益气血法调节GDF9、c-IAP1/2、JNK1/2、TNFR1/2表达对超排卵大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响

目的观察益气血法经后增殖方含药血清基于p38 MAPK/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路调节生长分化因子9(GDF9)、细胞凋亡抑制蛋白1/2(c-IAP1/2)、c-Jun氨基末端激酶1/2(JNK1/2)、肿瘤坏死因子受体1/2(TNFR1/2)表达对控制性超排卵大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响。方法取12只雌性大鼠,随机分为控制性超排卵+中药组(6只大鼠给予经后增殖方4.5 g/kg灌胃)和控制性超排卵组(6只大鼠给予等体积生理盐水灌胃),后续经腹腔注射醋酸曲普瑞林、孕马血清促性腺激素、HCG后,取2组大鼠腹主动脉血制备含药血清和空白血清。另取15只雌性大鼠,经腹腔注射醋酸曲普瑞林、孕马血清促性腺激素、HCG后,收集卵巢颗粒细胞,分别与空白血清(空白血清组)、含药血清(含药血清组)、含药血清+GDF9抗体(含药血清+GDF9抗体组)在体外共同培养。TUNEL检测卵巢颗粒细胞凋亡率,qRT-PCR法检测卵巢颗粒细胞中p38 MAPK、NF-κB、GDF9、c-IAP1、c-IAP2、JNK1、JNK2、TNFR1、TNFR2 mRNA表达情况,Western blot法检测卵巢颗粒细胞中GDF9蛋白表达情况。结果含药血清组和含药血清+GDF9抗体组细胞凋亡率均明显低于空白血清组(P均<0.05),且含药血清组明显低于含药血清+GDF9抗体组(P<0.05)。含药血清组p38 MAPK、NF-κB mRNA相对表达量均明显低于空白血清组(P均<0.05)。含药血清组和含药血清+GDF9抗体组c-IAP1、c-IAP2、GDF9 mRNA相对表达量和GDF9蛋白相对表达量均明显高于空白血清组(P均<0.05),且含药血清组均明显高于含药血清+GDF9抗体组(P均<0.05);含药血清组和含药血清+GDF9抗体组JNK1、JNK2、TNFR1、TNFR2 mRNA相对表达量均明显低于空白血清组(P均<0.05),且含药血清组均明显低于含药血清+GDF9抗体组(P均<0.05)。结论益气血法经后增殖方可通过调控p38 MAPK/NF-κB信号通路,上调控制性超排卵大鼠卵巢颗粒细胞中GDF9、c-IAP1、c-IAP2的表达,下调JNK1、JNK2、TNFR1、TNFR2的表达,抑制卵巢颗粒细胞凋亡。

NF-κBp65,c-IAP2,Caspase-3在宫颈癌中的表达及意义

目的:探讨核因子-κB(NF-κB)p65、细胞凋亡抑制蛋白-2(c-IAP2)和半胱氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)在宫颈癌组织中表达的意义。方法:应用免疫组织化学方法检测NF-κBp65、c-IAP2和Caspase-3在44例宫颈癌、50例宫颈上皮内瘤变(CIN)及30例正常宫颈组织中的表达情况。结果:宫颈癌和CIN中NF-κBp65,c-IAP2的阳性表达率高于正常宫颈组织(P<0.05),而Caspase-3的表达率低于正常宫颈组织(P<0.05),3个指标在CINⅠ和正常宫颈组织中的表达无差异(P>0.05),在CINⅡ～Ⅲ中NF-κBp65,c-IAP2的表达高于正常宫颈组织(P<0.05),而Caspase-3的表达低于正常宫颈组织(P<0.05);NF-κBp65,c-IAP2,Caspase-3在宫颈癌的不同临床分期中的表达无差异(P>0.05),NF-κBp65,c-IAP2在低分化和有淋巴结转移组宫颈癌组织中的表达高于高分化组织和无淋巴结转移组(P<0.05),而Caspase-3的表达低于高分化组织和无淋巴结转移组(P<0.05);NF-κBp65与c-IAP2在宫颈癌中的表达呈正相关,NF-κBp65,c-IAP2在宫颈癌中的表达与Caspase-3的表达呈负相关。结论:宫颈癌中NF-κBp65、c-IAP2高表达而Caspase-3低表达可能和宫颈癌的发生发展有关。

基因c-IAP2和GAS1在何杰金及间变性大细胞淋巴瘤中表达

目的 :检测凋亡相关基因c-IAP2和GAS1在何杰金氏淋巴瘤 (HL)及间变性大细胞淋巴瘤 (ALCL)组织中的蛋白表达状况及差异 ,探讨此两种基因与HL和ALCL发生发展的相关性。方法 :将 2 88例恶性淋巴瘤标本经HE及CD30、CD15、CD2 0、CD4 5RO免疫组化染色 ,筛选出 4 5例HL和ALCL ,以免疫组化方法检测c -IAP2和GAS1在HL和ALCL中的表达 ,并进行统计分析。结果 :①c -IAP2及GAS1分别在两组病例中的表达均有显著差异 (P <0 0 5 ) ;②有两个病例为大小细胞混合型 ,c -IAP2和GAS1在大细胞的表达与HL一致 ,在小细胞的表达与ALCL类似。结论 :c-IAP2、GAS1在HL和ALCL中的表达存在差异性 ,提示二者与此两种肿瘤的发生相关 ,HL和ALCL可能存在不同的发生机制及不同的信号转导途径受损部位 ;个别病例中存在着HL及ALCL两种瘤细胞的特点 ,表明HL和ALCL存在重叠和过渡 ;c-IAP2和GAS1的表达方式有助于HL及ALCL的鉴别诊断。

凋亡蛋白因子c-IAP2在新疆哈萨克族食管癌中的表达及临床意义

目的探讨新疆哈萨克族食管癌组织中凋亡蛋白因子c-IAP2 mRNA的表达及其临床意义。方法采用RT-PCR方法检测30例哈萨克族食管癌患者中c-IAP2 mRNA的表达。结果 30例哈萨克族食管癌患者癌组织与正常组织(手术切缘无癌组织)中c-IAP2 mRNA表达阳性率分别为93.33%(28/30)与70.0%(21/30)。半定量光密度扫描后c-IAP2 mRNA表达量在哈萨克族食管鳞癌患者癌组织及正常组织中差异有统计学意义(P<0.05),但c-IAP2的表达与分化程度、病理分期及有无淋巴结转移均无相关性。结论 c-IAP2 mRNA在哈萨克族食管癌患者癌组织中的表达高于正常组织,表明c-IAP2通过抑制细胞凋亡,可能促进了哈萨克族食管癌的发生。

三氧化二砷对恶性黑素瘤A_(375)细胞NF-κB、C-IAP2及caspase-3表达的影响

目的：探讨三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）在诱导人黑素瘤A375细胞凋亡中,对核因子-κB（NF-κB）、细胞凋亡抑制蛋白2（C-IAP2）以及半胱氨酸-天冬氨酸特异性蛋白酶-3（caspase-3）表达的影响。方法：Western blot法检测A375细胞中NF-κB p65核蛋白的表达和caspase-3蛋白的活化,半定量RT-PCR法检测C-IAP2mRNA的表达。结果：2.5、5.0、10.0μmol/LAs2O3作用于A375细胞24h,NF-κB p65核蛋白表达比值分别为（39.60±7.76）%、（10.17±0.90）%和（4.43±0.91）%;caspase-3蛋白比值分别为（10.03±2.06）%、（23.43±3.28）%和（35.70±4.61）%;C-IAP2mRNA表达的比值为（66.78±15.46）%、（30.16±5.52）%和（6.46±4.54）%,上述各指标与相应对照组比较及组内两两比较差异均有统计学意义（P〈0.05~P〈0.01）,随着As2O3作用浓度的增加,caspase-3激活型蛋白增多,NF-κB p65核蛋白和C-IAP2mRNA表达下降。结论：As2O3能抑制NF-κB、C-IAP2基因的表达,活化caspase-3蛋白表达。推测NF-κB-C-IAP2-caspase-3通路可能是As2O3诱导A375细胞凋亡的途径之一。

c-IAP2与Smac基因在白血病中的表达及其临床意义

为了研究c-IAP2及其拮抗素Smac基因在白血病中的表达及对成人急性白血病(AL)患者的预后意义,采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测103例白血病患者c-IAP2、Smac的mRNA表达水平,20名健康人为正常对照,K562、Kg-1a细胞株为阳性对照。结果表明:c-IAP2、Smac在初治AL中的表达较正常对照组明显升高,两者的表达为高度正相关,治疗缓解后c-IAP2、Smac的表达明显下降,与初治AL组有明显差异(P<0.05),复发后c-IAP2、Smac基因的表达又复升高。c-IAP2mRNA和SmacmRNA在慢性粒细胞性白血病慢性期(CML-CP)组的表达率和表达水平均高于正常对照组,但无统计学意义(P>0.05)。在初治AL患者中,c-IAP2、Smac表达阳性的患者缓解率均低于表达阴性的患者。结论:c-IAP2mRNA、SmacmRNA过度表达和急性白血病的发病呈正相关;c-IAP2、Smac高表达的患者完全缓解率低,预后不良;c-IAP2、Smac可作为急性白血病的发病、复发及预后判断的指标之一。

三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡过程中ROS、NF-κB和C-IAP2的变化

背景与目的:探讨As2O3(arsenic trioxide,ATO)对HL-60细胞凋亡过程中细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、NF-κB(nuclear factor kappa B),及C-IAP2(cellular inhibitor of apoptosis proteins 2)的影响。材料与方法:以7.5μmol/L As2O3单独应用及与500μmol/L N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)联合作用于HL-60细胞12、24 h后,流式细胞术检测HL-60细胞ROS的产生量;Western blot法检测NF-κB P65核蛋白的变化情况;半定量RT-PCR法检测C-IAP2的相对表达量。结果:7.5μmol/L的As2O3作用HL-60细胞12、24 h后细胞内ROS的生成增加,与阴性对照比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。NF-κBP65核蛋白的相对含量分别为49.3%±4.4%和23.1%±2.1%,C-IAP2的相对表达分别为72.9%±5.8%和59.3%±4.4%,较对照组均明显降低(P<0.05)。500μmol/L NAC和7.5μmol/L As2O3共同作用HL-60细胞12、24 h后细胞ROS生成量相对减少,与AS2O3单独作用组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);NF-κB P65核蛋白的相对含量分别为65.4%±4.9%和37.1%±3.4%,C-IAP2的相对表达量分别为81.1%±5.8%和73.7%±4.9%。较AS2O3单独作用组均明显增加(P<0.05)。结论:As2O3诱导HL-60细胞凋亡过程中,细胞内ROS生成增加,抑制NF-κB活性,同时下调其靶基因C-IAP2等的表达;NAC能阻断As2O3诱导HL-60细胞凋亡过程中ROS的生成,部分阻断了NF-κB活性的抑制。

多发性骨髓瘤细胞中c-IAP2表达及其相关研究

目的探讨细胞凋亡抑制蛋白-2(cellular inhibitor of apoptosis protein-2,c-IAP2)在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)发病机制中的作用,为MM治疗提供新的思路和理论依据。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测c-IAP2mRNA在MM患者中的表达,分析c-IAP2mRNA与半胱氨酸-天门东氨酸酶-3(cysteine-aspartic proteases-3,caspase-3)蛋白、核因子-κBp65(NF-κBp65)mRNA的相互关系。结果初诊MM患者的c-IAP2mRNA表达水平高于对照组(P<0.05),c-IAP2mRNA与NF-κBp65mRNA表达水平呈正相关(r=0.681),与caspase-3蛋白表达水平呈负相关(r=-0.547)。结论c-IAP2mRNA在多发性骨髓瘤中高表达,与对照组相比差异有统计学意义,经分析表明c-IAP2基因在多发性骨髓瘤发病中可能具有促进作用。

Livin和c-IAP2在新疆维吾尔族食管癌中的表达

目的:探讨Livin和c-IAP2基因在新疆维吾尔族食管癌组织中的表达及其与临床病理因素的关系。方法:分别采用RT-PCR和Western blot方法检测Livin和c-IAP2 mRNA和蛋白在60例食管癌组织及其相应癌旁正常组织中的表达,并分析Livin、c-IAP2mRNA的表达与临床病理因素的关系。结果:Livin和c-IAP2 mRNA在60例癌组织中的阳性表达率均为90.0%(54/60),在60例癌旁正常组织中表达的阳性率均为56.7%(34/60),癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁正常组织,差异具有统计学意义(p<0.01);且Livin和c-IAP2 mRNA阳性表达分别与淋巴结转移和TNM分期相关(P均<0.05),Western blot检测结果显示在60例癌组织标本中Livin和c-IAP2蛋白的阳性表达率依次为86.67%(52/60)和68.33%(41/60),均明显高于相应癌旁正常组织,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:Livin和c-IAP2基因的表达可能与新疆维吾尔族食管癌的发生、发展有关。

凋亡调控因子c-IAP1,c-IAP2和Caspase-3在大肠肿瘤中的表达及意义

目的:探讨凋亡调控因子c-IAP1,c-IAP2和Caspase-3在大肠肿瘤中的表达,了解其在大肠肿瘤的发生发展中的作用。方法:收集我院2002年至2004年手术后经病理证实并有完整随访资料的大肠腺癌标本45例,同时收集外伤后手术切除的正常大肠组织为正常对照,采用免疫组化SP法和半定量积分法分别检测c-IAP1,c-IAP2和Caspase-3在大肠腺癌、大肠腺瘤及正常大肠黏膜中的表达。结果:c-IAP1,c-IAP2和Caspase-3的阳性表达率在正常大肠黏膜组与大肠腺瘤组、正常大肠黏膜组与大肠腺癌组、大肠腺瘤组与大肠腺癌组之间均有显著性差异(P<0.05)。c-IAP1与Caspase-3在大肠腺癌中的表达呈负相关(r=-0.321,P<0.05)。c-IAP2和Caspase-3在大肠腺癌中表达无相关性,(P>0.05,r=-0.164)。c-IAP1和c-IAP2在大肠腺癌中的表达无相关性。(P>0.05,r=0.066)。结论:凋亡受阻在大肠肿瘤形成过程中起着一定的作用;c-IAP1,c-IAP2可能参与了大肠腺瘤和腺癌的发生和发展,并在一定程度上反映大肠腺癌的恶性程度;凋亡抑制蛋白c-IAP1,c-IAP2的表达与患者的性别、年龄、5年生存率、肿瘤部位、组织学类型、有无淋巴结转移及Dukes分期等因素无关。

鼻咽癌组织中c-IAP2的表达及其临床意义

目的探究细胞凋亡抑制蛋白2(cellular inhibitor of apoptosis protein 2,c-IAP2)在鼻咽癌组织中的表达以及临床意义。方法回顾性分析95例鼻咽癌患者的肿瘤组织和40例正常患者的鼻咽组织及临床预后资料,分别利用RT-PCR、Western印迹以及免疫组织化学染色检测上述组织中c-IAP2 mRNA和蛋白的表达水平;卡方检验探究肿瘤组织中c-IAP2表达与临床病理学特征的关系;采用Kaplan-Meier结合Logrank检验表达不同c-IAP2表达水平患者的生存差异;采用单因素和多因素Cox比例风险回归模型分析影响鼻咽癌患者预后的危险因素。结果c-IAP2 mRNA及蛋白水平在鼻咽癌组织中显著高于正常组织(t=12.62,P<0.001);进一步,免疫组化分析发现c-IAP2在鼻咽癌组织呈高表达,且其高表达与肿瘤T分期、N分期、TNM分期及分化程度显著相关(P均<0.05);生存分析显示c-IAP2低表达组鼻咽癌患者的总生存率显著高于高表达组(χ^(2)=11.86,P=0.001),且c-IAP2高表达是导致鼻咽癌患者总生存期缩短的一个独立危险因素(HR=2.425,95%CI:1.256~4.994,P=0.012)。结论鼻咽癌中c-IAP2的表达水平明显上调,其高表达与患者的不良预后显著相关,对于评估鼻咽癌患者的预后具有潜在的临床应用价值。

雷公藤内酯醇诱导MUTZ-1细胞凋亡及其机制研究

为了探讨雷公藤内酯醇(triptolide)诱导骨髓增生异常综合征(MDS)细胞系MUTZ1细胞凋亡及其作用机制,将triptolide与MUTZ1细胞共育,采用MTT法观察细胞生长,DNA片段化分析和AnnexinVFITC/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡,RTPCR及Westernblot方法检测基因和蛋白质水平。结果表明:triptolide对MUTZ1细胞具有明显的生长抑制作用,呈量效与时效关系,24小时半数抑制率(IC50)为55.06ng/ml;triptolide能诱导MUTZ1细胞DNA断裂产生DNAladder,且能诱导MUTZ1细胞磷脂酰丝氨酸转位,其发生率随药物浓度增加而增加;triptolide作用于MUTZ1细胞12小时导致caspase3激活,PARP酶解及cIAP2mRNA表达水平下调,凋亡率与caspase3原酶及cIAP2表达量呈负相关(r=-0.907,P=0.000;r=-0.919,P=0.000)。结论:triptolide能通过诱导凋亡抑制MUTZ1细胞的生长,triptolide诱导MUTZ1细胞凋亡是通过caspase3激活及PARP酶解所介导的,且caspase3的激活可能与凋亡蛋白抑制因子cIAP2的下调有关。

三氧化二砷诱导A375细胞凋亡过程中的信号传导途径研究

背景与目的:探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)在诱导人黑素瘤A375细胞凋亡中,对NF-κB、C-IAP2以及Caspase-3信号传导途径的影响。材料与方法:将As2O3和Caspase-3抑制剂Ac-devd-cho单独或联合作用A375细胞后,采用Western blot法检测NF-κB p65和Caspase-3表达水平,免疫组织化学法检测Caspase-3蛋白的表达,RT-PCR法检测C-IAP2mRNA表达。结果:5.0μmol/L As2O3单独处理A375细胞12h和24h以及As2O3联合Ac-devd-cho处理24h组,随着As2O3作用时间的延长,Caspase-3激活蛋白增多、NF-κB p65核蛋白和C-IAP2mRNA表达下降,Ac-devd-cho能够阻断Caspase-3蛋白的活化,而对NF-κBp65核蛋白和C-IAP2mRNA表达无明显影响;免疫组织化学法也显示,Caspase-3激活型蛋白随着As2O3作用时间的延长而增高,但能被Ac-devd-cho阻断。结论:As2O3可诱导A375细胞凋亡,能抑制A375细胞NF-κB、C-IAP2基因的表达,且不被Ac-devd-cho所阻断;As2O3能活化Caspase-3蛋白表达,而此效应可被Ac-devd-cho阻断。推测NF-κB_C-IAP2-Caspase-3通路可能是As2O3诱导A375细胞凋亡的途径之一。

人类免疫缺陷病毒-1vpr基因沉默后细胞凋亡及凋亡相关蛋白的表达研究

目的通过RNA干扰HIV-1vpr基因的表达后观察凋亡相关蛋白c-凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein, IAP）2的表达情况，同时检测各组Jurkat细胞的凋亡情况。方法将空载体（NC组）、HIV-1 vpr质粒（vpr组）、vpr＋磷酸化RNAT-U6.1/Neo-vpr-56质粒（Si56组）、vpr＋磷酸化RNAT-U6.1/Neo-vpr-160质粒（Si160组）分别转染Jurkat细胞并培养48 h，分别进行总RNA、蛋白提取，利用实时PCR检测vpr基因的表达，证实质粒转染成功，以实时PCR和蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白人类内源性抗凋亡蛋白（inhibitor of apoptosis protein 2 c-IAP2）的表达情况，流式细胞仪检测各组Jurkat细胞的凋亡情况。 结果vpr组、Si56组、Si160组均可检测到vpr基因的表达，与vpr组比较，Si56组、Si160组HIV-1vpr基因表达的mRNA水平均出现明显降低，分别下降82.2%、87.2%，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。与NC组比较，vpr组、Si56组及Si160组c-IAP2基因表达的mRNA水平明显升高，分别为NC组的3.75、2.49、2.65倍；但Si56组、Si160组c-IAP2基因表达的mRNA水平均低于vpr组，分别下降33.7%和29.5% ；蛋白质印迹法检测显示，c-IAP2蛋白表达水平与mRNA结果一致，其中Si56组、Si160组c-IAP2蛋白表达水平比vpr组分别下降42.2%和46.8% （均P〈0.05）。NC组、vpr组、Si56组和Si160组均可检测到Jurkat细胞凋亡，与NC组比较，vpr组细胞凋亡率明显升高，为NC组的1.76倍，而Si56组和Si160组细胞凋亡率与NC组比较差异无统计学意义（均P〉0.05）；与vpr组比较，Si56组和Si160组细胞凋亡率明显降低，分别为19.26%和18.05%（P〈0.05）。结论通过沉默HIV-1vpr基因可下调Jurkat细胞c-IAP2基因的转录和蛋白表达水平，抑制Jurkat细胞的凋亡。