HGF/c-Met信号传导通路与晚期非小细胞肺癌关系的研究进展

肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)/c—Met信号传导通路在晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的发生、发展中起重要调控作用,并与表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂的继发性耐药密切相关。针对该通路的分子靶向治疗为晚期NSCLC提供了新的思路,现已成为近年研究的热点:本文就HGF/c—Met的结构、功能及其在晚期NSCLC中的治疗进展等作一综述。

c-Met信号通路及其抑制剂的研究进展

c-Met和肝细胞生长因子(HGF)在很多肿瘤细胞组织中高表达。c-Met信号通路的活化引起一系列的信号级联放大反应,导致了肿瘤细胞的生长、增殖、侵袭和凋亡减少。HGF是c-Met的配体,参与并影响肿瘤微环境的形成。该文就HGF如何活化c-Met及其下游的信号通路、c-Met与其他受体介导的信号通路间的串话对耐药性的影响以及针对HGF和c-Met信号通路的抑制剂的研究进展进行综述。

HGF/c-Met信号通路与胃癌相关研究进展

胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,主要治疗方式为手术、化疗和放疗,但是临床效果却不尽如人意。目前针对胃癌靶向治疗仍不理想,单一的靶向治疗易导致耐药及肿瘤复发,多靶点联合用药将是胃癌分子靶向治疗的一个发展趋势。本文介绍了肝细胞生长因子(HGF)/肝细胞生长因子受体(c-Met)信号转导通路参与胃癌的发生、发展和侵袭转移,是极具潜力的胃癌治疗靶点。目前研究中涌现出大量靶向该通路的药物并在临床研究中取得成果,但由于种族及胃癌亚型不同,仍然面临许多挑战。更深入的研究HGF/c-Met信号转导通路的作用机制,多渠道筛选独特分子亚型的胃癌患者用以进行针对性的靶向临床试验等可为胃癌治疗提供新的思路。

下调c–Met表达对肝癌细胞侵袭生长能力的影响

目的:探讨下调c–Met表达对肝癌(HCC)细胞侵袭生长能力的影响。方法:采用小干扰RNA(siRNA)技术沉默HCC细胞株Bel–7402和HepG2的c–Met基因,应用细胞计数试剂盒(CCK–8)方法:克隆形成实验检测细胞增殖和生长,流式细胞仪检测细胞周期的变化,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹法(Western blot)方法检测相关信号通路蛋白Ras、Raf、p–Erk、cyclin D1、β–catenin和Slug的表达。结果:siRNA技术能成功下调Bel–7402和HepG2的c–Met基因表达。下调c–Met表达后,HCC细胞增殖活性下降,发生明显DNA合成前期G1期停滞,侵袭能力减弱,Raf、p–Erk、cyclin D1、β–catenin和Slug蛋白表达下降。结论:下调HCC细胞c–Met基因的表达能够抑制细胞增殖和生长,阻滞细胞周期,减弱细胞侵袭能力,其机制可能与干扰Ras/Raf/ERK、Wnt通路和EMT过程有关。

c-met信号传导通路在脑胶质瘤中的作用

c-met受体是原癌基因c—met编码的蛋白质产物，在正常情况下可调节胚胎发育、器官形态分化、组织修复等，而在病理状态下可介导肿瘤细胞的增殖、分化、黏附、侵袭等生物学特性。目前已发现其在多种肿瘤中发挥上述作用，包括乳腺癌、食管癌、前列腺癌、肝癌、卵巢癌等。其在胶质瘤中同样高表达且与不良预后密切相关。现将该信号传导通路在胶质瘤中作用的最新研究进展综述如下。

候选转移抑制基因通过调控肝细胞生长因子／c—Met信号通路影响膀胱癌BIU87细胞生物学功能的研究

目的观察候选转移抑制基因（MTSS1）通过调控肝细胞生长因子（HGF）／c—Met信号通路对膀胱癌BIU87细胞生物学功能的影响。方法培养膀胱癌BIU87细胞，将传代的细胞分为以下3组：A组：PEFMTSSl和PSV2neo共转染组；B组：阴性对照小干扰RNA（shNC）和PSV2neo共转染组；C组：未转染组，A组为实验组，B、C两组为阳性对照组和阴性对照组。通过Westernblot和实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）检测MTSS1蛋白和mRNA在3组细胞中的表达水平，并检测3组BIU87细胞中c—Met、E一钙黏蛋白（E-cadherin）和N一钙黏蛋白（N—eadherin）蛋白和mRNA水平表达变化，并通过流式细胞法和划痕实验观察比较转染PEFMTSSl的BIU87细胞的的迁移能力和增殖凋亡情况。结果（1）Westernblot和Real-timePCR检测结果显示：与B、C组比较，PEFMTSS1组MTSS1蛋白及mRNA表达均显著下调（P〈0．01），c—Met蛋白及其mRNA的表达显著下调（P〈0．01）。（2）Westernblot和Real—timePCR检测结果显示：与B、C组比较，A组上皮标志物E—eadherin蛋白和及mRNA表达显著上调（P〈0．01），c-Met蛋白及其mRNA，间质细胞标志物N—cadherin蛋白及mRNA的表达显著下调（P〈0．01），B、C两组间E—eadherin和N—eadherin蛋白及mRNA表达的差异无统计学意义（P〉0．01）。（3）划痕实验检测细胞迁移：结果表明，A组划痕间距较宽，愈合被抑制，BIU87细胞迁移能力低于B、C组细胞（P〈0．01），B、C两组细胞的划痕间距差异无统计学意义（P〉0．叭）。（4）流式细胞仪分析细胞凋亡：A、B和C组细胞的凋亡率分别为（26．73±3．72）％、（4．28-t-O．68）％和（2．73±0．41）％，A组细胞的凋亡率较C组明显增加（P〈0．01），B、C两组细胞凋亡的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论MTSSl基因转染对体外膀胱癌细胞株BIU87细胞具有促进增殖和抑制凋亡作用，其可能是通过调控HGF／c—Met信号转导通路来发挥作用。

恩度对雌激素受体阳性的人乳腺癌细胞生长的抑制作用及其分子机制的研究

研究了重组人血管内皮抑素(恩度)对雌激素受体阳性的人乳腺癌MCF-7细胞株生长的抑制作用与其分子机制.采用MTT法、台盼蓝染色法和中性红染色法检测不同浓度恩度对MCF-7细胞生长的抑制作用,Hoechst33258荧光染色法和TUNEL分析法观察恩度诱导MCF-7细胞凋亡的形态变化,蛋白印迹法检测恩度作用的MCF-7细胞中与生长和凋亡相关蛋白的表达.结果表明,恩度显著性地抑制MCF-7细胞的生长并诱导细胞凋亡.此外,恩度显著性地减少MCF-7细胞VEGFR1,c-Met,ERα,Akt,NF-κB,Bcl-2和CyclinD1蛋白的表达,明显地上调Bax蛋白的表达,其作用的分子机制可能是通过抑制VEGFR1/c-Met/ERα-Akt-NF-κB信号传导通路,下调Bcl-2/Bax蛋白比率、降低CyclinD1蛋白的水平.

醛糖还原酶与糖尿病视网膜病关系的研究

糖尿病视网膜病变(DR)是一种严重的致盲性眼病.醛糖还原酶(AR)是多元醇通路中的限速酶,而多元醇通路是机体组织细胞葡萄糖代谢的重要途径.

血管能抑素,一种新的血管生成抑制因子

血管能抑素(canstatin)是新近发现的血管生成抑制因子,在体外能抑制血管内皮增殖与迁移,并诱导其凋亡,在体内可抑制肿瘤生长。血管能抑素的N端与C端均有抗血管生成和抑制内皮细胞增殖的作用,而N末端诱导内皮细胞的凋亡活性明显高于C末端。血管能抑素能抑制Akt、FAK的磷酸化。血管能抑素诱导的细胞凋亡与PI3K/Akt信号传导通路的抑制作用有关。

p-Stat3及其下游靶基因c-myc在喉鳞癌组织和细胞中的表达及意义

目的:检测喉鳞状细胞癌(LSCC)组织及细胞中p-Stat3及其下游靶基因c-myc的表达,探讨这2种基因与本地区LSCC的发生、发展以及它们之间的相互关系。方法:采用免疫组织化学方法检测p-Stat3和c-myc在60例LSCC和30例声带息肉组织中的表达,探讨其相关性;免疫细胞化学法检测喉鳞癌细胞Hep2中p-Stat3和c-myc的表达,Western blotting法检测Hep2细胞在Stattic作用下p-Stat3和c-myc蛋白的表达情况。结果:LSCC组织中p-Stat3和c-myc蛋白的阳性表达率分别为65%和70%,与声带息肉组织相比差异有统计学意义(P<0.05)。LSCC组织中二者的表达呈正相关(r=0.273,P<0.05)。细胞免疫化学法显示,在Hep2细胞中存在有p-Stat3和c-myc蛋白的表达;在抑制剂Stattic作用下,Hep2细胞中p-Stat3和c-myc蛋白的表达水平随着浓度的增加逐渐下降。结论:在LSCC组织和Hep2细胞中存在有p-Stat3和c-myc的表达,Stattic可以特异性的抑制p-Stat3的表达,并下调其下游靶基因c-myc的表达,表明活化的p-Stat3信号通路可以成为LSCC基因治疗中一个重要的分子靶点。

去甲基化Runx3基因对荷人胃癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用

Runx3基因作为转化生长因子（TGF-β）信号传导通路中的一个重要因素参与对上皮细胞的负向调控。在众多的肿瘤中均发现了染色体1p36的异常，而其中Runx3甲基化对胃癌的发生发展的影响越来越受到广泛关注。为进一步明确Runx3基因甲基化在胃癌发生、发展中的作用，本研究运用5-aza-2’-deoxycytidine药物处理胃癌细胞株达到去甲基化效果并接种于BALB／c裸鼠观察成瘤率和肿瘤体积，从而深入探讨Runx3基因在胃癌中的表达情况及其临床意义。

整合素β1-局灶黏附激酶对体外培养的垂体瘤细胞侵袭性的影响

目的 探讨整合素(INT) β1 局灶黏附激酶(FAK)信号传导通路在侵袭性垂体瘤中的作用及其意义。方法 选取手术切除的新鲜垂体瘤标本8例,进行原代培养,利用Boyden小室侵袭模型,分别加入INTβ1抗体以抑制INTβ1 FAK的激活、加入蛋白激酶C激活剂以激活FAK ,观察干预后垂体瘤细胞中FAK、磷酸化FAK(激活的FAK)、FAKmRNA的变化,以及相应的细胞侵袭能力的变化。结果 在加入INTβ1抗体后,Y3 97 FAK水平明显降低(P <0 .0 5 ) ,FAK的激活被抑制,同时伴随细胞侵袭率的显著降低(P <0 .0 5 ) ;加入蛋白激酶C激活剂后,FAKmRNA水平明显增高(P <0 .0 5 ) ;Y3 97 FAK水平明显增高(P <0 .0 5 ) ,FAK被激活;同时细胞侵袭率增高(P <0 .0 5 )。同时加入INTβ1抗体和TPA后,FAKmRNA水平明显增高(P <0 .0 5 ) ;Y3 97 FAK水平明显增高(P <0 .0 5 ) ,表明FAK仍然被激活,伴细胞侵袭率增高(P <0 .0 5 )。结论 垂体瘤中存在INTβ1 FAK信号传导机制,并且在垂体瘤的侵袭行为中具有重要作用;INTβ1

尿感方抗尿道致病性大肠杆菌侵袭膀胱上皮细胞的作用研究

目的观察尿感方抗尿道致病性大肠杆菌(uropathogenic Escheriehia coli,UPEC)侵袭膀胱上皮细胞的作用,并探讨其作用机制。方法通过UPEC感染人膀胱癌细胞5637(human bladder cancer cell 5637,HTB-9)侵袭模型,观察尿感方含药尿液保护膀胱上皮细胞抗UPEC侵袭的作用;同时采用分子生物学技术,观察其对Toll样受体4(TLR4)/环磷酸腺苷(c AMP)信号传导通路的主要环节:TLR4、腺苷酸环化酶3(AC3)、环磷酸腺苷(c AMP)、蛋白激酶A(PKA)和Rac-1的影响。结果与大鼠空白尿液高剂量组(体积分数10%空白尿液)比较,尿感方大鼠含药尿液高剂量组(体积分数10%含药尿液)的细菌入侵率降低;与模型组比较,大鼠空白尿液组的细菌入侵率无显著性差异。与大鼠空白尿液高剂量组比较,尿感方大鼠含药尿液高剂量组增加了TLR4、AC3蛋白的表达及胞内c AMP的水平,促进了PKA活化,抑制了Rac-1的活性。结论尿感方具有一定的抗UPEC侵袭膀胱上皮细胞的作用,其作用机制与影响TLR4/c AMP信号传导通路的环节有关。

Ruboxistaurin对糖尿病大鼠心房重构的影响

目的探讨蛋白激酶C-β(PKCβ)在糖尿病心房颤动(简称房颤)发生中的作用及机制。方法健康成年wistar雄性大鼠64只,分为两部分进行实验,每部分32只大鼠,均随机分为4组:对照组(C组),糖尿病组(DM组),PKCβ抑制剂组(CR组)和糖尿病+PKCβ抑制剂组(DMR组),每组8只。第一部分建立链脲菌素诱导的糖尿病模型,CR组及DMR组大鼠予PKCβ抑制剂(Ruboxistaurin,LY333531)1mg·Kg^(-1)·d^(-1)饲养8周,超声心动图测量左房前后径(LAD),左室舒张末内径(LVEDD),左室收缩末内径(LVESD)和左室射血分数(LVEF);HE染色及Masson染色检测左房细胞形态及心房间质纤维化程度;第二部分建立Langendorff灌流的离体大鼠心脏模型,右房起搏记录房间传导时间(IACT),测定房室传导文氏周长(AVWCL),S1S2刺激测定左房和右房有效不应期(LAERP、RAERP),计算心房不应期的离散度(AERPD)。Burst刺激诱发房颤,观察各组房颤诱发情况。结果与C组相比,DM组干预8周后LAD,LAD差值增大(P均<0.05);与DM组相比,DMR组干预8周后LAD,LAD差值减小(P均<0.05)。与C组相比,DM组大鼠左房肌细胞排列紊乱(P<0.05);与DM组相比,DMR组大鼠左房肌细胞排列整齐(P<0.05)。与C组相比,DM组大鼠左房肌细胞横截面积增大(P<0.05);与DM组相比,DMR组大鼠左房肌细胞横截面积减小(P<0.05)。与C组相比,DM组大鼠左房肌胶原容积分数增大(P<0.05);与DM组相比,DMR组大鼠左房肌胶原容积分数减小(P<0.05)。与C组相比,DM组大鼠IACT延长,LAERP减小,RAERP减小,AERPD增大(P均<0.05);与DM组相比,DMR组IACT缩短,LAERP增大,RAERP增大,AERPD减小(P均<0.05)。与C组相比,DM组大鼠房颤诱发率明显升高(P<0.05);与DM组相比,DMR组大鼠房颤诱发率显著降低(P<0.05)。结论 RBX可以明显减轻糖尿病大鼠左房的纤维化,改善糖尿病导致的电重构,降低了房颤的发生率。