益气活血通络解毒方对肺缺血／再灌注损伤小鼠细胞凋亡及c—Jun氨基末端激酶通路的影响

目的观察益气活血通络解毒方（YHTJF）对小鼠肺缺血／再灌注（I／R）损伤（LIRI）的影响，并探讨c-Jun氨基末端激酶（JNK）是否参与其凋亡机制。方法选择雄性C57BL／6J小鼠70只，按随机数字表法分为正常对照组（C组）、羧甲基纤维素钠（CMC-Na）＋正常对照组（CMC-Na＋C组）、CMC-Na＋假手术组（CMC-Na＋S组）、CMC-Na＋I/R模型组和CMC-Na＋YHTJF低、中、高浓度干预组（CMC-Na＋YL组、CMC-Na＋YM组、CMC-Na＋YH组）。C组不进行任何处理；CMC-Na＋S组只开胸，不夹闭肺门；其余各组均开胸夹闭肺门30min，再松开动脉夹使左肺再灌注3h。术毕处死小鼠留取肺组织，光镜和电镜下观察肺组织形态学及超微结构改变，并观察肺泡损伤定量评估指标（IQA）的变化；用原位末端缺刻标记试验（TUNEL）检测肺组织细胞凋亡指数（AI）；用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）和反转录-聚酶链反应（RT-PCR）检测JNK、葡萄糖调节蛋白78（GRP78）的mRNA和蛋白表达；并分析肺组织AI与JNK、GRP78的mRNA和蛋白表达及IQA的相关性。结果CMC-Na＋I／R组IQA、AI及JNK和GRP78 mRNA和蛋白表达均较CMC-Na＋S组明显升高[IQA：（74．00±7．31）％比（7．00±1．23）％，AI：（64．40±11．97）％比（5．60±1．14）％，JNKmRNA（灰度值）：1．143±0．284比0．152±0．128，GRP78 mRNA（灰度值）：0．897±0．129比0．284±0．044，JNK蛋白（A值）：0．428±0．074比0．073±0．052，GRP78蛋白（A值）：1．075±0．145比0．589±0．060j，CMC-Na＋YL组、CMC-Na＋YM组、CMC-Na＋YH组IQA、AI、JNK mRNA和蛋白、GRP78mRNA表达均较CMC-Na＋I／R组明显下降，以CMC-Na＋YM组较CMC-Na＋YL和CMC-Na＋YH组下降程度更显著[IQA：（26．20±3．35）％比（34．00±5．34）％、（41．20±9．18）％，AI：（29．40±3．05）％比（48．20±3．83）％、（39．20±6．14）％，JNK mRNA（灰度值）：0．681±0．130比0．804±0．153、0．938±0．11，GRP78 mRNA（灰度值）：0．450±0．105比0．747±0．231、0．566±0．115，JNK赁白（A值）：0．188±0．049比0．261±0．065、0．209±0．063，均P〈0．01]，CMC-Na＋YH组、CMC-Na＋YL组和CMC-Na＋YM组GRP78蛋白表达较CMC-Na＋I／R组明显升高，以CMC-Na＋YH组升高程度较CMC-Na＋YL组和CMC-Na＋YM组更显著（A值：1．429±0．226比1．130±0．169、1．128±0．177，均P〈0．01）。光镜下可见各组细胞凋亡以肺血管内皮细胞、肺泡上皮细胞为主，棕色颗粒为阳性细胞。电镜下可见：CMC-Na＋I／R组细胞核固缩并边集在核膜下，胞质浓缩，板层体减少、排空增多，细胞膜上微绒毛减少或消失，线粒体肿胀，肺泡隔及毛细血管内炎性细胞附壁增多。与CMC-Na＋I／R组比较，CMC-Na＋YL组、CMC-Na＋YM组、CMC-Na＋YH组肺组织超微结构损伤减轻，肺泡结构超微结构清晰可辨，核染色质较均匀，胞质增多，Ⅱ型肺泡上皮细胞表面微绒毛较多，板层小体数量增多，线粒体肿胀减轻，以CMC-Na＋YM组减轻最明显。肺组织AI与JNK、GRP78的mRNA和蛋白表达、IQA均呈显著正相关性（r值分别为0．907、0．928、0．880、0．712、0．911，均P〈0．01）。结论YHTJF可有效减轻小鼠LIRI肺组织细胞的凋亡，其机制可能与抑制JNK通路有关。

热休克蛋白70抑制c—Jun氨基末端激酶通路对H2O2诱导心肌细胞凋亡的保护作用

目的 观察热休克蛋白70（HSP70）对H2O2诱导乳鼠心肌细胞凋亡的保护作用及其机制。方法培养大鼠心肌细胞，随机分为5组：对照组、H2O2组、热休克组、c—Jun氨基末端激酶（JNK）抑制剂组、热休克＋JNK抑制剂组。生化法测定各组细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）、肌酸激酶（CK）活性和丙二醛（MDA）水平．流式细胞仪分析心肌细胞凋亡，噻唑蓝（MTT）法测定心肌细胞相对活力，Western blot法检测JNK的表达。结果 H2O2组LDH、MDA水平和CK活性明显高于其他组（P〈0．01），而SOD活性则明显低于其他组（P〈0．01）。细胞凋亡率H2O2组明显高于其他各组（P〈0．01）。细胞活力H20：组明显低于对照组（P〈0．01）．而热休克组、JNK抑制剂组、热休克＋JNK抑制剂组的细胞活力明显高于H2O2组（P〈0．01）。JNK只在H2O2组有表达。结论 HSP70对H2O2诱导的心肌细胞凋亡具有保护作用，其机制可能是HSP70大量表达后抑制了JNK信号的转导。

基于肌醇需求激酶1α/c-Jun氨基末端激酶信号通路探讨胆宁片干预非酒精性脂肪性肝病的作用及机制

目的基于肌醇需求激酶1α/c-Jun氨基末端激酶(IRE1α/JNK)信号通路,探讨胆宁片对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型大鼠的作用及机制。方法将32只SD大鼠随机分为正常饮食组(A组,等体积生理盐水,8只)和高脂饮食组(24只);高脂饮食组大鼠喂养10周复制NAFLD模型成功后,再随机分为模型组(B组,等体积生理盐水)、多烯磷脂酰胆碱组[C组,142.5 mg/(kg·d)]和胆宁片组[D组,562.5 mg/(kg·d)],各8只。各组小鼠均灌胃相应药物干预6周。测定大鼠的体质量、血糖(GLU);采用苏木精-伊红染色(HE)法观察大鼠肝组织病理形态变化,采用油红染色法观察肝组织脂质沉积;检测血清胰岛素(INS)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、游离脂肪酸(NEFA)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;采用免疫印迹(Western blot)法检测肝组织IRE1α、JNK1、磷酸化胰岛素受体底物1(p-IRS1)的蛋白表达水平。结果与B组比较,D组大鼠血糖和TC,TG,LDL-C,NEFA,ALT,AST水平均显著降低(P<0.01),血清INS和HDL-C水平显著升高(P<0.01);脂肪变性程度及细胞肿胀明显减轻,脂滴空泡体积缩小,数量减少;肝脏IRE1α,JNK1,p-IRS1蛋白表达水平均显著降低(P<0.01)。结论胆宁片可能通过下调IRE1α/JNK信号通路,减轻肝脏脂肪变性,从而改善NAFLD。

c—Jun氨基末端激酶通路参与雌激素对大鼠皮瓣缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察雌激素对皮瓣缺血再灌注损伤的保护作用，初步研究c—Jun氨基末端激酶（c—JunN—terminal kinase，JNK）通路与雌激素保护作用的相关性。方法取40只Wistar大鼠建立大鼠腹部皮瓣缺血再灌注损伤模型，随机分为健康对照组（A组）、缺血再灌注损伤组（B组）、雌激素组（C组）、JNK抑制剂组（D组）。术后第七天观察各组皮瓣大体情况，测量皮瓣成活面积并计算成活率，HE染色观察各组皮瓣组织学改变，测定皮瓣组织中JNK、p-JNK、丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-5（MKP-5）的表达。分析皮瓣成活率与JNK表达量的相关性。结果c组和D组皮瓣生长良好，皮瓣成活率较B组明显提高，皮瓣组织学改变较B组轻。C组、D组皮瓣州K、P—JNK表达量较B组明显降低，c组、D组州K负性调控因子MKP-5表达明显较B组增高。结论雌激素能明显改善皮瓣缺血再灌注损伤，提高皮瓣成活率，其机制可能是雌激素通过调控JNK通路发挥了对皮瓣的缺血再灌注损伤保护作用。

恩格列净通过c-Jun氨基末端激酶信号通路改善2型糖尿病性骨质疏松症的机制研究

目的探讨恩格列净通过c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路改善2型糖尿病性骨质疏松症(T2DOP)的机制。方法将大鼠随机分为假手术组(sham组)、T2DOP组、EM组(予恩格列净干预)和EM+Anisomycin组(予EM+JNK激活剂Anisomycin干预),每组各10只。收集4组大鼠体重、血糖、血酸水平、骨代谢指标及股骨生物力学特征。采用Micro-CT测定股骨显微结构;HE染色检测股骨组织病理学变化;蛋白质印迹法(Western blot)检测骨组织中氨基末端激酶1(JNK1)、磷酸化JNK1(p-JNK1)、c-Jun、磷酸化c-Jun(p-c-Jun)蛋白表达水平并分组进行比较。结果T2DOP组大鼠体重明显低于sham组,空腹血糖(FPG)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平均明显高于sham组;EM组大鼠体重明显高于T2DOP组,FPG、TG、TC及LDL-C水平均明显低于T2DOP组,TG、TC及LDL-C水平均明显高于sham组;EM+Anisomycin组大鼠体重明显低于EM组,FPG、TG、TC及LDL-C水平均明显高于EM组(P<0.05)。T2DOP组大鼠血清骨特异性转录因子(CBF-α1)、Ⅰ型前胶原氨基端原肽(PⅠNP)、骨钙素(OC)及Ⅰ型胶原交联羧基端肽(CTXⅠ)水平、股骨最大负荷、断裂挠度、弹性模量、骨小梁骨密度(BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)均明显低于sham组,骨小梁间隔(Tb.Sp)高于sham组;EM组大鼠血清CBF-α1、PⅠNP、OC及CTX-1水平、股骨最大负荷、断裂挠度、弹性模量、BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th均明显高于T2DOP组,Tb.Sp低于T2DOP组;EM组大鼠血清CBF-α1、PⅠNP及OC水平、股骨最大负荷、断裂挠度、弹性模量、BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th均明显低于sham组,CTX-1水平及Tb.Sp均高于sham组;EM+Anisomycin组大鼠血清CBF-α1、PⅠNP、OC及CTX-1水平、股骨最大负荷、断裂挠度、弹性模量、BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th均明显低于EM组,Tb.Sp高于EM组(P<0.05)。T2DOP组大鼠股骨组织中JNK1、p-JNK1、c-Jun、p-c-Jun蛋白表达水平均明显高于sham组;EM组大鼠股骨组织中JNK1、p-JNK1、c-Jun、p-c-Jun蛋白表达水平均明显低于T2DOP组;EM+Anisomycin组大鼠股骨组织中JNK1、p-JNK1、c-Jun、p-c-Jun蛋白表达水平均明显高于EM组(P<0.05)。结论恩格列净可改善T2DOP大鼠骨代谢量失衡和骨微结构,其作用机制可能和抑制JNK/c-Jun信号通路激活有关。

c-Jun氨基末端激酶信号通路在血管紧张素Ⅱ诱导腹主动脉瘤小鼠模型中的作用机制研究

目的探讨c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信号通路在血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导腹主动脉瘤(abdominal aortic aneurysm,AAA)小鼠模型中的作用机制。方法将C57BL/6 ApoE-/-(ApoE knock out,ApoE KO)雄性小鼠随机分为3组,假性手术组、模型组和抑制剂组;假性手术组背部肩胛间皮下手术植入预装生理盐水微量缓释泵,模型组、抑制剂组小鼠背部肩胛间皮下手术植入AngⅡ的痕量缓释泵(1000 ng/(min·kg)),造模周期为28 d,抑制剂组术前48 h腹腔注射JNK抑制剂SP600125(2 mg/kg)1 mL/d进行预处理,假性手术组和模型组给予等体积的生理盐水。苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)观察小鼠炎性反应指标,双氯荧光素(2′,7′-dichlorfluorescein-diacetate,DCFH-DA)染色检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)的荧光强度,蛋白免疫印迹检测p-JNK、p-c-Jun蛋白表达。结果与假性手术组相比,模型组小鼠AAA病理症状明显,AAA组织中绿色荧光明显增强,ROS含量明显升高,p-JNK及p-c-Jun的表达出现了明显的增强,差异均具有统计学意义(均P<0.05);与模型组相比,抑制剂组小鼠AAA病理症状相对好转,AAA组织中荧光强度明显减弱,ROS含量明显降低,p-JNK及p-c-Jun的表达水平明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论JNK信号通路在血管紧张素Ⅱ诱导小鼠腹主动脉瘤模型中起着重要的调控作用,抑制该通路能抑制氧化应激反应,改善AAA症状。

凋亡信号调节激酶1通过c-Jun氨基末端激酶通路调控高糖诱导的视网膜神经节细胞损伤

目的研究细胞凋亡信号调节激酶1(apoptosis signal-regulating kinase1,ASK1)对高糖诱导的视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)损伤的保护作用及其可能的机制。方法建立大鼠RGC细胞的分离培养和体外高糖(50 mmol/L葡萄糖)损伤模型。转染ASK1 siRNA沉默ASK1的表达。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ASK1 mRNA表达水平;Western blot检测ASK1、JNK蛋白表达量和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)磷酸化水平;MTT和CCK-8方法、Ki67染色分别检测RGC生长活力和增殖情况;Annexin-V FITC/PI方法和TUNEL检测RGC凋亡情况;试剂盒方法检测Caspase-3活性。结果 RGC高糖环境下培养4d,细胞生长活力降低明显(P<0.05);ASK1表达水平在高糖损伤的RGC中明显上升(P<0.05);ASK1 siRNA的转染实验结果显示:ASK1的表达水平明显下降(P<0.05),说明沉默表达实验成功;ASK1表达被抑制后RGC的生长活力(P<0.05)和增殖能力(P<0.05)明显上升,RGC的凋亡(P<0.01)和Caspase-3的活力(P<0.01)明显降低。沉默ASK1的表达有效地降低JNK蛋白的磷酸化水平。结论抑制ASK1的表达对RGC的高糖损伤有保护作用,其机制可能与抑制JNK通路有关。

导痰汤通过c—Jun氨基末端激酶信号通路抑制人脐静脉内皮细胞细胞间黏附分子-1表达的研究

目的通过体外实验研究导痰汤是否能通过调节c—Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路来干预细胞间黏附分子-1（ICAM—1）的表达，以揭示导痰汤治疗动脉粥样硬化的机制。方法培养人脐静脉内皮细胞（HuVEc），并随机分为7组。空白对照组：正常培养HUVEC24h；导痰汤对照组：用20％导痰汤含药血清预处理HUVEC6h；肿瘤坏死因子-a（TNF-a）诱导组：用200kU／L TNF—a培养HuVEC12h；5％、10％、20％导痰汤干预组及JNK阻滞组：TNF—a诱导前分别给予5％、10％、20％导痰汤含药血清或25umol／L JNK特异性阻滞剂SP600125预处理。采用聚合酶链反应（PCR）和蛋白质免疫印迹法（western blotting）检测HUVEC中ICAM-1mRNA和JNK蛋白的表达。结果TNF—a诱导组ICAM-1 mRNA和JNK蛋白表达显著高于空白对照组和导痰汤对照组（均P〈0．01）；用导痰汤含药血清或SP600125预处理，ICAM-1mRNA和JNK蛋白表达显著下降（P〈0．05或P〈0．01）。JNK蛋白与ICAM-1mRNA水平呈显著正相关（r=0．680，P〈0．01）。结论导痰汤可以有效抑制TNF—a刺激所致的HUVEC中ICAM-1的过度表达，这可能与导痰汤可抑制JNK信号通路有关。

c-Jun氨基末端激酶信号转导通路与蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛关系的研究进展

脑血管痉挛（cerebral vasospasm,CVS）是蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage,SAH）后最严重的并发症之一,其发生率高达30%~90%。常引起严重局部脑组织缺血或迟发性缺血性脑损害,导致严重的神经功能障碍,成为SAH致死、致残的重要原因。

木犀草素对慢性肾衰竭大鼠c-Jun氨基末端激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路及肾小球基膜增生的影响

目的探讨木犀草素对慢性肾衰竭(CRF)大鼠肾小球基膜(GBM)增生及c-Jun氨基末端激酶(JNK)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路的影响。方法将50只SD大鼠分为模型组、木犀草素低、中、高剂量组、阳性对照组,每组各10只,建立CRF大鼠模型。造模结束后,木犀草素低、中、高剂量组大鼠分别以50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg木犀草素灌胃,阳性对照组大鼠以2 mg/kg贝那普利灌胃。另取10只大鼠作为正常组,正常组和模型组大鼠以生理盐水灌胃,6组均连续灌胃28 d。记录6组大鼠实验前后体质量、24 h尿量、24 h尿蛋白并比较,采用HE染色、Masson染色观察6组大鼠肾脏组织结构变化。检测各组大鼠实验后SCr、BUN、UA、FN、ColⅣ水平并比较。采用蛋白质免疫印迹法检测肾脏组织中JNK、p-JNK、p38 MAPK、p-p38 MAPK水平并比较。结果实验后,模型组大鼠精神状态较差,体质量低于同期正常组,24 h尿量、24 h尿蛋白水平均高于同期正常组(P<0.05);木犀草素中、高剂量组、阳性对照组大鼠精神状态较同期模型组均有一定程度改善,体质量较同期模型组均升高,24 h尿量、24 h尿蛋白较同期模型组均降低(P<0.05)。光镜下可见模型组肾脏组织GBM增生,肾小管萎缩,局部灶紊乱明显,肾小球和肾小管纤维化明显;木犀草素低、中、高剂量组、阳性对照组大鼠精神状态、病理情况均有一定程度改善。与正常组比较,模型组SCr、BUN、UA、FN、ColⅣ水平均升高(P<0.05);与模型组比较,木犀草素中、高剂量组、阳性对照组SCr、BUN、UA、FN、ColⅣ及肾脏组织中p-JNK/JNK、p-p38 MAPK/p38 MAPK水平均降低(P<0.05)。与正常组比较,模型组肾脏组织中p-JNK/JNK、p-p38 MAPK/p38 MAPK水平均升高(P<0.05)。结论木犀草素可缓解CRF导致的GBM增生现象,可能是通过抑制JNK/MAPK信号通路实现的。

c-Jun氨基末端激酶在慢性低O_2高CO_2大鼠海马损伤中的作用

目的:探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)在慢性低O2高CO2大鼠海马损伤中的作用。方法:采用慢性低O2高CO2肺动脉高压大鼠模型。30只SD大鼠随机分为正常对照(NC)组、低O2高CO22周(2WH)组和低O2高CO24周(4WH)组,每组10只。Morris水迷宫检测行为学,用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)动态观察海马p-JNKmRNA的转录情况,免疫组织化学法测定p-JNK在海马CA1/CA3区的变化,TUNEL法检测海马CA1/CA3区神经细胞凋亡。结果:与NC组相比,低O2高CO22WH、4WH组大鼠寻找站台的平均逃避潜伏期延长、游泳总距离增加(P<0.01或P<0.05),且4WH组比2WH组潜伏期延长及游泳总距离增加更加明显(P<0.05);NC组大鼠海马仅见少量JNKmRNA及蛋白表达,低O2高CO2各组较NC组JNK表达明显增加(P<0.01或P<0.05),且4WH组比2WH组增加更明显(P<0.05)。低O2高CO22WH、4WH组的TUNEL阳性细胞数均明显多于NC组(P<0.01或P<0.05),且4WH组比2WH组增多明显(P<0.01)。结论:低O2高CO2能导致大鼠学习记忆障碍,可能与激活海马神经细胞内JNK有关。

补阳还五汤对大鼠脑缺血后蛋白激酶B1和c—Jun氨基末端激酶1／2表达的影响

目的探讨补阳还五汤对脑缺血后大鼠蛋白激酶B1（AKT1）和c-Jun氨基末端激酶1/2（JNK1/2）的影响。方法将48只SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、假手术组、模型组、补阳还五汤组，每组12只。采用大脑中动脉闭塞法（MCAO）建立右侧局灶性脑缺血大鼠模型。补阳还五汤组大鼠于术后2h起灌服补阳还五汤（主要由生黄芪120g、当归6g、赤芍4.5g、川芎3g、西红花3g、桃仁3g、广地龙3g组成）14.2 g/kg，每日1次，连续7 d。其他各组动物均给予等体积生理盐水。于第7日处死大鼠，取脑组织，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）测定AKT1 mRNA表达，采用免疫组化法检测JNK1/2蛋白表达。结果与正常对照组和假手术组比较，模型组AKT1 mRNA表达量〔吸光度（A）值〕明显降低（0.48±0.08比0.63±0.11、0.61±0.09，均P＜0.05），JNK1/2阳性细胞数（个/mm2）明显增多（34.13±4.57比16.15±1.09、16.23±2.05，均P＜0.05）；与模型组比较，补阳还五汤组脑组织中AKT1 mRNA表达（0.93±0.11）和JNK1/2阳性细胞数（45.04±5.68）明显增加，差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。结论补阳还五汤可上调缺血脑组织AKT1 mRNA和JNK1/2阳性细胞数表达，是其脑保护作用机制之一。

IgA肾病中磷酸化c-Jun氨基末端激酶与肾小管上皮细胞转分化关系的研究

目的检测IgA肾病(IgAN)患者肾小管间质中转化生长因子β(1TGF-β1)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)在体内对肾小管上皮细胞转分化的调控作用。方法参考IgAN病理类型HASS分级标准,把39例IgAN患者的肾活检标本,分为轻度增生组(HaasⅠ、Ⅱ型)、局灶增生组(HaasⅢ型)和增生硬化组(HaasⅣ、Ⅴ型)。据Katafuchi半定量积分标准评估肾小管间质损伤指数,用免疫组织化学技术检测TGF-β1、p-JNK、α-SMA在肾小管间质的表达。结果 IgAN各病变组肾小管间质损伤指数和TGF-β1、p-JNK、α-SMA表达均增高,且p-JNK与TGF-β1、α-SMA表达和肾小管间质损伤指数正相关。结论在IgAN患者肾组织中,JNK可能是调控TGF-β1介导的肾小管上皮细胞转分化的关键细胞内信号。

c-Jun氨基末端激酶与非酒精性脂肪性肝病

目前非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的发病率日益增加,但其发病机制至今仍不清楚。c-Jun氨基末端激酶是进化上保守的富含丝氨酸/苏氨酸的蛋白激酶家族成员之一,它与多种疾病的发病机制有关。近年来研究发现,c-Jun氨基末端激酶在NAFLD发病机制中具有重要作用,尤其是两种不同亚型在其中的独特作用更加引人关注。

c-Jun氨基末端激酶在慢性移植物抗宿主病狼疮样小鼠肾组织的表达及氟伐他汀的干预作用

建立慢性移植物抗宿主病(cGVHD)狼疮样小鼠模型,观察c-Jun氨基末端激酶(JNK)在狼疮样小鼠肾组织中的表达及氟伐他汀的干预作用。(C57BL/6J×DBA/2)F1代小鼠随机分为正常对照组、氟伐他汀高剂量组(10mg/kg)、低剂量组(5mg/kg)和模型组,16周后处死,采用双缩脲比色法观察各组小鼠24h尿蛋白量,免疫组织化学法定位检测JNK、p-JNK在肾组织的表达,RT-PCR法检测各组JNK mRNA表达及Western blotting半定量检测JNK、p-JNK蛋白表达。结果显示,模型组小鼠24h尿蛋白量、JNK mRNA及JNK、p-JNK蛋白表达较正常对照组均显著增加(P<0.01);氟伐他汀干预组较模型组上述指标均明显降低(P<0.01);高剂量组较低剂量组降低更明显(P<0.05)。JNK可能参与了狼疮肾炎病情进展,氟伐他汀可能通过影响JNK的表达从而延缓狼疮肾炎肾纤维化进程。

c-Jun氨基末端激酶在转化生长因子-β_1诱导肾系膜细胞合成纤维连接蛋白中的作用

目的研究c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)在转化生长因子-1β(transforminggrowth factor-β1,TGF-β1)诱导肾系膜细胞合成纤维连接蛋白(fibronectin)中所介导的作用。方法用蛋白免疫印迹法检测TGF-β1诱导的肾系膜细胞纤维连接蛋白合成以及JNK的磷酸化。用SP600125来抑制JNK的活性。结果加入TGF-β1后,系膜细胞JNK磷酸化水平逐渐增加,5 h时达高峰,TGF-1β显著增加系膜细胞纤维连接蛋白的表达。用SP600125预处理系膜细胞能增加TGF-β1引起的纤维连接蛋白表达,且具有剂量依赖性。结论JNK活化可能负性调控TGF-β1引起的纤维连接蛋白表达。

c-Jun氨基末端激酶与炎症性肠病发病的关系

c-Jun氨基末端激酶(JNK)是促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族成员之一,在机体的炎性反应过程中起到重要作用,其参与包括炎症性肠病(IBD)在内的一些炎性疾病的发病。现对JNK信号通路的致炎作用及其对于IBD发病的影响作一综述。

c-Jun氨基末端激酶介导的细胞凋亡和自噬参与调控磷酸三钙磨损颗粒诱导的小鼠颅骨假体周围骨细胞死亡

目的探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)介导的细胞凋亡和自噬是否参与调控磷酸三钙(TCP)磨损颗粒诱导假体周围骨细胞死亡。方法取雄性ICR小鼠36只,随机分为3组:正常对照组(control,n=12)、TCP磨损颗粒组(模型组,n=12)和SP6000125组(n=12)。采用TCP磨损颗粒30 mg置于颅骨顶后缝合皮肤构建小鼠颅骨溶解模型,SP6000125组小鼠于术后第2天颅顶注射JNK通路特异性抑制剂SP600125(1. 0 mg/kg),每3日1次。持续干预2周后处死小鼠取颅骨。Calcein-AM探针标记和HE染色观察各组假体周围骨细胞形态和活性变化;通过酶消化法获取假体周围骨细胞,应用流式细胞术检测假体周围骨细胞凋亡情况; Western blotting法检测假体周围骨细胞中Bcl-2、Bax、磷酸化JNK(p-JNK)、Beclin-1和微管相关蛋白1轻链3(LC-3)等蛋白的表达变化。结果与control组比较,TCP组假体周围骨细胞活性明显降低,空骨陷窝比例显著增加,骨细胞凋亡明显(P <0. 05),JNK通路被活化,p-JNK蛋白表达明显上调(P <0. 05);自噬相关蛋白Beclin-1和LC-3表达显著上调,且LC-3I向LC-3II转换明显增加(P <0. 05);与TCP组比较,SP600125组假体周围骨细胞凋亡显著减少、自噬被明显抑制(P <0. 05)。结论 JNK介导的细胞凋亡和自噬参与调控TCP磨损颗粒诱导的假体周围骨细胞死亡,促进假体周围骨溶解。

刺糖多糖对小鼠腹腔巨噬细胞核转录因子、丝裂原活化蛋白激酶及氨基末端激酶信号通路相关基因和蛋白表达的影响

目的探讨刺糖多糖对小鼠腹腔巨噬细胞中核转录因子(NF-κB)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)及c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路相关基因和蛋白表达水平的影响。方法将处于对数生长期的小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7按1×10^8 L^-1接种至24孔细胞培养板中,24 h后更换细胞培养液。将细胞分为0.0、12.5、50.0、100.0 mg·L^-1刺糖多糖组,每组细胞加入相应浓度的刺糖多糖干预24 h。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组细胞中p38、NF-κB p65、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、JNK1/2/3 mRNA的表达,采用Western blot法检测各组细胞中磷酸化p38(p-p38)、p38、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、NF-κB p65、磷酸化ERK1/ERK2(p-ERK1/ERK2)、ERK1/ERK2、磷酸化JNK1/2/3(p-JNK1/2/3)及JNK1/2/3蛋白的表达。结果刺糖多糖干预巨噬细胞24 h后,与0.0 mg·L^-1刺糖多糖组比较,50.0、100.0 mg·L^-1刺糖多糖组细胞中ERK1、NF-κB p65 mRNA表达量显著升高(P<0.05);12.5、50.0、100.0 mg·L^-1刺糖多糖组细胞中p38 mRNA表达量显著升高(P<0.05)。与12.5 mg·L^-1刺糖多糖组比较,50.0、100.0 mg·L^-1刺糖多糖组细胞中ERK1、p38、NF-κB p65 mRNA表达量显著升高(P<0.05)。与0.0、12.5 mg·L^-1刺糖多糖组比较,50.0、100.0 mg·L^-1刺糖多糖组细胞中p-p38、p-NF-κB p65、p-ERK1/ERK2、ERK1/ERK2蛋白表达量显著升高(P<0.05)。结论刺糖多糖能上调p38、NF-κB p65、ERK1/2蛋白的磷酸化水平,从而激活MAPK信号通路和NF-κB信号通路;刺糖多糖的免疫机制可能与NF-κB p65、p38、ERK1mRNA表达上调有关。

探讨降糖消渴颗粒对高脂饮食诱导2型糖尿病肾脏氨基末端激酶信号通路的影响

目的:运用降糖消渴颗粒治疗高脂饮食诱导2型糖尿病并探讨其对肾脏氨基末端激酶信号通路的影响。方法:72只Wistar大鼠,在SPF级条件下饲养,根据随机数字表法分为干预组、对照组和正常对照组,每组24只,通过链脲佐菌素(STZ)30 mg/kg腹腔注射协同高脂饮食诱导2型糖尿病进行动物造模,造模后干预,正常对照组予标准饲料;对照组予高糖高脂饲料;干预组予高糖高脂饲料,降糖消渴颗粒根据大鼠体重9 g/kg的计算灌胃剂量,1次/d。疗程8周。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA法)检测大鼠的血糖(Glu)、三酰甘油(TG),总胆固醇(TC)、血肌酐(Scr);常规HE染色,观察各组肾脏结构变化;实时荧光聚合酶链式反应(q-PCR)检测肾组织中氨基末端激酶(JNK)和胰高血糖样肽-1(GLP-1)mRNA的表达,蛋白质印迹法(Western Blot)检测肾组织中JNK信号通路的激活情况情况,JNK、磷酸化氨基末端激酶(p-JNK)和GLP-1的蛋白表达情况。结果:1)干预组经治疗后Glu、TC、TG和Scr较对照组显著下降(P<0.05)。2)干预组较对照组明显改善肾小球结构改变的情况(P<0.05)。3)与正常对照组比较,对照组中p-JNK蛋白表达显著升高(P<0.05),GLP-1基因和蛋白显著降低(P<0.05);经治疗后干预组p-JNK蛋白较对照组降低(P<0.05),而GLP-1基因和蛋白升高(P<0.05)。结论:降糖消渴颗粒可调节糖、脂质代谢,发挥保护肾脏作用,其作用机制可能与抑制JNK信号通路,上调GLP-1有关。