舒肝解郁胶囊联合莫沙必利对功能性消化不良大鼠胃黏膜CRF、C⁃KIT表达的影响

目的观察舒肝解郁胶囊联合莫沙必利对功能性消化不良大鼠胃黏膜CRF、C⁃KIT表达的影响。方法建立功能性消化不良(FD)大鼠模型,30只Wistar雄性大鼠随机分为空白组、模型组、舒肝解郁+莫沙必利组,每组10只,灌胃2周。灌胃结束后处死大鼠,记录大鼠体质量变化、胃残留率,免疫组化及Western blot检测胃组织CRF、C⁃KIT的表达。结果与空白组比较,模型组体质量下降、胃残留率增加,胃组织CRF表达升高,C⁃KIT表达降低(P<0.05);与模型组比较,舒肝解郁+莫沙必利组体质量增加、胃残留率下降,胃组织CRF表达降低,C⁃KIT表达增加(P<0.05)。结论夹尾法及不规律饲养法可成功制备FD大鼠模型;舒肝解郁胶囊联合莫沙必利片可改善FD大鼠病症,其机制可能与下调胃CRF、上调胃C⁃KIT的表达相关。

c-KIT受体蛋白在犬皮肤肥大细胞瘤中的作用及其应用

皮肤肥大细胞瘤(MCT)是犬发生率较高的皮肤肿瘤类型之一,多发于老年犬,是危害犬类健康的重要疾病之一。c-KIT受体蛋白是一种跨膜蛋白,具有酪氨酸激酶活性,可调控肥大细胞的生长和分化。本文旨在阐明c-KIT受体蛋白在犬皮肤MCT中的作用及其应用,总结了c-KIT受体蛋白在肥大细胞增殖调控中的作用,深入探讨了c-KIT受体蛋白检测在犬皮肤MCT诊断中的应用价值,明确了c-KIT受体蛋白在犬皮肤MCT发生发展中的作用,同时也为进一步研究c-KIT受体蛋白在犬皮肤MCT中的发病机制提供了重要参考。

温胃阳汤对功能性消化不良大鼠肥大细胞活化及SCF/c-Kit信号通路的影响

目的:基于肥大细胞活化及干细胞因子(stem cell factor,SCF)/受体酪氨酸激酶c-Kit信号通路探讨温胃阳汤治疗大鼠功能性消化不良的作用机制。方法:将60只SD大鼠随机分为空白组,模型组,雷尼替丁组及温胃阳汤低、中、高剂量组,每组10只。空白组大鼠不予造模,其他各组采用夹尾刺激加不规则喂养复合番泻叶法建立大鼠功能性消化不良模型,模型建立后,空白组及模型组灌胃给予生理盐水,温胃阳汤低、中、高剂量组和雷尼替丁组则分别用温胃阳汤(0.743 g/mL、1.485 g/mL和2.970 g/mL)及盐酸雷尼替丁胶囊(3 g/L)灌胃。治疗结束后,以碳墨推进法测定小肠推进率;采用甲苯胺蓝染色观察大鼠十二指肠组织肥大细胞并计数;ELISA测定大鼠十二指肠中肥大细胞类胰蛋白酶(mast cell tryptase,MCT)和组胺(histamine,HA)的含量;RT-qPCR检测十二指肠中SCF和c-Kit mRNA的表达;Western blot和免疫组化检测十二指肠中SCF和c-Kit蛋白的表达水平。结果:与模型组相比,温胃阳汤治疗显著提高大鼠的小肠推进率(P<0.05);ELISA结果显示,温胃阳汤治疗可减少大鼠十二指肠黏膜组织肥大细胞数量及MCT和HA含量(P<0.05);Western blot和免疫组化结果表明,温胃阳汤治疗可上调大鼠十二指肠组织c-Kit和SCF蛋白的表达水平(P<0.05),增加SCF和c-Kit阳性细胞数(P<0.05);RT-qPCR结果显示,WWYD治疗可上调大鼠十二指肠组织c-Kit和SCF mRNA的表达(P<0.01)。而且,小肠推进率分别与MCT和HA含量呈负相关,与SCF和c-Kit的表达呈正相关。结论:温胃阳汤能促进大鼠十二指肠动力,其作用机制可能与抑制大鼠十二指肠MCT和HA的生成,及激活SCF/c-Kit信号通路有关。

基于drop-off ddPCR方法检测急性髓系白血病C-KIT基因N822位点突变及其临床应用

目的:建立急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)患者C-KIT基因N822位点突变的drop-off微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)定量检测方法,并评价其临床应用价值。方法:针对C-KIT基因第17外显子设计一对引物及探针,优化drop-off ddPCR反应条件及体系,评价该方法的特异性、灵敏度、重复性,使用所建立的方法对140例已行Sanger测序的AML初诊患者骨髓标本进行检测,并用二代测序(next generation sequencing, NGS)验证结果;用drop-off ddPCR对3例阳性患者化疗后C-KIT突变频率进行动态监测。结果:drop-off ddPCR检测C-KIT基因N822位点突变的最适退火温度为54℃,空白检测限为1.62拷贝数/μL,最低检测下限为10.12拷贝数/μL,线性良好。140例AML初诊患者样本中Sanger测序检出2例阳性(1.4%),而ddPCR共检出突变7例(5.0%),突变频率为0.29%~7.41%;进一步应用常规NGS方法对ddPCR阳性样本进行验证,共检出阳性3例(2.1%),等位基因频率为1.26%~8.00%。动态监测3例阳性患者C-KIT突变频率,结果显示治疗达完全缓解时C-KIT突变频率明显下降甚至降低至0。结论:本研究建立了检测C-KIT基因N822位点突变的drop-off ddPCR技术,具有良好的方法学检测性能,其灵敏度高于Sanger测序和NGS,有望用于阳性患者缓解后的可检测残留疾病监测及治疗指导。

哺乳动物毛色候选基因c-KIT的研究进展

哺乳动物的皮毛颜色主要受毛发中黑色素的种类和数量影响。c-KIT基因编码一种酪氨酸激酶跨膜受体,被称为肥大/干细胞生长因子受体,与黑色素生物合成相关。c-KIT基因突变会抑制干细胞生长因子受体功能,导致黑色素细胞的生成、成熟、增殖、分化和迁移等过程受到影响。本文就哺乳动物毛色形成的机制和主效基因、c-KIT基因的作用机理及其对哺乳动物毛色的影响进行综述,以期为深入研究哺乳动物毛色遗传机制以及不同毛色的选种和选育提供参考依据。

基于SCF/c-kit信号通路探讨理气通便方对气滞型慢传输型便秘大鼠肠道动力的影响

目的 基于SCF/c-kit信号通路探讨理气通便方对气滞型慢传输型便秘(STC)大鼠肠道动力的影响。方法 将36只Wistar雌性大鼠按随机数字表法分为对照组6只和造模组30只。造模组采用“洛哌丁胺混悬液+夹尾刺激”复制气滞型STC大鼠模型,连续刺激14 d。当大鼠表现出激惹、易怒、烦躁等情况,正常喂养饲料时出现大便干硬、排便数量减少等表现时,说明气滞型便秘模型造模成功。将造模成功的大鼠按照随机数字表法分为模型组、西药组、低剂量组、中剂量组和高剂量组各6只,低、中、高剂量组分别按5.15、10.3、20.6 g/(kg·d)给予理气通便方药液灌胃;西药组按0.18 mg/(kg·d)给予琥珀酸普芦卡必利片混悬液灌胃;对照组和模型组按10 mL/(kg·d)给予无菌水灌胃,每日1次,连续灌胃14 d。比较6组末次给药后6 h的粪便排出量、粪便含水量和小肠推进率;HE染色观察结肠组织病理变化;免疫组化检测结肠组织c-kit蛋白表达水平;Western blot检测结肠组织c-kit、SCF蛋白表达量。结果 HE染色显示:对照组大鼠结肠黏膜完整,杯状细胞和腺体排列整齐,未见炎症细胞聚集;模型组结肠黏膜出现肠腺排列欠整齐,黏膜下层间质血管扩张;各给药组结肠黏膜肠腺排列整齐,未观察到明显上皮损伤。与对照组比较,模型组粪便排出量、粪便含水量和小肠推进率均明显降低(P<0.05),结肠组织c-kit蛋白表达水平和c-kit、SCF蛋白表达量均明显降低(P<0.05)。与模型组比较,西药组、中剂量组、高剂量组粪便排出量、粪便含水率和小肠推进率均明显提高(P<0.05),低剂量组粪便排出量和粪便含水率均明显提高(P<0.05);给药组结肠组织c-kit蛋白表达水平均明显提高(P<0.05);低、中、高剂量组结肠组织c-kit蛋白表达量均明显提高(P<0.05),高剂量组SCF蛋白表达量明显提高(P<0.05)。结论 理气通便方可提高气滞型STC模型大鼠结肠组织中ICC的表达及调控SCF/c-kit信号通路,恢复对胃肠道节律的正常调控来改善便秘的症状。

基于SCF/C-kit信号通路探讨益髓破血方改善脑出血小鼠肠动力“通腑”作用机制

目的观察益髓破血方对脑出血小鼠排便情况与结肠组织干细胞因子(stem cell factor,SCF)/酪氨酸激酶受体(kit proto-oncogene,C-kit)信号通路的影响,探讨益髓破血方调节脑出血小鼠肠动力通腑作用机制。方法将54只SPF级健康雄性C57BL/6J小鼠随机均分为假手术组、模型组与方剂治疗组,采用鼠尾自体血注入法制作实验性脑出血模型,假手术组只进针不注射。方剂治疗组给予1 g/mL益髓破血方悬浊液灌胃,假手术组、模型组给予等体积生理盐水灌胃,每天1次。观察各组小鼠排便情况,记录第1天、第3天、第7天同时段6 h内的排便量以及末次灌胃后首次排便间隔时间,并于相同时间分段点处死小鼠取材,采用免疫组化和Western Blot法检测小鼠结肠组织中的SCF、C-kit蛋白。结果与假手术组比较,模型组小鼠第1天、第3天、第7天各6 h内排便量显著减少(P<0.05),末次灌胃首次排便时间明显滞后(P<0.05),结肠组织中SCF、C-kit蛋白表达显著减少(P<0.05),且随周期延长呈逐渐降低趋势;与模型组比较,方剂治疗组第1天、第3天、第7天各6 h内排便量相对增多(P<0.05),首次排便时间缩短(P<0.05),SCF、C-kit蛋白表达水平升高(P<0.05),且随时间推移逐渐向正常量恢复。结论益髓破血方干预治疗脑出血小鼠,可以增加肠动力,促进排便,发挥通腑作用使肠功能恢复,改善脑出血后便秘,其机制可能与SCF/C-kit信号通路有关。

二陈汤通过调控SCF/C-kit通路介导的痰湿型脑出血急性期胃肠功能障碍的研究

目的通过观察二陈汤对痰湿证脑出血急性期大鼠胃肠组织干细胞因子(stemcellfactor,SCF)/干细胞因子受体(C-kit)信号通路的动态变化的影响,探讨痰湿型体质与脑出血急性期胃肠功能障碍的关系及二陈汤的作用机制。方法将60只SD大鼠随机均分为空白组、假手术组、模型组、莫沙必利组(0.27 mg/d)、二陈汤低剂量组和二陈汤高剂量组(217、434 mg/d),每组10只。除空白组、假手术组外其余各组均采用自体血注入法制备大鼠脑出血模型,各组按剂量给予灌胃,空白组、假手术组、模型组给予生理盐水灌胃,每天2次,于给药7天处死大鼠,采用苏木精—伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察大鼠胃肠黏膜细胞形态变化,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR,RT-PCR)法和蛋白印迹(Western blot,WB)法检测大鼠胃、小肠组织中的SCF、C-kit蛋白及mRNA的表达水平。结果光镜下见空白组、假手术组大鼠胃肠黏膜细胞结构完整、形态规则,偶见轻微充血现象;模型组见组织细胞充血、水肿、炎性细胞浸润明显、组织糜烂;莫沙必利组及二陈汤低、高剂量组胃肠黏膜各层次欠清晰、排列不规则,部分组织可见组织细胞充血、水肿、炎性细胞浸润,此3组中以二陈汤低剂量组胃肠黏膜表现最为严重。模型组大鼠胃肠组织中SCF、C-kit mRNA表达水平较空白组、假手术组显著降低(P<0.05),莫沙必利组、二陈汤低剂量组、二陈汤高剂量组的表达增加(P<0.05),莫沙必利组和二陈汤高剂量组大鼠胃组织中的SCF mRNA表达显著增加(P<0.05),二陈汤高剂量组C-kit mRNA表达显著增加(P<0.05);小肠组织中的SCF、C-kit mRNA含量随二陈汤浓度提高而增加(P<0.05)。与模型组相比,莫沙必利组、二陈汤低、高剂量组大鼠胃肠组织中SCF、C-kit蛋白表达水平较模型组显著升高(P<0.05),三组中以莫沙必利及高剂量二陈汤效果更佳(P<0.05)。结论脑出血急性期痰湿型胃肠黏膜损伤及功能障碍的作用机制与SCF/C-kit信号通路相关蛋白及mRNA的表达降低有关,二陈汤可通过此机制进行有效干预,上调相关蛋白及mRNA的表达,有利于脑出血急性期胃肠功能障碍恢复。

鼠性成熟前期睾丸扭转对性成熟期健侧睾丸C-kit、PI3K表达的影响研究

目的 探究鼠性成熟前期睾丸扭转后,对处于不同状态的扭转睾丸,特别是扭转疑似坏死睾丸,采取何种手术方式(复位/切除),可最大限度地降低性成熟期健侧睾丸生精功能的损害。方法 采用Turner法制作鼠性成熟前期的睾丸扭转模型,56只3周龄雄性SD鼠,随机分成7组,每组8只。任选一组行假手术,作为对照组(CG);余6组分别制作扭转未坏死睾丸复位组(NNTR)/切除组(NNTO),扭转疑似坏死睾丸复位组(SNTR)/切除组(SNTO),以及扭转坏死睾丸复位组(NTR)/切除组(NTO)。术后饲养6周至性成熟期,脱颈法处死大鼠,切取对侧睾丸石蜡包埋行免疫组化SP法检测睾丸精原干细胞因子受体(C-kit)、磷酯酰肌醇-3-激酶(PI3K)的表达。结果 鼠性成熟期健侧睾丸组织生精细胞及间质细胞C-kit、PI3K的积分光密度(IOD)值:NNTR和NNTO组C-kit、PI3K的IOD值组间比较差异无统计学意义(P>0.05);SNTR和SNTO组C-kit、PI3K的IOD值组间比较差异也无统计学意义(P>0.05);NTR和NTO组C-kit、PI3K的IOD值组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。与CG组C-kit、PI3K的IOD值比较,NNTR、NNTO及NTO组中C-kit、PI3K的IOD值均无统计学意义(P>0.05);而SNTR、SNTO及NTR组中C-kit、PI3K的IOD值均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 鼠性成熟前期扭转疑似坏死睾丸、无论切除与复位,对性成熟期健侧睾丸仅轻微损害,应予以保留;性成熟前期扭转坏死睾丸的切除,对性成熟期健侧睾丸具有保护作用,应尽可能切除。

基于SCF/C-kit通路探讨三焦针法对腹泻型肠易激综合征大鼠的影响

目的 观察三焦针法对腹泻型肠易激综合征(irritable bowel syndrome with diarrhea, IBS-D)大鼠胃肠动力异常及结肠组织干细胞因子(stem cell factor, SCF)、酪氨酸激酶受体(tyrosine kinase receptor, C-kit) mRNA和蛋白表达的影响,探讨三焦针法治疗IBS-D的作用机制。方法 wistar雄性大鼠随机分为空白组、模型组、西药组和三焦组,每组6只。除空白组外,其余各组采用“冰醋酸灌肠+束缚应激”建立IBS-D大鼠模型。西药组予匹维溴胺灌胃(15 mg/kg),三焦组针刺膻中、中脘、气海、血海(双侧)及足三里(双侧),诸穴行捻转补法30秒,1次/d,均治疗14天。观察大鼠一般状态;测定体质量、旷场实验(大鼠横向运动和纵向运动)、稀便率、腹壁撤退反射(abdominal retraction reflex, AWR)3分阈值时注水量;RT-PCR法、Western blot法检测结肠组织SCF、C-kit mRNA及蛋白表达。结果 与空白组相比,IBS-D模型大鼠一般状态较差,体质量显著降低(P<0.01),旷场实验检测横向运动距离与纵向运动次数显著降低(P<0.01),稀便率显著增高(P<0.01),AWR3分时注水量显著降低(P<0.01),结肠组织中SCF、C-kit mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,西药组、三焦组大鼠体质量显著升高(P<0.01,P<0.05),横向运动距离与纵向运动次数均显著升高(P<0.05,P<0.01),稀便率显著下调(P<0.01),AWR3分时注水量显著提升(P<0.01),三焦组大鼠结肠组织中SCF、C-kit mRNA及蛋白水平表达均显著降低(P<0.01),而西药组SCF、C-kit mRNA及蛋白表达无统计学意义(P>0.05)。结论 三焦针法可改善IBS-D大鼠症状,可能是与调节结肠组织中SCF、C-kit mRNA及蛋白表达水平有关。

推中脘联合参香散贴敷通过SCF/C-kit信号通路对胃食管反流的作用研究

目的:探讨推中脘联合参香散贴敷通过干细胞因子(stem cell factor,SCF)/C-kit信号通路对胃食管反流(Gastroesophageal reflux,GER)的调控作用。方法:通过饮食不节法和导尿管球囊扩张法构建GER动物模型,分别用推中脘、参香散贴敷以及推中脘联合参香散贴敷治疗GER模型兔子。苏木精-伊红染色观察胃窦组织病理损伤。免疫荧光检测C-kit荧光强度。RT-qPCR检测SCF和C-kit mRNA相对表达。Western blot检测SCF、C-kit和连接蛋白43(Connexin 43,CX43)蛋白表达。结果:GER组兔子胃窦组织中细胞炎性浸润明显、胃黏膜上皮细胞增生,且组织中SCF、C-kit和CX43表达明显降低。经推中脘和参香散贴敷治疗可降低胃窦组织炎性浸润程度,促进SCF、C-kit和CX43表达。而与推中脘或参香散贴敷单独治疗组比较,推中脘联合参香散贴敷治疗组中细胞炎性浸润较单独治疗组减弱,几乎没有细胞增生,SCF、C-kit和CX43表达明显升高。结论:推中脘联合参香散贴敷治疗可显著改善GER,这可能通过调控SCF/C-kit信号通路实现。

电针关元穴经微RNA-199a-3p调控c-kit/ERK通路对神经源性尿潴留大鼠的治疗作用

目的探讨电针关元穴经miRNA-199a-3p调控酪氨酸激酶受体c-kit/ERK通路对神经源性尿潴留大鼠的治疗作用。方法采用改良脊髓横断法建立神经源性尿潴留大鼠模型60只,按随机数字表法平均分为5组:模型组、电针组、miRNA-199a-3p抑制剂组、miRNA-199a-3p抑制剂阴性对照组、电针+miRNA-199a-3p抑制剂组,另选取SD大鼠12只作为假手术组。使用药物分组干预处理后,检测大鼠尿动力学,比较各组大鼠膀胱最大容量、膀胱基础压、漏尿点压力;采用肌条实验检测大鼠逼尿肌兴奋性,比较各组肌条自发性收缩频率;采用H-E染色观察各组大鼠膀胱组织病理形态改变;用试剂盒测定各组大鼠血清炎症细胞因子环氧化酶2(COX-2)、IL-18、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平;采用qPCR检测各组大鼠膀胱组织miRNA-199a-3p与c-kit mRNA表达水平;采用蛋白质印迹法检测各组大鼠膀胱组织c-kit/ERK通路蛋白表达水平。结果与假手术组相比,模型组大鼠膀胱组织呈现严重病理损伤改变,膀胱最大容量、膀胱基础压、漏尿点压力及血清COX-2、IL-18、iNOS水平均升高(P均<0.05),肌条自发性收缩频率、膀胱组织miRNA-199a-3p与c-kit mRNA表达水平、膀胱组织磷酸化(p)-ERK/ERK与c-kit表达水平均降低(P均<0.05)。与模型组、电针+miRNA-199a-3p抑制剂组相比,电针组大鼠膀胱组织病理损伤减轻,膀胱最大容量、膀胱基础压、漏尿点压力及血清COX-2、IL-18、iNOS水平均降低(P均<0.05),肌条自发性收缩频率、膀胱组织miRNA-199a-3p与c-kit mRNA表达水平、膀胱组织p-ERK/ERK与c-kit表达水平均升高(P均<0.05);miRNA-199a-3p抑制剂组大鼠膀胱组织病理损伤均加重,膀胱最大容量、膀胱基础压、漏尿点压力及血清COX-2、IL-18、iNOS水平均升高(P均<0.05),肌条自发性收缩频率、膀胱组织miRNA-199a-3p与c-kit mRNA表达水平及膀胱组织p-ERK/ERK与c-kit表达水平均降低(P均<0.05)。与模型组相比,miRNA-199a-3p抑制剂阴性对照组大鼠各指标水平差异无统计学意义(P均>0.05)。结论电针关元穴可通过上调miRNA-199a-3p表达激活c-kit/ERK通路,减轻神经源性尿潴留大鼠膀胱组织炎症损伤,增强逼尿肌兴奋性,修复膀胱功能,改善尿潴留症状。

SCF/c-Kit信号通路通过抑制肥大细胞增殖调控影响病理性瘢痕形成的研究

目的探讨配体干细胞因子/c-KIT原癌基因(SCF/c-kit)对肥大细胞增殖的影响,并进一步探讨其在病理性瘢痕形成中的作用。方法收集病理性瘢痕组织和正常组织,通过甲苯胺蓝染色法检测组织中肥大细胞数目,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测患者血清中干细胞因子SCF的表达,蛋白质印迹法(Western blotting)检测组织中SCF和其受体c-Kit的表达。建立病理性瘢痕裸鼠模型,16 d后将造模成功的裸鼠随机分为模型+沉默阴性对照(si-NC)组和模型+si-SCF组,分别于裸鼠瘢痕内注射si-NC、si-SCF质粒和脂质体混合液0.25 mL,另设对照组,注射等体积磷酸盐缓冲液(PBS)。7 d后收集标本,游标卡尺测量裸鼠瘢痕体积大小,V.G染色检测瘢痕组织Ⅰ型胶原含量,甲苯胺蓝染色评估瘢痕组织肥大细胞数目,Western blotting检测组织中SCF和c-Kit的表达。结果病理性瘢痕患者的瘢痕组织出现大量肥大细胞,同时在病理性瘢痕患者血清中发现SCF高表达,而且在其瘢痕组织中SCF和c-Kit蛋白表达也增多;在病理性瘢痕模型裸鼠体内沉默SCF,抑制了c-Kit的表达,减小了模型裸鼠的瘢痕体积,降低了瘢痕组织中Ⅰ型胶原含量,还抑制了肥大细胞增殖。结论SCF/c-Kit信号通路可能是通过抑制肥大细胞增殖,来调控病理性瘢痕的形成。SCF/c-Kit的表达失控可能也是病理性瘢痕形成的一个重要诱因。

电针刺激ST-36通过mSCF/c-Kit信号促进糖尿病小鼠胃组织ICC表达

目的研究电针刺激足三里穴(ST-36)促进糖尿病(DM)小鼠胃组织Cajal间质细胞(ICC)表达,进而改善其胃排空功能,并探究其可能机制。方法将6~8周龄雄性C57/BL6小鼠随机分为4组:正常对照(Control)组、DM组、DM假性刺激(DM+SEA)组、DM电针刺激(DM+EA)组。电针刺激期间监测各组体质量和血糖的变化,采用酚红胃排空实验检测小鼠的胃排空功能,分别采用Ano1和c-Kit免疫荧光染色检测ICC网络变化,采用Western印迹和聚合酶链反应(PCR)检测mSCF/c-Kit信号的表达。结果电针刺激可以显著改善DM小鼠体质量减轻(均P<0.05),但对血糖没有影响(P>0.05);与Control组比较,DM组和DM+SEA组胃排空明显延迟(均P<0.05),而DM+EA组胃排空较DM组明显改善(均P<0.05);与Control组比较,DM组和DM+SEA组Ano1阳性ICC网络和c-Kit阳性ICC网络明显减少,而DM+EA组较DM组Ano1阳性ICC网络和c-Kit阳性ICC网络明显增多(均P<0.05);与Control组比较,mSCF/c-Kit信号的蛋白和mRNA表达水平在DM组和DM+SEA组明显降低,而DM+EA组较DM组mSCF/c-Kit信号的蛋白和mRNA表达水平明显升高(均P<0.05)。结论电针刺激可能通过促进mSCF/c-Kit信号表达,维持ICC网络的完整性,进而改善DM小鼠胃排空功能。

白术七物颗粒对慢传输型便秘小鼠肠道运动、Cajal间质细胞、c-Kit表达及肠道菌群的影响

目的观察白术七物颗粒对慢传输型便秘(STC)小鼠肠道运动、Cajal间质细胞(ICC)、酪氨酸激酶受体c-Kit及肠道菌群的影响,探讨其治疗STC的作用机制。方法42只ICR小鼠随机分为对照组、模型组、普芦卡必利组和白术七物颗粒低、中、高剂量组,采用盐酸洛哌丁胺灌胃建立STC小鼠模型,各给药组分别予相应药物灌胃14 d。观察小鼠一般体征变化,测定粪便干湿重及肠道推进率,HE染色观察结肠组织形态,免疫组化染色检测结肠组织c-Kit表达,TUNEL染色检测结肠组织ICC凋亡情况,16S rRNA测序检测肠道菌群变化。结果与对照组比较,模型组小鼠精神不振,皮毛粗糙、光泽度差,大便干结、呈团块状,粪便干湿重显著减少,肠道推进率显著降低(P<0.01),结肠黏膜有明显糜烂,腺体被破坏,结肠组织c-Kit表达显著降低(P<0.01),ICC凋亡有所增加;与模型组比较,白术七物颗粒中、高剂量组和普芦卡必利组小鼠一般体征显著改善,粪便干湿重显著增加,肠道推进率显著升高(P<0.01),结肠黏膜结构改善,结肠组织c-Kit表达显著升高(P<0.01),ICC凋亡减少。16S rRNA测序结果显示,白术七物颗粒可调节模型小鼠粪便绒毛杆菌属、乳杆菌属、拟杆菌属、副拟杆菌属和阿克曼菌属等菌群丰度,尤以白术七物颗粒高剂量组效果最明显。结论白术七物颗粒可改善STC小鼠症状和结肠损伤,促进肠道运动,其机制可能与上调结肠组织c-Kit表达、抑制ICC凋亡、改善肠道菌群失调有关。

便塞通合剂对慢传输型便秘大鼠结肠SCF/c-Kit信号通路的影响

目的:探讨便塞通合剂(BST)对慢传输型便秘(STC)大鼠结肠干细胞因子(SCF)/c-Kit信号通路的影响。方法:将40只健康SD雄性大鼠分为正常组(NC组,n=10)和造模组(n=30);运用洛哌丁胺复制STC大鼠模型,造模成功后,将造模组大鼠随机分为模型组(MC组)、莫沙比利组(PC组)、便塞通合剂组(BST组),每组各10只。药物干预14 d后,比较各组大鼠一般情况、24 h粪便颗粒数、粪便含水量及肠道炭墨推进率;免疫组化和RT-qPCR检测SCF、c-Kit的表达。结果:与模型组比,BST组大鼠24 h粪便颗粒数、粪便含水量、肠道炭墨推进率均增高(P<0.05);与空白组比,模型组大鼠结肠组织c-Kit、SCF蛋白及mRNA表达水平均降低(P<0.05);与模型组比,BST组大鼠结肠组织c-Kit、SCF蛋白及mRNA表达水平均增高(P<0.05)。结论:BST可有效治疗大鼠慢传输便秘,机制可能与上调肠道SCF及c-Kit表达,加快肠道蠕动有关。

大鼠冠状动脉粥样硬化钙化组织与c-kit^(+)和sca-1^(+)细胞的关系研究

目的探讨大鼠冠状动脉粥样硬化钙化区域sca-1、c-kit的表达变化,为进一步研究冠状动脉粥样硬化机制奠定细胞学基础。方法30只健康成年SD大鼠,随机分为正常对照组(n=8)和动脉粥样硬化钙化模型组(n=22)。采用丙基硫氧嘧啶灌胃、高脂高胆固醇饲料喂养和维生素D3腹腔注射方法制备模型。模型制备成功后,通过免疫组织化学和免疫荧光技术观察sca-1、c-kit在模型组与正常组的大鼠冠状动脉组织中的表达变化。利用免疫荧光双标技术证明sca-1与α-SMA的共定位表达。利用western blotting技术检测模型组与正常组的冠状动脉组织c-kit、sca-1蛋白的表达差异。结果造模12周,大鼠冠状动脉管壁明显增厚,内膜明显增生,平滑肌纤维排列显著紊乱,坏死物质沉积、脂质沉积和钙结节沉淀。免疫组化和免疫荧光结果显示sca-1+细胞和c-kit^(+)细胞在动脉粥样硬化钙化区域的冠状动脉内膜、中膜、外膜中数量明显高于正常对照。病变区域的部分细胞存在sca-1与α-SMA的共表达。Western blotting结果显示动脉粥样硬化和钙化区域的c-kit、sca-1蛋白的表达量高于正常对照组。结论sca-1+细胞和c-kit^(+)细胞有向冠状动脉粥样硬化钙化区域迁移的倾向,其机制尚需研究。

色象中药血清对SCF、c-Kit表达及黑素瘤细胞调控的研究

【目的】探讨色象中药对黑素的体外调控机制。【方法】筛选黑药(首乌、熟地、乌梅、女贞子、黒芝麻、丹参、鸡血藤)和白药(白芷、白附子、白茯苓、白蔹、白芨、白僵蚕、白术),制备各中药含药血清,体外处理人A375黑素瘤细胞16~48 h。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定黑素瘤细胞增殖情况;采用NaOH溶解法测定黑素瘤细胞黑素含量;采用免疫荧光染色法测定黑素瘤细胞干细胞因子(SCF)、c-Kit蛋白表达。【结果】(1)分别含首乌、乌梅、黑芝麻、白茯苓、白术、女贞子、白芷、白附子、白芨、白僵蚕的血清组黑素瘤细胞增殖能力较对照组升高(P<0.05或P<0.01);分别含丹参、白蔹的血清组黑素瘤细胞增殖能力较对照组降低(P<0.01)。(2)分别含熟地、黑芝麻、丹参、鸡血藤、白蔹、白术、首乌、女贞子、白芷、白附子、白芨、白僵蚕的血清组黑素瘤细胞中黑素含量较对照组增加(P<0.05或P<0.01)。(3)与对照组比较,含乌梅血清组SCF、c-Kit蛋白表达量均增加(P<0.01),分别含女贞子、白芷、白茯苓、白蔹的血清组SCF、c-Kit蛋白表达量均减少(P<0.05或P<0.01),分别含首乌、黑芝麻、丹参、白附子的血清组SCF蛋白表达量增加、c-Kit蛋白表达量减少(P<0.05或P<0.01),含白僵蚕血清组SCF蛋白表达量减少、c-Kit蛋白表达量增加(P<0.05或P<0.01),分别含熟地、鸡血藤、白术的血清组SCF蛋白表达量增加(P<0.05或P<0.01)。c-Kit蛋白表达量变化不明显(P>0.05),含白芨血清组SCF蛋白表达量变化不明显(P>0.05)。c-Kit蛋白表达量减少(P<0.01)。【结论】白药与黑药均可通过调控SCF、c-Kit表达,对黑素瘤细胞黑素代谢有双向调节作用。

黑色素瘤中C-Kit抑制剂的临床前景及临床研究进展

C-Kit编码的酪氨酸激酶是一种典型的Ⅲ型受体酪氨酸激酶,其突变和扩增在黑色素瘤中大量存在,而且C-Kit在体内涉及PI3K/AKT、JAK/STAT和Ras-Erk等多条信号通路,与肿瘤的发生发展密切相关。C-Kit抑制剂通过抑制C-Kit激酶从非活化性构象向活化性构象的转变,达到抗肿瘤的作用。目前C-Kit抑制剂主要获批用于慢性髓细胞白血病、胃肠道间质瘤、晚期肾癌、肝细胞癌等,尚未获批用于黑色素瘤的治疗。C-Kit抑制剂可以有效抑制黑色素瘤,本综述旨在系统描述C-Kit抑制剂用于治疗黑色素瘤的可能机制和研究进展,为今后临床用药提供可能。

中医疗法靶向干预SCF/c-kit信号通路治疗功能性消化不良机制研究进展

功能性消化不良(FD)的病理机制尚未阐明,中医治疗FD优势明显,临床疗效确切,其中以中药复方、单味药及其成分和针灸等为代表的中医疗法在FD的临床治疗中具有重要地位。目前,针对FD的研究中干细胞因子(SCF)/c-kit信号转导的重要性日益凸显,并取得一定进展。中医疗法干预SCF/c-kit系统治疗FD的机制可能与其调节胃肠卡哈尔间质细胞、神经细胞和肥大细胞功能异常引起的胃肠动力障碍、十二指肠低度炎症和内脏敏感性增高有关。本文对中医疗法调控SCF/c-kit通路治疗FD进行综述,以期为临床治疗提供依据。