荞麦蜂花粉多糖的纯化、表征及其在体外消化过程中抗氧化活性的变化

本论文旨在研究荞麦蜂花粉多糖(BWPP)在模拟体外胃肠消化过程中的抗氧化活性。采用DEAE-52纤维素柱对粗多糖进行分级纯化,经体外模拟胃、肠消化研究其在体外消化过程中的抗氧化活性的变化规律。结果表明经DEAE-52纤维素柱层析洗脱纯化后得到总糖含量最高组分BWPP-1,其主要由Glc、Xyl、Ara等组成,且红外光谱显示BWPP-1具有明显的多糖特征吸收峰。BWPP和BWPP-1在进行体外模拟胃肠消化时,模拟胃液消化60 min时,BWPP和BWPP-1的ABTS^(+)·清除率均达到最大值,分别为86.39%±1.28%、90.38%±2.78%,与其他消化时间的存在显著差异(P<0.05);60 min时对DPPH·清除率达到最大值,分别为86.86%±0.11%、89.58%±1.67%,且二者差异不显著(P>0.05);模拟肠液消化时,BWPP和BWPP-1对ABTS^(+)·清除率在60 min时达到最大值为88.67%±0.40%和91.82%±2.77%,且二者差异不显著(P>0.05);对DPPH·清除率在240 min时达到最大值57.11%±0.06%和65.67%±3.67%,二者差异显著(P<0.05);而在消化过程中,对铁离子还原能力均较弱。由此可得,BWPP和BWPP-1具有较好的ABTS^(+)·和DPPH·清除能力,且胃液消化时DPPH·清除能力略高于肠液消化,而肠液消化时的ABTS^(+)·清除能力略高于胃液消化。本研究为以荞麦蜂花粉为基料的功能性产品的开发提供理论依据。

酶提醇沉提取荞麦蜂花粉粗多糖工艺优化及其抗氧化活性分析

以荞麦蜂花粉为研究对象,采用Box-behnken响应面试验优化酶提醇沉法提取荞麦蜂花粉粗多糖,并对提取得到的粗多糖进行结构鉴定和抗氧化活性分析。结果表明,当果胶酶、纤维素酶、中性蛋白酶的添加量分别为0.02%,0.03%,1.0%时,以75%乙醇为提取剂,在39℃提取时提取率最高可达(30.74±0.23)%。经红外光谱和紫外光谱分析,粗多糖具有明显的多糖特征吸收峰,且不含有核酸和蛋白质,经HPLC分析,荞麦蜂花粉粗多糖主要是由Glc组成,其含量高达54.74%,并含有少量的Man、鼠李糖、GlcN、GlcUA、Gal、Fuc;其单糖含量比为Man∶鼠李糖∶GlcN∶GlcUA∶Glc∶Gal∶Fuc为1.472∶1.723∶0.119∶0.129∶54.740∶11.458∶0.490。通过对荞麦蜂花粉粗多糖进行抗氧化活力测定结果表明,O_(2)^(-)·清除率IC_(50)值为(0.636±0.005)mg/mL,ABTS+自由基清除率IC_(50)值为(1.678±0.006)mg/mL,DPPH自由基清除率IC_(50)值为(0.734±0.003)mg/mL,羟基自由基(·OH)清除率IC_(50)值为(0.527±0.004)mg/mL,均显著优于阳性对照物荞麦粉多糖、香菇多糖的抗氧化能力(p<0.01)。

荞麦蜂花粉多酚对α-淀粉酶的抑制作用

蜂花粉多酚是一类能够有效降低血糖的天然物质。α-淀粉酶是高等生物体内血糖控制的关键酶,抑制其活性有助于控制餐后血糖。为探究蜂花粉多酚抑制α-淀粉酶发挥降糖活性的机制,本文以荞麦蜂花粉多酚(buckwheat bee pollen polyphenol,BBPP)为对象,采用比色法、荧光分光光度法研究BBPP对α-淀粉酶活性影响及其抑制机理。结果表明,BBPP能对α-淀粉酶产生较强的抑制作用,半抑制浓度(IC_(50))为2.00±0.06 mg/mL,抑制类型为可逆性混合型抑制。高温、强碱、光照以及高浓度氧化剂与还原剂等处理,均能降低BBPP对α-淀粉酶的抑制作用。在273~298 K和298~310 K时其结合过程分别为动态猝灭和静态猝灭。随着BBPP浓度增加,α-淀粉酶荧光最大发射波长产生蓝移,表明α-淀粉酶构象改变,疏水性增加。本研究发现荞麦蜂花粉多酚对α-淀粉酶具有较强抑制作用,对荞麦蜂花粉多酚的临床开发利用具有重要的理论参考价值。

荞麦蜂花粉多糖对肉仔鸡免疫功能、血脂及抗氧化能力的影响

试验旨在观察日粮中添加荞麦蜂花粉多糖对肉仔鸡免疫功能、血脂及抗氧化能力的影响。将200羽1日龄AA肉仔鸡随机分为空白对照组、试验1、2、3组,每组5个重复,每个重复10羽。其中对照组饲喂基础日粮,试验1、2、3组分别在基础日粮中添加500.0、1 000.0、1 500.0 mg/kg的荞麦蜂花粉多糖。饲养试验期为42 d。结果表明,与对照组相比,试验1、2、3组可显著提高肉仔鸡脾脏指数、胸腺指数与血清IgG含量,能显著升高血清SOD与GSH-Px活性,降低MDA含量(P<0.05)。另外,试验2、3组还可显著提高法氏囊指数与血清IgA、IgM含量,并明显降低血清胆固醇含量(P<0.05)。但各试验组对肉仔鸡生长性能、甘油三酯含量无明显影响(P>0.05)。试验结果表明,基础日粮中添加荞麦蜂花粉多糖,可明显促进肉仔鸡免疫功能,降低血清胆固醇,并明显提高肉仔鸡抗氧化能力。提示荞麦蜂花粉多糖可能是一种较好的纯天然肉仔鸡免疫增强剂与抗氧化剂。

荞麦蜂花粉的氧化应激防护及其活性成分分析

本文研究了荞麦蜂花粉的醇提取物和水提取物,测定了其体外抗氧化能力及其对骨髓干细胞增殖的促进能力,据此筛选出功能性更强的荞麦蜂花粉水提取物,研究其对骨髓干细胞的辐射防护作用,并测定了其氨基酸和多糖的组成。结果表明:荞麦蜂花粉水提取物及醇提取物均具有一定的抗氧化能力,且呈剂量依赖关系。荞麦蜂花粉水提取物对骨髓干细胞促增殖活性最高可达74.74%,其促进作用显著高于醇提取物。荞麦蜂花粉水提取物主要成分为糖及蛋白质,其富含多种氨基酸,其中谷氨酸含量最高,其次为天冬氨酸、赖氨酸、苏氨酸及丝氨酸。荞麦蜂花粉水提取物的单糖组成主要为核糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖及半乳糖,其物质的量比为0.35∶0.95∶27.78∶0.93∶1.70∶13.19∶16.16。

荞麦蜂花粉抑制酪氨酸酶活性成分研究

本实验研究了荞麦蜂花粉乙醇提取物不同组分对蘑菇酪氨酸酶活性的影响,并对其有效成分进行了分离及鉴定。结果表明:AB-8大孔树脂50%乙醇洗脱物对酪氨酸酶活性的抑制效果最明显,该部分经MCI、ODS柱分离,得到了三种鞣质类单体化合物:1,2,3,4,6-五-O-没食子酰-D-葡萄糖(1)、1,2,3,4,6-五-O-没食子酰-2-O-间-双没食子酰-D-葡萄糖(2)、葡萄糖上连了9个没食子酰基团的物质(3)。这三个化合物是首次从荞麦蜂花粉中分离、鉴定的鞣质类物质,在浓度为1 mg/m L时,化合物1、2、3对酪氨酸酶的抑制率分别为:60.77%、78.25%、53.64%。

荞麦蜂花粉总黄酮含量测定及提取工艺研究

研究荞麦蜂花粉总黄酮类物质的提取工艺,以芦丁为对照品用吸光光度法测定总黄酮含量;比较了索氏提取法、热回流法和冷浸法等提取方法;提出采用水沉法精制粗黄酮浸膏;通过L9(34)正交试验,优选了提取工艺参数。结果表明:索氏提取法测得荞麦蜂花粉总黄酮含量最高,为3.81%;冷浸法提取工艺虽然提取率稍低,但实用价值高。

荞麦蜂花粉多糖对糖尿病大鼠血糖、血脂的影响

目的:观察荞麦蜂花粉多糖对四氧嘧啶(ALX)性糖尿病大鼠血糖、血脂的影响。方法:用ALX建立糖尿病大鼠模型,分别用荞麦蜂花粉多糖150mg/(kg.d)、300mg/(kg.d)及阳性对照药苯乙双胍350mg/(kg.d)灌胃治疗,正常对照组及糖尿病模型对照组则给等容积生理盐水。连续给药14d后,分别测定各组大鼠血糖、血脂。结果:荞麦蜂花粉多糖150mg/(kg.d)、300mg/(kg.d)能明显降低ALX所致糖尿病大鼠高血糖,与糖尿病模型对照组相比,P<0.01。同时,相同剂量的荞麦蜂花粉多糖还能明显降低ALX性糖尿病大鼠血清TG(P<0.05)、TC、LDL-C(P<0.01)。另外,荞麦蜂花粉多糖300mg/(kg.d)还能使糖尿病大鼠血清HDL-C显著回升(P<0.05)。但荞麦蜂花粉多糖150mg/(kg.d)对HDL-C则无明显影响(P>0.05)。结论:荞麦蜂花粉多糖能降低ALX性糖尿病大鼠高血糖、血脂,提示荞麦蜂花粉多糖对糖尿病的防治具有一定的应用价值。

气相色谱质谱法分析荞麦蜂花粉中脂肪酸成分

[目的]分析测定荞麦蜂花粉中的脂肪酸成分。[方法]分别采用索氏抽提法和酸水解法提取荞麦蜂花粉脂肪酸,再经过甲酯化处理后,通过气相色谱/质谱联用技术分析脂肪酸的组成。[结果]两种提取方法的脂肪酸收率分别为8.26%和8.81%,共检出11种脂肪酸成分,含量最高的是5,11,14,17-二十碳四烯酸,两种提取方法得到的结果分别为29.45%和38.15%,其余主要成分为棕榈酸、亚油酸、油酸和二十碳三烯酸。[结论]荞麦蜂花粉中富含ω-3家族的二十碳多不饱和脂肪酸,明显不同于文献报道的荞麦种子油脂肪酸成分,其是否与荞麦蜂花粉所具有的生理活性功能相关,值得深入研究。

荞麦蜂花粉的化学成分研究

从荞麦蜂花粉中分离得五种结晶化合物,经化学鉴别及测定其光谱数据,鉴定为二十九烷烃,软脂酸,C-3/C-8″双芹菜素,山萘酚-3-O-槐糖甙以及山萘酚-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-葡萄糖甙。‘

荞麦蜂花粉多糖A的分离及其降血糖活性

对荞麦蜂花粉粗多糖进行分离鉴定并检测纯化多糖的降血糖活性。利用DEAE-52离子交换柱、HW-55F、Sephacryl S-400凝胶柱对荞麦蜂花粉粗多糖进行分离,得到一个单一组分多糖A。利用STZ糖尿病小鼠模型检测多糖A的降血糖活性并通过核磁方法对其进行1H-NMR、13C-NMR和135DEPT-NMR分析。结果表明:与高血糖模型组相比,多糖A高、低剂量组的STZ糖尿病小鼠空腹血糖值都显著降低(P<0.01,P<0.01),降低率分别为18.46%,15.11%,并提高糖尿病小鼠糖耐量。初步推测多糖A主链是(1→6)-β-葡萄糖组成的,在侧链上连有氨基酸。

荞麦蜂花粉破壁扫描电子显微镜分析及黄酮模拟消化释放

以扫描电子显微镜法研究荞麦蜂花粉低温聚能超声破壁过程,发现在外加聚能超声作用下,蜂花粉破壁是沿3个萌发沟裂开,接着破裂,最后破碎的过程,据此提出电子显微镜视野中更加精准的破壁率计算方法。在扫描电子显微镜观测指导下,获得最佳的破壁条件为初始温度0℃、超声功率400 W、脉冲通断比1∶2、超声时间30 min、料液比1∶30(g/mL),在此条件下,破壁率达98.33%。进一步研究发现,破壁率与蜂花粉细胞内黄酮在模拟肠胃液中的总释放率呈线性增加关系,线性方程为y=0.3638x+27.172,R2=0.9997。