SPE-HPLC测定断血流胶囊中醉鱼草皂苷Ⅳb的含量

目的:建立固相萃取-高效液相色谱法测定断血流胶囊中醉鱼草皂苷Ⅳb的含量。方法:色谱柱:Dikma Kromasil C_(18)柱(5 μm,250 mm×4.6 mm);流动相:甲醇-水(80:20);流速:0.8 mL·min^(-1);检测波长:250 nm;柱温:40℃。结果:醉鱼草皂苷Ⅳb在0.15～1.2μg范围内具有良好的线性关系(r=0.9999),总平均加样回收率为98.8%(n=9)。结论:该方法简便、快速、有效、灵敏、准确,具有良好的重复性和回收率,可作为该制剂的定量分析方法。

高效液相色谱法测定醉鱼草甙

目的：测定风轮菜属植物中醉鱼草甙的含量。方法：用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）对风轮菜属的几种原植物、风轮菜活性部位研究过程中呈现药理活性的几部分粗膏及断血流片进行醉鱼草甙的含量测定。色谱柱为ＨｉＴｅｃｈＣ１８柱（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ），甲醇水（７０∶３０）作流动相，检测波长在２１０ｎｍ。结果：不同样品所含醉鱼草甙的量有差异。平均回收率为１０１．３％，ＲＳＤ为１．７３％。结论：首次建立了醉鱼草甙的定量方法。

正交试验优选断血流软胶囊提取工艺

以醉鱼草皂苷Ⅳb含量、断血流总皂苷含量和浸膏得率为考察指标,采用正交试验设计优选断血流软胶囊的提取工艺。最佳提取工艺为药材粒度为中粉,10倍量水,煎煮2次,每次1.0h,优选得到的工艺稳定、合理、可行。

HPLC-ELSD法测定细风轮菜中醉鱼草苷Ⅳ的含量

采用ZORBAX SB-C18柱（4.6 mm×150 mm,5.0μm）;柱温30℃;流动相：乙腈-水（梯度洗脱：0→30 min：10%~50%乙腈）;流速1.0 mL/min;Alhech 2000 ES ELSD检测器;漂移管温度110℃;气体为空气;流速3.0 L/min;进样量5.0μL。建立高效液相色谱-蒸发光散射检测（HPLC-ELSD）法测定细风轮菜中醉鱼草苷Ⅳ的含量。结果醉鱼草苷Ⅳ在5.18~15.54μg的范围内线性关系良好（r为0.9997）;平均回收率（n=5）为101.3%（RSD=0.59%）。本法简便、准确、重复性好,可作为细风轮菜中醉鱼草苷Ⅳ含量检测的方法。

SPE-HPLC测定断血流片中醉鱼草皂苷Ⅳb的含量

目的:建立固相萃取-高效液相色谱法测定断血流片中醉鱼草皂苷Ⅳb的含量。方法:色谱柱Dikma Kromasil C18柱(5μm,250mm×4.6mm),流动相甲醇–水(80∶20),流速0.8ml/min,检测波长250nm,柱温40℃。结果:醉鱼草皂苷Ⅳb在0.7715～6.136μg范围内具有良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为98.57%,RSD为0.56%(n=9)。结论:该方法简便、快速、有效、灵敏、准确,具有良好的重复性和回收率,可作为该制剂的定量分析方法。

醉鱼草苷Ⅳ对H_(22)肝癌小鼠的抑瘤作用

为观察醉鱼草苷Ⅳ对H22肝癌小鼠的体内抑瘤作用,取H22肝癌细胞接种于小鼠右腋皮下,H22肝癌小鼠随机分为5组:模型组、醉鱼草苷Ⅳ高、中、低(1.00、0.50、0.25mg/kg)3个剂量组和阳性药(CTX,20.0mg/kg)对照组。每组10只,治疗期间记录各组小鼠的体重变化并观察小鼠生存状态,连续腹腔注射10d后,于第11天观测抑瘤率、脾腺指数、胸腺指数,同时进行血清中SOD、MDA、GGT和AKP含量检测。结果表明:与模型组比较,醉鱼草苷Ⅳ高、中剂量组对小鼠H22移植性肝癌均有显著的抑瘤作用(P<0.01),抑瘤率分别为56.96%和50.63%;与模型组相比,醉鱼草苷Ⅳ高剂量组小鼠血清SOD活性增加(P<0.05),醉鱼草苷Ⅳ各剂量组血清MDA、GGT和AKP水平均降低(P<0.01);除SOD活性之外,环磷酰胺组与模型组比较无显著差异。说明醉鱼草苷Ⅳ在体内具有抗肝癌作用,其机理可能和机体的抗氧化能力有关,有待于进一步研究。

高效液相色谱法测定断血流胶囊中醉鱼草皂苷Ⅳb的含量

目的建立高效液相色谱(HPLC)法测定断血流胶囊中醉鱼草皂苷Ⅳb的含量。方法采用反相高效液相色谱法,色谱柱为Hypersil BDS-C18(4.6 mm×200 mm,5μm),流动相为甲醇-水(80∶20),检测波长为250 nm,流速为1 ml.min-1。结果醉鱼草皂苷Ⅳb在3.17-31.7μg/ml范围内峰面积与其浓度呈良好的线性关系,平均回收率为99.4%(RSD=1.2%)。结论此法简便、准确,可作为断血流胶囊含量测定的方法。

HPLC法测定断血流分散片的溶出度

目的:建立断血流分散片的溶出度测定方法,为评价和控制药品质量提供方法。方法:采用小杯法以纯化水作为溶出介质,转桨转速为100r·min^(-1),用高效液相色谱法测定醉鱼草皂苷Ⅳ b,色谱柱为汉邦C_(18)柱(5μm,4.6mm×250mm);流动相为甲醇-水(80∶20);流速是1.0mL·min^(-1);检测波长为250nm;柱温为30℃。绘制断血流分散片的累积溶出度曲线,并运用电子表格Excel软件处理药物溶出度数据,提取参数(T_d,m),并对参数进行相关性检验。结果:本法线性范围为2.06～22.62μg·mL^(-1),r=0.9999;平均回收率为99.86%,RSD为0.46%(n=9)。对不同批次的断血流分散片进行了溶出度测定,溶出参数差异无显著性意义(P<0.01)。结论:本方法具有灵敏、准确、快速的优点,适用于断血流分散片的质量控制。

醉鱼草皂苷Ⅳ激活线粒体抑制αβ整合素在结直肠癌小鼠肝转移中的作用及机制研究

目的 探讨醉鱼草皂苷Ⅳ(BS-Ⅳ)激活线粒体抑制αβ整合素在结直肠癌的肝转移中的作用及机制。方法 将60只BALB/c小鼠分为对照组、模型组和低、中、高剂量实验组(0.1、1、2 mg·kg^(-1 )BS-Ⅳ),除对照组外其余4组小鼠通过尾静脉注射肠癌细胞建立结直肠癌小鼠模型,造模成功后干预2周。观察各组小鼠肝表面的肿瘤结节数量和肝质量。将HT-29细胞培养传代后用1、2、3、4、5、10μmol·L^(-1)BS-Ⅳ培养,检测各组细胞存活率、凋亡率及细胞黏附性,并用蛋白质印迹法检测细胞B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X(Bax)蛋白表达水平。结果 对照组、模型组与低、中、高剂量实验组小鼠的肿瘤结节数量分别为0、(12.33±1.58)、(8.26±0.73)、(5.14±0.91)、(3.33±0.28)个;肝质量分别为(1.63±0.13)、(5.58±0.64)、(4.89±0.51)、(3.74±0.57)、(2.26±0.28)g;模型组与对照组相比,低、中、高剂量实验组与模型组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。经1、2、3、4、5、10μmol·L^(-1)的BS-Ⅳ处理后,HT-29结直肠癌细胞的细胞活性分别为(93.20±1.48)%、(78.02±2.33)%、(39.05±3.46)%、(19.10±4.03)%、(18.41±4.21)%、(18.31±4.98)%,随着剂量增加,HT-29结直肠癌细胞的细胞活性得到显著抑制(均P<0.05)。4、5、10μmol·L^(-1)BS-Ⅳ处理2 h后,HT-29结直肠癌细胞的细胞凋亡率分别为(12.20±1.48)%、(23.02±2.13)%、(37.85±2.56)%;0、4、5、10μmol·L^(-1)BS-Ⅳ组HT-29细胞的黏附细胞数量分别为(18.13±0.46)×10~5、(14.02±0.34)×10~5、(8.09±0.21)×10~5、(2.98±0.08)×10~5,与0μmol·L^(-1) BS-Ⅳ组HT-29细胞相比,BS-Ⅳ干预后HT-29细胞的黏附细胞数量减少(均P<0.01)。HT-29细胞经BS-Ⅳ处理后,α_(2)β_1整合素的表达水平显著下降,对Ⅰ型和Ⅳ型胶原蛋白的黏附力明显下降,与经BS-Ⅳ处理的细胞相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 醉鱼草皂苷Ⅳ可能通过激活线粒体抑制αβ整合素,有效抑制结直肠癌小鼠的肝转移。

醉鱼草苷Ⅳ对大鼠肝星状细胞增殖、活化的影响

目的:观察醉鱼草苷Ⅳ对大鼠贮脂细胞株(HSC-T6)增殖及活化的影响。方法:用不同质量浓度的醉鱼草苷Ⅳ处理HSC-T6,采用噻唑蓝(MTT)法测定醉鱼草苷Ⅳ对HSC-T6增殖的影响。采用20,14,9.8,6.86 mg.L-1醉鱼草苷Ⅳ干预细胞24 h,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ),Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)mRNA的表达;Annexin V/PI双染色法结合流式细胞术检测醉鱼草苷Ⅳ对HSC-T6凋亡的影响。结果:醉鱼草苷Ⅳ可显著抑制HSC-T6的增殖,且呈明显的量效关系。醉鱼草苷Ⅳ(6.86 mg.L-1)对HSC-T6 Col-ⅢmRNA表达具有显著的抑制作用(P<0.05);醉鱼草苷Ⅳ(9.8 mg.L-1)对细胞分泌羟脯氨酸(Hyp)和HSC-T6 Col-ⅠmRNA表达具有显著的抑制作用(P<0.05,P<0.01)及对HSC-T6具有显著的诱导凋亡作用(P<0.01),从而达到抗肝纤维化的作用。结论:醉鱼草苷Ⅳ可体外抑制HSC-T6的增殖和活化,对肝纤维化有潜在的干预作用,其机制可能与抑制贮脂细胞增殖及细胞外基质的合成有关。