淫羊藿苷对BALB/c-nu裸小鼠雄激素依赖性前列腺癌雄激素受体信号转导通路的影响

目的研究淫羊藿苷对BALB/c-nu裸小鼠雄激素依赖性前列腺癌雄激素受体信号转导通路(P13K/Akt)的影响。方法将40只雄性BALB/c-nu裸小鼠随机均分为对照组、模型组、抑制剂组和实验组(n=10),除对照组外均采用前列腺内注射人前列腺癌细胞株(LNCaP)悬液(2×107个/mL)的方法建立LNCa P模型,2周后,4组均采用尾静脉注射相应药物的方法治疗28 d。采用Western blotting法检测前列腺癌变组织雄激素受体剪接变异体7(AR-V7)、磷酸化蛋白激酶(p-Akt)和磷酸化雄激素受体(p-AR)蛋白表达;FITC-CY3法检测钙黏蛋白E(E-cadherin)和降钙素(Calcitonin)阳性率。结果与模型组比较,实验组p-Akt及p-AR蛋白均低表达(P<0.05),而Calctionin及AR-V7的阳性率均明显降低(P<0.05),E-cadherin的阳性率明显升高(P<0.05)。结论淫羊藿苷通过调控P13K/Akt信号转导通路相关因子表达而抑制LNCa P侵袭和转移。

A549肺腺癌细胞株BALB/C-nu/nu裸鼠骨转移模型的建立

目的探讨A549肺腺癌细胞株裸鼠骨转移模型建立的可行性.方法选择健康6~8周龄Balb/c-nu/nu裸鼠20只,将20只Balb/c-nu/nu裸鼠采用经皮左心室内注射法,将A549肺腺癌细胞株接种于裸鼠体内,接种后饲养观察Balb/c-nu/nu裸鼠的成瘤情况.结果全部裸鼠均完成经皮心脏肺腺癌细胞的种植,共造模成功12只,占到全部裸鼠的60%.造模成功的裸鼠成瘤天数经SPSS分析,结果符合正态分布,得出裸鼠成瘤天数的均值、标准差、及可信区间.结论通过经皮左心室内注射A549肺腺癌细胞株,建立Balb/c-nu/nu裸鼠肺腺癌骨转移模型,方法可行性强,科学可靠,成膜率高,可用于肺腺癌骨转移发病机制的研究.

淫羊藿素对BALB/c-nu裸鼠前列腺癌组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路及E-钙黏蛋白的影响

目的观察淫羊藿素对雄激素依赖型前列腺癌模型小鼠前列腺癌组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路及E-钙黏蛋白的影响并探讨其机制。方法雄性BALB/c-nu裸鼠40只,随机分为空白对照组、荷瘤组、LY294002组和淫羊藿素组,每组10只,除空白对照组外均采用含有2×107个/mL的人LNCaP前列腺癌细胞悬液前列腺内注射以建立前列腺癌LNCaP荷瘤鼠模型。2周后淫羊藿素组按80 mg/kg剂量尾静脉注射淫羊藿素治疗4周,PI3K/Akt抑制剂组尾静脉注射PI3K/Akt抑制剂LY294002,空白对照组、荷瘤组尾静脉注射等体积生理盐水。治疗结束后取前列腺组织,采用Western blotting检测磷酸化雄激素受体AR(p-AR)、磷酸化蛋白激酶(p-Akt)、雄激素受体剪接变异体7(AR-V7);免疫荧光双重染色(FITCCY3)法检测降钙素(Calcitonin)和钙黏蛋白E(E-cadherin)表达。结果荷瘤组前列腺组织p-AR和p-Akt均高表达,前列腺瘤组织芯片标本中AR-V7和Calctionin阳性率分别为(32.45±2.15)%和(46.31±5.01)%,E-cadherin阳性率(22.93±1.96)%,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。淫羊藿素组前列腺组织p-AR和p-Akt低表达,AR-V7和Calctionin阳性率分别为(17.02±1.23)%和(29.76±2.74)%,E-cadherin阳性率为(86.27±6.75)%,与荷瘤组比较差异有统计学意义(P<0.05)。LY294002组和淫羊藿素组组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论淫羊藿素具有调控P13K/Akt信号通路的作用,主要通过调控p-AR、pAkt、AR-V7和Calctionin水平而影响前列腺癌LNCa P细胞侵袭和转移。

苯并[a]芘恶性转化细胞THBEc1致裸小鼠原位肺癌模型的构建及血清人源神经纤维网蛋白2对该模型的诊断价值

目的建立苯并[a]芘(BaP)恶性转化人支气管上皮细胞T-16HBE-C1(THBEc1)的裸小鼠原位肺癌模型,评估血清人源神经纤维网蛋白2(NRP2)对该模型的诊断价值。方法12只雄性ICR小鼠随机分为3组,右肺分别一次性注射无菌生理盐水20,30和40μL,观察14 d内小鼠死亡数,以确定小鼠肺内注射安全体积。16只雄性BALB/c-nu裸小鼠随机分为4组:对照组[皮下和肺内同时一次性接种人支气管上皮16HBE(HBE)细胞,皮下1×10^(6),肺内2×10^(5)]、皮下荷瘤模型组(皮下一次性接种THBEc1细胞1×10^(6))、原位肺癌模型组(肺内一次性接种THBEc1细胞2×10^(5)或5×10^(5))。接种后每7 d监测小鼠体重和皮下肿瘤体积;HE染色检测肺肿瘤和皮下肿瘤组织病理特征,计算成瘤率;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测裸小鼠血清和胸水中人源NRP2水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线确定血清人源NRP2对THBEc1细胞导致的裸小鼠原位肺癌模型的诊断价值。结果肺内注射40μL无菌生理盐水可致2/4小鼠死亡,20和30μL组未见小鼠死亡,但整体表现欠佳,故后续实验注射体积选择20μL。对照组裸小鼠均未在接种部位检出肿瘤,小鼠体重持续增长;皮下荷瘤模型组祼小鼠全部成瘤,体重显著低于对照组(P<0.05)。接种细胞后第10天,原位肺癌模型5×10^(5)细胞组裸小鼠全部成瘤(4/4);第14天,原位肺癌模型2×10^(5)细胞组裸小鼠3/4成瘤,且2个剂量组小鼠体重均低于对照组(P<0.01,P<0.05),肿瘤组织均呈鳞状细胞癌特征。ELISA结果显示,对照组裸小鼠血清人源NRP2水平均显著低于皮下荷瘤模型(4只)和原位肺癌模型(7只)裸小鼠(P<0.05)。原位肺癌模型组(4只)裸小鼠胸水中均可检出高水平的人源NRP2。ROC曲线显示,血清人源NRP2水平能有效区分THBEc1细胞在裸小鼠肺内是否成瘤,最佳截断值为123.00 ng·L^(-1)。结论通过肺内注射接种THBEc1细胞建立了裸小鼠原位肺癌模型,血清人源NRP2可用于该模型诊断。

淫羊藿素对BALB/c-nu裸小鼠人源性前列腺癌模型的影响

目的探讨淫羊藿素抑制人源性前列腺癌LNCaP细胞珠BALB/c-nu裸小鼠荷瘤组织磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(P13K/Akt)信号通路及其相关蛋白磷酸化的可能机制。方法将40只雄性BALB/c-nu裸小鼠按随机对照原则均分为4组[对照组、前列腺癌(PCa)组、阳性药组和实验组]并采用前列腺内注射LNCaP细胞株构建PCa动物模型。实验组每日按0.1 mL/10 g尾静脉注射0.8%淫羊藿素,阳性药组按0.1 mL/10 g尾静脉注射P13K/Akt抑制剂LY294002,对照组和PCa组注射等体积生理盐水。注射4周后比较裸小鼠体质量、前列腺瘤体湿重、体积及P13K/Akt信号通路相关蛋白表达。结果与PCa组比较,实验组前列腺瘤体湿重、体积、P13K、 p-Akt、磷酸化雄激素受体(p-AR)、雄激素受体剪接变异体7(AR-V7)和降钙素(Calcitonin)均较模型组降低(P<0.05),而钙黏蛋白E(E-cadherin)升高(P<0.05)。结论淫羊藿素通过调节PI3K/Akt信号通路抑制PCa的进展,且这一作用与Akt及AR磷酸化有关。

HL60/VCR耐药细胞荷瘤鼠模型的建立

目的建立白血病HL60/VCR耐药细胞株移植动物模型方法。方法将生长状态良好的耐药细胞株HL60/VCR1.0×107/0.2ml接种到BALB/c-nu/nu裸小鼠皮下,定期观察裸鼠生长状况,测量移植瘤大小,留取标本检测不同脏器肿瘤负荷及多药耐药基因MDR1表达情况。结果 2.0×106HL60/VCR细胞皮下接种BALB/c-nu/nu裸小鼠,成瘤率为67.7%,免疫组化检测荷瘤裸鼠肝脏和脾脏均可见巢状分布白血病细胞,PCR检测成瘤组织表达MDR1基因。结论皮下移植可成功建立耐药细胞株荷瘤鼠模型,为研究多药耐药细胞株动物体内生物学行为及逆转多药耐药提供了动物模型。

人鼻咽癌CNE－2Z细胞的不同转移潜能克隆株在严重联合免疫缺陷小鼠体内的检验和比较研究

将人类鼻咽癌不同克隆株的细胞悬液移植在严重联合免疫缺陷（ＳＣＩＤ）小鼠和ＢＡＬＢ／ｃ（ｕｎ／ｕｎ）裸小鼠的颈背侧皮下，５６ｄ后处死全部动物进行观察。结果发现，在ＳＣＩＤ小鼠体内移植后ＣＮＥ２Ｌ２为高转移克隆株，其淋巴结转移率为１００％，肺转移率为７１％；而ＣＮＥ２Ｌ４为低转移克隆株，其肺转移率为１３％，淋巴结未见癌转移。这是从１个细胞母系中新筛选出的１个高转移和１个低转移的癌细胞克隆株。实验结果还显示，同ＢＡＬＢ／ｃ（ｕｎ／ｕｎ）裸小鼠相比，ＳＣＩＤ小鼠的恶性表型的表达能力高。另外，皮下移植时肿瘤细胞的数量可能与转移表型的表达有相关性，移植的瘤细胞数越多，转移率越高，反之亦然。

BALB/c裸小鼠繁育的实验观察

在自制的隔离器内观察温度、昼夜明暗时间和相对湿度的变化对 BALB/c裸小鼠繁育的影响 ,经过 1 4个月的实验观察得出如下结论 :在隔离器内 ,温度为 2 5～ 2 7℃、昼夜明暗交替时间为 1 0∶ 1 4 h、相对湿度为 40 %～ 45%时 ,BALB/c裸小鼠的妊娠率为 95%、仔鼠离乳率其中纯合子 (nu/nu)为 98% ,杂合子 (nu/+)为 1 0 0 %、成年鼠死亡率为 0、出生仔鼠中纯合子与杂合子比率分别为 56%和 44% ;在实验变化范围内 ,温度、昼夜明暗交替时间和相对湿度的变化对成年鼠(雄性纯合子、雌性杂合子 )

中脑中缝核和5-HT在电针抑制cAMP诱发的家兔皮层痫样电活动中的作用

本实验观察到电针对cAMP所诱发的家兔皮层痫样电活动的抑制作用,可被赛庚啶、电解损毁中脑中缝核所消除或减弱;电刺激中脑中缝核则有与电针抑痛相似的效应;提示中缝核的5—HT能神经元可能参与电针抑痫效应。

电刺激尾核头部对隐神经A类和C类纤维传入诱发体感皮层电反应的影响

实验用猫，在氯醛糖麻醉、三碘季铵酚制动下，用方波电脉冲刺激隐神经，配合极化电流阻断技术分别引起隐神经Ａ和Ｃ类纤维兴奋，在对侧大脑皮层ＳⅠ区和ＳⅡ区记录平均诱发电位（分别同称为Ａ－ＳⅠＥＰ、Ａ－ＳⅡＥＰ、Ｃ－ＳⅠＥＰ、Ｃ－ＳⅡＥＰ）。用双极同心圆电极刺激尾核头部不同部位。实验结果表明，只有刺激同侧尾核头部内侧浅表部位，才对Ｃ－ＳⅠＥＰ，Ｃ－ＳⅡＥＰ，Ａ－ＳⅡＥＰ有抑制作用，提示尾核头部对大脑皮层不同躯体感觉代表区有不同的调制作用，对ＳⅠ区Ｃ类纤维传入信息有独特的抑制作用。

CEA阳性细胞系的鉴定及其荷瘤小鼠模型建立

目的鉴定HT-29、MKN-45及Hela细胞系中CEA的阳性表达率,并分别建立3个细胞系对应的荷瘤小鼠肿瘤模型,分析其成瘤特性。方法采用RT-PCR、western blot检测HT-29、MKN-45及Hela细胞中的CEA表达情况,采用免疫荧光实验检测3株细胞系的CEA蛋白表达情况。以2×10^(7)/ml细胞浓度接种小鼠建立动物模型,观察荷瘤小鼠生长情况并记录肿瘤大小,对其成瘤特性进行分析。结果CEA蛋白在HT-29、MKN-45细胞中表达,而在Hela细胞中不表达,CEA蛋白主要存在于细胞的胞质中。MKN-45荷瘤小鼠的成瘤潜伏期为(6.3±1.5)d,HT-29成瘤潜伏期为(6.0±2.2)d,而Hela细胞的成瘤潜伏期为(10.0±1.6)d。MKN-45、HT-29细胞的成瘤时间明显短于Hela细胞。结论CEA在HT-29、MKN-45细胞中表达,而在Hela细胞中不表达。成功建立了3株细胞对应的荷瘤小鼠模型,为CEA阳性肿瘤的发病基础以及治疗提供了动物模型基础。

HCN4、Cx43在电击死者窦房结组织中的表达变化

目的研究电击死者心脏窦房结组织中超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4(hyperpolarizationactivated cyclic nucleotide-gated cation channel 4,HCN4)及连接蛋白43(connexin43,Cx43)表达的变化。方法选择2010—2013年徐州医学院病理学教研室尸体解剖中有明确电流斑的电击死者34例作为电击死组,并设交通事故颅脑损伤死者20例作为对照组。应用免疫组织化学法检测HCN4和Cx43在心脏窦房结组织中的表达。结果 HCN4阳性细胞表达于窦房结细胞膜及细胞质中,Cx43阳性细胞表达于窦房结T细胞及心肌细胞的细胞膜及细胞质中。电击死组HCN4的表达高于对照组(P<0.05),Cx43的表达低于对照组(P<0.05)。结论电击死者窦房结组织中HCN4和Cx43表达的变化,说明电击死可能与心脏电生理的改变及冲动传导改变有关。

C形传热管大空间自然对流换热研究

C形换热器的结构具有特殊性,有必要对其处于大空间中的自然对流换热机理进行研究。以单C形传热管作为研究对象,用CFD分析技术,对管外流体的流动和热边界层进行分析,得到与直管自然对流换热之间的差异。对C形传热管在大空间中自然对流换热稳态时的总体换热进行研究,引入变量L/H,与Ra数相结合,得到两者与Nu之间的关系式,通过数据拟合得到一定范围内C形传热管自然对流Nu的计算关系式。

HBV preS2起始区反义核酸对人肝癌细胞在裸鼠体内生长的抑制作用

PCR合成互补于HBVpre S2起始区的反义寡核苷酸 (as preS2 ) ,以HBVDNA转染的HepG2 2 15细胞接种裸鼠制备人肝癌模型 ,通过连续用药、一次性用药、混合用药等三种途径研究其对人肝癌裸鼠模型的抑瘤生长及体内抗HBV作用。流式细胞术 (FCM)分析asON诱导瘤细胞凋亡作用 ,ELLSA法检测反义核酸作用裸鼠血清中HBV抗原含量的变化。结果显示 ,一次性与混合用药组裸鼠均表现为成瘤潜伏期延长 ,成瘤率明显低于瘤细胞对照未用药组 (P <0 0 5 ) ,瘤体生长缓慢。裸鼠瘤内连续用药 ,在 48hFCM测凋亡峰值为 39 5 7%,S期细胞降低显著 ,生理盐水与无关序列对照分别为 7 92 %、10 89%,提示as preS2可能诱导S期细胞凋亡。as preS2对荷瘤鼠HBeAg和HB sAg的抑制率分别为 45 %和 6 5 %。提示 ,as preS2可有效抑制体内HBV抗原表达 ,对人肝癌裸鼠在体内的生长有明显的抑制作用。

人脐血细胞在肝损伤裸鼠体内向肝细胞的分化

目的探讨在制备的肝损伤模型中人脐血单个核细胞向肝细胞的分化能力。方法采用腹腔注射CCl4和5-氟尿嘧啶的方法制备肝损伤模型,将分离的脐血单个核细胞以2×107/ml经尾静脉注射入裸鼠体内。4周后处死裸鼠取肝组织。以RT-PCR方法对ALB、AFP mRNA的表达进行检测;并用免疫组织化学SP染色检测人HSA、PCNA、ALB的表达情况。结果RT-PCR显示ALB、AFP mRNA在人肝组织移植组中表达呈阳性,而在损伤未移植组和正常对照组表达为阴性;免疫组织化学染色表明,在裸鼠肝实质区域出现人HSA、PCNA和ALB阳性表达细胞。结论人脐血单个核细胞在裸鼠体内确有向肝细胞分化的趋势。

裸鼠糖尿病模型的建立及皮下异种胰岛移植研究

目的探讨链脲左菌素(STZ)建立BALB/c nu/nu裸鼠Ⅰ型糖尿病模型的方法,及将大鼠胰岛分离纯化后移植至糖尿病裸鼠皮下,对移植后裸鼠进行疗效评价。方法选用Balb/c裸鼠分为三组:糖尿病且胰岛移植组、糖尿病胰岛未移植组和正常组;用STZ对裸鼠进行糖尿病建模,大鼠胰岛分离、纯化后移植至糖尿病裸鼠背部皮下,进行血糖、体重和HE染色考察,以糖尿病未移植组和正常组作对照。结果STZ浓度175 mg/kg时,腹腔注射裸鼠糖尿病造模成功率高,纯化的大鼠胰岛活性较好,但移植后疗效平均维持时间约5 d,移植第5 d的OGTT结果显示胰岛皮下移植组和糖尿病组血糖均较正常组高,移植3 d时HE染色显示胰岛在皮下存活,但胰岛中心部位细胞有坏死。结论本研究建立了一种免疫排斥缺陷宿主异种胰岛皮下移植治疗糖尿病的方法,为进一步探索改进胰岛移植研究提供参考。

中药“参阳”方对人舌鳞癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤作用

目的:前瞻性研究表明,中药“参阳”方能够延长口腔癌患者的生存期并提高生存率,但其抗癌机制尚不十分明确。本研究的主要目的是观察中药“参阳”方对人舌鳞癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤作用,并探讨其可能的作用机制。方法:将体外培养的人舌鳞癌细胞系Tca8113细胞接种于裸鼠皮下,建立人舌鳞癌移植瘤模型,共48只,随机分为4组:“参阳”方A组、B组、阳性对照组和阴性对照组。采用灌胃方法进行药物干预,共30d,观察各组的抑瘤效果及对裸鼠一般状况、生存时间和脾脏指数的影响。结果:每只鼠每天喂养“参阳”方72.8mg,能轻度抑制Tca8113细胞移植瘤的生长,抑瘤率为22.04%;裸鼠的脾脏指数明显提高(t检验,P<0.05);生命延长率为18.9%。主要脏器的组织学检查未见病理改变,表明所用剂量药物无明显的毒副反应。结论:“参阳”方对荷瘤鼠的直接抗癌作用较弱,其对口腔鳞癌的治疗作用可能是通过调节机体的免疫功能而实现。

盐酸川芎嗪在3种SPF动物皮肤上的透过作用

目的 通过比较盐酸川芎嗪在SPF实验动物BALB c裸鼠、KM小鼠、SD大鼠皮肤上的透过情况 ,为寻找用于体外渗透实验比较适合的SPF动物的皮肤提供依据。方法 用两室扩散池体外透皮实验装置 ,以皮肤为屏障 ,分别测定盐酸川芎嗪对不同种类、不同部位动物皮肤的渗透系数和贮库效应。结果 3种动物背部之间、腹部之间对川芎嗪的透皮吸收作用差异均有显著性 ,其中以裸鼠背、腹部的渗透系数最高 ;同一种动物背部皮肤的透皮吸收效果要优于腹部皮肤 ;BALB c裸鼠皮肤的贮库效应明显强于SD大鼠皮肤 ;每一种动物的背部皮肤的贮库效应强于腹部皮肤。结论 常用的SPF实验动物中 ,裸鼠背部皮肤做体外渗透实验较为理想。

封闭群草原兔尾鼠正常血液生化指标的测定

利用雅培 (AEROSET)全自动血液生化测定仪对封闭群草原兔尾鼠 2 3项血液正常生化指标进行了测定。与昆明小鼠、BALB c nu小鼠、Wistar大鼠、人的正常值相比较 ,该种实验动物血液正常生化指标具有以下特点 :①总蛋白 (TPROT)、白蛋白 (ALB)、球蛋白 (GLOB)、总胆红素 (TBILI)、直接胆红素 (DBILI)、间接胆红素 (IBILI)、尿素氮 (UREA)、二氧化碳 (CO2 )、甘油三脂 (TG)、胆固醇 (CHOL)、钠 (Na)、氯 (Cl)、镁(Mg)、总钙 (TCA)的测定值 ,五者间无显著性差异 (P >0 0 5 ) ;②封闭群草原兔尾鼠与昆明小鼠相比 ,谷草转氨酶 (AST)、谷丙转氨酶 (ALT)、糖 (GLU)、钾 (K)、磷 (P3 + )存在显著性差异 (P <0 0 1或P <0 0 5 ) ;③封闭群草原兔尾鼠与BALB c nu小鼠相比 ,谷草转氨酶 (AST)、谷丙转氨酶 (ALT)、碱性磷酸酶 (ALP)、糖 (GLU)测定值 ,存在显著性差异 (P <0 0 1或P <0 0 5 ) ;④封闭群草原兔尾鼠与Wistar大鼠相比 ,谷草转氨酶、谷丙转氨酶、钾、糖测定值 ,存在显著性差异 (P <0 0 1或P <0 0 5 ) ;⑤封闭群草原兔尾鼠与人相比 ,谷草转氨酶、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶 (LDH)、肌肝 (CREAT)、尿酸 (UA)、钾 (K)存在显著性差异 (P <0 0 1或P <0 0 5 )。结果表明

三叶青乙酸乙酯提取物对结肠癌HT29细胞皮下移植瘤的诱导凋亡作用

目的:观察三叶青乙酸乙酯提取物对结肠癌HT29细胞皮下移植瘤的诱导凋亡作用,探讨其可能的作用机制,为三叶青在临床上应用于结肠癌的治疗提供实验依据。方法:以HT-29结肠癌细胞荷瘤裸鼠为模型。实验分5组,模型组、阳性对照组及三叶青提取物低、中、高剂量组,各组裸鼠给予相应药物或生理盐水灌胃14 d。观察各组裸鼠的一般情况,以及对HT29细胞皮下移植瘤的抑瘤率;HE染色后观察肿瘤组织细胞形态学改变,免疫组织化学方法检测瘤组织内Caspase-3的蛋白表达水平。结果:三叶青提取物中、高剂量组及阳性组瘤重较模型组减轻(P<0.05),阳性组瘤重最轻;中药各组随着剂量的增加,抑瘤率上升。与模型对照组比较,各给药组荷瘤鼠瘤细胞凋亡程度增强;三叶青提取物中、高剂量组瘤组织Caspase-3蛋白表达水平显著上调。结论:三叶青乙酸乙酯提取物可抑制结肠癌HT29细胞皮下移植瘤的生长,作用机制之一为上调Caspase-3蛋白的表达,诱导结肠癌HT29细胞皮下移植瘤凋亡。