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朗德鹅C/EBPα基因的克隆及不同处理对其在肝脏中表达的影响 被引量:5
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作者 于莎莉 张翔 +3 位作者 苏胜彦 周阳 李齐发 谢庄 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期495-502,共8页
为研究C/EBPα基因与朗德鹅肝脏脂肪代谢的关系,本研究克隆了朗德鹅C/EBPα基因,预测其蛋白结构和功能,并通过实时荧光定量PCR技术检测了朗德鹅肝脏C/EBPα基因在对照组和填饲、填饲+T3、填饲+T3+甜菜碱、填饲+甜菜碱等4个不同处理组中... 为研究C/EBPα基因与朗德鹅肝脏脂肪代谢的关系,本研究克隆了朗德鹅C/EBPα基因,预测其蛋白结构和功能,并通过实时荧光定量PCR技术检测了朗德鹅肝脏C/EBPα基因在对照组和填饲、填饲+T3、填饲+T3+甜菜碱、填饲+甜菜碱等4个不同处理组中的表达情况。结果发现:朗德鹅C/EBPα基因序列长为1 401bp,开放阅读框(ORF)为975bp,编码324个氨基酸的蛋白质,两侧分别是210bp的5′-UTR和397bp的3′-UTR;预测朗德鹅C/EBPα蛋白位于细胞核中,不含有信号肽,不含有跨膜区,含有bZIP功能结构域;不同填饲处理组肝脏组织中C/EBPα基因的表达显著或极显著高于对照组(P<0.05或P<0.01),其中填饲+T3+甜菜碱处理组显著高于其它3个填饲处理组(P<0.05),与对照组差异极显著(P<0.01)。推测C/EBPα基因在朗德鹅肝脏脂肪代谢过程中发挥作用。 展开更多
关键词 朗德鹅 c/ebpα基因 序列分析 表达水平
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鸡肝细胞中C/EBPα基因的敲低及对糖脂代谢相关基因表达的影响 被引量:3
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作者 张燕萍 李柯晔 +5 位作者 王中亮 曾屾 苏媛媛 吴玉婷 金晶 顾志良 《中国家禽》 北大核心 2020年第4期15-19,共5页
C/EBPα即CCAAT/增强子结合蛋白α基因,其编码的CCAAT/增强子结合蛋白是重要的转录调控因子,在细胞的分化和代谢过程中发挥着重要的调节作用。试验利用RNAi来敲低鸡LMH细胞系中C/EBPα基因的表达,以研究C/EBPα基因影响脂肪代谢的机制... C/EBPα即CCAAT/增强子结合蛋白α基因,其编码的CCAAT/增强子结合蛋白是重要的转录调控因子,在细胞的分化和代谢过程中发挥着重要的调节作用。试验利用RNAi来敲低鸡LMH细胞系中C/EBPα基因的表达,以研究C/EBPα基因影响脂肪代谢的机制。根据鸡C/EBPα基因的mRNA序列,设计3对siRNA,用RNAi干扰技术来敲低鸡LMH细胞中的C/EBPα基因表达,然后用荧光定量PCR检测C/EBPα基因的表达情况,发现其中的C/EBPα-siRNA-161能够显著降低C/EBPα基因的表达;并将C/EBPα-siRNA-161转染LHM细胞后48 h后,利用荧光定量PCR检测LMH细胞中糖脂代谢相关基因(PCK1、SCD、GLUT2、PPARγ、INS、G6PC、IGF1、IGF2、INSR、STAT3)的表达,发现在LMH细胞中PCK1、G6PC、GLUT2基因的mRNA表达量下降,结果表明C/EBPα基因能影响糖代谢相关基因G6PC、GLUT2、甘油异生相关基因PCK1的表达,证实了C/EBPα基因对鸡肝细胞中的糖脂代谢具有调控作用,通过调控C/EBPα基因的表达将影响糖吸收及甘油异生。 展开更多
关键词 LMH细胞系 c/ebpα基因 基因敲低 荧光定量PcR 糖脂代谢
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C/EBPα基因在老年多发性骨髓瘤中的表达及临床意义 被引量:1
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作者 臧玉柱 陈香丽 +2 位作者 白炎亮 张文荟 于润红 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期123-128,共6页
目的:研究C/EBPα基因在老年多发性骨髓瘤(MM)中的表达变化及其临床预后意义。方法:自2015年2月-2017年10月在我院接受治疗的69例老年MM患者作为MM组,同时选取38例健康体检者作为对照组,采集2组人员骨髓并分离单个核细胞。采用RT-PCR方... 目的:研究C/EBPα基因在老年多发性骨髓瘤(MM)中的表达变化及其临床预后意义。方法:自2015年2月-2017年10月在我院接受治疗的69例老年MM患者作为MM组,同时选取38例健康体检者作为对照组,采集2组人员骨髓并分离单个核细胞。采用RT-PCR方法检测样本中单个核细胞的C/EBPα基因表达水平,采用Western blot方法检测C/EBPα蛋白表达水平,采用免疫组织化学方法检测骨髓组织中的C/EBPα水平,探讨C/EBPα基因表达与MM患者临床特征及生存期的相关性。结果:MM患者中C/EBPα基因mRNA及其蛋白表达水平均明显低于对照组(P <0. 05)。C/EBPα表达水平与MM患者的ISS分期、CRP、Ca^(2+)、β2-MG、LDH及骨髓瘤细胞比例均有明显相关性(P <0. 05)。C/EBPα基因的表达与MM患者的性别、年龄、免疫球蛋白分型、Hb水平无相关性(P>0. 05)。通过免疫组织化学实验发现,对照组骨髓样本染色较深,CR、PR及复发的MM患者骨髓样本染色依次减轻。通过Western blot检测发现,CR组MM患者C/EBPα蛋白的水平均显著高于PR和复发组患者(P <0. 05)。KaplanMeier生存分析发现,C/EBPα基因高表达的患者组OS和DFS均优于低表达组(P <0. 05)。多因素Cox回归分析表明,CRP、骨髓瘤细胞比例及C/EBPα基因表达水平是影响OS及PFS独立因素(P <0. 05)。结论:C/EBPα基因在MM患者中表达水平较低,其低水平表达可能刺激MM的发生; C/EBPα基因表达与MM疾病发展密切相关。 展开更多
关键词 c/ebpα基因 多发性骨髓瘤 临床预后
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骨髓增生异常综合征患者c/ebpα基因表达水平及其临床意义 被引量:1
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作者 姬文灿 丁凯阳 +3 位作者 朱薇波 汪健 张磊 吴竞生 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2011年第1期90-93,共4页
本研究探讨骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer binding protein alpha,C/EBPα)基因的表达及其在MDS发病、病情进展中的意义。应用Taqman探针的实时荧光定量PCR(Real-time qu... 本研究探讨骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer binding protein alpha,C/EBPα)基因的表达及其在MDS发病、病情进展中的意义。应用Taqman探针的实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,RQ-PCR)方法检测33例MDS患者和14例正常对照者的骨髓单个核细胞中的c/ebpα mRNA的表达,分析其在MDS中的表达水平变化。结果表明,MDS低危组和高危组c/ebpα mRNA的表达水平均显著低于对照组(分别为t=3.310,p<0.01,t=6.260,p<0.001),且c/ebpαmRNA在MDS高危组中的表达水平较低危组降低(t=2.709,p<0.05)。MDS患者中c/ebpα mRNA表达水平与患者性别、年龄及血象无明显相关性,但MDS患者c/ebpαmRNA低表达组的骨髓中原始细胞比例明显高于c/ebpα mRNA高表达组(p<0.01)。结论:c/ebpα基因表达的下调与MDS的发病密切相关,c/ebpα基因可能是诱导MDS发病的重要分子生物学标志;c/ebpα表达下调的程度与MDS的病情进展有密切关系。 展开更多
关键词 骨髓增生异常综合征 c/ebpα基因 实时荧光定量PcR
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维吾尔族宫颈鳞癌C/EBPα基因甲基化意义 被引量:1
5
作者 张东辉 潘泽民 +4 位作者 潘晓琳 王红英 杨昕 周琦 张金莉 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期329-330,共2页
目的探讨维吾尔族宫颈鳞癌C/EBPα基因(CCAAT/enhancer-binding proteinαgene)启动子区甲基化的意义。方法收集19例维吾尔族宫颈鳞癌组织和17例宫颈正常组织,提取基因组DNA,用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析技术(MALDI-TOF)检... 目的探讨维吾尔族宫颈鳞癌C/EBPα基因(CCAAT/enhancer-binding proteinαgene)启动子区甲基化的意义。方法收集19例维吾尔族宫颈鳞癌组织和17例宫颈正常组织,提取基因组DNA,用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析技术(MALDI-TOF)检测C/EBPα基因启动子区CpG岛甲基化状态。结果 (1)C/EBPα基因启动子区CpG岛甲基化程度在19例维吾尔族宫颈鳞癌病例组与17例对照组中各为(0.137 1±0.088 36)与(0.115 6±0.087 28),差异有统计学意义(Z=-2.840,P=0.005);(2)维吾尔族宫颈鳞癌病例组C/EBPα基因启动子区CpG_1、CpG_5和CpG_14.15甲基化程度各为(0.095 9±0.053 16)(、0.072 1±0.025 07)和(0.261 3±0.050 83),明显高于对照组的(0.068 1±0.076 09)(、0.044 7±0.026 25)和(0.191 7±0.070 69),差异有统计学意义(P<0.05);(3)患者年龄、高危型人类乳头瘤病毒16(HPV16)感染与C/EBPα基因启动子区CpG岛高甲基化状态无关(P>0.05)。结论 C/EBPα基因启动子区CpG岛、尤其是CpG_1、CpG_5和CpG_14.15的高甲基化状态可能导致该基因沉默,从而促进维吾尔族宫颈鳞癌的发生发展。 展开更多
关键词 维吾尔族 宫颈鳞癌 c/ebpα基因 甲基化
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C/EBPα基因与肿瘤
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作者 张东辉 潘泽民 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期58-62,共5页
C/EBPα基因是抑癌基因,有抑制增殖、促进分化和调节DNA损伤反应等作用。各种机制如对抗性的蛋白质-蛋白质相互作用、基因突变和翻译后修饰等导致C/EBPα转录抑制或活性丧失,可能诱发肿瘤。本文结合国内外研究现状,介绍C/EBPα基因的结... C/EBPα基因是抑癌基因,有抑制增殖、促进分化和调节DNA损伤反应等作用。各种机制如对抗性的蛋白质-蛋白质相互作用、基因突变和翻译后修饰等导致C/EBPα转录抑制或活性丧失,可能诱发肿瘤。本文结合国内外研究现状,介绍C/EBPα基因的结构、功能及与肿瘤的诊断、治疗和预后的关系。 展开更多
关键词 c/ebpα基因 抑癌基因 肿瘤
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C/EBPα基因在大鼠肝星状细胞内的表达及意义 被引量:2
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作者 黄瑾 张锦生 +4 位作者 黄光存 汤其群 陈晨 张秀荣 陈琦 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 2004年第5期259-262,共4页
目的 初步探讨CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)在肝星状细胞(HSC)激活过程中的作用。 方法 采用免疫细胞化学、western blot及RT-PCR检测原代培养不同时间段HSC内C/EBPα蛋白和mRNA的表达,以及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、结蛋白、基质... 目的 初步探讨CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)在肝星状细胞(HSC)激活过程中的作用。 方法 采用免疫细胞化学、western blot及RT-PCR检测原代培养不同时间段HSC内C/EBPα蛋白和mRNA的表达,以及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、结蛋白、基质金属蛋白酶-2(MMP2)mRNA、Ⅰ型前胶原(α1)mRNA的表达;Lipofect AMINE2000介导的瞬时转染方法将pcDNA3.1(-)-C/EBPα真核表达质粒转染入激活的HSC内,采用免疫细胞化学方法鉴定转染成功及转染后HSC内增殖细胞核抗原(PCNA)的表达;在相差显微镜下观察HSC在原代培养过程中形态的改变。 结果 原代正常HSC中可以检测到C/EBPα mRNA和蛋白的表达,蛋白位于细胞质和细胞核内,但主要位于细胞质内,且除新鲜分离(0d)组以外,随着HSC培养至2、4、7、10d,C/EBPα蛋白和mRNA的表达呈逐步下降的趋势,而α-SMA、MMP2和Ⅰ型前胶原(α1)的表达则逐步增强;转染后24 h,目的基因转染组HSC内C/EBPα的表达明显强于空载体对照组,而PCNA的阳性细胞数较空载体对照组明显减少;转染后36 h,目的基因转染组细胞几乎全部死亡,残存的细胞形态变细,体积缩小,而空载体对照组细胞仍存活。 结论 C/EBPα基因可能参与HSC的激活调控机制,且C/EBPα过表达对HSC的增殖存在抑制作用。 展开更多
关键词 肝星状细胞 DNA结合蛋白 c/ebpα基因 大鼠 HSc 免疫细胞化学 调控机制 增殖抑制
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C/EBPα基因对子宫颈癌HeLa细胞增殖和迁移能力的作用分析 被引量:1
8
作者 张鑫芝 王红英 +4 位作者 郑威楠 刘引引 康华丽 李星 潘泽民 《中国妇幼保健》 CAS 北大核心 2012年第23期3644-3646,共3页
目的:探索CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)基因对HeLa细胞增殖和定向迁移的影响。方法:用MTT方法检测C/EBPα基因重组质粒转染组、空质粒转染组和未转染组对HeLa细胞增殖的影响。用Transwell侵袭转移模型评价He-La细胞的迁移情况。其中... 目的:探索CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)基因对HeLa细胞增殖和定向迁移的影响。方法:用MTT方法检测C/EBPα基因重组质粒转染组、空质粒转染组和未转染组对HeLa细胞增殖的影响。用Transwell侵袭转移模型评价He-La细胞的迁移情况。其中,不同上室中分别加入C/EBPα基因重组质粒转染组、空质粒转染组和未转染组的HeLa细胞,下室中加入含20%FBS的培养基。结果:C/EBPα基因重组质粒转染组、转染空质粒组和未转染HeLa细胞组的吸光度值分别为0.21±0.01、0.24±0.01和0.24±0.02,重组质粒转染组与空质粒转染组和未转染HeLa细胞组比较差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell实验发现重组质粒转染组与空质粒转染组和未转染HeLa细胞组相比,细胞迁移能力减弱,细胞穿膜数分别为12.0±2.2、39.0±3.2和39.6±2.6,重组质粒转染组与空质粒转染组和未转染HeLa细胞组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:C/EBPα基因能抑制子宫颈癌HeLa细胞的增殖和迁移能力。 展开更多
关键词 c/ebpα基因 HELA细胞 增殖 迁移
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鸡C/EBP-α基因表达载体的构建及抗血清制备 被引量:4
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作者 王娉 王启贵 +1 位作者 李辉 张富春 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期978-981,共4页
目的:构建鸡C/EBP-α基因原核和真核表达载体及制备高效价的抗血清,为在蛋白质水平研究鸡C/EBP-α基因的功能以及与其他脂肪细胞分化调控基因间的时空协同关系奠定基础。方法:采用RT-PCR的方法,根据已知鸡的C/EBP-α基因cDNA序列,获取鸡... 目的:构建鸡C/EBP-α基因原核和真核表达载体及制备高效价的抗血清,为在蛋白质水平研究鸡C/EBP-α基因的功能以及与其他脂肪细胞分化调控基因间的时空协同关系奠定基础。方法:采用RT-PCR的方法,根据已知鸡的C/EBP-α基因cDNA序列,获取鸡C/EBP-α基因的cDNA片段,测序正确后分别克隆到原核表达载体pGEX-4T-1和真核表达载体pcDNA3中。重组质粒pGEX-4T-1/C/EBP-α转化大肠杆菌BL21(DE3),不同浓度的IPTG诱导后,用SDS-PAGE检测蛋白表达情况;真核表达载体pcDNA3/C/EBP-α应用水压转染法,经RT-PCR检测外源C/EBP-α基因在小鼠肝脏中的表达情况,然后采用"DNAprime-protein boost"策略免疫小鼠,制备高效价的抗血清,应用Western blot检测抗血清的特异性。结果:构建了鸡C/EBP-α基因的原核和真核表达载体;SDS-PAGE显示C/EBP-α得到了特异性的表达;RT-PCR结果提示C/EBP-α mRNA在小鼠肝脏中表达;ELISA和Western blot结果表明基因免疫小鼠产生了高效价和特异性强的抗血清。结论:成功构建了鸡C/EBP-α基因的原核pGEX-4T-1/C/EBP-α和真核表达载体pcDNA3/C/EBP-α,外源基因C/EBP-α mRNA能在小鼠肝脏中有效表达,同时制备了高效价、特异性强的抗血清。 展开更多
关键词 家鸡 c/ebpα基因 载体构建 抗体
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新疆维吾尔族宫颈癌组织中C/EBPα第一外显子突变与HPV16感染的关系 被引量:3
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作者 龙海晨 王红英 +5 位作者 李玉华 杨昕 左强强 范佩文 郭彩丽 潘泽民 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2014年第3期325-329,共5页
为探讨新疆维吾尔族宫颈癌组织中C/EBPα第一外显子突变与HPV16感染的关系。收集46例新疆维吾尔族宫颈癌标本,采用基因测序方法检测C/EBPα第一外显子的突变,利用PCR扩增方法分析HPV16病毒的感染,进行统计学分析。结果发现C/EBPα第一... 为探讨新疆维吾尔族宫颈癌组织中C/EBPα第一外显子突变与HPV16感染的关系。收集46例新疆维吾尔族宫颈癌标本,采用基因测序方法检测C/EBPα第一外显子的突变,利用PCR扩增方法分析HPV16病毒的感染,进行统计学分析。结果发现C/EBPα第一外显子突变的患者HPV16病毒感染率高。且C/EBPα第一外显子突变的患者与未突变的患者的HPV16病毒的感染率存在显著性差异。McNemanr检验P<0.05双侧。由此可知,新疆维吾尔族宫颈癌组织中C/EBPα基因第一外显子突变与HPV16病毒的感染相关。C/EBPα第一外显子突变可能是导致宫颈癌的一个重要因素。 展开更多
关键词 宫颈癌 突变 c/ebpα基因 HPV16
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C/EBPα在肝细胞癌中的表达及意义 被引量:2
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作者 郑洁 魏志新 +4 位作者 王宝松 姜栋栋 赵金岭 于树娜 蒋吉英 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2010年第6期593-596,共4页
目的检测肝细胞癌(HCC)标本中肝细胞核因子C/EBPα的表达,探讨其在肝癌发生、发展中的作用。方法采用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)和免疫组化方法检测C/EBPα mRNA和蛋白质在肝癌组织... 目的检测肝细胞癌(HCC)标本中肝细胞核因子C/EBPα的表达,探讨其在肝癌发生、发展中的作用。方法采用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)和免疫组化方法检测C/EBPα mRNA和蛋白质在肝癌组织和癌旁肝组织中的表达。结果 C/EBPα mRNA在癌旁肝组织中的相对表达量(0.737±0.268)明显高于肝细胞癌组织(0.258±0.190),差异有显著性(P<0.05)。C/EBPα mRNA的表达与肿瘤分化程度有关(P<0.05)。C/EBPα蛋白在癌旁肝组织中的阳性率(100.0%)明显高于肝细胞癌组织(38.4%),差异有显著性(P<0.05)。C/EBPα蛋白的表达与肿瘤分化程度有关(P<0.05)。结论 C/EBPα在肝细胞癌中表达下调在肝癌的发展过程中起重要作用。 展开更多
关键词 c/ebpα基因 肝细胞癌 RT-PcR 免疫组织化学
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鸡L-FABP启动子区C/EBPα结合位点的定点突变分析 被引量:2
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作者 贺綦 孙婴宁 +1 位作者 李辉 王启贵 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1496-1501,共6页
为进一步分析L-FABP启动子区域中的C/EBPα结合位点以确定其在L-FABP转录中的调控作用。本研究采用定点突变方法将L-FABP启动子区域中的C/EBPα结合位点进行有效突变。结果显示,C/EBPα外源过表达可以抑制L-FABP启动子活性,突变L-FABP... 为进一步分析L-FABP启动子区域中的C/EBPα结合位点以确定其在L-FABP转录中的调控作用。本研究采用定点突变方法将L-FABP启动子区域中的C/EBPα结合位点进行有效突变。结果显示,C/EBPα外源过表达可以抑制L-FABP启动子活性,突变L-FABP启动子区域中C/EBPα结合位点后L-FABP的启动子活性明显升高。这些结果表明,鸡L-FABP基因受到C/EBPα基因负调控作用,且C/EBPα很可能通过与该位点结合参与L-FABP的转录调控,为进一步研究C/EBPα在L-FABP基因转录调控中的作用提供重要依据。 展开更多
关键词 L-FABP基因 启动子 定点突变 c/ebpα基因
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新乌头碱对K562细胞及耐柔红霉素的K562细胞凋亡的诱导作用及其机制 被引量:5
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作者 关心 杨同华 +1 位作者 张超然 冯帅 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期281-284,共4页
目的观察温阳药新乌头碱对白血病细胞K562和K562耐柔红霉素细胞株(K562/DNR)的抑制作用及可能的分子机制。方法应用MTT法,结合流式细胞术检测不同浓度新乌头碱对K562和K562/DNR增殖和凋亡的影响。通过Real-time PCR检测不同浓度新乌头... 目的观察温阳药新乌头碱对白血病细胞K562和K562耐柔红霉素细胞株(K562/DNR)的抑制作用及可能的分子机制。方法应用MTT法,结合流式细胞术检测不同浓度新乌头碱对K562和K562/DNR增殖和凋亡的影响。通过Real-time PCR检测不同浓度新乌头碱作用72h对K562和K562/DNR细胞C/EBPα、Caspase-3、p53凋亡相关基因表达的影响。结果 K562和K562/DNR细胞的增殖抑制率随着新乌头碱浓度增加及作用时间延长而上升,呈浓度、时间依赖性(均P<0.05)。新乌头碱能引起K562和K562/DNR细胞凋亡,且随着药物浓度增加,凋亡率也逐渐升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Real-time PCR结果显示,经50μmol/L新乌头碱作用72h,K562和K562/DNR细胞的C/EBPα表达下调,Caspase-3、p53表达上调,与正常对照组相比差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论新乌头碱能够引起K562和K562/DNR细胞发生凋亡,并且凋亡机制可能与下调C/EBPa基因及上调Caspase-3、p53基因有关。 展开更多
关键词 新乌头碱 白血病 细胞凋亡 c/ebpα基因 cASPASE-3基因 P53基因
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