒张末期前壁厚度、左室收缩末期前壁厚度(LVAWs)、左室舒张末期后壁厚度(LVPWd)、左心室收缩末期后壁厚度、射血分数(EF)和短轴缩短率(FS)显著降低(P<0.01),左室舒张末期内径、左室收缩末期内径(LVIDs)、左室舒张末期容积、左室收缩末期容积(LVESV)显著升高(P<0.05,P<0.01);心肌细胞大量坏死,梗死边缘区心肌细胞代偿性肥大且排列紊乱,血管旁和心肌间质内大量炎性细胞浸润和胶原纤维沉积;血浆HSP27含量显著增加(P<0.01),心肌组织TLR4、NF-κB p65蛋白表达显著升高(P<0.05)。与模型组比较,芪参颗粒组大鼠LVAWs、LVPWd、EF和FS显著升高,LVIDs、LVESV显著降低(P<0.05,P<0.01);心肌组织炎性细胞浸润、心肌细胞存活情况和间质纤维化情况显著改善;血浆HSP27含量显著减少(P<0.01),心肌组织TLR4、NF-κB p65蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论芪参颗粒可能通过降低血浆HSP27含量抑制TLR4/NF-κB通路,从而减轻炎症反应,改善心肌梗死后心室重构和心功能下降。

cMPO、HLA-B27在急性淋巴细胞白血病中的表达及临床意义

目的基于流式细胞术观察急性淋巴细胞白血病(ALL)患者细胞质髓过氧化物酶(cMPO)及人类白细胞抗原B27(HLA-B27)表达情况,分析两者与ALL发生及治疗效果的关系。方法将2020年10月至2022年10月该院收治的45例ALL患者作为ALL组,另选取同期于该院治疗的45例非恶性血液疾病患者作为非ALL组。采用流式细胞术检测两组患者于入院时cMPO、HLA-B27表达情况,统计患者基线资料。ALL患者给予常规治疗,根据临床疗效分为有效组、无效组。采用Logistics回归分析分析cMPO、HLA-B27与ALL发生及治疗效果的相关性。结果ALL组cMPO阳性、HLA-B27阳性患者比例高于非ALL组(P<0.05)。二元Logistics回归分析显示,cMPO、HLA-B27阳性是ALL发生的危险因素(OR>1,P<0.05)。45例ALL患者经4次给药后,有效35例,无效10例,无效组骨髓幼稚细胞比例、Hb、PLT低于有效组(P<0.05),WBC高于有效组(P<0.05)。二元Logistics回归分析显示,cMPO、HLA-B27阳性是ALL患者治疗无效的危险因素(OR>1,P<0.05)。结论cMPO、HLA-27阳性表达与ALL的发生及临床疗效密切相关,临床可通过监测cMPO、HLA-27表达情况,针对性地制订治疗方案,从而提高ALL患者临床疗效。

强直性脊柱炎患者HLA-B27核酸、炎症指标、免疫指标的临床意义分析

目的探讨人类白细胞抗原B27(HLA-B27)核酸、炎症指标、免疫指标在强直性脊柱炎(AS)患者中的临床意义。方法纳入73例AS患者(AS组)及73例健康体检者(健康对照组),检测外周血HLA-B27核酸、炎症指标[超敏C反应蛋白(hs-CRP)、前清蛋白(Prea)]、免疫指标[免疫球蛋白(Ig)A、IgG、IgM、IgE、补体C3(C3)、补体C4(C4)、血清总补体(CH50)]及抗链球菌溶血素O(ASO)、类风湿因子(RF)、红细胞沉降率(ESR)。采用受试者工作特征曲线分析HLA-B27核酸、hs-CRP和ESR对AS的诊断效能。结果AS组HLA-B27核酸阳性率及ESR、hs-CRP、ASO、IgA水平显著高于健康对照组(P<0.05),hs-CRP在不同分级AS患者中比较,差异均有统计学意义(P<0.05);AS组Prea、RF、IgG、IgM、IgE、C3、C4、CH50与健康对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。HLA-B27核酸、hs-CRP和ESR联合检测诊断AS的曲线下面积为0.996(95%CI:0.991~0.999),大于各项指标单独诊断(P<0.05)。结论HLA-B27核酸、hs-CRP及ESR联合检测能够有效提高AS的检出率,在AS的辅助诊断中发挥着重要作用。

湖南地区携带HLA-B*27꞉04等位基因人群与强直性脊柱炎的易感性具有强相关性

目的:人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)B27是强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)的易感等位基因,HLA-B27抗原分型是临床诊断AS的重要指标,但目前的分型方法如序列特异引物聚合酶链反应技术(polymerase chain reaction-sequence specific primer,PCR-SSP)等仍存在一定的缺陷。因此,本研究旨在应用高分辨率聚合酶链反应直接测序分型法(polymerase chain reaction-sequence-based typing,PCR-SBT)分析B27亚型与湖南地区强直性脊柱炎易感性的相关性。方法:收集2020年1至12月在湘雅二医院门诊就医的116例疑似AS患者(疑似AS组)和121名健康志愿者(对照组)的外周血,采用PCR-SBT进行HLA-B基因分型。在疑似AS组患者中,23名患者最终被确诊为AS(AS确诊组),其余的93名未能确诊的患者为非AS确诊组。采用PCR-SBT和PCR-SSP检测116例疑似AS患者的HLA-B27分型,并比较2种方法的检测结果。结果:疑似AS组HLA-B27等位基因频率显著高于对照组[11.63%vs 2.48%;P<0.001,优势比(odds ratio,OR)=5.18,95%置信区间(confidence interval,CI)2.097~12.795]。疑似AS组和对照组均检出B*27:04、B*27:05、B*27:06、B*27:07。疑似AS组B*27:04等位基因频率明显高于对照组[9.48%vs 1.24%;P<0.001,OR=8.346,95%CI 2.463~28.282]。疑似AS组和AS确诊组B27阳性率(B27+/+和B27+/-)均显著高于对照组(分别χ^(2)=16.579,P<0.001;χ^(2)=94.582,P<0.001)。在AS确诊组中,21例为HLA-B27携带者,AS确诊组B27阳性率为91.3%。PCR-SBT方法可对HLA-B基因位点进行高分辨分型,其敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确度均高于PCR-SSP法。结论:应用PCR-SBT检测出HLA-B*27:04与湖南地区AS具有强相关性。PCR-SBT可作为临床AS辅助诊断的优选方案。