重组海参溶菌酶基因工程菌的构建及原核表达

根据GenBank中海刺参溶菌酶的cDNA序列(Accession no.EF036468),利用RT-PCR技术扩增出海刺参溶菌酶的基因片段(SL),将其克隆到原核表达载体pET-32a(+),得到重组质粒pET-32a(+)-SL,再转化至E.coil Rosetta(DE3)pLysS。利用IPTG诱导表达,重组蛋白经SDS-PAGE分析,得到一条分子质量约为31ku的特异条带。经过Western blotting分析鉴定,结果显示重组海参溶菌酶成功在大肠杆菌中表达,并且有部分可溶性蛋白,占总菌体蛋白约10%。这些结果为进一步研究海参溶菌酶的作用机理奠定基础。

沙眼衣原体主要外膜蛋白在减毒鼠伤寒杆菌中的表达及初步鉴定

目的采用作为疫苗载体的减毒鼠伤寒杆菌致死性平衡系统 ,构建能异源表达沙眼衣原体(Ct)主要外膜蛋白(MOMP)的重组菌株。方法以D型Ct的DNA为模板 ,用所设计的特异性引物扩增编码CtMOMP高变区(VDI～VDIV)基因 ,并将扩增产物定向克隆至质粒pUC19中。序列分析后 ,再亚克隆至与减毒鼠伤寒杆菌X4550互补的质粒pYA3341中 ,以重组质粒转化减毒鼠伤寒杆菌X4550。结果对构建的重组菌以种特异性抗CtMOMP单克隆抗体(mAb)做蛋白印迹表明 ,在相对分子质量(Mr)约为33000处表达有1条带 ,表达量约占菌体总蛋白的13 %。结论成功地构建了能表达MOMP的重组菌株并获得表达。

华北落叶松无性系种子园子代测定研究

采用随机区组设计 ,对华北落叶松无性系种园 2 0个无性系子代的形质指标和实生苗高度进行了测定 ,通过方差分析和布雷金评价结果表明 ,2 0个子代所测性状均明显高于一般林分子代 .

试论英诗汉译中的形合与意合——以《咏水仙》为例

英语重形合,汉语重意合,是公认的英汉语特征,也是检验英汉互译的标准。英汉翻译中,诗歌翻译是一个难点。梳理前人研究,以《咏水仙》为例,分析其省略、替代、重复、骈偶和散行等语言组织方式,讨论英诗汉译中的形合与意合的关系。

孤立性心房颤动的C反应蛋白1441C/T多态性及其血清水平

目的探讨孤立性心房颤动(LAF)患者C反应蛋白(CRP)1441C/T基因多态性,及LAF、CRP1441C/T基因多态性与其血清CRP浓度之间的关系。方法采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)技术对116例LAF患者(病例组)和112例健康体检者(对照组)行1441C/T基因型检测,并分别检测两组血清CRP浓度。结果病例组中含T等位基因及CT基因型增多,且病例组发现一例TT基因型,但两组间CRP1441C/T基因型和等位基因频率分布均无差异;行组间和亚组比较,病例组血清CRP浓度明显高于对照组(P<0.05);分别行组内及亚组比较,发现CT+TT基因型与CC基因型者CRP血清浓度无差异。结论 LAF患者中T等位基因及CT基因型增多;LAF患者血清CRP水平明显高于对照组。

牛带绦虫8ku蛋白基因家族cDNA的克隆和序列分析

根据带科绦虫8ku蛋白基因序列设计引物,采用RT-PCR方法对牛带绦虫六钩蚴总RNA进行扩增,扩增产物经胶回收试剂盒纯化,与pGEM-T Easy载体连接,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,筛选含有阳性重组DNA的克隆,对阳性克隆进行测序。使用DNAStar和MAGE 4生物学软件对基因克隆进行序列分析和进化树分析。结果显示,成功克隆了5种牛带绦虫8ku蛋白基因家族新成员,cDNA序列完整开放阅读框的大小为258bp,TSA8ku-1cDNA为优势克隆。序列同源性分析表明,各cDNA克隆氨基酸序列之间的差异性为1.2%～14.2%,与猪带绦虫诊断抗原TsRS1群(组)成员同源,相似性为85.9%～88.9%。由此可以推测,克隆的5种8ku蛋白基因家族成员可能是牛带绦虫病的重要诊断抗原候选基因。

记忆T细胞在哮喘小鼠不同时间的表达量

目的研究哮喘模型小鼠肺脏和脾脏组织中记忆T细胞(Tm)不同时期的表达规律以及可能作用机制。方法将84只小鼠随机分为对照组和模型组,每组42只。模型组予以腹腔注射和雾化吸入卵清白蛋白,对照组则予以等量磷酸缓冲盐溶液。于激发前1日开始,每隔2 d处死2只小鼠,直至激发后20 d。收集小鼠脾脏和肺脏,用流式细胞术检测脾脏和肺脏中Tm的水平,实时定量聚合酶链式反应检测T盒子转录因子(T-bet)、维甲酸相关孤儿受体γ亚型(RORγt)mRNA的水平。结果激发后第7天肺脏中CD4^+Tm-(辅助T细胞)Th比例达到最大值为(46.20±2.18)%,第9天脾脏中CD4^+Tm-Th比例为(38.35±1.60)%;第3天肺脏中CD8^+Tm-Th比例达到最大值为(42.29±0.97)%,第7天脾脏中CD8^+Tm-Th比例达到最大值为(31.26±1.04)%。对照组和模型组肺组织中T-bet mRNA的表达量分别为1.00±0.01,0.73±0.07;RORγt mRNA表达量分别为1.02±0.01,2.65±0.33,模型组与对照组比较,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论 CD4^+Tm可能参与哮喘小鼠气道的持续炎症反应,CD8^+Tm可能表达于哮喘的急性发作时期,其作用机制可能与Th17、Th1细胞的分化有关。