原癌基因c—Met在子宫内膜癌中表达的研究

目的 研究原癌基因c—Met在子宫内膜癌中的表达及其意义。方法 采用免疫组织化学SP的方法，研究50例子宫内膜癌组织及20例正常子宫内膜组织中原癌基因c—Met的表达。结果 子宫内膜癌中c—Met阳性表达率高于正常子宫内膜（P〈0．05），且与组织分级、肌层浸润深度、临床分期显著相关（P〈0．05）。结论c—Met的过表达在子宫内膜癌变中起重要作用，促进了子宫内膜癌的发生和发展，对判断子宫内膜癌的恶性程度有较重要价值。

c—Met蛋白在老年结肠癌患者组织中的表达及其意义

【目的】探讨c—Met蛋白在老年结肠癌患者组织中的表达及其意义。【方法】采用免疫组化法检测49例老年人结肠癌组织、33例非老年人结肠癌组织及82例癌旁组织中c—Met蛋白的表达，并分析其与老年、非老年患者临床病理特征的相关性。【结果】c—Met蛋白在老年人结肠癌组织和非老年人结肠癌组织中的阳性表达率分别为75．5％、63．6％，均明显高于癌旁组织（20．7％），差异有统计学意义（P〈0．05）。老年人结肠癌中，不同性别和不同淋巴结转移状况患者中c—Met蛋白表达比较差异均有统计学意义（P〈0．05）；在不同肿瘤大小、不同组织学类型、不同分化程度、不同临床分期的患者中，c—Met蛋白表达比较无统计学差异（P〉0．05）；非老年人结肠癌中，在不同性别的患者中c—Met蛋白有统计学差异（P〈0．05）；在不同肿瘤大小、不同组织学类型、不同分化程度、不同临床分期及不同淋巴结转移状况的患者中，c-Met蛋白表达均无统计学差异（P〉0．05）。【结论】c—Met表达上调可能是结肠癌发生、发展的重要因素；c-Met在老年人和非老年人结肠癌组织中的表达有差异。

新型4-苯氧基吡啶类c-Met激酶抑制剂的合成和抗肿瘤活性研究

为了发现新型高活性c-Met激酶抑制剂,以2-氨基-4-氯吡啶为原料,经醚化、酰化、烷基化、还原和酰化等多步反应,制备了6种未见文献报道的4-苯氧基吡啶类化合物,化合物结构经红外光谱、核磁共振氢谱和质谱确证.生物活性测试结果显示,6种化合物对MKN-45、A549、H460和HT-294种肿瘤细胞株具有很好的抗增殖活性,两种化合物对c-Met激酶具有很好的抑制活性.其中化合物7b抑制MKN-45、A549、H460和HT-29细胞株的IC 50值分别为1.89、5.14、0.74、0.60μmol/L.该化合物在1000 nmol/L和200 nmol/L的浓度下对c-Met激酶的抑制率分别为96.2%和82.8%,显示出了优异的抗肿瘤活性.

肝细胞生长因子及其受体c-Met在结直肠癌中的表达及其意义

目的探讨结直肠癌中肝细胞生长因子及其受体c-Met表达及其意义。方法选取2020年2月—2022年2月在牡丹江医学院附属第二医院接受治疗的结直肠癌患者126例作为病例组,并选取同期40例正常结肠组织及良性腺瘤作为对照组。统计分析两组结直肠组织中微淋巴管密度(microlymphatic density,LMVD)表达、HGF及其受体c-Met阳性表达情况,统计分析病例组结直肠癌组织中不同临床指标患者的LMVD、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)及其受体细胞间质上皮转换因子(cellular-mesenchymal epithelial transition factor,c-Met)表达。结果病例组患者结直肠组织中LMVD表达高于参照组(P<0.05)。病例组病理分期Ⅰ+Ⅱ期、有淋巴结转移患者的结直肠癌组织中LMVD分别低于病理分期Ⅲ+Ⅳ期、无淋巴结转移患者(P<0.05),HGF阳性、c-Met阳性患者的结直肠癌组织中LMVD分别高于HGF阴性、c-Met阴性患者(P<0.05)。病例组患者结直肠组织中HGF及其受体c-Met阳性表达率均高于参照组(P<0.05)。病例组病理分期Ⅰ+Ⅱ期结直肠癌组织中HGF及其受体c-Met阳性表达率均高于Ⅲ+Ⅳ期患者(P<0.05),有淋巴结转移患者的结直肠癌组织中HGF及其受体c-Met阳性表达率均低于无淋巴结转移患者(P<0.05)。结论结直肠癌中肝细胞生长因子及其受体c-Met阳性表达提升,病理分期越高阳性率越高、有淋巴结转移阳性率升高,可能成为治疗新靶点。

基于c-Met信号通路的抗癌药物研究进展

c-Met的持续激活将破坏肿瘤细胞间的粘附、促进细胞运动及肿瘤新生血管的生成,使肿瘤细胞易于进入血液循环并获得侵袭转移的能力。因而,c-Met已成为抗癌药物研究的一个极有希望的新靶点。本文简要阐述了近年来基于c-Met信号通路的抗癌药物研究进展,重点综述了其中的ATP竞争性酪氨酸激酶小分子抑制剂。

黄芪建中汤对脾胃虚寒证胃溃疡大鼠炎症因子及HGF/c-Met信号通路的影响

目的观察黄芪建中汤对脾胃虚寒证胃溃疡大鼠炎症因子及HGF/c-Met信号通路的影响。方法将60只大鼠随机分为4组,即正常组、模型组、黄芪建中汤组[黄芪建中汤6.8 g/(kg·d)]、奥美拉唑组[奥美拉唑肠溶胶囊4.2 mg/(kg·d)],每组15只大鼠。正常组除外,其他组采用耗气破气法结合饥饱失常法进行大鼠脾胃虚寒证模型造模,再采用冰醋酸法建立大鼠胃溃疡模型。比较各组大鼠体质量、溃疡指数;HE染色观察大鼠胃组织病理学变化;采用酶联免疫吸附法检测血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;免疫组化法检测胃组织中肝细胞生长因子(HGF)、肝细胞生长因子受体(c-Met)表达;荧光定量PCR检测胃组织HGF、c-Met m RNA水平。结果与正常组相比,模型组大鼠体质量降低,溃疡指数升高,IL-6、IL-1β、TNF-α含量升高,HGF升高,HGF、c-Met m RNA升高(P<0.05);与模型组相比,黄芪建中汤组和奥美拉唑组大鼠体质量升高,溃疡指数降低,IL-6、IL-1β、TNF-α降低,HGF升高,HGF、c-Met mRNA升高(P<0.05)。结论黄芪建中汤可以通过抑制炎症因子、调节HGF/c-Met通路的表达促进胃黏膜修复。

基于转录组测序探究C-MET表达在非小细胞肺癌中的免疫调控机制

目的通过转录组测序技术分析C-MET表达在非小细胞肺癌中的免疫调控机制。方法使用siRNA分子干扰技术将C-MET高表达肺腺癌细胞株(H1993)、肺鳞癌细胞株(EBC-1)的C-MET表达沉默,利用转录组测序技术检测C-MET沉默前后细胞差异表达的基因(DEGs),通过生物信息学分析挖掘出C-MET可能参与调控的免疫微环境信号通路及相关基因。最后使用人免疫细胞与H1993、EBC-1共培养技术验证C-MET对免疫因子(INF-γ、INF-β、CXCL-10)的影响。结果通过转录组测序技术共检测到505个DEGs,其中H1993的C-MET调控前后表达差异组的表达差异基因共有38个,上调的差异表达基因有24个,下调的差异表达基因有14个。EBC-1的C-MET调控前后表达差异组的表达差异基因共有467个,上调的差异表达基因有347个,下调的差异表达基因121个。差异基因的KEGG分析表明,C-MET表达可能通过白细胞介素(IL-17)信号通路、白细胞分化、细胞因子受体活性、细胞周期、细胞因子-细胞因子受体相互作用参与免疫细胞调节因子的调控。使用肺癌细胞与人免疫细胞共同培养技术验证C-MET对免疫因子分泌的影响,Rt-qPCR检测结果提示:与C-MET高表达组共培养的PBMC中干扰素(INF-γ)的m RNA转录水平是低表达组的77倍、CXCL-10的mRNA转录水平是低表达组的1.6倍,INF-β的mRNA转录水平是低表达组的2倍。结论C-MET表达可能通过IL-17信号通路、白细胞分化、细胞因子受体活性通路参与肿瘤周围免疫微环境调控。

肝细胞生长因子／c—met系统与头颈肿瘤

肝细胞生长因子是一种多功能的细胞生长因子，其生物活性由c—met蛋白所介导，肝细胞生长因子通过与原癌基因c-met受体结合激活受体酪氨酸蛋白激酶活性调节细胞的分裂、增殖、分化、迁移等。故肝细胞生长因子／c—met信号传导在肿瘤的侵袭转移中发挥重要作用。人类许多肿瘤的生长、侵袭和转移与肝细胞生长因子／c—met系统密切相关。研究肝细胞生长因子／c-met系统与头颈部肿瘤侵袭、转移的关系，将对头颈肿瘤的诊断、治疗及预后有重要意义。

幽门螺杆菌对肝癌HepG2细胞C‐Met基因表达的影响

目的研究幽门螺杆菌(Hp)对肝癌HepG2细胞原癌基因C-Met表达的影响。方法将Hp与HepG2细胞共同培养,设置空白对照组、Hp组、C-Met抑制剂空白组和C-Met抑制剂Hp组,每组设副孔5个,采用CCK8试剂盒检测HepG2细胞增殖活性,采用Western blot和qPCR方法检测C-Met原癌基因蛋白和mRNA表达水平。结果相较于空白对照组,Hp处理组HepG2细胞增殖活性升高且与时间呈正相关,而C-Met抑制剂可以抑制HepG2细胞的增殖活性。同时,Hp组HepG2细胞C-Met基因蛋白和mRNA表达水平均上调,C-Met抑制剂组则显著下调。相较于Hp共培养12 h,共培养24 h C-Met蛋白和mRNA表达水平均上调。结论Hp促进HepG2细胞的增殖可能与其提高原癌基因C-Met的蛋白及其mRNA表达水平有关,为后续更深入研究肝癌发生发展的复杂机制提供了理论依据。

猫爪草总皂苷基于Sema4D/PlxnB1/c-Met通路对A549裸鼠移植瘤增殖的抑制作用及机制研究

目的:探讨猫爪草总皂苷(TSRT)基于Sema4D/PlxnB1/c-Met通路对人非小细胞肺癌A549裸鼠移植瘤增殖的抑制作用及机制。方法:成功构建A549裸鼠移植瘤模型后,随机分为空白组、阴性组、过表达组和药物组(1.73g/kg TSRT),记录成瘤情况并绘制肿瘤生长曲线,实验结束后剥离移植瘤并称重;RT-PCR和Western blot分别检测各组Sema4D、PlxnB1、c-Met mRNA和蛋白表达差异;免疫组化检测Sema4D阳性表达率。结果:与空白组相比,过表达组接种20d后的肿瘤体积显著增加,肿瘤重量明显增加,Sema4D、PlxnB1、c-Met mRNA和蛋白表达水平显著升高,Sema4D阳性表达率显著提高(P<0.01);与过表达组相比,药物组接种20d后肿瘤体积明显降低,瘤重显著降低,Sema4D、PlxnB1、c-Met mRNA和蛋白表达水平显著下降,Sema4D阳性表达率明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:TSRT能显著抑制人肺癌裸鼠移植瘤的生长,其作用机制可能与抑制Sema4D/PlxnB1/c-Met信号通路有关。

宫颈癌患者癌组织c-Met mRNA与NF-κB mRNA表达的关系及其对预后的影响

目的分析肝细胞生长因子受体原癌基因c-Met mRNA与核因子-κB(NF-κB)mRNA在宫颈癌发病中的关系及对宫颈癌患者预后的影响。方法选取本院宫颈癌患者89例作为癌变组,宫颈癌前病变患者89例作为癌前病变组,因子宫肌瘤行全子宫切除患者89例作为正常宫颈组。采用RT-PCR检测3组宫颈组织中c-Met、NF-κB mRNA相对表达量。采用Spearman/Pearson分析c-Met mRNA与NF-κB mRNA在宫颈癌发病中的关系。采用Kaplan-Meier曲线分析不同c-Met mRNA、NF-κB mRNA表达水平患者的3年生存率。结果宫颈组织中c-Met、NF-κB mRNA相对表达量,癌变组>癌前病变组>正常宫颈组(P<0.05)。癌前病变组、癌变组c-Met mRNA与NF-κB mRNA呈正相关(P<0.001)。c-Met高表达与NF-κB mRNA高表达在宫颈癌发病中呈正向交互作用(P<0.05)。c-Met、NF-κB mRNA与宫颈癌临床分期、淋巴结转移、脉管浸润呈正相关,与分化程度呈负相关(P<0.05)。癌变组c-Met、NF-κB mRNA高表达患者3年生存率低于低表达患者(P<0.05)。结论c-Met mRNA与NF-κB mRNA高表达在宫颈癌发病中呈正向交互作用,与临床分期、淋巴结转移、脉管浸润呈正相关,且宫颈癌患者3年生存率显著降低。

M2型巨噬细胞来源外泌体调控HGF/c-Met通路参与多发性骨髓瘤细胞转移的作用研究

目的探究M2型巨噬细胞来源的外泌体对人多发性骨髓瘤细胞转移的影响及机制。方法在体外将THP-1细胞诱导分化成M0型和M2型巨噬细胞,实时荧光定量聚合酶反应(RT-qPCR)检测诱导后M2型巨噬细胞标志物血红蛋白清道夫受体(CD163)、白细胞介素-10(IL-10)、精氨酸酶-1(Arg-1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达水平,分离M2型巨噬细胞来源的外泌体;将RPMI-8226细胞分为对照组、M0-Exos组、M2-Exos组,Transwell小室法检测细胞迁移数目与侵袭数目,蛋白质印迹检测细胞中N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏附蛋白(E-cadherin)及转录因子Snail的表达水平,并检测肝细胞生长因子(HGF)/c-Met相关蛋白的表达水平;接着将RPMI-8226细胞分为对照组、M2-Exos组、SU11274组、SU11274+M2-Exos组,Transwell小室法检测细胞迁移数目与侵袭数目,蛋白质印迹检测细胞中N-cadherin、Vimentin、E-cadherin及Snail表达水平。结果与M0型巨噬细胞比较,M2型巨噬细胞中CD163、IL-10、Arg-1、TGF-β1的mRNA表达水平均显著上调(P<0.05);从M2型巨噬细胞中分离的颗粒物中有CD9、CD63、TSG101、ALIX蛋白表达,由此判定该颗粒物为外泌体。与对照组比较,M2-Exos组细胞迁移与侵袭数目均显著增加(P<0.05),N-cadherin、Vimentin、Snail蛋白表达显著增加(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著减少(P<0.05),HGF蛋白表达及p-c-Met/c-Met比值也显著增加(P<0.05)。与M2-Exos组比较,SU11274+M2-Exos组细胞迁移与侵袭数目显著减少(P<0.05),N-cadherin、Vimentin、Snail蛋白表达显著减少(P<0.05),且E-cadherin蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论M2型巨噬细胞来源的外泌体能够促进人多发性骨髓瘤细胞迁移、侵袭及EMT,加剧肿瘤细胞转移,该作用与调控HGF/c-Met通路有关。

CTC、RON及c-Met在早期三阴性乳腺癌预后预测中的作用

目的 分析循环肿瘤细胞(CTC)、受体酪氨酸激酶(RON)及间质表皮转化因子(c-Met在早期三阴性乳腺癌(TNBC)预后预测中的作用。方法 分析2018年1月至2021年1月于郑州大学第一附属医院进行诊治的1 225例乳腺癌患者资料,根据纳入标准最终选取168例TNBC患者设为研究组,选取患者癌旁3 cm的组织为对照组,另选取同时期在本院进行健康体检者168名为健康组。根据患者治疗后的预后情况将研究组分为预后良好组(n=142)以及预后不良组(n=26)。比较研究组与健康组CTC的表达情况,比较研究组与对照组c-Met与RON的表达情况,采用多元Logistic回归分析影响TNBC预后的独立危险因素;并通过受试者工作特征曲线(ROC)分析c-Met、RON、CTC对TNBC患者预后的预测价值。结果 研究组CTC水平高于健康组,差异有统计学意义(P<0.05);研究组c-Met与RON阳性表达高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);预后良好组、预后不良组年龄、肿瘤直径比较差异无统计学意义(P>0.05),预后良好组、预后不良组腋窝淋巴结、体重指数、糖尿病、RON、c-Met、CTC比较,差异有统计学意义(P<0.05),经非条件多因素logistic回归模型分析显示,腋窝淋巴结转移、CTC阳性、RON阳性、c-Met阳性为TNBC患者预后的危险因素(P<0.05)。CTC、RON及c-Met单独检测以及三者联合检测AUC分别为0.764、0.778、0.776、0.857,其中三者联合检测AUC值最大。结论 联合检测RON、c-MET、CTC水平对TNBC患者预后具有一定的预测价值。

c-Met信号通路及其抑制剂的研究进展

c-Met和肝细胞生长因子(HGF)在很多肿瘤细胞组织中高表达。c-Met信号通路的活化引起一系列的信号级联放大反应,导致了肿瘤细胞的生长、增殖、侵袭和凋亡减少。HGF是c-Met的配体,参与并影响肿瘤微环境的形成。该文就HGF如何活化c-Met及其下游的信号通路、c-Met与其他受体介导的信号通路间的串话对耐药性的影响以及针对HGF和c-Met信号通路的抑制剂的研究进展进行综述。

c-Met、MMP-2、MMP-9在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的研究c-Met、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metallo-proteinase-9,MMP-9)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达,探讨三者的表达与肝癌侵袭转移间的关系,并初步明确在肝细胞癌预后判断中的作用。方法采用免疫组化对47例肝细胞癌手术切除标本中c-Met、MMP-2、MMP-9的表达进行检测,评估c-Met的表达与HCC临床病理因素的关系及与MMP-2、MMP-9表达的关系。结果c-Met、MMP-2、MMP-9在肝细胞癌组织中的阳性表达率分别为38.3%、72.3%、89.4%,与正常肝组织比较差异有统计学意义(分别为12%、16%、12%,P<0.05);c-Met阳性表达率与肝细胞癌的转移、淋巴浸润、包膜形成以及肿瘤分化有关(P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤的大小、分期无关;MMP-2的阳性表达率仅与肝细胞癌的包膜形成有关(P=0.028);MMP-9的阳性表达率与HCC的各项临床病理因素无关;c-Met阳性表达与MMP-2的异常表达有关(P<0.001)。结论在HCC的转移中,HGF/c-Met与HCC的转移有关,并且与MMP系统之间存在联系,可能影响MMP-2、MMP-9的表达,对于HCC的转移防治及预后具有一定的临床意义。

人源抗c-Met单链抗体腹腔注射可抑制A549肺腺癌荷瘤小鼠移植瘤生长

目的 该实验旨在验证间质上皮转化单链抗体(Met scFv)在体内对皮下移植瘤裸鼠的抗肿瘤作用。方法 建立裸鼠肿瘤模型,皮下注射A549肺腺癌细胞,成瘤后通过腹腔注射IRDye680 LT N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯标记的Met scFv,借助小动物成像仪进行实时监测以观察该抗体在荷瘤小鼠体内的动态分布情况,检测肿瘤组织细胞c-Met与抗体的亲和力,定期尾静脉注射Met scFv,观察肿瘤体积变化并绘制肿瘤生长曲线。免疫组织化学染色法检测Met scFv是否能有效结合肿瘤组织中的c-Met抗原。结果 裸鼠体内分布结果表明,在最初的3 h内,Met scFv主要分布于腹腔内。经过大约48 h,荧光信号开始在肿瘤组织中聚集。瘤体免疫组织化学染色结果显示,肿瘤组织中c-Met高表达;定期尾静脉注射Met scFv,可使小鼠瘤体生长明显减缓。结论 Met scFv在体内特异性识别肿瘤细胞且表现出显著的抗肿瘤活性。

CD151和c-Met在大肠癌中的表达及临床意义

目的探讨CD151和c-Met在大肠腺癌组织中的表达及其与临床各个病理因素之间的关系。方法应用双重免疫荧光标记法对正常大肠黏膜和大肠腺癌组织各120例进行CD151和c-Met检测,及进行Kaplan-Meier生存分析。采用Spearman等级相关分析CD151和c-Met之间的相关性。结果 CD151大肠正常黏膜和腺癌组织的阳性率分别为21.7%(26/120)、72%(86/120),两者比较具有统计学意义(P<0.001)。c-Met大肠正常黏膜和腺癌组织的阳性率分别为17.5%(21/120)、60%(72/120),腺癌组织与正常黏膜比较具有统计学意义(P<0.001)。在大肠腺癌中,CD151和c-Met的表达与患者年龄、性别和肿瘤的部位、大小无相关性,与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移及Duke分期有关(P<0.05)。CD151和c-Met在大肠正常黏膜和腺癌组织中的表达经双变量相关分析,Spearman系数r=0.970,表达呈正相关(P<0.001)。CD151+、α3β1+、CD151+α3β1+与大肠癌患者5年生存期密切相关,是影响大肠癌预后的因素(P<0.01、P<0.05、P<0.0001)。结论 CD151和c-Met在大肠癌的表达密切相关。CD151与c-Met联合表达是大肠癌临床预后判断的可靠指标。

大肠癌中C-Met VEGF及其受体KDR的表达与预后的相关性

目的:探讨C-Met、CEGF及其受体KDR在大肠癌组织中的表达与预后的关系,为判断大肠癌患者预后提供参考。方法:应用免疫组织化学法检测60例大肠癌标本中C-Met、VEGF及其受体KDR的表达情况。随访统计5年生存率。结果:C-Met、VEGF及其受体KDR在大肠癌组织中的表达阳性率分别为43.3%、61.7%及68.3%;三者在大肠癌组织中的表达与患者的年龄及性别无明显相关(P>0.05),与肿瘤侵袭深度、是否淋巴结转移及Dukes分期密切相关(P均<0.05)。C-Met、VEGF及KDR阳性者5年生存率分别为423%、43.2%及51.2%,阴性者5年生存率分别为73.5%、87.0%及78.9%,两组差异有统计学意义(P<0.05)Cox回归生存分析显示:对于大肠癌患者,VEGF、KDR及C-Met均是独立危险因素;联合检测VEGF、KDR及C-Met,是预测大肠癌预后很好的指标。结论:C-Met、VEGF及其受体KDR在大肠癌患者组织中的表达与大肠癌的发生、发展有关,三者均阳性表达提示患者预后差,可作为评价预后的指标。

c-Met siRNA对肝细胞生长因子诱导的人胆管癌QBC939细胞增殖的影响

目的:近年来胆管癌的发病率和病死率呈上升的趋势,5年生存期低于5%,因此亟需利用现代生物技术探索新的治疗方法。探讨针对肝细胞生长因子(HGF)受体c-Met的RNA干扰对人胆管癌(CCA)QBC939细胞增殖的影响。方法:构建针对人c-Met基因的小干扰RNA(siRNA),转染体外培养的人CCA QBC939细胞,应用MTT法检测细胞增殖,Western blot检测c-Met、细胞周期素(Cyclin)D1和A表达以及磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)和胞外信号调节激酶(ERK1/2)信号通路活化。结果:c-Met siRNA显著抑制c-Met蛋白表达,且随着其浓度的增加,c-Met蛋白表达逐渐下降,500 nmol/L c-Met siRNA对c-Met蛋白表达的抑制率达65%。HGF刺激24 h,细胞增殖是对照组的4.54倍,100 nmol/L c-Met siRNA预处理即显著抑制HGF诱导的细胞增殖,其抑制率达26%,且随浓度增加,其抑制作用逐渐增强,500 nmol/L c-Met siRNA对HGF诱导的细胞增殖的抑制率达85%。HGF刺激4h,PI3K和Akt的活性即显著增强,分别是对照组的4.09和4.54倍,c-Met siRNA可呈浓度依赖性的抑制HGF诱导的PI3K/Akt活化,500 nmol/L c-Met siRNA几乎完全抑制HGF诱导的PI3K/Akt活化。HGF显著诱导人CCAQBC939细胞ERK1/2活化,50 ng/ml HGF刺激4 h,磷酸化ERK1/2表达是对照组的3.63倍,c-Met siRNA可呈浓度依赖性的抑制HGF诱导的ERK1/2活化。HGF显著诱导人CCA QBC939细胞细胞周期素D1和A表达,分别是对照组的2.83和3.16倍,c-Met siRNA可呈浓度依赖性的抑制HGF诱导的细胞周期素D1和A表达。结论:针对人c-Met基因的RNA干扰可有效阻断人CCA QBC939细胞c-Met表达,并通过阻断PI3K/Akt和ERK1/2信号通路活化而抑制HGF诱导的细胞增殖。

分泌型PD-1抗体可提高c-Met CAR-T细胞对胰腺癌细胞的杀伤作用

目的设计并制备能够分泌PD-1抗体和靶向c-Met的CAR-T细胞,以消除肿瘤对CAR-T细胞的免疫抑制作用,从而提高CAR-T细胞对胰腺癌的治疗效果。方法采用Kaplan-Meier Plotter、GEPIA和Timer2.0生物信息学数据库,分析c-Met在胰腺癌中的表达、生存期及免疫浸润。免疫组化检测胰腺癌临床样本c-Met和PD-L1表达,流式细胞术验证胰腺癌细胞Aspc-1 c-Met和PD-L1表达通过基因编辑将PD-1分泌型抗体和HIS标签连接至2代c-Met CAR分子后,构建PD-1/c-Met CAR质粒并包被慢病毒,慢病毒感染至活化T细胞内,通过流式细胞技术检测CAR-T阳性率和细胞亚群;Western blotting检测分泌型PD-1抗体在细胞上清液中的存在;体外功能试验中,通过LDH释放实验检测CAR-T对靶细胞的杀伤效率,CCK-8检测靶细胞存在下PD-1抗体对CAR-T增殖的促进作用。ELISA检测PD-1/c-Met CAR-T和c-Met CAR-T活化后细胞因子的分泌量。结果生信分析结果显示,胰腺癌组织c-Met表达高于正常组织(P<0.01);c-Met表达水平与胰腺癌患者生存期呈负相关(P<0.01)。c-Met的表达可能与多种免疫细胞浸润成正相关。免疫组化结果显示,胰腺癌c-Met和PD-L1表达均高于癌旁组织(P<0.01);流式细胞术结果显示,Aspc-1细胞c-Met和PD-L1表达量为90.7%和57.7%,琼脂糖凝胶电泳显示成功制备四代PD-1/c-Met CAR分子;流式细胞术和Western blotting显示,成功构建PD-1/c-Met CAR-T且PD-1抗体可顺利分泌。体外功能验证中LDH结果显示,PD-1/c-Met CART对肿瘤细胞杀伤效率在效靶比为20:1时高于c-Met CAR-T(P<0.01);CCK-8实验结果显示,靶细胞刺激72 h后增殖效率高于c-Met CAR-T(P<0.01);ELISA结果显示,PD-1/c-Met CAR-T分泌的细胞因子IL-2和TNF-α高于c-Met CAR-T(P<0.01)。结论PD-1抗体分泌型c-Met CAR-T可成功构建,并在体外胰腺癌细胞上显示出优于c-Met CAR-T肿瘤杀伤效率和增殖效率。