单味黄芩煎剂对内毒素“二次打击”脓毒症大鼠体内Fn及肺组织EPCR、AMPK表达的影响

目的观察单味黄芩煎剂对内毒素“二次打击”脓毒症大鼠体内纤维结合蛋白(Fn)及肺组织血管内皮细胞蛋白C受体(EPCR)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)表达的影响。方法28只健康SPF级成年雄性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、黄芩正常剂量组、黄芩高剂量组,每组7只,予腹腔注射内毒素(LPS)(1 mg/kg),16 h后气管内注入LPS(5 mg/kg),建立大鼠脓毒症急性肺损伤模型。黄芩正常剂量、高剂量组建模术前6 h分别经口灌胃2 mL不同剂量的黄芩煎剂,其中正常剂量组为1 g/kg,高剂量组为4 g/kg;假手术组和模型组均注射等体积的生理盐水,每天给药1次,连续3 d。结束实验后留取肺组织、血标本,HE染色观察肺组织病理学变化,测定肺组织湿/干重比,酶联免疫吸附法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、Fn,血气分析检测氧气分压(PaO_(2))并计算氧合指数,蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测肺组织EPCR、AMPK。结果模型组较假手术组肺组织出现炎性病理改变,血清Fn明显下降,TNF-α、IL-6显著上升,湿干重比升高明显,氧合指数显著下降,肺组织EPCR表达降低明显,AMPK表达增加明显;与模型组相比,黄芩正常剂量组、高剂量组血清Fn明显升高,肺组织EPCR表达升高明显,湿干重比明显下降,氧合指数明显改善,减轻肺组织病理变化(均P<0.05或P<0.01);黄芩正常剂量组、高剂量组之间Fn、EPCR、AMPK表达差异无统计学意义(P>0.05),湿干重比、氧合指数差异无统计学意义(P>0.05)。结论单味黄芩煎剂对内毒素“二次打击”脓毒症大鼠肺损伤有保护作用,能够降低肺损伤程度,改善氧合指数,其机制可能与抑制炎症反应,提高Fn、EPCR表达,保护内皮细胞有关,但与黄芩的剂量关系不密切。

c-di-AMP——细菌中第二信使的研究进展

环二腺苷酸(cyclic diadenylate monophosphate,c-di-AMP)是新发现的在细菌中广泛存在的一类重要的第二信使。c-di-AMP不仅与细菌的生长、细胞壁的代谢平衡、生物被膜的形成等密切相关,还在真核宿主细胞抗感染的固有免疫中发挥重要作用。主要从c-di-AMP的合成酶与降解酶、c-di-AMP在病原菌中的结合蛋白以及c-di-AMP与宿主细胞互作过程中的相关受体蛋白等几方面进行综述。

肺炎克雷伯菌转录调控子CRP对菌株粘附能力及细胞活性的影响

目的分析肺炎克雷伯菌临床分离株WT(wild type)、回补株(c-Δcrp)和突变株(Δcrp)对人肺癌上皮细胞A549细胞的粘附能力及细胞活性的影响。方法肺炎克雷伯菌WT株、c-Δcrp株和Δcrp株感染人肺癌上皮细胞A549,经裂解液裂解后平板计数计算粘附的菌量。LDH释放法检测细菌对细胞的毒性,优化感染时间和感染指数。结果 WT株及c-Δcrp株粘附的菌量分别为logCFU=5.145和logCFU=4.915,均高于Δcrp株(logCFU=4.122),差异有统计学意义(F=8.366,P=0.004)。以MOI=1 000(细菌∶细胞=1 000)的菌量感染靶细胞,37℃孵育8 h,加底物液避光显色10 min,离心所得上清稀释10倍进行测定为最佳反应条件。WT株对细胞的毒性百分比(70.69%)明显高于Δcrp株(19.54%),差异有统计学意义(t=8.843,P=0.001)。结论 crp基因敲除后,突变株的细胞毒性和粘附力明显下降,肺炎克雷伯菌转录调控子CRP对菌株粘附力及细胞活性具有正向调控作用。

稳定表达人源α2A-肾上腺素受体细胞系的建立

目的建立稳定表达人源α2A-肾上腺素能受体(α2A-AR)的细胞系。方法将带有潮霉素B(Hygro)抗性的α2A-AR(pc DNA3.1/Hygro-HA-α2A-AR)重组质粒通过脂质体介导转染至已表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的蛋白激酶A催化亚基(PKAcat)的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞(以Hygro 200 mg·L-1进行压力筛选后,采用PKA重分布实验筛选阳性克隆),然后使用实时定量PCR验证α2A-AR受体在转录水平的表达,最后以时间分辨荧光共振能量转移免疫实验检测c AMP含量以鉴定受体功能。结果 PKA重分布实验结果表明,CHO-PKAcat-α2A-AR 7号克隆反应性良好;与CHO-PKAcat-EGFP细胞相比,该细胞系α2A-AR m RNA表达水平较高(P<0.01),且多次传代能保持稳定;在α2A-AR激动剂作用后,能显著抑制forskolin引起的c AMP水平升高(P<0.01)。结论成功构建稳定表达α2A-AR的CHO-PKAcat-α2A-AR细胞系,可用于药物筛选及机制研究。

cAMP受体蛋白对嗜水气单胞菌生长初期胆汁耐受性的影响

目的本研究拟确定cAMP受体蛋白对嗜水气单胞菌胆汁耐受性的影响。方法构建嗜水气单胞菌的luxS、crp的缺失株及crp回补株,通过胆汁生长实验确定嗜水气单胞菌及其构建株的胆汁耐受性。结果嗜水气单胞菌BJ018、BJ018ΔluxS和BJ018Δcrp在LB培养基中生长速度基本一致。10%胆汁LB中,BJ018和缺失株ΔluxS前8 h生长被抑制,后期呈对数快速生长;其缺失株Δcrp生长速度领先于野生株,早期生长未被抑制。嗜水气单胞菌BJ018Δcrp的回补株早期生长重新被抑制,与野生株BJ018基本一致。其他两株嗜水气单胞菌BJ017、BJ054及其缺失株Δcrp胆汁生长结果与BJ018、BJ018Δcrp一致。这些结果提示嗜水气单胞菌CRP影响菌株对胆汁的耐受。结论CRP的存在影响嗜水气单胞菌在胆汁中的生长,可能在胆汁耐受调控中起到重要作用。