山慈菇药理作用及临床应用研究进展

《中华人民共和国药典》中收载的中药材山慈菇Cremastra appendiculata,为兰科植物杜鹃兰Cremastra appen⁃diculata(D.Don)Makino或独蒜兰Pleione bulbocodioides(Franch)Rolfe或云南独蒜兰Pleione yunnanensis Rolfe的干燥假鳞茎,味甘、微辛,性凉,归肝、脾经,作为传统中药具有清热解毒、化痰散结等功效,常用于治疗痈肿疔毒、瘰疬痰核、蛇虫咬伤、癥瘕痞块等。近年来,随着对山慈菇及其提取物生物活性研究的不断深入,其抗肿瘤、抗氧化、神经保护、抗菌、抗痛风、降脂降糖、提高造血功能及增强免疫等药理作用受到广泛关注;此外,山慈菇还常与其他中药组成复方,在呼吸系统、消化系统、内分泌代谢系统等疾病的治疗方面疗效确切,临床应用前景广阔。目前对于山慈菇的研究较多,但大多以抗肿瘤和抗氧化作用的研究开发为主,且存在缺乏基因研究、信号通路研究与大样本随机对照临床研究等问题,故文章通过分析和总结山慈菇最新研究文献,从其药理作用的基础研究和复方的临床研究两个方面进行综述,并总结目前研究中存在的不足之处,以期为山慈菇的临床应用和新药研发提供参考。

山慈菇的化学成分和药理作用研究进展

山慈菇为兰科植物杜鹃兰、独蒜兰和云南独蒜兰的干燥假鳞茎,中医将其广泛应用于抗癌处方中。其化学成分主要为菲类、联苄类,此外还有少量苷类、木脂素类及黄烷类化合物。生物活性研究表明其所含化学成分具有抗肿瘤、抗血管生成、降压、抗菌作用,以及对乙酰胆碱受体M3的阻断作用,对酪氨酸酶的激活作用和对造血系统的作用。

独蒜兰化学成分研究

目的:研究独蒜兰Pleione bulbocodioides假鳞茎中的化学成分。方法:利用正相硅胶柱色谱、SephadexLH-20、反相制备液相色谱等手段进行分离纯化,并通过1H-NMR、13C-NMR等波谱技术进行结构鉴定。结果:从乙酸乙酯层中分离得到9个化合物,分别鉴定为:5,5″,7,4',4,7″-六羟基-[3'-8″]双黄酮(Ⅰ)、kayaflavone(Ⅱ)、gymconopin D(Ⅲ)、4-羟基苯乙酸甲酯(Ⅳ)、对羟基苯甲醛(Ⅴ)、对羟基苯甲酸(Ⅵ)、4-oxopentanoic acid(Ⅶ)、对苯二酚(Ⅷ)、天麻苷(Ⅸ)。结论:化合物Ⅰ～Ⅸ为首次从该植物中分离得到。

独蒜兰乙酸乙酯萃取物通过内源性线粒体通路诱导白血病K562细胞和HL-60细胞凋亡

目的:探讨独蒜兰乙酸乙酯萃取物对人慢性粒细胞白血病K562细胞和急性髓性白血病HL-60细胞增殖及凋亡的影响以及诱导凋亡的途径。方法:采用XTT法、台盼蓝拒染法、Annexin V-FITC/PI双染法、PI染色法、4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色和Western blot法研究不同浓度独蒜兰乙酸乙酯萃取物对上述2种白血病细胞增殖、凋亡、细胞周期和凋亡相关蛋白表达等方面的影响。结果:独蒜兰正丁醇萃取物对K562细胞活力几乎没有抑制作用,而乙酸乙酯萃取物能显著抑制K562和HL-60细胞的活力和增殖。乙酸乙酯萃取物对于HL-60细胞作用24 h的半数抑制浓度(IC_(50))为(42.14±2.54)mg/L,对于K562细胞的IC_(50)为(51.28±3.12)mg/L。Annexin V-FITC/PI和DAPI染色结果显示,乙酸乙酯萃取物呈剂量依赖性诱导2种细胞凋亡,且50 mg/L的乙酸乙酯萃取物作用后K562细胞的凋亡率为33.1%,而HL-60细胞的凋亡率为63.1%,说明HL-60细胞对乙酸乙酯萃取物更加敏感,伴有典型的细胞核凋亡形态学改变。PI染色结果显示HL-60细胞和K562细胞都被阻滞于G_2期。Western blot结果显示,随着药物浓度的升高,细胞凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达降低,而促凋亡蛋白Bax、cleaved caspase-3和活化的多腺苷二磷酸核糖聚合酶的表达逐渐升高,内源性线粒体凋亡的特征胞浆中细胞色素C和凋亡诱导因子表达也逐渐升高。结论:独蒜兰乙酸乙酯萃取物能显著抑制K562和HL-60细胞增殖,并通过触发内源性线粒体凋亡通路诱导这2种细胞凋亡。

不同培养基对山慈姑种子无菌萌发的影响

[目的]寻找山慈菇（Pleione bulbocodioides（Franch.）Rolfe）种子萌发的最佳培养条件,为山慈菇试管苗的获得提供技术支撑。[方法]人工授粉获得山慈姑种子,利用其未成熟胚进行种子萌发试验,探讨了不同蔗糖浓度、不同活性炭浓度、不同类型的基本培养基、4种单激素（6-BA、KT、NAA、IAA）及各自不同浓度、2种双激素组合及不同浓度等对山慈姑种子萌发率的影响。[结果]诱导山慈姑种子萌发的最适培养基为1/2MS＋1.5 mg/L IAA＋0.05%干酪素＋2%蔗糖＋0.75%活性炭＋0.55%琼脂（pH 5.8）,且添加了IAA的处理萌发率普遍较高,不仅诱导出原始球茎数量多,而且体积大,平均直径达1~1.5 mm。[结论]该试验建立优质、高效的山慈菇种子萌发体系,可为大量试管苗的获得奠定基础。

独蒜兰化学成分及生物活性研究进展

独蒜兰为兰科植物,是中药山慈菇的主要来源之一,包含菲类、联苄、苷类、木脂素、蒽醌、黄酮等多种化学成分,这些化学成分具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎、神经毒活性等多种药理活性。本文系统总结独蒜兰化学成分及药理作用的研究现状,为其临床应用和新药开发奠定理论基础。

独蒜兰离体快繁技术研究

以野生独蒜兰成熟未开裂的蒴果为外植体,对独蒜兰离体快繁技术进行研究。结果显示:用清水冲洗后再用75%酒精消毒30s,0.1%升汞消毒10min,污染率低至26%。培养基VW+0.005mg·L^-1TDZ+0.3mg·L^-1NAA适宜于独蒜兰的种子萌发培养,在该培养基中独蒜兰种子的萌发率为39.3%;适宜独蒜兰芽增殖的培养基为VW+1.0mg·L^-16-BA+0.2mg·L^-1NAA,在该培养基中独蒜兰芽的增殖系数为7.6;在VW+0.2mg·L^-1NAA+0.2mg·L^-1IBA+0.3g·L^-1活性炭的培养基上,独蒜兰的生根率为92%。独蒜兰组织培养技术体系的建立,对于解决其生产用苗紧缺以及遗传改良有着重要的理论价值及实践意义。

舟曲县独蒜兰分布及居群特征

配合甘肃省兰科植物调查工作,通过对舟曲县7个调查地独蒜兰[Pleione bulbocodioides(Franch.)Rolfe]分布与居群特征调查。结果显示,其中2个调查地有独蒜兰的分布,分布于城关镇三眼峪沟内西北向的石壁上和拱坝河上游南岸距河面5 m的石台上,证实了舟曲县境内有独蒜兰的分布,舟曲是独蒜兰新的分布记录点,在这个区域以西、以北再没有发现独蒜兰的分布,说明舟曲的这一分布区域是独蒜兰分布的最西北边界,对植物分布区系研究有重要意义。

独蒜兰的化学成分研究

目的对独蒜兰Pleione bulbocodioides假鳞茎的化学成分进行研究。方法采用正、反相硅胶柱色谱,凝胶柱色谱及制备高效液相色谱等方法对独蒜兰乙醇提取物的醋酸乙酯部位进行分离纯化,根据波谱数据结合理化性质鉴定化合物结构。结果从独蒜兰乙醇提取物的醋酸乙酯部位分离得到13个化合物,分别鉴定为4,4′-二羟基二苯基甲烷(1)、phillygenin(2)、表松脂醇(3)、2,5,2′,5′-四羟基-3-甲氧基联苄(4)、大黄酚(5)、大黄素甲醚(6)、汉黄芩素(7)、β-谷甾醇(8)、山药素Ⅲ(9)、对羟基苯甲酸(10)、独蒜兰西醇F(11)、3,3′-dihydroxy-2-(4-hydroxybenzyl)-5-methoxybibenzyl(12)、3′,5-dihydroxy-2-(4-hydroxybenzyl)-3-methoxybibenzyl(13)。结论化合物1～8为首次从独蒜兰属植物中分离得到。

独蒜兰组培苗炼苗和移栽技术研究

目的探讨影响独蒜兰组培苗移栽成活的关键因子。方法从种球大小、育苗基质、移栽月份、营养液配方等4个方面设计试验,分析不同处理对独蒜兰组培苗成活和生长的影响。结果适宜移栽的组培苗标准应达到:球茎直径≥0.6cm,百粒重≥20g,炼苗基质以腐熟木屑+蛭石(1:1)最佳,炼苗移栽时间以3~4月为最佳,1/3B5营养液促进组培苗生长效果最佳。结论筛选出适宜炼苗的种球级别以及最适宜的移栽时间、育苗基质和营养液,建立了独蒜兰组培苗炼苗关键技术。

不同产地独蒜兰种质资源的遗传多样性分析

目的对我国不同产区的23份独蒜兰的遗传多样性进行分析,为后续资源利用奠定基础。方法利用ISSR分子标记技术和类平均法(UPGMA)对23份独蒜兰资源进行PCR扩增和数据分析。结果从100条ISSR引物中筛选出12条多态性较好的引物,在23份独蒜兰资源中扩增出86条DNA片段,其中多态性片段80条,多态位点百分率(PPB)为93.0%。23份独蒜兰资源被划分为2个类群,同一地区来源的大部分资源聚在同一类群或亚类群,也存在不同地区来源的资源间遗传关系较近的情况。结论 ISSR标记可为独蒜兰种质资源鉴定、遗传关系分析及品种培育提供一定依据。