白头翁汤正丁醇提取物对白念珠菌VVC临床株黏附作用的影响

目的探讨白头翁汤正丁醇提取物(Butyl alcohol extract of Bai Tou Weng decoction,BAEB)对外阴阴道念珠菌病(Vulvovaginal Candidiasis,VVC)白念珠菌临床分离株黏附作用的影响。方法平板法检测与BAEB共培养2 h、4 h时白念珠菌的CFU;XTT还原法检测与BAEB共培养2 h、4 h的白念珠菌代谢活性;试管法检测白念珠菌絮凝能力;水-烃两相法检测白念珠菌细胞表面疏水性(cell surface hydrophobicity,CSH);荧光显微镜观察菌体活力;扫描电镜观察白念珠菌细胞形态;qRT-PCR法检测黏附相关基因ALS1、CSH1、HWP1、ALS5、ALA1、INT1、MNT2与ALS3的表达。结果 512、1 024μg/m L BAEB可显著抑制黏附2 h、4 h时的白念珠菌的CFU及代谢活性;肉眼和倒置显微镜下观察发现512、1 024μg/m L BAEB可明显延缓絮凝产生的时间;256、512、1 024μg/m L的BAEB均能够显著减少白念珠菌的细胞表面疏水性;qRT-PCR检测表明1 024μg/m L的BAEB作用后,ALS1、CSH1、ALA1、ALS3、INT1、HWP1分别下调18.7%、36%、37.8%、29.6%、19.9%、21.6%,ALS5与MNT2未产生明显变化。结论 BAEB可能通过调节黏附相关基因抑制白念珠菌VVC临床株的黏附作用。

白头翁汤正丁醇提取物对白念珠菌VVC临床株体外生物膜形成的抑制作用

目的探讨白头翁汤正丁醇提取物（Butyl alcohol extract of Bai Tou Weng decoction,BAEB）对分离自外阴阴道念珠菌病（vulvovaginal candidiasis,VVC）的白念珠菌临床分离株（以下简称VVC临床株）生物膜形成的影响。方法采用微量稀释法测定BAEB对白念珠菌的最低抑菌浓度（Minimal Inhibitory Concentration,MIC）;甲基四氮盐（XTT）还原法测定BAEB对白念珠菌生物膜代谢活性的影响,Time-kill法检测BAEB对白念珠菌活菌数的影响;结晶紫染色法测定BAEB对白念珠菌生物膜生物量（Biomass）的影响;扫描电镜（SEM）观察BAEB对白念珠菌生物膜形态结构的影响;激光共聚焦显微镜（CLSM）检测BAEB对白念珠菌生物膜荧光信号强度的影响;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测生物膜相关基因UME6、PES1和HSP90的转录水平变化。结果 BAEB对12株白念珠菌的MIC在64~256μg/mL之间,对白念珠菌生物膜的SMIC80（抑制80%生物膜形成的最低药物浓度）为1 024μg/mL或以上;Time-Kill曲线显示在12h之后,512、1 024μg/mL浓度的BAEB对白念珠菌均具良好的杀伤作用;结晶紫染色法表明512、1 024μg/mLBAEB能够减少其生物膜生物量;SEM观察到1 024μg/mL BAEB能够有效抑制白念珠菌在不同黏附介质上生物膜的完整度;CLSM显示512、1 024μg/mL的BAEB可以明显降低生物膜荧光信号强度;qRT-PCR检测显示在256、512、1 024μg/mL的BAEB作用下,UME6转录水平分别下调了72%、71%、77%,在512、1 024μg/mL的BAEB下HSP90转录水平上调了2.23和3.31倍,而PES1未有明显变化。结论 BAEB可以抑制白念珠菌VVC临床株体外生物膜的形成。

白头翁汤正丁醇提取物诱导白念珠菌生物被膜细胞凋亡

目的探讨白头翁汤正丁醇提取物(Butyl alcohol extract of Bai Tou Weng decoction,BAEB)对白念珠菌生物被膜细胞凋亡的影响。方法分别以DCFH-DA染色和JC-1染色,用流式细胞仪检测白念珠菌生物被膜细胞内活性氧(ROS)水平和线粒体膜电位(MMP)变化;Annexin V-FITC/PI染色染色荧光显微镜观察白念珠菌生物被膜细胞磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)外翻并检测凋亡率;FITC-VAD-FMK染色观察白念珠菌生物被膜细胞metacaspase活性;DAPI染色观察白念珠菌生物被膜细胞核形态。结果≥128μg/mL BAEB处理后白念珠菌生物被膜细胞内活性氧水平显著升高,线粒体膜电位显著降低,PS外翻增加,凋亡率明显升高,metacaspase酶活性显著升高,细胞核出现固缩和碎裂。结论白头翁汤正丁醇提取物可诱导白念珠菌生物被膜细胞凋亡。

白头翁汤正丁醇提取物对白念珠菌作用下Caco-2细胞中细胞因子、防御素及Toll样受体表达的影响

目的从细胞因子、人β-防御素(human beta defensin,HBD)及Toll样受体(toll-like receptors,TLRs)途径探究白头翁汤正丁醇提取物(butyl alcohol extract of Baitouweng Decoction,BAEB)抗白念珠菌的机制。方法以Caco-2细胞为实验模型,先以BAEB作用Caco-2细胞24h,再加入热灭活的白念珠菌SC5314孢子(Candida albicans,C.A)共培养24h,以MTT法测定Caco-2细胞存活率;采用酶联免疫吸附试验检测Caco-2细胞上清液白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-8、IL-1β、HBD-2、HBD-3水平;采用普通PCR法检测Caco-2细胞TLR1、TLR2、TLR4、TLR5mRNA的表达水平。结果与对照组比较,C.A单独作用的Caco-2细胞中IL-6、IL-8、IL-1β、HBD-2、HBD-3表达水平显著升高(P<0.05),TLR1、TLR2、TLR4、TLR5mRNA表达水平显著上调(P<0.05);与C.A单独作用相比,BAEB预保护Caco-2细胞后,Caco-2细胞中IL-6、IL-8、IL-1β及HBD-2、HBD-3表达水平明显降低(P<0.05),TLR1、TLR2、TLR4、TLR5mRNA表达水平也显著下调(P<0.05),BAEB高剂量的效应最明显。结论 BAEB抗白念珠菌的机制与下调细胞因子、HBD及TLRs表达有关。

白头翁汤正丁醇提取物对小鼠外阴阴道念珠菌病的治疗作用研究

目的探讨白头翁汤正丁醇提取物(Butyl alcohol extract of BaiTouWeng,BAEB)对小鼠外阴阴道念珠菌病(vulvovaginal candidiasis,VVC)的治疗作用。方法雌性昆明种小鼠72只,随机分为正常组、模型组、白头翁汤正丁醇提取物高剂量、中剂量、低剂量与氟康唑组,皮下注射雌二醇致小鼠假发情期,再阴道接种白念珠菌2×10~6 CFU/mL,药物治疗7d。采用涂布法检测VVC小鼠的阴道真菌载荷量;HE染色法观察阴道组织的病理学改变;ELISA法检测小鼠阴道组织的IL-1β、IL-18的含量;qRT-PCR法检测小鼠阴道组织中NLRP3、ASC、caspase-1的mRNA表达。结果与正常组相比,模型组小鼠阴道黏膜层完全破坏,大量炎症细胞浸润;与模型组比较,BAEB组黏膜呈现不同程度的改善。与正常组相比较,模型组小鼠阴道组织IL-1β、IL-18含量升高,真菌载量明显升高,均具有统计学意义(P<0.001)。阴道组织中TLR2、TLR4、NLRP3、ASC、caspase-1的mRNA含量分别上调,差异均有统计学意义(P<0.001)。与模型组相比较,BAEB治疗组IL-1β、IL-18含量均降低,差异均有统计学意义(P<0.001)。结论白头翁汤正丁醇提取物对小鼠外阴阴道念珠菌病具有治疗作用。

白头翁汤正丁醇提取物对白念珠菌细胞壁抑制作用研究

目的探讨白头翁汤正丁醇提取物(Butyl alcohol extract of BaiTouWeng decoction,BAEB)对白念珠菌细胞壁的抑制作用。方法以spot assay检测BAEB对白念珠菌细胞活性的影响;流式细胞仪和酶标仪检测BAEB对白念珠菌细胞壁β-1,3-葡聚糖及几丁质变化;qRT-PCR检测白念珠菌细胞壁β-1,3-葡聚糖合成相关基因FKS-1及几丁质合成相关基因CHS1、CHS2、CHS3、CHS8的表达;透射电镜观察BAEB对白念珠菌细胞壁结构影响。结果 BAEB干预后白念珠菌活性降低,256、512、1 024μg/mL BAEB组白念珠菌细胞壁β-1,3-葡聚糖暴露与几丁质暴露逐渐增多(P<0.05);1 024μg/mL BAEB干预组FKS1、CHS1、CHS2、CHS3、CHS8分别下调5.57、2.96、3.29、4.47、3.00倍;透射电镜观察BAEB干预后白念珠菌细胞壁结构有破损。结论 BAEB可通过增加β-1,3-葡聚糖和几丁质的暴露,抑制β-1,3-葡聚糖、几丁质及其生物合成相关基因的表达,进而破坏白念珠菌细胞壁完整性。

桑黄正丁醇提取物对白念珠菌生物膜形成的抑制作用

目的探讨桑黄正丁醇提取物(butyl alcohol extract of Phellinus igniarius decoction,BAEP)体外对白念珠菌(Candida albicans)标准株SC5314生物膜形成的影响。方法采用二倍稀释法测定BAEP对白念珠菌的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)和抑制50%生物膜形成的最低浓度(sessile minimal inhibitory concentration,SMIC 50);采用XTT还原法测定BAEP对白念珠菌生物膜代谢的影响;固体培养基上观察BAEP对白念珠菌菌落形态的影响;倒置显微镜与荧光显微镜下分别观察BAEP对白念珠菌生物膜形态与活性的影响;扫描电镜下观察BAEP对白念珠菌生物膜形态结构的影响;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测生物膜相关基因ALS1和HWP1的转录水平变化。结果BAEP对白念珠菌生物膜的SMIC 50为1024μg/mL;菌落形态实验观察结果显示,1024μg/mL BAEP可影响白念珠菌菌落;倒置显微镜、荧光显微镜下显示1024μg/mL BAEP可抑制白念珠菌生物膜的形态和活性;扫描电镜下显示1024μg/mL BAEP对白念珠菌生物膜有明显的抑制作用;qRT-PCR检测结果显示BAEP可明显下调HWP1的表达水平和上调ALS1基因的表达水平。结论BAEP对白念珠菌SC5314生物膜的形成有一定的抑制作用。

基于PKCδ/NLRC4/IL-1Ra轴对NLRP3炎症小体的负调控研究白头翁汤正丁醇提取物治疗外阴阴道念珠菌病的作用机制

该研究旨在从PKCδ/NLRC4/IL-1Ra轴负调控NLRP3炎症小体的角度探讨白头翁汤正丁醇提取物(n-butanol alcohol extract of Baitouweng Decoction,BAEB)治疗外阴阴道念珠菌病(vulvovaginal candidiasis,VVC)小鼠的作用机制。实验中,将雌性C57BL/6小鼠分为6组,分别为空白对照组,VVC模型组,BAEB高、中、低剂量组(80、40、20 mg·kg^(-1))和氟康唑组(20 mg·kg^(-1)),除空白对照外,其余各组利用雌激素依赖性的方法构建VVC小鼠模型,模型构建成功后,空白对照组不作处理,BAEB高、中、低剂量组分别给予80、40、20 mg·kg^(-1)BAEB治疗,氟康唑组给予20 mg·kg^(-1)氟康唑治疗,VVC模型组则灌胃等量的生理盐水。每日观察各组小鼠的一般状态和体质量;革兰染色观察小鼠阴道灌洗液中白念珠菌形态的变化;微量稀释法检测小鼠阴道分泌物的真菌载量,处死小鼠后,巴氏染色法检测阴道灌洗液中中性粒细胞的浸润程度,enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)法检测阴道灌洗液中炎症因子interleukin(IL)-1β、IL-18以及lactate dehydrogenase(LDH)的含量;hematoxylin-eosin(HE)染色进行阴道组织病理学分析;免疫组化(immunohistochemistry,IHC)检测阴道组织中NLRP3、PKCδ、pNLRC4、IL-1Ra的表达和分布;免疫荧光(immunofluorescence,IF)检测阴道组织中pNLRC4、IL-1Ra的表达与分布,免疫印迹(Western blot,WB)检测阴道组织中NLRP3、PKCδ、pNLRC4、IL-1Ra的蛋白表达;qRT-PCR检测NLRP3、PKCδ、pNLRC4、IL-1Ra mRNA的表达。结果显示,与空白对照组比较,VVC模型组小鼠阴道出现红肿以及白色分泌物,与VVC模型组比较,BAEB能改善VVC小鼠的一般状态。革兰染色、巴氏染色、微量稀释法以及HE染色结果显示,与空白对照组比较,阴道灌洗液中分布有大量菌丝且有大量中性粒细胞浸润,阴道灌洗液中真菌载荷显著增加,阴道组织黏膜被破坏且有大量炎性细胞浸润,BAEB可减少白念珠菌菌丝形成,BAEB中、高剂量组可显著减少中性粒细胞的浸润以及真菌载荷,BAEB低、中剂量组可减轻阴道组织的损伤,而BAEB高剂量组可将损伤的阴道组织恢复至正常水平。ELISA结果显示,与空白对照组比较,炎症因子IL-1β、IL-18、LDH的含量显著增加,与VVC模型组比较,BAEB中、高剂量组可显著减少IL-1β、IL-18以及LDH的含量。WB和PCR结果显示,与空白对照组比较,VVC模型组小鼠阴道组织中PKCδ、pNLRC4、IL-1Ra蛋白和mRNA表达显著降低,而NLRP3的蛋白和mRNA表达显著上升;与VVC模型组比较,BAEB中、高剂量组可上调阴道组织中PKCδ、pNLRC4、IL-1Ra蛋白和mRNA表达,抑制阴道组织中NLRP3蛋白和mRNA表达。该研究表明,BAEB对于VVC小鼠的治疗作用可能与促进PKCδ/NLRC4/IL-1Ra轴负调控NLRP3炎症小体有关。

白头翁汤正丁醇提取物对碱性pH条件下白念珠菌VVC临床株形态转化的影响

目的：探讨白头翁汤正丁醇提取物（butyl alcohol extract of Baitouweng decoction,BAEB）在碱性条件下对白念珠菌VVC（vulvovaginal candidiasis）临床分离株酵母-菌丝形态转化的影响. 方法：采用肉汤稀释法测定白头翁汤不同溶剂萃取物对VVC临床株的最低抑菌浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）;倒置显微镜观察不同pH环境下VVC临床株形态;采用XTT还原法评价在pH 8.0时菌丝活性;扫描电镜观察白念珠菌菌丝形态;荧光显微镜观察菌体代谢活力;固体培养基上观测菌落形态;半固体培养基上观察菌丝侵袭能力;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测菌丝特异性基因ALS3,CSH1,SUN41,HWP1和CaPDE2的表达量. 结果：白头翁汤正丁醇提取物（BAEB）对VVC临床株的MIC为64~128 mgL-1,低于总提取物、石油醚提取物、乙酸乙酯提取物和水提取物的MIC;pH 8.0时VVC临床株的菌丝形成能力最强;扫描电镜结果显示512, 1 024 mgL-1的BAEB明显抑制VVC临床株的形态转化,荧光显微镜结果显示1 024 mgL-1的BAEB可以降低VVC临床株的代谢活性;512,1 024 mgL-1BAEB浓度的固体菌落未出现褶皱,1 024 mgL-1BAEB浓度的半固体培养基内部未见菌丝侵袭;qRT-PCR检测显示1 024 mgL-1时,ALS3,CSH1,SUN41,HWP1分别下调4.26,3.2,2.74,5.12倍,CaPDE2上调2.38倍. 结论：BAEB在碱性pH条件下对白念珠菌VVC临床株的形态转化具有抑制作用.

基于NLRP3炎症小体研究白头翁汤正丁醇提取物对白念珠菌定植下小鼠溃疡性结肠炎的作用机制

目的研究白头翁汤正丁醇提取物(butyl alcohol extract of Baitouweng Decoction,BAEB)对白念珠菌异常定植下的葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium salt,DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的治疗作用,以及对Dectin-1/脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,Syk)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)信号通路的影响。方法将105只C57BL/6小鼠随机分为对照组、DSS组、DSS+白念珠菌组及BAEB低、中、高剂量(20、40、80 mg/kg)组和美沙拉嗪(200 mg/kg)组。对照组小鼠每日自由饮水;DSS组予3%DSS溶液,自由饮用连续7 d;其他组在DSS组基础上,在第1、3、5、7天ig白念珠菌(1×108 CFU/只)。第8天开始分别ig相应药物,1次/d,连续7 d。每天称定小鼠质量,观察一般状态,收集粪便,采用平板培养法检测粪便真菌载荷。末次给药次日,处死小鼠,测量结肠长度,苏木素-伊红(HE)染色法进行结肠组织学分析;ELISA法检测结肠组织炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和IL-18水平;免疫组化法检测结肠组织Occludin和闭锁连接蛋白-1(zonula occludens-1,ZO-1)表达;Western blotting检测结肠组织Dectin-1、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、Syk、凋亡相关微粒蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)、剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(cleaved cysteinasparate protease-1,cleaved Caspase-1)和NLRP3蛋白表达。结果与对照组和DSS组比较,DSS+白念珠菌组小鼠粪便培养出更多的白念珠菌(P<0.01);结肠黏膜损伤程度严重(P<0.01);结肠组织炎症因子IL-1β、IL-18水平明显升高(P<0.01);结肠组织Occludin和ZO-1蛋白表达明显下降(P<0.05);结肠组织NLRP3、NF-κB和Dectin-1蛋白表达水平显著升高(P<0.01),ASC、cleaved Caspase-1和Syk蛋白表达水平显著降低(P<0.05、0.01)。与DSS+白念珠菌组相比,BAEB组小鼠肠道白念珠菌显著减少(P<0.01);结肠组织中IL-1β、IL-18水平下降(P<0.05、0.01);结肠组织Occludin和ZO-1蛋白表达均显著升高(P<0.05、0.01);BAEB低剂量组Syk蛋白表达水平显著降低(P<0.01);BAEB中剂量组ASC和Syk蛋白表达水平显著升高(P<0.05、0.01),NLRP3和NF-κB蛋白表达水平显著降低(P<0.05、0.01);BAEB高剂量组NF-κB蛋白表达水平显著降低(P<0.01),ASC蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。结论BAEB可能通过抑制白念珠菌异常定植下Dectin-1/Syk通路所介导的NLRP3炎症小体过度活化,进而阻断IL-1β与IL-18的产生来发挥抗UC作用。

白头翁汤正丁醇提取物对热带念珠菌毒力因子的影响

目的：探讨白头翁汤正丁醇提取物butyl alcohol extract of Baitouweng decoction,BAEB对热带念珠菌（Candida tropicalis）毒力因子细胞表面疏水性、菌丝及生物膜形成的影响。方法：采用微量稀释法测定BAEB对热带念珠菌的最低抑菌浓度（MIC）;XTT还原法测定BAEB对热带念珠菌生物膜抑制作用（SMIC80）,Time-Kill法检测BAEB对热带念珠菌活菌数的动态影响;水-烃两相法测定BAEB对热带念珠菌细胞表面疏水性（cell surface hydrophobicity,CSH）的影响;荧光显微镜观察BAEB对热带念珠菌菌丝形态的影响;扫描电镜观察BAEB对热带念珠菌生物膜形态的影响;激光共聚焦显微镜检测BAEB对热带念珠菌生物膜荧光信号强度的影响;实时荧光定量PCR（q RT-PCR）检测菌丝及生物膜相关基因UME6,NRG1,ALST3的表达量变化。结果：BAEB对9株热带念珠菌的MIC在64-128 mg·L^-1,对热带念珠菌生物膜的SMIC80为256-512 mg·L^-1,FLZ对热带念珠菌的MIC在1-1 024 mg·L^-1,SMIC80为1 024 mg·L^-1或以上,Time-Kill曲线显示256,512 mg·L^-1BAEB具有明显的杀菌作用,CSH实验显示128,256,512 mg·L^-1BAEB均能够降低其表面疏水性,SEM观察到512 mg·L^-1BAEB能够有效抑制热带念珠菌在硅胶导尿管上生物膜完整度,CLSM显示256,512 mg·L^-1BAEB可以明显降低生物膜荧光信号强度,q RT-PCR检测显示在256,512 mg·L^-1BAEB作用下,ALST3,UME6基因表达量显著下调,NRG1无明显变化。结论：BAEB可以抑制热带念珠菌细胞表面疏水性、菌丝及生物膜形成等毒力因子。

基于pH信号通路的白头翁汤正丁醇提取物对白念珠菌生物膜作用机制的研究

该文基于pH信号通路探讨白头翁汤正丁醇提取物(butyl alcohol extract of Baitouweng Decoction,BAEB)对白念珠菌生物膜的影响。以扫描电镜观察pH突变株生物膜形态结构; CLSM测量pH突变株生物膜厚度;酶标仪检测pH突变株生物膜活性;流式细胞仪检测pH突变株生物膜损伤; qRT-PCR法检测pH突变株生物膜相关基因的表达。结果显示,对生物膜结构,PHR1基因缺失造成结构缺陷,PHR1回补则基质较多; BAEB干预对该2株无明显影响。RIM101基因缺失或回补无明显结构损伤,但BAEB干预后,这2种菌株生物膜均被明显抑制。对生物膜厚度,PHR1基因缺失或PHR1回补的厚度降低;BAEB干预后,该2株厚度变化不明显。而RIM101基因缺失或回补对生物膜厚度影响不大;加入BAEB后,该2株生物膜厚度明显变薄。对生物膜活性,PHR1基因缺失、PHR1回补和RIM101基因缺失均造成活性降低,RIM101回补无明显变化;BAEB干预后,PHR1基因缺失、PHR1回补、RIM101缺失与RIM101回补的生物膜活性与干预前相比显著降低。对生物膜损伤程度,PHR1基因缺失、PHR1回补和RIM101基因缺失、RIM101回补均出现不同程度损伤;加入BAEB干预后,PHR1缺失或PHR1回补的损伤率差异并不大,但RIM101缺失或RIM101回补的损伤率显著升高。对基因表达水平,除HSP90基因上调外,PHR1缺失、PHR1回补、RIM101缺失、RIM101回补的ALS3,SUN41,HWP1,UME6和PGA10基因均出现了不同倍数的下调趋势。该研究表明,pH信号通路中PHR1和RIM101基因突变能提高菌株对于抗真菌药物BAEB的敏感性,从而抑制白念珠菌生物膜形成及相关基因的表达。

白头翁汤正丁醇提取物对酸性条件下白念珠菌pH突变株黏附的影响

目的 基于pH信号通路探讨白头翁汤正丁醇提取物(butyl alcohol extract of Baitouweng Decoction,BAEB)对白念珠菌黏附的影响。方法 Spotassay检测酸性条件下pH突变株的活性;XTT法检测酸性条件下pH突变株黏附时的代谢活力;荧光显微镜观察酸性条件下pH突变株细胞黏附活力;正辛烷容纳法测定酸性条件下pH突变株疏水性;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测酸性条件下pH突变株黏附相关基因的表达。结果 512μg/m L BAEB对共培养24、48 h的pH突变株的活性影响不大;phr2/phr2在酸性条件下代谢活性低,512μg/m L BAEB可明显抑制白念珠菌野生株(WT)、PHR2回补菌株、rim101/rim101、RIM101回补菌株的代谢活性,对phr2/phr2代谢活性影响不大;512μg/m L BAEB可明显抑制WT、PHR2回补菌株、rim101/rim101、RIM101回补菌株的细胞黏附活力,phr2/phr2加药前后细胞黏附活性无明显变化;512μg/mL BAEB对WT、phr2/phr2、PHR2回补、rim101/rim101及RIM101回补菌株的细胞表面疏水性影响不明显;q RT-PCR法检测512μg/m L BAEB对pH突变株在酸性条件下黏附相关基因作用不明显,但1 024μg/m L BAEB则对大多数黏附相关基因有明显抑制作用。结论 BAEB在酸性条件下能一定程度抑制白念珠菌的黏附。

白头翁汤正丁醇提取物对外阴阴道念珠菌病小鼠阴道黏膜中性粒细胞趋化的影响

该文探讨白头翁汤正丁醇提取物(butyl alcohol extract of Baitouweng Decoction,BAEB)对外阴阴道念珠菌病(vulvovaginal candidiasis,VVC)小鼠阴道黏膜中性粒细胞趋化的影响。将SPF级雌性昆明小鼠72只,随机分为正常组,模型组,氟康唑组,BAEB低、中、高剂量组,皮下注射苯甲酸雌二醇致假发情期,再阴道接种白念珠菌2×106 CFU·mL-1,药物治疗7 d。革兰染色法观察小鼠阴道分泌物中白念珠菌形态;平板法检测小鼠阴道真菌载荷;HE染色法观察小鼠阴道组织病理情况;酶联免疫吸附(ELISA)法检测小鼠灌洗液中LDH,IL-6,TNF-α水平;巴氏染色法观察阴道灌洗液中性粒细胞并计数;ELISA法检测阴道黏膜趋化因子中IL-8和MIP-2水平;qRT-PCR法检测小鼠阴道黏膜中IL-8和MIP-2的mRNA水平。结果表明,与正常组相比,VVC模型组阴道内有大量菌丝生成且大量的真菌载荷,阴道黏膜层结构完全破坏,中性粒细胞数量增多,IL-8和MIP-2的蛋白和mRNA水平上调。经BAEB治疗,与模型组相比,治疗组小鼠阴道内菌丝减少,真菌载荷量降低,黏膜损伤有所改善,炎症因子含量降低,IL-8和MIP-2的蛋白和mRNA水平均下调。上述结果提示,BAEB可能通过抑制趋化因子以阻断中性粒细胞向阴道腔的募集而发挥治疗VVC的作用。

白头翁汤正丁醇提取物对外阴阴道念珠菌病小鼠阴道黏膜上皮屏障的影响

探讨白头翁汤正丁醇提取物(butyl alcohol extract of Baitouweng Decoction,BAEB)对外阴阴道念珠菌病(vulvovaginal candidiasis,VVC)小鼠阴道黏膜上皮屏障的影响。雌性SPF(specific pathogen free)级昆明种小鼠72只,随机分为空白组、VVC模型组、阳性药氟康唑组、BAEB治疗组(高、中、低剂量组)。隔天皮下注射苯甲酸雌二醇,于假发情期向小鼠阴道接种白念珠菌(2×106 CFU·mL-1)连续7 d,以构建VVC模型,之后药物治疗7 d。革兰染色观察小鼠阴道分泌物中白念珠菌形态;平板法检测小鼠阴道真菌载荷量;HE(hematoxylin-eosin staining)染色法观察小鼠阴道黏膜组织病理状况;MT(Masson′s trichrome staining),HE及PAS(periodic acid-schiff staining)染色法观察小鼠阴道黏膜上皮屏障的完整性;免疫组化法检测小鼠阴道黏膜上皮细胞mucin-1和mucin-4蛋白表达;Western blot法测定第0,3,7天黏膜上皮细胞mucin-1和mucin-4蛋白表达水平。结果发现,VVC模型组小鼠阴道内有大量白念珠菌丝生成及较高真菌载荷量,阴道黏膜结构不完整,外层角化层脱落,阴道上皮细胞增生,炎症浸润加剧,以及上皮细胞表面mucin-1和mucin-4蛋白表达显著增多;经BAEB治疗后,小鼠阴道内菌丝减少,真菌载荷量显著下降,炎症浸润减少,阴道黏膜组织损伤改善,上皮屏障修复并恢复完整性,mucin-1和mucin-4蛋白水平下调。上述结果表明,BAEB可能通过重塑阴道黏膜上皮屏障的完整性而发挥治疗VVC的作用。

白头翁汤正丁醇提取物抑制白念珠菌细胞膜

该文探讨白头翁汤正丁醇提取物(butyl alcohol extract of Baitouweng decoction,BAEB)对白念珠菌细胞膜的抑制作用。以Spot assay观察BAEB对白念珠菌细胞活性的影响;酶标仪检测BAEB干预后白念珠菌细胞内渗透压变化;荧光显微镜观察BAEB对白念珠菌细胞膜通透性的影响;高效液相检测白念珠菌细胞膜麦角甾醇的含量;q RT-PCR法检测细胞膜麦角甾醇生物合成相关基因的表达。结果显示,256,512,1 024 mg·L^(-1)BAEB干预下白念珠菌活性逐渐降低;512,1 024 mg·L^(-1)BAEB组白念珠菌胞内甘油含量显著性增多(P<0.05),与白念珠菌胞内渗透压相关的基因HOG1分别下调9.1,9.3,5.5倍;512,1 024 mg·L^(-1)BAEB组白念珠菌红色荧光细胞明显增多;1 024 mg·L^(-1)BAEB干预后麦角甾醇峰面积为35.884 95,有显著性差异(P<0.05);1 024 mg·L^(-1)BAEB干预组ERG1,ERG2,ERG3,ERG4,ERG5,ERG6,ERG10,ERG11,ERG13,ERG24,ERG25,ERG251,ERG26与UPC2分别下调6.58,4.89,4.15,9.24,3.41,9.84,3.08,7.50,5.53,5.90,2.45,3.25,1.98,10.07倍。BAEB可通过抑制麦角甾醇及其生物合成相关基因的表达,进而抑制白念珠菌细胞膜完整性。

白头翁汤正丁醇提取物通过下调NLRP3炎症小体及相关信号通路治疗小鼠外阴阴道念珠菌病的作用机制研究

探讨白头翁汤正丁醇提取物(BAEB)对外阴阴道念珠菌病(VVC)小鼠的治疗作用,并从TLRs/MyD88与Dectin-1/Syk信号通路及其介导的NLRP3炎症小体角度阐明其作用机制。实验中将雌性KM小鼠随机分为空白对照组、VVC模型组、氟康唑组、BAEB治疗组(20、40、80 mg·kg^(-1))。除空白对照组外,其他各组均建立VVC模型,于第8天给予BAEB灌胃治疗,空白对照组给予生理盐水,持续7 d。每日观察小鼠状态,记录小鼠体质量,分别于小鼠阴道感染白念珠菌的第1、3、7、14天,平板法检测阴道灌洗液真菌载荷量,革兰染色观察阴道灌洗液中白念珠菌形态;处死小鼠后,HE、PAS染色法进行阴道组织病理学分析;ELISA检测阴道灌洗液中细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18、S100a8)的含量;荧光分光光度计检测阴道组织中活性氧含量;Western blot检测阴道组织中NLRP3、ASC、caspase-1、Dectin-1、Syk、MyD88、TLR2、TLR4、NF-κB的蛋白表达;免疫组化法检测阴道组织中NLRP3、Dectin-1、Syk、MyD88、TLR2、TLR4的表达和分布。结果显示,BAEB能改善VVC小鼠的一般状态,减少阴道分泌物中的真菌载荷和白念珠菌菌丝数量;降低阴道组织活性氧与阴道灌洗液中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18和S100a8的含量,下调阴道组织中NLRP3、ASC、caspase-1、Dectin-1、Syk、MyD88、TLR2、TLR4、NF-κB蛋白表达。上述结果表明,BAEB对于VVC小鼠的治疗作用可能与其下调TLRs/MyD88与Dectin-1/Syk通路关键蛋白及其介导的NLRP3炎症小体激活有关。