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嗜热链球菌c-di-AMP合成酶的结构预测
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作者 范艺周 骆思羽 +3 位作者 朱浩伟 薛珍 艾连中 熊智强 《工业微生物》 CAS 2024年第1期171-176,共6页
作为一种新兴第二信使分子,c-di-AMP具有全局调控胞内渗透压平衡、DNA损伤和生物膜形成等生理功能。本实验室在实验前期筛选出了一株高产胞外多糖的嗜热链球菌菌株S-3,但未对其进行c-di-AMP信号通路研究。本研究在嗜热链球菌S-3全基因... 作为一种新兴第二信使分子,c-di-AMP具有全局调控胞内渗透压平衡、DNA损伤和生物膜形成等生理功能。本实验室在实验前期筛选出了一株高产胞外多糖的嗜热链球菌菌株S-3,但未对其进行c-di-AMP信号通路研究。本研究在嗜热链球菌S-3全基因组中筛选出c-di-AMP合成酶(StDAC),对其二级结构进行预测,结果显示St DAC二级结构包含42.98%α-螺旋、15.32%β-折叠和38.30%无规则卷曲。利用SWISS-MODEL和Modeller对StDAC进行单模板和多模板同源建模,由SWISS-MODEL建立的模型通过了Ramachandran、Errat和Verify-3D评估,表明其结构较为合理;而Modeller建立的模型仅通过了Ramachandran评估,总体结构评分较低。本研究预测的嗜热链球菌StDAC三维模型为解析其结构和功能奠定了基础。 展开更多
关键词 嗜热链球菌 c-di-amp 生物信息学 二级结构 同源建模
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乳酸菌第二信使分子c-di-AMP研究进展
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作者 范艺周 李欢欢 +3 位作者 喻林兵 曹佳尧 艾连中 熊智强 《工业微生物》 CAS 2024年第2期79-84,共6页
微生物依赖信号识别和信号传递来感知并响应外界环境变化。c-di-AMP作为第二信使分子在信号传导过程中发挥着关键作用,其通过酶、转录调控因子和核糖开关等受体靶标来调控细胞生长、生物膜形成、K^(+)稳态、DNA完整性、细胞壁合成和脂... 微生物依赖信号识别和信号传递来感知并响应外界环境变化。c-di-AMP作为第二信使分子在信号传导过程中发挥着关键作用,其通过酶、转录调控因子和核糖开关等受体靶标来调控细胞生长、生物膜形成、K^(+)稳态、DNA完整性、细胞壁合成和脂肪酸合成等与生理功能相关的基因和蛋白的表达。尽管对于c-di-AMP代谢调控在枯草芽孢杆菌、单增李斯特氏菌和金黄色葡萄球菌等细菌中的研究较为深入,但对其在乳酸菌中的研究却相对较少。基于此,文章重点关注乳酸菌中cdi-AMP的代谢及其在K^(+)稳态和抑制甘氨酸甜菜碱转运中的信号传导作用;同时,通过总结现有研究中的乳酸菌c-di-AMP代谢调控,深化对乳酸菌第二信使分子信号调控的认知。 展开更多
关键词 乳酸菌 第二信使分子 环二腺苷酸
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牙龈卟啉单胞菌c-di-AMP代谢相关基因的克隆及表达纯化 被引量:3
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作者 邱伟 程兴群 +1 位作者 周学东 李雨庆 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期607-612,共6页
目的克隆牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)中负责c-di-AMP代谢的相关基因,并使其在大肠杆菌中正确表达及高效纯化。方法通过聚合酶链反应(PCR)克隆牙龈卟啉单胞菌ATCC33277的pgn0523、pgn1187和pgn2003三个基因,经过酶切后将... 目的克隆牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)中负责c-di-AMP代谢的相关基因,并使其在大肠杆菌中正确表达及高效纯化。方法通过聚合酶链反应(PCR)克隆牙龈卟啉单胞菌ATCC33277的pgn0523、pgn1187和pgn2003三个基因,经过酶切后将目的基因片段与大肠杆菌表达质粒p ET28a连接,分别构建出重组表达质粒p ETpgn0523、p ET-pgn1187和p ET-pgn2003。将重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白,通过十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析和鉴定。用镍离子金属亲和层析法对重组蛋白进行分离纯化,BCA法检测目的蛋白的浓度。结果目的基因pgn0523、pgn1187和pgn2003扩增产物条带与预期大小一致。重组表达质粒p ET-pgn0523、p ET-pgn1187和p ET-pgn2003及其PCR产物琼脂糖凝胶电泳验证与预期大小相符,测序结果与Gen Bank中牙龈卟啉单胞菌ATCC33277国际标准菌株的基因序列100%一致。IPTG诱导后的菌体经SDS-PAGE检测得到3个大小分别为19.5×103、39.9×103、66.0×103的蛋白质增强条带,与预期大小相符。镍离子金属亲和层析柱纯化得到的蛋白与预期目的蛋白分子量一致,BCA法测定目的蛋白的浓度分别为0.708、0.523和0.861 mg·m L-1。结论本研究成功克隆并表达纯化了牙龈卟啉单胞菌c-di-AMP代谢相关蛋白,得到了较高浓度和纯度的目的蛋白,为进一步探究牙龈卟啉单胞菌c-di-AMP的生理功能及体内代谢途径奠定了基础。 展开更多
关键词 牙龈卟啉单胞菌 c-di-amp 代谢基因 表达纯化
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c-di-AMP——细菌中第二信使的研究进展 被引量:3
4
作者 金华 马春骥 +3 位作者 韩杨 罗海霞 李敏 郝秀静 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2019年第6期109-116,共8页
环二腺苷酸(cyclic diadenylate monophosphate,c-di-AMP)是新发现的在细菌中广泛存在的一类重要的第二信使。c-di-AMP不仅与细菌的生长、细胞壁的代谢平衡、生物被膜的形成等密切相关,还在真核宿主细胞抗感染的固有免疫中发挥重要作用... 环二腺苷酸(cyclic diadenylate monophosphate,c-di-AMP)是新发现的在细菌中广泛存在的一类重要的第二信使。c-di-AMP不仅与细菌的生长、细胞壁的代谢平衡、生物被膜的形成等密切相关,还在真核宿主细胞抗感染的固有免疫中发挥重要作用。主要从c-di-AMP的合成酶与降解酶、c-di-AMP在病原菌中的结合蛋白以及c-di-AMP与宿主细胞互作过程中的相关受体蛋白等几方面进行综述。 展开更多
关键词 环二腺苷酸(c-di-amp) 固有免疫 结合蛋白 受体蛋白
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细菌c-di-AMP检测方法的研究进展
5
作者 张雪琴 周学东 +1 位作者 彭显 程磊 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2021年第4期98-106,共9页
环二腺苷酸(cyclic diadenylate monophosphate,c-di-AMP)是一种广泛存在于细菌中的重要核苷酸第二信使分子,在病原体细菌,尤其是许多革兰阴性细菌中发挥着重要作用。研究表明,c-di-AMP在细菌生长、耐药性、抗应激、侵袭力和生物膜形成... 环二腺苷酸(cyclic diadenylate monophosphate,c-di-AMP)是一种广泛存在于细菌中的重要核苷酸第二信使分子,在病原体细菌,尤其是许多革兰阴性细菌中发挥着重要作用。研究表明,c-di-AMP在细菌生长、耐药性、抗应激、侵袭力和生物膜形成等方面担当不可取代的角色,同时参与激活和调节宿主的免疫反应。有关c-di-AMP的研究逐渐深入并成为微生物研究领域的热点,微生物主要通过改变其胞内外c-di-AMP的含量来调节细菌生理功能及宿主细胞免疫反应,因此对于胞内外c-di-AMP的定量研究也得到了研究者的重视。目前针对c-di-AMP的定量检测已有多种技术方法被报道,包括经常使用的HPLC/MS检测、ELISA检测,以及利用甲氧檗因的荧光检测、荧光生物传感器的c-di-AMP活细胞成像等。每种方法的检测原理、适用范围及优缺点各不相同。对现有检测方法的总结有助于对新检测手段的探索,进一步提升对c-di-AMP功能的认知。为了广泛研究c-di-AMP介导的信号通路及其生物学作用,就目前细菌c-di-AMP的检测方法的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 环二腺苷酸 检测方法 酶联免疫吸附试验 HPLc/MS 环二核苷酸
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Cyclic Bis(3'-5')diadenylic Acid (c-di-AMP) Analogs Promote the Activities of Photosynthesis and Respiration of <i>Chlamydomonas reinhardtii</i>
6
作者 Takafumi Tezuka Hiroshi Shirouzu +5 位作者 Keigo Ishida Noritaka Suzuki Takuya Matsuo Kin-ichi Oyama Setsuyuki Aoki Masaki Tsukamoto 《American Journal of Plant Sciences》 2014年第1期24-28,共5页
Physiological changes in the photosynthesis, respiration and cell division of Chlamydomonas reinhardtii, a freshwater green alga, in response to adenine nucleotides were investigated. In advance of this investigation,... Physiological changes in the photosynthesis, respiration and cell division of Chlamydomonas reinhardtii, a freshwater green alga, in response to adenine nucleotides were investigated. In advance of this investigation, two adenine nucleotides, di(2'-O-methyl)-cyclic bis(3'-5')diadenylic acid (1) and its N-benzoyl-protected analog 2 were synthesized from the commercially available adenosine phosphoramidite. The respective analogs significantly promoted the cell division (cell number) of C. reinhardtii strains 137c mt+ and BR mt+. Moreover, they significantly enhanced the O2 evolution (photosynthesis) and O2 uptake (respiration) of both strains. c-di-AMP analogs seem to play an effective role as a physiological activator in planta. 展开更多
关键词 c-di-amp O2 Evolution (Photosynthesis) O2 Uptake (Respiration) chlamydomonas reinhardtii
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核安全级DI&C系统平台的安全性和可靠性分析方法的探索
7
作者 秦宇 张亚栋 尹宝娟 《自动化博览》 2012年第12期70-74,共5页
目前国内外的法规、标准和研究的对象基本上都是核安全级数字化仪控(DI&C)系统,对核安全级DI&C系统平台的安全性和可靠性分析缺乏足够的指导。本文对比了DI&C系统和DI&C系统平台,然后根据DI&C系统的安全性和可靠性... 目前国内外的法规、标准和研究的对象基本上都是核安全级数字化仪控(DI&C)系统,对核安全级DI&C系统平台的安全性和可靠性分析缺乏足够的指导。本文对比了DI&C系统和DI&C系统平台,然后根据DI&C系统的安全性和可靠性分析的研究现状,建立了适用于DI&C系统平台的安全性和可靠性分析体系,并说明了DI&C系统平台应用于以确定对象为目标的DI&C系统的限制条件。本文为核安全级DI&C系统平台的安全性和可靠性分析工作提供了技术支持。 展开更多
关键词 核安全级仪控系统平台 仪控系统 安全性和可靠性分析
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钩端螺旋体c-di-AMP结合蛋白调控钾离子转运 被引量:1
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作者 戴欣珏 姚丽琴 +1 位作者 陈婧 胡玮琳 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期451-457,共7页
目的寻找和鉴定钩端螺旋体中编码第二信使c-di-AMP结合蛋白KtrA,并探究c-di-AMP-KtrA/B系统的功能及调控机制。方法采用PCR扩增ktrA基因并克隆入pET42a质粒获得pET42aktrA原核表达载体,将其转入表达宿主菌中获得表达rKtrA的工程菌E.coli... 目的寻找和鉴定钩端螺旋体中编码第二信使c-di-AMP结合蛋白KtrA,并探究c-di-AMP-KtrA/B系统的功能及调控机制。方法采用PCR扩增ktrA基因并克隆入pET42a质粒获得pET42aktrA原核表达载体,将其转入表达宿主菌中获得表达rKtrA的工程菌E.coli BL21DE3pET42a-ktrA。通过亲和层析法提纯上述工程菌表达的重组蛋白rKtrA后,运用BIAcore技术检测rKtrA与c-di-AMP的结合能力。采用细菌双杂交法检测钩端螺旋体Ktr系统中KtrA与KtrB的结合能力以及外源c-di-AMP对其结合的调控机制。通过在钾离子转运功能缺失大肠埃希菌LB2003株中回补相关基因,分析c-di-AMP-KtrA/B通路功能。结果成功构建钩端螺旋体ktrA基因原核表达工程菌,纯化的rKtrA可与c-di-AMP特异性结合;KtrA可与KtrB发生相互作用,该结合作用可被c-di-AMP解离;KtrA/B系统参与调控钾离子的摄取,该系统功能受c-di-AMP负调控。结论钩端螺旋体KtrA为c-di-AMP结合蛋白,c-di-AMP-KtrA/B系统参与调控钾离子的转运。 展开更多
关键词 钩端螺旋体 c-di-amp 钾离子转运
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CdaR-DAC信号系统调控钩端螺旋体合成第二信使分子c-di-AMP 被引量:2
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作者 方葆 李阳 +1 位作者 严杰 胡玮琳 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期881-885,共5页
目的确定致病性问号钩端螺旋体(简称钩体)LA3304基因产物DAC合成c-di-AMP的活性,LA3303基因产物CdaR增强DAC酶活。方法采用PCR扩增问号钩体黄疸出血群赖型赖株LA3304基因,并构建其原核表达系统。Ni-NTA亲和层析法提纯表达的目的重组蛋白... 目的确定致病性问号钩端螺旋体(简称钩体)LA3304基因产物DAC合成c-di-AMP的活性,LA3303基因产物CdaR增强DAC酶活。方法采用PCR扩增问号钩体黄疸出血群赖型赖株LA3304基因,并构建其原核表达系统。Ni-NTA亲和层析法提纯表达的目的重组蛋白rDAC。采用高效液相色谱法(HPLC)检测rDAC环化ATP底物为c-di-AMP的活性。采用细菌双杂交法检测CdaR与DAC相互作用情况。构建细菌共表达系统,结合HPLC法检测CdaR增强DAC酶活情况。结果所构建的问号钩体赖株LA3304基因原核表达系统在IPTG诱导下能高效表达rDAC,Ni-NTA亲和层析法提纯的rDAC经SDS-PAGE后显示为单一蛋白条带。rDAC具有体外合成ATP底物为c-di-AMP的功能。CdaR与DAC存在相互作用,CdaR可显著增强DAC酶活(P<0.05)。结论LA3304基因产物DAC具有c-di-AMP合成酶活性,CdaR可增强DAC活性,并与DAC构成CdaR-DAC信号系统,共同参与调节钩体c-di-AMP合成。 展开更多
关键词 钩端螺旋体 c—di—amp DAc cDAR
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基于Aerolysin纳米孔道对单个c-di-AMP分子的检测研究 被引量:5
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作者 牛红艳 胡正利 +1 位作者 应佚伦 龙亿涛 《化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2019年第10期989-992,共4页
环二腺苷酸(c-di-AMP)是原核细胞中普遍存在的第二信使,不仅能够有效调控细胞生长、离子转运、细胞壁代谢平衡等多种生理过程,还能引发I型干扰素应答,激发机体天然免疫反应.本实验使用单个气单胞菌溶素(Aerolysin)纳米孔道蛋白构建的单... 环二腺苷酸(c-di-AMP)是原核细胞中普遍存在的第二信使,不仅能够有效调控细胞生长、离子转运、细胞壁代谢平衡等多种生理过程,还能引发I型干扰素应答,激发机体天然免疫反应.本实验使用单个气单胞菌溶素(Aerolysin)纳米孔道蛋白构建的单分子界面,对c-di-AMP进行单分子测量研究.为提高Aerolysin纳米孔对带负电小分子化合物的测量灵敏度,本实验利用LiCl为支持电解质,有效屏蔽Aerolysin孔口表面负电荷,减小c-di-AMP与Aerolysin纳米孔之间的静电排斥,从而显著增强了Aerolysin纳米孔道对单个c-di-AMP分子的检测能力.实验结果显示,在90mV电压下,每分钟在LiCl中获得的有效穿孔事件的数量最高可达同条件KCl支持电解质的30倍,且有效穿孔事件占总体事件的比例在不同电压下提升了7~11倍.进一步表明,使用LiCl支持电解质,可有效增强Aerolysin孔道对带负电小分子化合物的测量灵敏度.因此,本研究实现了Aerolysin纳米孔道对单个环二核苷酸的高灵敏免标记检测,有望为单分子水平上阐明新型免疫干扰机制提供新的分析方法. 展开更多
关键词 环二腺苷酸 环二核苷酸 气单胞菌溶素 单分子界面 生物纳米孔道
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c-di-AMP调控细菌生物被膜的形成 被引量:4
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作者 彭显 李继遥 徐欣 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1369-1375,共7页
细菌生物被膜是细菌持续性致病的重要机制。研究细菌生物被膜的形成和发展可为顽固性细菌感染防治提供新的思路与策略。环二腺苷酸c-di-AMP(Cyclic diadenosine monophosphate)是继c-di-GMP之后在细菌中新发现的一种核苷酸第二信使分子... 细菌生物被膜是细菌持续性致病的重要机制。研究细菌生物被膜的形成和发展可为顽固性细菌感染防治提供新的思路与策略。环二腺苷酸c-di-AMP(Cyclic diadenosine monophosphate)是继c-di-GMP之后在细菌中新发现的一种核苷酸第二信使分子。研究发现,c-di-AMP参与调节细菌多种生理功能,包括细菌生长代谢、生物被膜形成、细胞壁的合成以及细菌毒力因子等。本文综述了c-di-AMP参与调控细菌生物被膜形成的不同方式及其分子机制。鉴于c-di-AMP在调控细菌生物被膜中的重要性,其可作为抗细菌生物被膜感染新药研发的潜在靶点。 展开更多
关键词 细菌 生物被膜 c-di-amp c-di-GMP
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结核分枝杆菌c-di-AMP合成酶的表达和纯化以及小鼠多抗血清的制备 被引量:1
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作者 曹田宇 吉思雨 +5 位作者 褚阳光 王丽梅 康健 王立飞 徐志凯 柏银兰 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第8期681-684,688,共5页
目的表达和纯化结核分枝杆菌c-di-AMP合成酶,并制备多克隆抗体,为研究c-di-AMP在MTB生理过程中的作用奠定基础。方法从MTB基因组中PCR扩增c-di-AMP合成酶Rv3586基因,构建原核表达载体,序列鉴定后,IPTG诱导目的基因表达,采用Western-blo... 目的表达和纯化结核分枝杆菌c-di-AMP合成酶,并制备多克隆抗体,为研究c-di-AMP在MTB生理过程中的作用奠定基础。方法从MTB基因组中PCR扩增c-di-AMP合成酶Rv3586基因,构建原核表达载体,序列鉴定后,IPTG诱导目的基因表达,采用Western-blot鉴定目的蛋白,并用离子亲和层析法纯化重组蛋白;用纯化蛋白经背部皮下免疫小鼠,收集小鼠血清,用免疫学方法测定抗体滴度及其特异性。结果 PCR成功扩增Rv3586基因,限制性酶切分析和序列测定结果表明成功构建原核表达载体;表达的重组c-di-AMP合成酶蛋白分子质量大小约43ku,该蛋白可被抗His标签抗体和感染小鼠血清识别。用纯化蛋白免疫小鼠,初次免疫后抗体滴度可达1︰12 800,且该多克隆抗体可识别结核分枝杆菌和卡介苗c-di-AMP合成酶。结论在E.coli中成功表达c-di-AMP合成酶,并制备了多克隆抗体,可用于结核分枝杆菌c-di-AMP生物学功能的进一步研究。 展开更多
关键词 结核病 结核分枝杆菌 c-di-amp 原核表达 抗体
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第二信使分子c-di-AMP调控细菌中钾离子转运的机制 被引量:7
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作者 蔡霞 何进 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1434-1442,共9页
钾离子(K^+)是维持生命体存活的必需元素。原核生物进化出一系列K^+转运系统,如Kdp系统﹑Ktr系统和Trk系统等,来维持胞内相对恒定的K^+浓度。环二腺苷酸单磷酸(cyclic diadenosine monophosphate,c-di-AMP)是新发现的第二信使分子,可以... 钾离子(K^+)是维持生命体存活的必需元素。原核生物进化出一系列K^+转运系统,如Kdp系统﹑Ktr系统和Trk系统等,来维持胞内相对恒定的K^+浓度。环二腺苷酸单磷酸(cyclic diadenosine monophosphate,c-di-AMP)是新发现的第二信使分子,可以与K^+转运系统中的KdpD、KtrA和TrkA结合。当胞内c-di-AMP浓度高时,c-di-AMP会与K^+转运蛋白结合,降低其转运活性。c-di-AMP的靶标除蛋白质外,还有RNA元件,即c-di-AMP的核糖开关。高浓度的c-di-AMP与其核糖开关结合后,可抑制下游K^+转运蛋白编码基因,如kdp、ktr和trk操纵子以及kup基因的转录,从而调控K^+的转运。总之,胞内高浓度的c-di-AMP抑制细菌对K^+的吸收。c-di-AMP调控K^+转运机制的研究,不仅丰富了K^+转运的调控方式,而且也扩大了c-di-AMP的调控范围,为细菌的利用与防治提供了新思路。 展开更多
关键词 c-di-amp K+转运系统 K+转运 受体/靶标 核糖开关
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细菌c-di-AMP在宿主免疫中的作用研究 被引量:2
14
作者 吴沁蕊 彭显 周学东 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1098-1103,共6页
环状二聚腺苷-3′,5′-单磷酸(cyclic diadenosine monophosphate,c-di-AMP)是细菌和古细菌中新发现的第二信使。通过直接与靶蛋白结合或影响靶蛋白表达,c-di-AMP调节多种细菌的生理功能,包括维持渗透压、平衡中枢代谢、监测DNA损伤以... 环状二聚腺苷-3′,5′-单磷酸(cyclic diadenosine monophosphate,c-di-AMP)是细菌和古细菌中新发现的第二信使。通过直接与靶蛋白结合或影响靶蛋白表达,c-di-AMP调节多种细菌的生理功能,包括维持渗透压、平衡中枢代谢、监测DNA损伤以及控制生物膜和孢子形成。作为一种新型病原体相关分子模式与宿主模式识别受体结合,通过激活干扰素基因刺激蛋白(stimulator of interferon genes,STING),诱导环磷酸鸟苷-磷酸腺苷合酶(cyclic GMP-AMP synthase,cGAS)-STING信号轴产生Ⅰ型干扰素,并通过核因子-κB信号通路促进炎症因子分泌,在宿主对细菌感染及肿瘤的免疫中发挥重要作用。因其良好的免疫原性,c-di-AMP可作为免疫佐剂为疫苗的研发提供新的靶点。然而,对c-di-AMP在宿主免疫中的具体作用机制有待进一步探索。本文介绍了c-di-AMP的结构及生物学特性,总结了c-di-AMP对宿主免疫应答调控的可能机制,同时跟进其作为免疫佐剂应用于临床的治疗新进展。研究c-di-AMP的功能及对宿主免疫应答的作用机制可为临床上解决细菌耐药、感染控制、肿瘤防治以及疫苗开发提供新的思路。 展开更多
关键词 c-di-amp 第二信使 细菌感染 肿瘤 免疫佐剂
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c-di-AMP在细菌感染与免疫中的作用 被引量:4
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作者 宁唤唤 徐志凯 柏银兰 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期2362-2369,共8页
环二腺苷酸(Cyclic diadenosine monophosphate,c-di-AMP)是细菌中广泛存在的第二信号分子。c-di-AMP在细菌中的代谢受二腺苷酸环化酶(Diadenylatecyclase, DAC)和磷酸二酯酶(Phosphodiesterase,PDE)的精密调控。c-di-AMP不仅调节细菌... 环二腺苷酸(Cyclic diadenosine monophosphate,c-di-AMP)是细菌中广泛存在的第二信号分子。c-di-AMP在细菌中的代谢受二腺苷酸环化酶(Diadenylatecyclase, DAC)和磷酸二酯酶(Phosphodiesterase,PDE)的精密调控。c-di-AMP不仅调节细菌生长、细胞壁稳态、离子转运等多种生理过程,而且能够被真核宿主胞内多种感应子/受体蛋白识别,从而调控抗感染免疫。细菌c-di-AMP参与调控宿主I型干扰素应答、NF-κB信号通路活性、自噬以及炎症小体应答等固有免疫应答。此外,c-di-AMP作为黏膜佐剂可诱导宿主适应性免疫。c-di-AMP被认为是一种新发现的病原体相关的分子模式(Pathogen associated molecular pattern,PAMP),已成为细菌疫苗和药物研究中的新靶点。 展开更多
关键词 环二腺苷酸 细菌 感染 免疫 固有免疫
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细菌c-di-AMP特异性磷酸二酯酶的研究进展 被引量:1
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作者 张颖 徐兆坤 +2 位作者 罗海霞 郝秀静 李敏 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第22期2627-2637,共11页
c-di-AMP特异性磷酸二酯酶(c-di-AMP-specific phosphodiesterase,PDE)是一类能够将c-di-AMP水解为线性pApA或AMP的酶,对维持细菌体内c-di-AMP的代谢平衡至关重要.在不同的细菌中存在着不同结构类型的PDE,其功能既具有一定的保守性,又... c-di-AMP特异性磷酸二酯酶(c-di-AMP-specific phosphodiesterase,PDE)是一类能够将c-di-AMP水解为线性pApA或AMP的酶,对维持细菌体内c-di-AMP的代谢平衡至关重要.在不同的细菌中存在着不同结构类型的PDE,其功能既具有一定的保守性,又存在特异性.c-di-AMP作为第二信使分子在包括古菌、革兰氏阳性菌及支原体、衣原体、蓝细菌等部分革兰氏阴性菌等在内的原核生物中发挥多种功能.近年来研究显示,PDE通过调节细菌中cdi-AMP水平,进而调控细菌生长、生物被膜形成、细菌耐药性、细菌毒力和宿主细胞的免疫应答等生物学过程,是预防和治疗病原菌感染的重要潜在靶点,在疫苗研发及小分子药物筛选开发领域中具有极大的潜力.本文对近年来PDE分类、结构及生物学功能等方面进行综述,旨在为相关研究人员提供参考. 展开更多
关键词 第二信使 c-di-amp 磷酸二酯酶 结构与功能
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第二信使分子调控细菌胞外多糖生物合成研究进展 被引量:5
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作者 艾连中 范艺周 熊智强 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第4期1-8,共8页
细菌胞外多糖是细菌在生长代谢过程中分泌到周围环境中的高分子聚合物,能够增强细菌对氧化应激、干燥及宿主防御因子的抵抗力,赋予细菌额外的生存优势。细菌胞外多糖作为乳化剂、胶凝剂、增稠剂、保水剂、保鲜剂和稳定剂,广泛应用于食... 细菌胞外多糖是细菌在生长代谢过程中分泌到周围环境中的高分子聚合物,能够增强细菌对氧化应激、干燥及宿主防御因子的抵抗力,赋予细菌额外的生存优势。细菌胞外多糖作为乳化剂、胶凝剂、增稠剂、保水剂、保鲜剂和稳定剂,广泛应用于食品、化工、制药、化妆品和石油等行业。环二鸟苷酸(c-di-GMP)和环二腺苷酸(c-di-AMP)是2种新发现的第二信使分子,介导细菌脂肪酸代谢、钾离子稳态、生物膜形成和胞外多糖生物合成等多种生理功能的信号转导。本文综述c-diGMP和c-di-AMP信使分子的代谢及其介导的细菌胞外多糖生物合成分子机制,以期为第二信使分子介导的信号网络调控研究提供借鉴。 展开更多
关键词 细菌 胞外多糖 环二鸟苷酸 环二腺苷酸
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抗原85B-6kDa早期分泌靶抗原(Ag85B-ESAT-6)亚单位疫苗黏膜免疫对结核分枝杆菌的免疫应答 被引量:3
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作者 宁唤唤 张芳琳 +7 位作者 康健 王立飞 路延之 任瑞 白鹭 梁璇 谢燕玲 柏银兰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期886-892,共7页
目的评价抗原85B-6kDa早期分泌靶抗原融合蛋白(AE)亚单位疫苗经黏膜免疫小鼠诱导的免疫应答及其对结核分枝杆菌(MTB)感染的保护力。方法分别用AE、AE联合环二腺苷酸(c-di-AMP)亚单位疫苗经鼻黏膜免疫小鼠,ELISA检测抗体水平以及1型辅助T... 目的评价抗原85B-6kDa早期分泌靶抗原融合蛋白(AE)亚单位疫苗经黏膜免疫小鼠诱导的免疫应答及其对结核分枝杆菌(MTB)感染的保护力。方法分别用AE、AE联合环二腺苷酸(c-di-AMP)亚单位疫苗经鼻黏膜免疫小鼠,ELISA检测抗体水平以及1型辅助T(Th1)细胞的细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)和Th2细胞的IL-10分泌水平,实时荧光定量PCR检测IFN-γ、IL-2、IL-10和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA水平。MTB静脉感染免疫小鼠,ELISA检测感染小鼠血清抗体及脾细胞细胞因子分泌水平,HE染色分析肺病理改变,平板法计数菌落形成单位(CFU)检测脾和肺荷菌数。结果AE和AE联合c-di-AMP经鼻黏膜免疫可诱导小鼠产生高水平的特异性抗体,促进脾细胞增殖、脾和肺脏Th1/Th2型细胞因子和TNF-α转录增加、脾Th1/Th2型细胞因子分泌增加。小鼠MTB感染后,与对照组相比,AE和AE联合c-di-AMP免疫小鼠特异性抗体水平仍升高,Th1/Th2型细胞免疫应答增强,肺组织呈炎症反应,肺、脾荷菌数显著降低,且AE联合c-di-AMP免疫小鼠肺、脾荷菌数进一步降低。结论AE亚单位疫苗经黏膜接种可诱导小鼠产生体液与细胞免疫应答,并提供对MTB感染的保护力;c-di-AMP为佐剂可在一定程度上提高AE的免疫原性。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌(MTB) 亚单位疫苗 抗原85B(Ag85B) 6kDa早期分泌靶抗原(ESAT-6) 环二腺苷酸(c-di-amp) 黏膜免疫
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结核分枝杆菌EsxV亚单位疫苗黏膜免疫诱导的免疫应答 被引量:2
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作者 白鹭 宁唤唤 +6 位作者 康健 梁璇 谢燕玲 彭钰君 张婧瑶 路延之 柏银兰 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期379-386,共8页
目的研究结核分枝杆菌抗原Rv3619c(EsxV)黏膜免疫小鼠诱导的免疫应答水平。方法PCR法扩增esxV基因克隆入原核表达载体pET28a(+),获得的重组E.coli诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE电泳和Western Blot鉴定蛋白的表达,亲和层析法纯化EsxV蛋白。... 目的研究结核分枝杆菌抗原Rv3619c(EsxV)黏膜免疫小鼠诱导的免疫应答水平。方法PCR法扩增esxV基因克隆入原核表达载体pET28a(+),获得的重组E.coli诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE电泳和Western Blot鉴定蛋白的表达,亲和层析法纯化EsxV蛋白。以EsxV和/或联合环二腺苷酸(c-di-AMP)经鼻黏膜免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠特异性抗体水平及亚类,MTS法检测脾细胞增殖,qRT-PCR检测脾和肺脏细胞因子表达水平,ELISA法检测脾细胞因子分泌水平。结果成功构建EsxV的原核表达载体pET28a(+)-esxV并诱导表达目的蛋白,亲和层析法获得了纯化的重组EsxV蛋白。EsxV经黏膜免疫可诱导显著的体液免疫应答,但诱导的细胞免疫应答水平不高。EsxV与c-di-AMP经黏膜接种可诱导特异性IgG水平增加,EsxV蛋白特异的脾细胞增殖,脾和肺细胞的IFN-γ转录增加。c-di-AMP显著提高EsxV特异的IFN-γ、IL-2、IL-10和IL-17细胞因子分泌,而不诱导炎症因子TNF-α和IL-6表达。结论EsxV与c-di-AMP佐剂构建的亚单位疫苗可诱导特异性体液和细胞免疫应答,可进一步用于新型结核病亚单位疫苗的研制。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 6kDa早期分泌靶抗原分泌系统蛋白V(EsxV) 亚单位疫苗 黏膜免疫 环二腺苷酸
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植物乳杆菌环二腺苷酸合成酶的克隆表达与活性分析
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作者 杜斌 刘喜朋 +3 位作者 韦曾传 汪肖 刘正红 林栋 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期1130-1139,共10页
【背景】环二腺苷酸(Cyclic Diadenosine Monophosphate,c-di-AMP)是一种主要存在于革兰氏阳性菌中的重要的第二信使分子,其参与细菌的生长、生存、抗逆性等多种生理活动,但目前关于乳酸菌中c-di-AMP的研究甚少。【目的】从植物乳杆菌(L... 【背景】环二腺苷酸(Cyclic Diadenosine Monophosphate,c-di-AMP)是一种主要存在于革兰氏阳性菌中的重要的第二信使分子,其参与细菌的生长、生存、抗逆性等多种生理活动,但目前关于乳酸菌中c-di-AMP的研究甚少。【目的】从植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)中克隆得到c-di-AMP合成酶基因,在大肠杆菌中进行可溶性表达并研究其体外活性。【方法】使用高效液相色谱以及质谱分析对植物乳杆菌-YRA7细胞内容物中的c-di-AMP进行检测;以植物乳杆菌-YRA7基因组DNA为模板,克隆c-di-AMP合成酶基因(lpDacA),构建重组表达载体pET-28a-lpDacA并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,通过Ni-NTA亲和层析纯化后进行体外活性研究。【结果】在植物乳杆菌中检测到c-di-AMP分子;成功构建了c-di-AMP合成酶基因的重组表达质粒,该重组蛋白在大肠杆菌中得到可溶性表达;体外活性分析显示,该重组蛋白可以催化ATP生成c-di-AMP,其活性依赖于二价阳离子的存在,在Mg2+存在以及碱性环境下活性较强;RHR是合成酶活性的关键基序,是环二腺苷酸合成酶与ATP的结合位点。【结论】植物乳杆菌c-di-AMP合成酶的克隆表达及活性分析为进一步研究c-di-AMP在植物乳杆菌中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 环二腺苷酸 植物乳杆菌 原核表达
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