基于肠道菌群平衡分析微生态制剂联合浙贝黄芩汤对急性淋巴细胞白血病大剂量化疗后患者的临床影响

目的探讨微生态制剂联合浙贝黄芩汤对急性淋巴细胞白血病(ALL)大剂量化疗后患者粒细胞集落刺激因子受体(G-CSFR)、粒单系集落形成单位(CFU-GM)、肠道菌群及红系爆式集落形成单位(BFU-E)的影响。方法选取延安大学附属医院2019年6月至2022年12月收治的ALL患者130例作为研究对象,根据治疗方法将患者分为A组、B组、C组,3组患者均接受大剂量化疗,化疗结束48 h后A组患者实施常规治疗,B组患者单纯浙贝黄芩汤治疗,C组给予微生态制剂联合浙贝黄芩汤治疗,治疗12 d后,对3组患者G-CSFR、CFU-GM、BFU-E表达情况及血细胞数量进行检测。结果治疗后,C组血红蛋白、白细胞、血小板[(79±6)g/L、(3.8±0.4)×10^(9)/L、(66.4±3.6)×10^(9)/L]与A组[(59±7)g/L、(3.2±0.4)×10^(9)/L、(52.6±2.8)×10^(9)/L]、B组[(61±7)g/L、(3.1±0.3)×10^(9)/L、(52.8±2.6)×10^(9)/L]对比,差异有统计学意义(P<0.05)。C组G-CSFR(5.35±0.16)pg/ml和白细胞介素-11受体(IL-11R)(6.38±0.54)μg/kg水平均高于A组[(2.23±0.13)pg/ml和(1.49±0.24)μg/kg]和B组[(2.31±0.16)pg/ml和(2.31±0.49)μg/kg]差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,C组患者7 d CFU-GM(18.5±6.0)个和14 d BFU-E(83.5±7.5)个高于A组[7 d CFU-GM(9.5±2.0)个和14 d BFU-E(59.5±6.5)个]和B组[7 d CFU-GM(12.0±6.5)个和14 d BFU-E(63.5±5.0)个],差异有统计学意义(P<0.05)。7 d后,C组双歧杆菌(12.56±3.25)lgCFU/g、乳酸杆菌(13.56±2.58)lgCFU/g、肠杆菌(5.12±1.45)lgCFU/g、肠球菌(5.14±0.58)lgCFU/g高于A组[(9.26±1.03)lg CFU/g、(8.65±0.84)lg CFU/g、(8.08±0.64)lgCFU/g、(8.15±0.46)lgCFU/g]和B组[(11.35±1.36)lg CFU/g、(12.43±1.14)lgCFU/g、(6.49±0.55)lgCFU/g、(6.66±0.43)lgCFU/g],差异有统计学意义(P<0.05)。结论微生态制剂联合浙贝黄芩汤治疗可以有效提高ALL大剂量化疗后患者的G-CSFR、CFU-GM、BFU-E水平,可能更好地改善化疗引起的患者骨髓抑制情况,改善肠道菌群,具有临床研究价值。

地黄低聚糖对快速老化模型小鼠造血功能的影响

目的：研究地黄低聚糖（ＲＧＯＳ）对快速老化模型小鼠（ＳＡＭＰ８）造血功能的影响。方法：采用造血祖细胞体外克隆培养等实验血液学方法。结果：ＲＧＯＳ１０，２０ｍｇ·ｋｇ－１可使ＳＡＭＰ８小鼠的ＣＦＵ－Ｓ、ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－Ｅ和ＢＦＵ－Ｅ明显增多，并可使外周血中降低的ＷＢＣ数明显增加。提示ＲＧＯＳ可刺激ＳＡＭＰ８小鼠造血干细胞、祖细胞的增殖分化。集落刺激活性实验显示ＲＧＯＳ可使小鼠体内的集落刺激因子产生明显增多。小鼠骨髓组织学研究结果也进一步证实了ＲＧＯＳ增强ＳＡＭＰ８小鼠造血功能的作用。结论：ＲＧＯＳ可以增强ＳＡＭＰ８小鼠的造血功能。

重型再生障碍性贫血患者免疫抑制治疗后骨髓造血祖细胞水平的变化及其意义

为更好地评价重型再生障碍性贫血(SAA)患者免疫抑制治疗(IST)后骨髓造血功能恢复程度,采用造血祖细胞体外培养技术,动态观察了48例接受IBT的SAA患者及20例正常对照者骨髓晚期红系爆式集落形成单位(mBFU-E)及粒-巨噬系集落形成单位(CFU-GM)的水平变化。结果表明,IST前所有SAA患者骨髓mBFU-E及CFU-GM水平均显著低于正常对照组(P<0.001);IST后1年,29例有效者骨髓mBFU-E及CFU-GM水平显著增高,增高程度与其临床疗效相关;12例mBFU-E及10例CFU-GM水平恢复正常,其中8例患者mBFU-E及CFU-GM水平同时恢复正常。这表明SAA确是一组异质性疾病,其造血功能衰竭与异常免疫关系密切,若去除这种异常,造血功能可获得部分甚至完全重建。

人正常骨髓CD34^+造血细胞体外扩增形成红系及混合系造血祖细胞的能力

根据阳性选择策略，采用ＣＩＭＳ－１００免疫磁性无菌分离系统富集人正常骨髓ＣＤ３４＋造血细胞，然后将其在含Ｅｐｏ＋ＧＭ－ＣＳＦ＋ＩＬ－３＋ＩＬ－６＋ＳＣＦ（简ＥＧＩＳ）组合造血生长因子的无基质液培体系中扩增４周，定期进行单个核细胞计数、ＢＦＵ－Ｅ及ＣＦＵ－Ｍｉｘ的培养。经ＦＡＣＳ鉴定所富集的ＣＤ３４＋造血细胞纯度平均＞９０％。人正常骨髓ＣＤ３４＋造血细胞在该条件下均可持续产生大量单个核细胞，最高可扩增１７７０倍。与ＨＰＰ－ＣＦＣ和ＣＦＵ－ＧＭ相反，ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－Ｍｉｘ扩增量较低，最高仅为２．３６和２．４倍，且仅在第１周出现，随后迅速减少至停止。

不同部位的巨噬细胞培养上清液对小鼠红系血细胞发生的影响

目的:探讨腹腔、肺泡和肝脏的巨噬细胞培养上清液对小鼠早期红系造血祖细胞[用红系爆式集落形成单位(BFU-E)表示]和晚期红系造血祖细胞[用晚期红系集落形成单位(CFU-E)表示]发生的影响。方法:采用造血祖细胞体外培养技术观察3种不同部位的巨噬细胞培养上清液对BFU-E和CFU-E集落数的影响。结果与结论:3种培养上清液均能促进BFU-E和CFU-E的分化与增殖,而肺泡巨噬细胞培养上清液的上述作用更明显。

重组人红细胞生成素在恶性肿瘤贫血中的应用

目的 评价重组人红细胞生成素(rHuEPO)治疗恶性肿瘤贫血的疗效。方法 首先体外应用rHuEPO对5例正常人和5例恶性肿瘤贫血患者骨髓做红系集落形成单位(CFU—E)培养。将45例妇科恶性肿瘤患者分治疗组23例和对照组22例做临床观察。结果 体外实验表明,在大剂量rHuEPO作用下,肿瘤患者骨髓CFU—E数明显增加,接近正常。临床观察治疗组血红蛋白(HGB)从用药第2周开始升高,而对照组HGB逐渐降低。rHuEPO每周应用169.69±38.82 U/kg的有效率为72.2％。结论rHuEPO是治疗恶性肿瘤相关贫血的有效药物。

EPO单克隆抗体抑制CFU-E研究

目的探讨EPO单克隆抗体是否具有抑制红系集落形成单位(CFU-E)形成的功能。方法对大鼠骨髓进行定向体外CFU-E培养,按以下条件进行分组培养:空白对照组(不加EPO)、常规组(加EPO,不加EPO单克隆抗体)、EPO单克隆抗体干预组(EPO+EPO单克隆抗体)。培养168 h后,观察各组CFU-E数量。结果空白对照组、常规组、EPO单克隆抗体干预组的CFU-E集数落分别为0.0±0.0、151.8±23.3和10.7±3.9。EPO单克隆抗体干预组与常规组比较,CFU-E集落数存在非常显著性差异(P<0.01)。结论该EPO单克隆抗体可明显抑制CFU-E形成,即抑制红细胞系的增殖,是治疗高原红细胞增多症的可能药物。

一种具有刺激红系细胞集落生成的螺旋藻（Spirulina platensis）蛋白

从螺旋藻体中通过ＤＥＡＥ纤维素层析、硫酸铵分部沉淀和葡聚糖Ｇ７５凝胶过滤得到一种具有离体情况下刺激红系细胞集落生成的功能蛋白质．ＳＤＳ—ＰＡＧＥ测分子量为１５０００道尔顿，等电点为４．８，含有藻蓝胆素．该蛋白命名为螺旋藻１５０００蛋白（Ｓｐｉｒｕｌｉａｐｌａｔｅｎｓｉｓ１５０００，ＳＰ—１５０００）．

高原红细胞增多症骨髓前红系祖细胞体外培养动态观察

目的:对高原红细胞增多症（HAPC）骨髓前红系祖细胞（BFU—E）进行动态观察,以探讨其发病机理。方法:应用造血干细胞体外培养技术,取其体系内含单个核细胞2×105/ml置于培养液中,在5％CO2、37℃及饱和湿度条件下培养,以观察其细胞生长情况。结果:红系祖细胞接种及增殖延滞时间为24h后,可见双细胞及少数4～6个细胞组成的细胞团。第4天可见10个左右细胞的细胞团,第6～7天可见较多CFU—E集落,第9天CFU—E集落数量明显减少,第10天可见较大或多中心的集落。呈桔黄色或颜色逐渐加深,以50～100个细胞的爆式集落为多见,联苯胺染色阳性,呈棕褐色,第14天可见较多较大的爆式集落含100～1000个左右细胞,培养至21d,BFU—E集落多数退化或消失。结论:观察中发现HAPC骨髓BFU—E集落产率与正常对照比较有显著差异（P【0.01）,集落类型以多中心型,分散型为主。提示,HAPC骨髓BFU—E具有很强的增殖、分化能力,其机理需要进一步探讨。

鹿龙再生汤对重型再生障碍性贫血小鼠模型BFU-E和CFU-GM的影响

目的 :研究鹿龙再生汤对重型再生障碍性贫血(severe aplastic anemia,SAA)小鼠模型外周血象及红系爆式集落形成单位(burst-forming unit-erythroid,BFU-E)和粒单系集落形成单位(colony-forming unit-granulocyte macrophage,CFU-GM)的影响,探讨鹿龙再生汤促进造血作用的机制。方法 :BALB/c小鼠40只通过干扰素(interferon,IFN-γ)腹腔注射联合白消安灌胃,连续用药10 d,成功诱导建立了SAA模型,然后被随机分为4组(n=10),分别设为SAA组、SAA中药小剂量组(一般浓度)、SAA中药中剂量组(正常剂量的5倍浓度)、SAA中药大剂量组(正常剂量的10倍浓度),并分别予以生理盐水及3个不同剂量的鹿龙再生汤灌胃;另取10只正常BALB/c小鼠作为正常组,予以生理盐水灌胃和腹腔注射。5 d后收集各组小鼠眼眶血检测外周血象,取小鼠骨髓单个核细胞用甲基纤维素培养,培养7 d后观察并计数的BFU-E、CFU-GM。结果 :造模后SAA小鼠外周血的白细胞、血红蛋白、血小板、网织红细胞均有降低(P<0.05),经过不同剂量的鹿龙再生汤治疗后SAA小鼠的外周血均有不同程度升高,其中中剂量的鹿龙再生汤可以明显升高SAA模型小鼠外周血白细胞和网织红细胞的计数(P<0.05)。SAA组BFU-E和CFU-GM的集落形成较正常组明显下降(P<0.05),而SAA中药中剂量组BFU-E和CFU-GM的集落形成较SAA组明显上升(P<0.05)。结论 :中剂量的鹿龙再生汤可能通过促进SAA小鼠骨髓单个核细胞BFU-E、CFU-GM的生成,从而改善外周血象,相关实验结果可能为SAA的中药治疗提供理论依据。

基于造血活性小肽研究阿胶炮制原理

目的基于造血活性小肽研究阿胶炮制原理。方法Orbitrap-MS法对阿胶及其炮制品(蛤粉炒、蒲黄炒)的酶解-超滤物进行数据解析,根据分值、丰度、韦恩图、热图聚类分析推断其可能具有造血活性或具有深入研究价值的肽序列。采用Fmoc固相合成法对其进行合成,检测纯度、三氟乙酸残留、净肽含量、内毒素等。以红细胞爆式集落形成单位为指标,检测阿胶及其炮制品的酶解-超滤物和13种合成肽活性。结果共检测出171种肽,其中127个来源于胶原蛋白。蛤粉炒阿胶26种新肽产生,21种肽消失;蒲黄炒阿胶16种新肽产生,52种肽消失,多数肽序列保持不变,但丰度有所改变。以其中13种肽作为对象进行Fmoc合成,发现其均可用于细胞培养。结论阿胶炮制后,造血活性升高,推测是胶原蛋白裂解并经消化产生ejp33(GVVGLPGQR)强活性肽、ejp131(GPAGPSGPPGKDGT)弱活性肽以达到增效作用,且其促造血效果是以ejp10(GPAGPIGPV)、ejp6(GPAGPTGPV)、ejp77(LSSPARSGASL)为主的数种肽的协同作用。

干扰素α对真性红细胞增多症患者非促红细胞生成素依赖性红系祖细胞生长的影响

目的:探讨干扰素α(IFN-α)治疗真性红细胞增多症(PV)的作用机制.方法:采用体外半固体集落培养的方法,观察IFN-α对PV患者体内外骨髓非促红细胞生成素(Epo)依赖性红系爆式集落形成单位(BFU-E)集落生长的影响.结果:28例PV患者中有26例骨髓中存在非Epo依赖性BFU-E集落生长,平均集落数为196±15/2×105单个核细胞(MNC),对照组均无非Epo依赖性BFU-E集落生长.IFN-α在体外对PV患者骨髓中非Epo依赖性BFU-E集落生长呈剂量依赖性抑制作用;IFN-α治疗后,PV患者骨髓非Epo依赖性BFU-E集落数与治疗前比较明显减少(P<0.05), 治疗时间越长,BFU-E集落数减少越明显.结论:IFN-α在体内外对PV患者骨髓非Epo依赖性BFU-E集落生长有抑制作用.

活(破)血逐瘀法治疗真性红细胞增多症疗效观察及其机理探讨

目的：为寻找治疗真性红细胞增多症（ｐｏｌｙｃｙｔｈｅｍｉａｖｅｒａ，ＰＶ）的有效方法。方法：应用活（破）血逐瘀法治疗２８例ＰＶ患者。结果：其中４例临床缓解，１１例好转，总有效率达５３．６％。活（破）血逐瘀法治疗有效者骨髓中红细胞生成素依赖性红系祖细胞（ＥＰＯ＋ＣＦＵ－Ｅ）及红细胞生成素非依赖性红系祖细胞（ＥＰＯ－ＣＦＵ－Ｅ）均明显减少，尤以后者更为显著。结论：本疗法主要通过作用于ＥＰＯ－ＣＦＵ－Ｅ而发挥疗效；此外，活（破）血逐瘀治疗有效者骨髓成纤维样祖细胞（ＣＦＵ－Ｆ）数量亦有明显变化。

补肾滋阴方剂对小鼠骨髓CFU－E作用的观察

本文应用体内扩散盒法观察了补肾方剂刺激小鼠骨髓ＣＦＵ－Ｅ生长，实验观察显示，无论补肾阳、滋肾阴方剂都可刺激骨髓造血机能，增加红系细胞生成，但补肾阳方优于滋肾阴方，灌胃给药途径优于注射。

胰蛋白酶酶切EPO之多肽片段抑制EPO促CFU-E形成的研究

目的:观察胰蛋白酶酶切EPO之多肽片段能否抑制EPO促红系形成。方法:对大鼠骨髓进行红系定向体外培养,加入胰蛋白酶酶切EPO之多肽片段干预,观察红系集落形成单位(CFU-E)之数量,判定胰蛋白酶酶切EPO之多肽片段对红系增殖活性的影响。结果:胰蛋白酶酶切EPO之多肽片段加入干预培养后,CFU-E数量明显减少(P<0.01)。结论:胰蛋白酶酶切EPO之多肽产物体外能对抗EPO,抑制红系增殖。其可作为治疗高原红细胞增多症的可能药物进一步研究。

rhIL-2对人骨髓CFU-GM与CFU-E和BFU-E的影响

目的:为了探索rhIL-2对人骨髓造血干祖细胞体外增殖的影响。方法:本文采用甲基纤维素体外半固体培养法。结果:证明了50～1000U/ml rhIL-2单用时对人骨髓造血祖细胞的CFU-GM、CFU-E及BFU-E无直接刺激增生作用,当与GM-CSF联合应用时,100～400U/ml rhIL-2其CFU-GM集落形成率明显高于单用GM-CSF(100U/ml)的对照组(P<0.05),当与EPO(2U/mi)联合应用时其CFU-E,及BFU-E集落形成率也明显高于单用EPO对照组(P<0.05),而1000U/ml rhIL-2其三种集落形成数目呈下降趋势,可能有抑制作用。结论:以上结果说明100～400U/ml rhIL-2可应用于协同GM-CSF及EPO体外扩增骨髓干/祖细胞来进行骨髓移植。

人胚胎干细胞来源红系细胞膜蛋白表达的研究

目的探讨人胚胎干细胞(h ESCs)来源红系细胞在发育过程中其膜蛋白,包括膜表型分子、膜骨架蛋白和跨膜蛋白的表达情况。方法 h ESCs与小鼠主动脉-性腺-中肾(m AGM-S3)基质细胞共培养产生造血干祖细胞(CD34+CD45+)和GPA+细胞,挑取共培养12 d的细胞,同时磁珠分选人脐血中的CD34^+细胞,在多种特定细胞因子SCF、IL-6、IL-3、FLT3-L、TPO、EPO等诱导下,分别进行集落培养12-14 d产生红系爆发式集落形成单位(BFU-E),运用流式细胞术(FACs)、qRT-PCR和免疫荧光染色等方法检测并比较hESCs和人脐血CD34^+细胞2种来源的红系细胞膜蛋白的表达情况,并以后者作为对照组。结果 hESCs来源BFU-E的膜蛋白的表达趋势与对照组相近:其膜骨架蛋白和跨膜蛋白的基因,如SPTA、SPTB、ANK1、EPB41等基因转录水平都在逐渐增强,而一些膜蛋白如黏附分子CD49d、CD29、CD71等的表达逐渐降低,CD47基本不表达;带3蛋白(Band 3)表达量较高且与成体型血红蛋白β-globin的表达呈正相关。结论在hESCs向红系诱导生成过程中,一些膜表型分子表达在逐渐降低,而膜蛋白表达逐渐增强。

特发性血小板减少性紫癜骨髓造血干细胞的功能及与疗效的关系

目的:探讨特发性血小板减少性紫癜(idiopathicthrombocytopenicpurpura,ITP)患者骨髓造血干细胞的增殖分化功能,并从巨核细胞集落形成单位的数量和血小板上升的幅度探讨两者之间的疗效关系。方法:用甲基纤维素半固体培养ITP患者粒-巨噬细胞集落形成单位、红系集落形成单位、巨核细胞集落形成单位,观察巨核细胞集落形成单位与血小板上升平均值的关系。结果:ITP患者骨髓粒-巨噬细胞集落、红系集落形成单位、巨核细胞集落形成单位集落数低于正常对照组,粒-巨噬细胞集落数及丛落数高于正常对照组,巨核细胞数大于5/高倍视野的ITP患者其巨核细胞数与血小板上升无关,巨核细胞集落形成单位与血小板上升平均值有关。结论:ITP患者骨髓造血干细胞增殖分化功能异常,提示ITP可能是造血干细胞异常的疾病。ITP的巨核细胞集落形成单位与血小板上升幅度有关,巨核细胞集落形成单位可以预测ITP的治疗效果。

当归多糖促进5-氟尿嘧啶作用后小鼠应激性红细胞发生

目的探讨当归多糖(Angelica sinensis polysaccharide,ASP)拮抗5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)对小鼠脾脏应激性红细胞发生的影响及其相关机制。方法选取6~8周龄的C57BL/6J小鼠,雌雄各半,分为对照组、ASP组、5-FU组、ASP+5-FU组。记录建模时期小鼠体质量,血细胞计数仪分析外周血常规;观察脾脏组织切片病理学改变;计算脾指数;台盼蓝染色法计数小鼠股骨骨髓单个核细胞及脾细胞数;分离培养及计数脾脏单个核细胞爆氏红系集落形成单位;流式细胞术检测F4/80+脾巨噬细胞数量;qRT-PCR检测脾脏黏附分子基因Emp,铁转运基因Hmox-1、Trf、Fpn、TrfR以及核内吞基因Tim4、MerTK表达水平。结果ASP部分逆转5-FU致伤小鼠体质量、红细胞数量、血红蛋白含量和红细胞压积、骨髓单个核细胞数量下降;ASP增大脾脏体积、提升脾指数、红髓面积、脾细胞数量,促进脾脏BFU-E形成;ASP拮抗5-FU,维持F4/80+脾巨噬细胞数量,促进Emp、Hmox-1、Trf、Fpn、TrfR、Tim4及MerTK基因表达。结论ASP通过保护脾脏幼红细胞岛中央巨噬细胞数量及功能,促进小鼠脾脏应激性红细胞发生。

贫血患者血清红细胞生成素浓度的测定及临床意义

用小鼠胎肝细胞体外血浆凝块培养红系集落(Erythroid colong formig unit inculturc,E-CFUc)方法,以红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)850323为标准试剂,测定正常人、贫血病人血清EPO浓度。实验用妊娠13～15d小鼠胎肝细胞。血清均经透析处理,培养液中加量最大不超过10％。EPO(850323)在培养液中浓度为2.5～100mU/ml。血清EPO(mU/ml)测定结果:28例正常人为48.O±17.7,12例再生障碍性贫血病人为946～>10000,1例巨幼细胞性贫血病人为500,1例缺铁性贫血病人为400和18例慢性肾功能衰竭病人则为94.2±87.6。结果表明:贫血病因对血清EPO浓度有影响。