c-myc反义寡核苷酸抑制半乳糖性白内障晶状体上皮细胞凋亡的机制

目的研究c-myc反义寡核苷酸(ASODN)对半乳糖性白内障晶状体上皮细胞(LECs)凋亡的影响。方法将Wistar大鼠按随机数字表法分为生理盐水组、半乳糖组和半乳糖+c-myc ASODN组,每组36只。半乳糖组及半乳糖+c-myc ASODN组每日球后注射0.2mL20%半乳糖,制作大鼠半乳糖性白内障模型,半乳糖+c-mycASODN组球后注射半乳糖4h后加注Lipo-c-myc ASODN复合液0.2mL,隔日1次。分别于给药后7、14、24d处死动物,取出晶状体,检测LECs的凋亡情况,采用TUNEL法检测c-myc ASODN对半乳糖诱导LECs凋亡的影响,透射电镜下观察LECs超微结构的改变。结果各组在7、14、24d的LECs凋亡率比较,差异均有统计学意义(F7days=3418.495,P<0.01;F14days=1137.555,P<0.01;F24days=2198.871,P<0.01);24d时半乳糖组LECs的凋亡率为56.57±3.20,生理盐水组为0.37±0.11,差异有统计学意义(P<0.01);半乳糖+c-myc ASODN组细胞凋亡率为29.35±1.63,较半乳糖组明显降低(P<0.05)。透射电镜下观察发现,半乳糖组可见LECs呈凋亡细胞的早期改变;随着高糖诱导时间的延长,凋亡细胞逐渐增多;生理盐水组几乎未见到凋亡细胞;半乳糖+c-myc ASODN组凋亡细胞数量较同期半乳糖组少。结论在白内障形成过程中半乳糖能诱导LECs凋亡,c-myc ASODN能够抑制半乳糖诱导的LECs凋亡。

C-myc反义寡核苷酸对胃癌荷瘤裸鼠抑瘤作用的研究

目的:探讨C-myc反义寡核苷酸(ASODN)对胃癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用。方法:将21只裸鼠建立人胃癌MKN-45细胞移植瘤动物模型。成瘤后动物随机平均分为3组,分别由皮下瘤体内注射脂质体(lipofectin,Lip)、C-mycSODN/Lip、C-mycASODN/Lip,每周1次,共3次。观察肿瘤抑制率、肿瘤体积和动物存活情况。免疫组化ABC法检测各组肿瘤的C-myc蛋白表达情况。结果:ASODN/Lip组肿瘤体积明显减少,肿瘤生长抑制,抑瘤率达41.5%;ASODN/Lip组裸鼠生存期较SODN/Lip组和Lip对照组延长明显(P<0.05);ASODN/Lip组肿瘤的C-myc蛋白表达明显降低。结论:C-myc反义寡核苷酸可以有效抑制人胃癌裸鼠皮下肿瘤的生长,延长动物生存期,为胃癌的治疗提供新的思路。

c-myc反义寡核苷酸对HL-60细胞端粒酶活性影响及诱导凋亡作用

为了研究c-myc基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞端粒酶活性的影响及其诱导凋亡作用,探讨HL-60细胞端粒酶活性与c-myc基因表达的关系,应用反义寡核苷酸封闭HL-60细胞c-myc基因的表达,RT-PCR方法检测该基因表达抑制情况,采用流式细胞术进行细胞凋亡检测及细胞周期分析,琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞的DNA断裂情况,应用TRAP-ELISA法测定HL-60细胞端粒酶的活性。结果表明:反义硫代寡核苷酸作用于HL-60细胞72小时后,c-myc基因表达明显受抑;S期细胞百分数由55.6%降至30%,并出现早期凋亡峰(凋亡细胞比例占25.2%);琼脂糖凝胶电泳显示DNA凋亡梯形带;端粒酶活性检测发现反义寡核苷酸3,4,5μmol/L作用组OD450-690分别为1.952±0.14,1.805±0.40,1.616±0.41,与未作用组(OD450-690为2.648±0.42)比较,差异有显著性(P<0.05);反义寡核苷酸1和2μmol/L作用组及正义寡核苷酸5μmol/L作用组OD450-690分别为2.324±0.36,2.162±0.38,2.466±0.29,与未作用组比较,差异无显著性(P>0.05)。结论:c-myc基因反义寡核苷酸能够通过封闭c-myc基因的表达而诱导HL-60细胞凋亡,阻止细胞由G1期进入S期,并具有下调端粒酶活性作用。

c-myc反义寡核苷酸对粘液表皮样癌细胞生长的抑制作用

目的 :探讨 c- myc基因的反义寡核苷酸 (ASODN)在涎腺粘液表皮样癌基因治疗中的作用。方法 :人工合成与 c- myc基因第二外显子翻译起始区序列互补的寡核苷酸 ,处理培养的人涎腺粘液表皮样癌 MEC- 1细胞。应用 MTT比色法观察其对细胞增殖的影响 ;流式细胞仪检测对细胞周期的影响 ;并采用免疫组化法检测 C- MYC蛋白的表达。结果 :c- myc反义寡核苷酸能抑制粘液表皮样癌 MEC- 1细胞的增殖 ,抑制作用具有浓度及时间依赖性。 5 0 %抑制浓度 (IC5 0 )为 8.2 μmol/ L。用浓度为 10 μmol/ L 的 c- myc ASODN处理 72 h,对 MEC- 1细胞的抑制率达 5 9%。c- myc ASODN抑制 MEC- 1细胞从 G1 期进入 S期 ;并能抑制 C- MYC蛋白的表达。结论 :c- myc反义寡核苷酸对粘液表皮样癌 MEC-

c-myc反义寡核苷酸对胃癌MKN-45细胞株生物学影响的研究

目的:观察c-myc反义寡核苷酸(ASODN)对胃癌MKN-45细胞株的生物学影响。方法:采用脂质体介导c-myc反义寡核苷酸转染人胃癌细胞系,用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)评价对细胞增殖的影响,免疫细胞化学ABC方法检测转染后c-myc蛋白的表达;流式细胞仪(FCM)观察细胞凋亡;RT-PCR及免疫组化方法检测c-myc基因表达变化。建立荷瘤小鼠模型,通过皮下瘤体内注射药物观察肿瘤体积和抑瘤率的变化。结果:c-myc基因反义寡核苷酸转染MKN-45细胞后,ASODN在0.25～4μmol/L的浓度范围内对MKN-45细胞均有不同程度的增殖抑制作用,作用48h后抑制率为11.2%～23.6%,且呈一定的剂量依赖性;FCM分析结果显示,转染后能诱导胃癌细胞凋亡,G0/G1期细胞增多;免疫细胞化学显示,c-myc蛋白水平明显降低,阳性表达率为(64.9±5.68)%;动物实验显示,ASODN可以抑制荷瘤小鼠肿瘤细胞的生长,肿瘤生长抑制率达41.5%。结论:c-myc基因反义寡核苷酸能明显抑制胃癌MKN-45细胞增殖、诱导细胞凋亡和下调c-myc蛋白水平。

脂质体介导c-myc反义寡核苷酸对乳腺癌MCF-7细胞生物学行为的影响

目的研究c-myc反义寡核苷酸(ASODN)经脂质体LipfectAMINETM(LR)介导转染对MCF-7细胞中c-myc蛋白表达及细胞增殖、凋亡的影响。方法用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)评价脂质体介导c-myc ASODN对细胞增殖的影响;免疫细胞化学ABC方法检测转染前后c-myc蛋白表达;流式细胞仪(FCM)定量分析细胞凋亡。结果ASODN/LR转染与正义、错义寡核苷酸相比,显著抑制MCF-7细胞增殖(P<0.01)。FCM分析结果显示,转染后可见明显细胞凋亡峰,72h相点细胞凋亡率达(28.76±2.09)%。免疫细胞化学显示c-myc蛋白水平明显降低,阳性表达率为(21.40±1.16)%。结论LR介导c-myc ASODN能明显抑制MCF-7细胞增殖、诱导细胞凋亡和下调c-myc蛋白水平。

反义c-myc寡核苷酸抑制大鼠气道平滑肌细胞增殖

目的 观察反义 c- myc寡核苷酸对大鼠气道平滑肌增殖的抑制作用 .方法 大鼠气道平滑肌细胞原代培养 ,4～12代用于实验 .利用 L ipofectin将正义、反义及错配 c- myc寡核苷酸导入大鼠气道平滑肌细胞 ,MTT法检测不同寡核苷酸对大鼠气道平滑肌细胞增殖的抑制作用 ,RT- PCR检测 c- mycm RNA的表达 ,免疫组织化学染色检测 c- Myc蛋白的表达 .结果 反义 c- myc寡核苷酸可抑制大鼠气道平滑肌细胞增殖 ,且这种抑制作用呈浓度依赖性 ;反义 c- myc寡核苷酸可降低 c- myc m RNA的表达 ,同时降低了 c- myc m RNA的翻译 .结论 反义 c-

反义c-myc寡核苷酸诱导骨肉瘤细胞MG-63凋亡的实验研究

目的:研究反义c-myc寡核苷酸诱导人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的作用。方法:设计反义c-myc寡核苷酸片段,转染入人骨肉瘤MG-63细胞,通过MTT法、流式细胞仪、HE染色及透射电镜方法,观察和分析其对人骨肉瘤MG-63细胞作用的效果。结果:MTT法示反义c-myc寡核苷酸可抑制人骨肉瘤MG-63细胞的增殖,10.0μmol/L、作用48h效果最明显;流式细胞仪检测证实反义c-myc寡核苷酸(终浓度10.0μmol/L)诱导瘤细胞的凋亡率达37.92%,出现明显的凋亡峰,并可抑制c-myc基因蛋白的表达;细胞呈典型凋亡特征。结论:反义c-myc寡核苷酸能有效诱导人骨肉瘤MG-63细胞的凋亡。

反义脱氧寡核苷酸诱导HL-60细胞分化及对c-myc基因表达的影响

目的 研究二个针对 c- myc基因的反义脱氧寡核苷酸 (简称反义核酸 )对急性白血病细胞 HL - 6 0的分化及基因表达的作用。 方法 以人工合成二个硫代寡核苷酸作用于 HL - 6 0细胞后 ,采用流式细胞仪检测 c- myc蛋白表达和 HL - 6 0细胞分化抗原 ,RT- PCR方法检测 c- myc基因表达 ,并在光镜下观察以瑞特染色及 NBT染色的HL - 6 0细胞形态。 结果 经反义核酸作用后 ,c- myc蛋白的表达有明显下降 ,与作用浓度与时间相关。急性白血病HL - 6 0细胞出现中 ,晚幼粒细胞增多 ,出现 CD1 5增高 ,HL A- DR及 CD3 4 降低是细胞分化的表现。同时 RT- PCR分析c- myc基因扩增明显减少。 结论 反义核酸对急性白血病细胞 HL - 6 0的诱导分化的同时抑制 c-

c-myc反义寡核苷酸联合5-Fu对胃癌的体外及裸鼠体内抗肿瘤作用

目的:探讨c-myc反义寡核苷酸(ASODN)联合5-Fu对胃癌MKN-45细胞株的体内、外抗肿瘤作用.方法:采用脂质体介导c-myc反义寡核苷酸转染人胃癌细胞系,用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)评价c-mycASODN联合5-Fu对胃癌细胞增殖的影响;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率和细胞周期;RT-PCR及免疫组化方法检测c-myc基因表达变化;建立荷瘤小鼠模型,通过皮下瘤体内注射药物观察肿瘤体积和抑瘤率的变化.结果:c-myc反义寡核苷酸联合5-Fu可显著抑制细胞增殖,细胞凋亡率(23.4±1.9)%,较单用c-myc反义寡核苷酸(10.6±1.1)%和5-Fu(12.5±1.0)%的抑制作用更为显著(P<0.01);RT-PCR及免疫组化显示ASODN和5-Fu均使c-mycmRNA和蛋白表达下降;体内实验显示c-myc反义寡核苷酸联合5-Fu可明显减少肿瘤体积,抑制肿瘤生长,抑瘤率达46.7%;较单一治疗组明显(P<0.05).结论:c-myc基因反义寡核苷酸联合5-Fu能明显抑制胃癌MKN-45细胞增殖、诱导细胞凋亡和下调c-myc蛋白水平;且可有效抑制人胃癌裸鼠皮下肿瘤的生长.

反义c-myc寡核苷酸对hTERT蛋白表达抑制作用的研究

目的探讨脂质体LipfectAMINETM(LR)介导的反义c-myc寡核苷酸(ASODN)对乳腺癌MCF-7细胞hTERT蛋白表达的抑制作用。方法应用免疫细胞化学ABC法检测转染反义、正义及未转染细胞中hTERT蛋白的表达情况。结果免疫细胞化学显示转染反义、正义与未转染细胞的hTERT蛋白表达分别为23%、96%、99%(P<0.01),表明转染反义c-myc的MCF-7细胞hTERT蛋白表达明显降低。结论反义c-myc寡核苷酸可以抑制hTERT蛋白的表达。

c—myc反义寡核苷酸对大鼠半乳糖性白内障形成的影响

白内障是眼科常见病，是主要的致盲性眼病之一。国内外学者正在积极探索治疗白内障的有效方法。随着分子生物学技术的快速发展，白内障的基因治疗已经进入人们的研究范围。癌基因的异常表达与晶状体上皮细胞（1ens epithelial cell，LEC）的增殖分化密切相关，而LEC的增殖分化是白内障发生发展的病理基础。许多研究结果表明，

可溶性支架转染c-myc基因反义寡核苷酸对静脉桥c-myc基因mRNA表达的影响

目的选择c-myc为靶基因,在兔颈总动脉颈外静脉移植模型中采用可溶性支架将反义c-myc寡核苷酸转染静脉桥,旨在从核酸mRNA水平明确c-myc基因在静脉桥再狭窄机制中的作用。方法新西兰大耳白兔随机分成5组,每组10只动物。①空白对照组;②单纯可溶性支架组;③正义寡核苷酸可溶性支架组;④反义寡核苷酸可溶性支架组;⑤不匹配寡核苷酸可溶性支架组。建立兔颈外静脉颈总动脉旁路移植术模型,合成c-myc寡核苷酸,处理可溶性支架,依组别不同,在静脉移植时静脉桥管腔内分别置入:①空白对照;②单纯可溶性支架;③反义寡核苷酸可溶性支架;④正义寡核苷酸可溶性支架;⑤不匹配寡核苷酸可溶性支架;于颈外静脉移植后7天、28天和90天取出静脉桥。采用原位杂交及NorthernBlot,半定量及定量地检测各组静脉桥中c-myc基因mRNA表达水平。结果原位杂交:同时间段反义寡核苷酸组细胞胞浆与胞核内c-myc基因mRNA的表达明显降低,其他各组静脉桥c-myc基因mRNA强烈表达,斑点杂交及Northern杂交印迹扫描数值显示7天、28天、90天空白对照组、空白支架组、正义组、错配组RNA的表达显著强于同时间点的反义寡核苷酸组RNA表达水平,而同时间点除外反义寡核苷酸可溶性支架组的其他各组之间无差异。结论可溶性支架转染c-myc基因反义寡核苷酸可显著抑制移植物内c-myc基因的表达。

超声联合反义c-myc寡核苷酸对移植静脉内膜增生的影响

目的观察超声辐照联合局部应用反义c-myc寡核苷酸对移植静脉内膜增生的影响,以期寻找防治内膜增生的新方法。方法将24只兔随机分为4组,对照组、超声辐照组、反义核苷酸组、超声辐照加反义核苷酸组,每组6只,建立兔自体颈内静脉移植替代颈总动脉模型。超声辐照组术后当天至第7天使用超声(2.190 W/cm2,0.8 MHz)辐照移植血管段,反义核苷酸组局部转染反义c-myc寡核苷酸。观察移植静脉的组织形态学改变;增殖细胞核抗原(PCNA);反转录PCR(RT-PCR)检测移植血管段c-myc基因的表达。结果术后第4周超声辐照组、反义核苷酸组、超声辐照加反义核苷酸组内膜厚度、PCNA阳性细胞数、c-myc基因表达均明显低于对照组(P<0.01)。结论超声辐照和局部转染反义c-myc可以降低平滑肌细胞的增殖和减轻内膜增生,可作为静脉移植后再狭窄的防治方法。

反义c-myc寡核苷酸抑制大鼠胸腺淋巴细胞增殖

目的 :观察反义c-myc寡核苷酸对大鼠胸腺淋巴细胞增殖的抑制作用。方法 :Ficoll密度梯度离心法分离大鼠胸腺淋巴细胞。利用Iipofectin将正义、反义及错配c -myc寡核苷酸导入大鼠胸腺淋巴细胞 ,[3 H]-TdR掺入法及MTS法检测淋巴细胞增殖 ,RT -PCR检测c-mycmRNA的表达。结果 :反义c-myc寡核苷酸可抑制大鼠胸腺淋巴细胞的增殖 [(0 14± 0 0 3)Avs (0 32± 0 16 )A ,P <0 0 5 ],但此抑制作用无浓度依赖性 ,反义c -myc寡核苷酸可降低胸腺淋巴细胞c-mycmRNA的表达。结论 :反义c -myc寡核苷酸可抑制大鼠胸腺淋巴细胞的增殖。

反义c-myc寡核苷酸对大鼠气道平滑肌细胞周期的阻滞作用

目的 :观察反义c myc寡核苷酸对大鼠气道平滑肌细胞周期的影响 .方法 :大鼠气道平滑肌细胞原代培养后 ,以Lipofectin将反义、正义和错配c myc寡核苷酸导入平滑肌细胞 ,流式细胞技术检测细胞周期 ,免疫组织化学方法检测cy clinD1和cyclinE的表达 .结果 :反义c myc寡核苷酸可明显抑制大鼠气道平滑肌细胞通过S期 ,正义及错配c myc寡核苷酸对细胞周期无明显影响 ;反义c myc寡核苷酸抑制了大鼠气道平滑肌细胞cyclinD1和cyclinE的表达 .结论 :反义c myc寡核苷酸可抑制大鼠气道平滑肌细胞通过S期 ,抑制cy

c-myc反义寡核苷酸对胃癌MKN-45细胞株增殖的影响

目的观察c-myc反义寡核苷酸对胃癌MKN-45细胞株增殖的抑制作用。方法用四甲基偶氮唑盐法评价脂质体介导c-myc反义寡核苷酸对细胞增殖的影响,免疫细胞化学ABC方法检测转染后c-myc蛋白表达;荧光显微镜观察细胞凋亡;流式细胞仪分析细胞凋亡。结果c-myc基因反义寡核苷酸转染MKN-45细胞后,可以显著抑制细胞增殖,其抑制作用具有剂量依赖性;流式细胞仪分析结果显示,转染后能诱导胃癌细胞凋亡,G_0/G_1期细胞增多;免疫细胞化学显示c-myc蛋白水平明显降低,阳性表达率为64．9%±5．68%。结论c-myc基因反义寡核苷酸能明显抑制胃癌MKN-45细胞增殖、诱导细胞凋亡和下调c-myc蛋白水平。

可溶性支架转染c-myc基因反义寡核苷酸对静脉移植物c-myc及PCNA表达的影响

目的采用可溶性支架将原癌基因c-m yc反义寡核苷酸转染静脉移植物,观察其对静脉移植物内c-m yc蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白产物表达的影响。方法50只新西兰大耳白兔建立兔颈外静脉颈总动脉旁路移植模型后随机分成5组,每组10只。对照组:无支架;组1:植入单纯可溶性支架;组2:植入正义c-m yc寡核苷酸可溶性支架;组3:植入反义c-m yc寡核苷酸可溶性支架;组4:植入不匹配c-m yc寡核苷酸可溶性支架。于静脉移植后7d、28d和90d取出静脉移植物,采用免疫组织化学方法检测其c-m yc蛋白和PCNA蛋白的表达。结果对照组、组1、组2、组4静脉移植术后7d、28d、90d时静脉移植物内膜和中膜内可见大量c-m yc蛋白和PCNA蛋白表达阳性的细胞,与同时间点组3比较差别均有统计学意义(P<0.01)。28d、90d时5组静脉移植物内c-m yc蛋白的表达与同组7d时比较明显增强(P<0.01)。结论可溶性支架转染c-m yc反义寡核苷酸可显著抑制静脉移植物内c-m yc蛋白和PCNA蛋白的表达。

C-myc反义寡核苷酸对结肠癌细胞SW480增殖及凋亡的影响

目的:观察脂质体介导的c-myc正反义寡核苷酸对结肠癌细胞SW480增殖和凋亡的影响。方法:通过脂质体将c-myc反义寡核苷酸转入人结肠癌细胞SW480,westernblot动态监测c-myc蛋白的表达情况,MTT法、流式细胞仪测定c-myc正反义寡核苷酸对SW480细胞增殖和凋亡的影响。结果:c-myc反义核苷酸对SW480细胞有明显的促进凋亡和抑制增殖的作用,而正义寡核苷酸没有这样的作用。结论:c-myc反义核苷酸具有明显的抗肿瘤作用,可以抑制肿瘤细胞生长,促进肿瘤细胞凋亡,可能成为治疗肿瘤的药物。

磷酸胆碱聚合物载反义c—myc寡核苷酸对兔髂动脉球囊损伤后血管狭窄的影响

目的探讨局部转运磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70载反义c—myc寡核苷酸（c—mycAS—ODN）基因复合物对兔髂动脉球囊损伤后血管狭窄的影响。方法40只家兔随机分为对照组、多聚赖氨酸（PLL）组、裸c—mycAS—ODN组、PLL载基因复合物N／P=3：1组和N／P=5：1组，每组各8只。构建兔髂动脉球囊损伤模型，于血管损伤段行PLL、c—mycAS—ODN、PLL载N／P=3：1和N／P=5：1基因复合物的局部转运。24h后应用共聚焦显微镜观察基因复合物在髂动脉的分布情况；4周后苏木精-伊红染色光镜下观察髂动脉的组织形态学变化，包括新生内膜面积（NIA）、中膜面积（MA）和新生内膜／中膜面积比（I／M）；Western blot法检测各组损伤血管处c—myc蛋白的表达情况。结果共聚焦显微镜可见转染N／P=3：1、N／P=5：1基因复合物的血管内膜有均匀的绿色荧光分布。苏木精-伊红染色光镜下对照组、PLL组、裸c—mycAS—ODN组均可见显著的内膜增生，组间比较NIA、I／M无显著性差异（P〉0．05）；与对照组比较，N／P=3：1组和N／P=5：1组NIA、I／M均明显减少（P〈0．05），后两组间比较无显著性差异（P〉0．05）。Western blot显示对照组、PLL组、裸c—mycAS—ODN组c—myc蛋白表达均明显增高，组间比较无显著性差异（P〉0．05）；与对照组比较，N／P=3：1组和N／P=5：1组c—myc蛋白表达明显减少（P〈0．05），后两组间比较无显著性差异（P〉0．05）。结论多聚赖氨酸可促进MPC30-DEA70／c—myc AS—ODN复合物进入髂动脉血管，有效抑制球囊损伤后新生内膜的过度增生，为基因治疗血管内狭窄提供了新型的非病毒类转基因手段。