c-Myc、CDK12在胃癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨胃癌组织中c-Myc、细胞周期蛋白依赖性激酶12(CDK12)表达及其与患者临床特征及预后的关系。方法 收集80例胃癌患者的胃癌组织和癌旁组织标本,采用免疫组化法检测标本中的c-Myc、CDK12表达水平。比较胃癌组织和癌旁组织中c-Myc、CDK12阳性表达情况;分析胃癌组织中c-Myc、CDK12阳性表达与患者临床病理特征的关系;分析c-Myc与CDK12阳性表达的相关性,胃癌组织中c-Myc、CDK12阳性表达与胃癌患者预后的关系。结果 胃癌组织中c-Myc、CDK12阳性表达率(77.5%、87.5%)均明显高于癌旁组织(13.8%、15.0%)(P<0.05)。不同年龄、性别、肿瘤最大直径患者胃癌组织中c-Myc、CDK12阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05);中低分化、Ⅲ~Ⅳ期、侵犯浆膜、有淋巴结转移患者胃癌组织中c-Myc和CDK12阳性表达率分别为88.0%、87.0%、88.9%、90.0%和94.0%、92.6%、97.2%、100.0%,均明显高于高分化、Ⅰ~Ⅱ期、未侵犯浆膜、无淋巴结转移患者胃癌组织的60.0%、57.7%、68.2%、70.0%和76.7%、76.9%、79.5%、80.0%(P<0.05)。相关分析发现,c-Myc、CDK12在胃癌组织中的表达呈正相关性(r=0.487,P=0.016<0.05)。胃癌组织中c-Myc、CDK12阳性患者的3年生存率分别为19.4%、21.4%,均明显低于c-Myc、CDK12阴性患者的55.6%、70.0%(P<0.05)。结论 c-Myc、CDK12在胃癌组织中异常高表达,两者呈正相关性,并与肿瘤的TNM分期、分化程度、肿瘤侵袭深度及淋巴结转移有关,对患者的预后有明显影响,通过检测两者水平可能评估胃癌患者的预后。

胃癌模型大鼠胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT的表达意义及其与胃癌病变程度的相关性

目的探讨胃癌模型大鼠胃黏膜组织细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、c-Myc、CKIT的表达意义及其与胃癌病变程度的相关性。方法选择48只健康成年雌性大鼠,按照随机数字表法将其分为对照组、研究1组、研究2组、研究3组,每组各12只。研究1组、研究2组、研究3组均制备成胃癌模型。对照组给予等量0.9%氯化钠溶液,第24周处死取材;研究1组、研究2组、研究3组制备成胃癌大鼠后分别于第8、16、24周取材。分析各组大鼠一般情况及胃黏膜组织病理切片,采用蛋白质印迹法检测胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT蛋白的表达,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT mRNA的表达,采用Spearman分析法测定胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT表达与胃癌病变程度相关性。结果对照组大鼠胃黏膜完整正常,外膜层、肌层、黏膜下层、黏膜层等结构清晰,且无炎症细胞浸润;研究1组大鼠胃黏膜组织与对照组大鼠接近,不存在炎症细胞,且黏膜腺体结构基本正常;研究2组大鼠胃黏膜组织存在破损,细胞核变大,基底部部分腺体细胞形态异常,存在轻度异型性,为早期胃癌;研究3组大鼠胃黏膜组织增加破损,核质比变大,细胞形态不规则,部分腺体存在扩张,黏膜下层及肌层存在炎症细胞浸润,为胃癌进展期。研究1组、研究2组、研究3组胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT蛋白均呈显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT蛋白在研究1组、研究2组、研究3组中逐渐升高趋势。研究1组、研究2组、研究3组胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT mRNA均呈显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT mRNA在研究1组、研究2组、研究3组中逐渐升高趋势。采用Spearman相关性结果分析显示,胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT表达与胃癌病变程度呈正相关(r=0.382、0.781、0.993,均P<0.001)。结论胃癌模型大鼠胃黏膜组织Cyclin D1、c-Myc、CKIT呈高表达,其与胃癌病变程度密切相关。

华蟾素通过调控MYH9/USP7/c-MYC通路抑制急性髓系白血病细胞免疫逃逸

【目的】探讨华蟾素调控肌球蛋白重链9(MYH9)/泛素特异性蛋白酶7(USP7)/骨髓细胞瘤病毒癌基因(c-MYC)通路对急性髓系白血病(AML)细胞免疫逃逸的影响。【方法】(1)体内实验:建立裸鼠异种移植瘤模型,评估华蟾素对AML细胞在体内生长和免疫逃逸的影响。(2)体外实验:使用不同浓度的华蟾素处理人AML细胞株HL-60,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞活力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。将HL-60细胞与活化的CD8^(+)T细胞共培养,流式细胞术检测CD8^(+)T细胞表面标志物CD25的表达,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测共培养上清液中细胞因子[白细胞介素2(IL-2)和干扰素(IFN-γ)]的水平,CytoTox96非放射性细胞毒性分析评估CD8^(+)T细胞对HL-60细胞的毒性。Western Blot法检测MYH9、USP7和c-MYC的蛋白表达,免疫共沉淀(Co-IP)法检测MYH9、USP7和泛素化之间的相互作用。转染MYH9过表质粒,验证华蟾素在AML中的作用机制。【结果】华蟾素抑制裸鼠移植瘤生长,增强CD8^(+)T细胞抗肿瘤的能力。华蟾素浓度依赖性地抑制HL-60细胞活力、侵袭。华蟾素处理后上调CD8^(+)T细胞表面标志物CD25的表达,同时还上调IL-2和IFN-γ水平。华蟾素增强CD8^(+)T细胞对HL-60细胞的毒性。华蟾素抑制HL-60细胞MYH9、USP7和c-MYC的蛋白表达,MYH9通过募集USP7促进c-MYC去泛素化,华蟾素抑制MYH9介导的c-MYC去泛素化。【结论】华蟾素可通过抑制MYH9的表达进而减少去泛素化酶USP7对c-MYC的募集,促进c-MYC泛素化降解,从而抑制AML细胞免疫逃逸。

鳜弹状病毒N蛋白与鳜c-Myc互作调控谷氨酰胺代谢机制

为了研究鳜弹状病毒(SCRV)如何调控鳜c-Myc(Sc-c-Myc)进而调控谷氨酰胺代谢的分子机制,本研究通过免疫共沉淀联合蛋白质谱寻找可能与Sc-c-Myc互作的病毒蛋白,初步分析确定为核衣壳蛋白(N蛋白);Co-IP结果显示,SCRV的N蛋白与Sc-c-Myc存在相互作用。通过PCR扩增获得了带有Flag标签序列的SCRV-N基因的ORF片段,并构建了SCRV-N蛋白过表达载体pcDNA-N-Flag;将pcDNA-N-Flag质粒转染鳜脑组织细胞系(CPB细胞系),荧光共定位结果显示,Sc-c-Myc与SCRV-N在细胞质内存在共定位现象;通过逆转录实时定量PCR(RT-qPCR)和免疫印记(Western blot)检测转染pcDNA-N-Flag的CPB细胞系中Sc-c-Myc及谷氨酰胺代谢通路关键酶(GLS1、GDH和IDH2)的表达变化,发现Sc-c-Myc、GLS1的转录水平和蛋白水平均显著上调。综上表明,SCRV的N蛋白与Sc-c-Myc互作促进Sc-c-Myc的表达,进而调控宿主细胞谷氨酰胺代谢途径,为SCRV防控提供了新的靶点。

基于ERK介导C-Myc/PD-L1协同作用探讨参芪抑瘤方联合顺铂对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤机制

目的:探讨参芪抑瘤方联合顺铂经ERK介导C-Myc/PD-L1相协途径对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤作用及其机制。方法:60只SPF级雄性昆明小鼠,采用随机数字表法取10只小鼠作为空白组,其余50只小鼠复制H22肝癌荷瘤小鼠模型,模型复制成功后将模型小鼠随机分为模型组、顺铂组[2.5×10^(-3) g/(kg·3 d)]、参芪抑瘤方低[13.515 g/(kg·d)]、中[27.030 g/(kg·d)]、高剂量[54.060 g/(kg·d)]联合顺铂[2.5×10^(-3) g/(kg·3 d)]组,每组10只,治疗13 d,末次给药24 h后,麻醉处死小鼠,测定小鼠肿瘤抑制率和脾指数、胸腺指数;HE染色观察小鼠肿瘤组织病理学变化;ELISA试剂盒检测肿瘤组织匀浆液中EGF、IFN-γ含量;IHC法和Western blot法检测肿瘤组织中p-ERK1/2、C-Myc、PD-L1蛋白表达;RT-PCR法检测肿瘤组织中ERK、C-Myc、PD-L1mRNA表达水平。结果:与空白组相比,模型组小鼠平均体质量和脾脏指数均降低(P<0.05);与模型组相比,各治疗组肿瘤抑制效果明显,且参芪抑瘤方联合顺铂组以剂量依赖性方式抑制肝癌小鼠肿瘤生长,提高小鼠平均体质量和脾指数、胸腺指数,促进肿瘤细胞坏死,增加坏死面积,降低肿瘤组织中EGF和IFN-γ含量以及p-ERK1/2、C-Myc、PD-L1蛋白表达和ERK、C-Myc、PD-L1 mRNA表达(P<0.05);与顺铂组相比,参芪抑瘤方中、高剂量联合顺铂组治疗效果显著,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:参芪抑瘤方联合顺铂能有效抑制H22肝癌荷瘤小鼠的肿瘤生长,显著下调肿瘤组织中C-Myc与PD-L1蛋白表达,该机制可能通过调控ERK信号通路相关蛋白表达发挥抑瘤作用。

在口腔表皮样癌细胞中c-myc对GS和GLS表达的调控以及对癌瘤生长的裸鼠体内实验研究

目的:用动物实验模型探讨人口腔表皮样癌细胞中c-myc与谷氨酰胺酶(GLS)、谷氨酰胺合成酶(GS)间的相关性。方法:免疫组化检测口腔癌临床样本中c-myc、GLS、GS表达。建立c-myc稳定高表达的KB细胞模型,并移植入裸鼠体内以建立裸鼠成瘤模型,细胞和裸鼠各分为3组(n=6),分别为正常对照组、空载体转染细胞组和c-myc过表达细胞组,观察肿瘤生长;免疫组化检测肿瘤中c-myc、 GLS、 GS的表达情况。结果:c-myc、 GLS、 GS在口腔癌临床样本中高表达;在c-myc高表达细胞模型中c-myc mRNA表达水平显著高于空载体对照组;在动物实验中,随着时间的延长,各组裸鼠成瘤模型均形成肿瘤,c-myc过表达组肿瘤体积及重量增加更为显著(P<0.01);c-myc过表达组瘤组织样本中GLS及GS表达显著高于空载体组和对照组(P<0.01)。结论:在口腔表皮样癌细胞中,c-myc高表达,并使GLS、GS表达升高。

猫CDH1基因在过表达c-MYC成纤维细胞中的表达变化及生物信息学分析

[目的]试验旨在研究骨髓细胞瘤病毒癌基因同源物(myelocytomatosis viral oncogene homolog, c-MYC)对猫成纤维细胞的影响及其与E-钙黏蛋白(cadherin 1,CDH1)基因表达和分子特性的关系,为将其应用于猫肿瘤疾病防治和组织损伤修复提供依据。[方法]通过组织贴壁法对猫胎儿成纤维细胞进行分离培养,利用电转仪将PB-TRE-c-MYC质粒转染至细胞并观察细胞形态,利用实时荧光定量PCR检测CDH1基因的表达情况,并通过生物信息学软件分析CDH1蛋白的理化性质和结构特征。[结果]过表达c-MYC导致细胞形态发生变化,从间质细胞的长梭型向上皮细胞的鹅卵石状发生转变,且使上皮细胞标志基因CDH1的表达极显著上调(P<0.01)。生物信息学分析显示,猫CDH1蛋白有881个氨基酸,其中含量最多的是亮氨酸,定位于细胞膜,存在4个CA结构域,介导细胞与细胞的接触,属于亲水性的酸性蛋白,主要由无规则卷曲组成,可能存在由Sec易位子转运并被信号肽酶Ⅰ(Sec/SPⅠ)切割的信号肽位点。[结论]猫CDH1基因的表达可被外源性重编程因子c-MYC激活,其编码的钙黏蛋白可促进猫胎儿成纤维细胞的间质-上皮转化,以抑制细胞癌化。

c-Myc通过lnc-TBL1XR1-5影响口腔鳞状细胞癌的发生发展

目的研究c-Myc调节的长链非编码RNA TBL1XR1-5(lnc-TBL1XR1-5)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)进展的影响。方法根据c-Myc的表达对TCGA数据库中头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)样本进行生物信息学分析,筛选出c-Myc表达密切相关的lnc-TBL1XR1-5。实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测c-Myc和lnc-TBL1XR1-5在OSCC癌组织和癌旁组织中的表达关系,分析其在HOK、HN6、CAL27细胞系中表达差异,c-Myc过表达和敲低对lnc-TBL1XR1-5的影响。双荧光素酶报告基因测定用于验证c-Myc与lnc-TBL1XR1-5启动子区的结合。RNA荧光原位杂交(RNA FISH)用于确定lnc-TBL1XR1-5在OSCC细胞系中的定位。通过qRT-PCR、细胞计数、CCK-8、集落形成等实验观察lnc-TBL1XR1-5的过表达或敲低对OSCC细胞增殖的影响,并通过划痕实验、Transwell实验等观察lnc-TBL1XR1-5的过表达或敲低对OSCC细胞迁移的影响,最后通过观察培养基颜色和pH变化观察lnc-TBL1XR1-5的过表达或敲低对OSCC细胞代谢的影响。结果c-Myc对lnc-TBL1XR1-5在OSCC细胞系和组织中的表达具有正调控作用。通过双荧光素酶报告基因测定验证了c-Myc与lnc-TBL1XR1-5启动子区的结合。RNA FISH显示lnc-TBL1XR1-5定位于OSCC细胞的细胞核。lnc-TBL1XR1-5的过表达促进了OSCC细胞系的迁移、代谢和增殖,而敲低则具有相反的作用。结论c-Myc在OSCC中正向调节lnc-TBL1XR1-5,lnc-TBL1XR1-5促进OSCC的迁移、增殖和代谢。

基于细胞系和类器官研究c-Myc在肝癌治疗和耐药中的作用

目的:基于肝癌细胞系与类器官的药物基因组学数据探讨骨髓细胞瘤癌基因(c-Myc)的潜在治疗效果。方法:收集肝癌细胞系的药敏、功能基因组和基因表达数据,评估c-Myc的表达与药敏的关联。统计c-Myc表达在肝癌测序队列中的差异和预后相关性。免疫组织化学染色验证c-Myc在肝癌患者的表达,检测其与类器官生物库类器官的药敏关联。选取三种不同的c-Myc抑制剂在肝癌细胞系和类器官上进行药物筛选,检测干预c-Myc对二维、三维水平的肿瘤杀伤作用。生物信息学分析探究c-Myc与靶向耐药的相关性。结果:生物信息学分析联合免疫组织化学鉴定c-Myc在肝癌中调控药敏的潜在作用。c-Myc在癌组织中的表达明显高于癌旁组织,而且c-Myc的表达在靶向药耐药患者中高于靶向药敏感患者(P<0.05)。药敏实验揭示了c-Myc抑制剂THZ1、ABBV-744、JQ1可杀伤肿瘤细胞及类器官,并且与仑伐替尼在细胞系SNU-739中显示出显著的协同致死作用(协同系数均>1)。进一步的类器官生物库数据分析显示,c-Myc与干性介导的靶向耐药显著正相关(R=0.87)。结论:c-Myc在在靶向治疗耐药患者中高表达,并且抑制c-Myc可在二维、三维体外模型中起到很好的肿瘤杀伤效果,肝癌中可作为一个新的靶点。

宫颈癌组织中EMC6、C-myc及BCL-2的表达和预后

目的通过生信分析,评估EMC6基因在泛癌及宫颈癌中的表达、免疫相关性及诊断价值,并探究EMC6、C-myc、BCL-2蛋白与宫颈癌的相关性及预后。方法分析TCGA和GTEx数据库中EMC6在泛癌和宫颈癌的表达,并利用SangerBox和Timer数据库评估EMC6与免疫相关性,以及ROC评估诊断潜力。通过免疫组化在68例宫颈癌及癌旁组织中检测EMC6、C-myc、BCL-2蛋白表达,分析其与临床病理特征的联系。使用Phi系数法分析相关性,并利用Kaplan-Meier法评估这些蛋白对预后的影响。结果宫颈癌中EMC6表达降低,对免疫浸润有显著影响,且诊断准确性较高(AUC=0.819)。免疫组化显示,与宫颈癌旁组织相比,EMC6蛋白表达下降、而C-myc和BCL-2蛋白表达上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。EMC6表达与临床病理特征无相关性(P>0.05),而C-myc与病理类型相关(P<0.05),BCL-2与年龄、病理类型、肿瘤大小、分化程度相关(P<0.05)。EMC6与C-myc、BCL-2表达在宫颈癌中呈负相关(Phi=-0.367,P=0.002;Phi=-0.284,P=0.019),且三者与患者总生存期显著相关(P<0.05)。结论宫颈癌中EMC6蛋白表达下降,与C-myc、BCL-2蛋白表达呈负相关,且这些蛋白的表达水平与患者的总生存期之间存在显著的相关性,提示它们可能作为宫颈癌治疗和预后评估的潜在生物标志物。

胃癌患者血清c-Myc和PD-L1水平与临床病理特征及预后的相关性

目的 探讨胃癌患者血清c-Myc和程序性死亡配体1(programmed death ligand 1,PD-L1)水平与临床病理特征及预后的相关性。方法 收集2018年8月至2019年4月期间96例胃癌患者作为研究对象(观察组),另纳入健康体检者96例为对照组。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清c-Myc和PD-L1水平。胃癌患者血清中c-Myc和PD-L1表达的相关性采用Spearman相关分析;血清c-Myc和PD-L1表达与患者预后的关系采用Kaplan-Meier法分析;Cox回归分析胃癌患者预后的影响因素。结果 与对照组相比,观察组患者血清c-Myc、PD-L1水平显著升高(P<0.05)。Spearman法分析显示,胃癌患者血清中c-Myc和PD-L1表达呈正相关(r=0.431,P<0.05);c-Myc、PD-L1表达与肿瘤直径、TNM分期、浸润深度、淋巴结转移和分化程度有关(P<0.05)。胃癌组织中c-Myc和PD-L1低表达患者3年累计生存率为88.89%(32/36)、86.67%(26/30),均显著高于高表达患者的76.67%(46/60)、78.79%(52/66)(P<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,c-Myc、PD-L1、TNM分期是影响胃癌患者预后的危险因素(P<0.05)。结论 胃癌患者血清中c-Myc和PD-L1高表达均呈现上调趋势,二者与胃癌患者临床病理特征及预后有关。

LncRNA CDC6通过抑制c-Myc表达调节肺癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化

目的探讨LncRNA CDC6(CDC6)对肺癌细胞增殖、上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)和凋亡的影响及其作用机制。方法RT-qPCR检测肺癌组织和细胞中CDC6和c-Myc的mRNA水平,并分析CDC6和c-Myc mRNA水平与患者临床指标的相关性。随后,通过CDC6-siRNA和pcDNA-CDC6转染,或CDC6-siRNA和pcDNA-c-Myc共转染肺癌细胞;MTT法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western Blotting检测增殖、凋亡及EMT相关蛋白的表达。结果LncRNA CDC6在肺癌组织和细胞系中高表达(P<0.05)。CDC6和c-Myc mRNA水平与肺癌的病理分型、TNM分期、分化程度以及淋巴结的转移密切相关。沉默CDC6抑制肺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,降低增殖相关蛋白以及EMT相关蛋白表达水平,促进促凋亡蛋白Bax表达,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2表达(P<0.05)。过表达CDC6促进肺癌细胞增殖,抑制细胞凋亡,上调增殖相关蛋白以及EMT相关蛋白表达,减少促凋亡蛋白Bax水平,增加抗凋亡蛋白Bcl-2水平(P<0.05)。过表达c-Myc逆转了沉默CDC6对A549细胞增殖、凋亡以及EMT相关蛋白表达的影响。结论LncRNA CDC6通过调控c-Myc促进EMT过程及肺癌细胞的增殖能力,抑制细胞凋亡。

老年心肌梗死患者外周血单个核细胞中c-fos c-myc表达及临床意义

目的分析老年心肌梗死(MI)患者外周血单个核细胞中c-fos与c-myc表达,并探讨二者与老年MI的关系。方法将78例老年MI患者设为研究1组,73例稳定型心绞痛患者设为研究2组,同期纳入74名健康体检志愿者作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测三组被试者外周血单个核细胞中c-fos、c-myc水平。采用Pearson法分析c-fos、c-myc与血糖、高密度脂蛋白、三酰甘油的相关性,采用Logistic回归分析探讨MI预后的影响因素。结果研究1组被试者血糖水平高于对照组,三酰甘油水平及c-fos、c-myc水平高于研究2组和对照组,高密度脂蛋白水平低于研究2组和对照组;研究2组被试者高密度脂蛋白水平低于对照组,c-fos、c-myc水平高于对照组(P<0.05)。MI患者外周血单个核细胞中c-fos、c-myc水平与血糖、三酰甘油水平均呈正相关(P<0.01),与高密度脂蛋白呈负相关(P<0.01)。预后不良组患者c-fos、c-myc水平、三酰甘油水平高于预后良好组(P<0.01)。Logistic回归分析结果显示,c-fos、c-myc是影响MI患者预后不良的危险因素(P<0.01)。结论老年MI患者外周血单个核细胞中c-fos、c-myc呈高表达,二者与MI病情发展密切相关,c-fos、c-myc对预测老年MI不良预后具有一定的作用。

糖尿病合并胰腺癌患者血清及组织中c-myc和PTEN表达水平及其与预后的关系

目的探讨糖尿病合并胰腺癌患者血清及组织中c-myc和PTEN表达水平及其与预后的关系。方法选取胰腺癌患者64例,其中单纯胰腺癌患者25例纳入对照组,将合并糖尿病患者39例纳入观察组。采用酶联免疫吸附法检测血清c-myc和PTEN水平。免疫组织化学法检测癌组织中c-myc和PTEN蛋白表达。统计2组血清及组织中c-myc和PTEN表达、生存情况,COX多因素回归分析影响糖尿病合并胰腺癌患者预后因素。结果观察组血清c-myc水平高于对照组,PTEN水平低于对照组,P<0.05;观察组癌组织中c-myc蛋白阳性率高于对照组,PTEN蛋白阳性率低于对照组,P<0.05。c-myc(+)患者生存率低于c-myc(-)患者生存率,PTEN(+)患者生存率高于PTEN(-)患者生存率,P<0.05。合并糖尿病、c-myc阳性表达、PTEN阳性表达、肿瘤大小、远处器官转移、分化程度是影响胰腺癌患者预后的独立因素(P<0.05)。结论糖尿病合并胰腺癌患者血清和组织中c-myc和PTEN表达水平异常,c-myc阳性表达与预后不良相关,PTEN阳性表达与预后良好相关。

高表达MYH9通过激活AKT/c-Myc通路抑制非小细胞肺癌细胞凋亡

目的探讨肌球蛋白重链9(MYH9)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、凋亡和对顺铂敏感性的影响并探讨其作用机制。方法常规培养6株NSCLC细胞系(A549、H1299、H1975、SPCA1、H322、H460)和1株正常支气管上皮细胞系(16HBE)采用Westernblot法检测MYH9的表达情况;采用免疫组织化学染色法检测NSCLC患者组织MYH9的表达,实验分为癌组织(49例)和癌旁组织(43例);常规培养H1299和H1975细胞系,使用CRISPR/Cas9技术构建MYH9敲除的NSCLC细胞系,实验分为sgNC组,sgMYH9组,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、克隆形成实验检测敲除MYH9对肺癌细胞增殖的影响;Westernblot实验、细胞凋亡流式细胞术检测MYH9对细胞凋亡的影响;通过IC50法检测敲除MYH9的肺癌细胞对顺铂敏感性的影响,实验分为sgNC组、sgMYH9组;培育小鼠肿瘤异种移植物模型验证MYH9体内生物学功能,实验分为sgNC组、sgMYH9组。结果与癌旁组织相比,MYH9在癌组织中上调(P<0.001),高表达患者具有更短的生存(P=0.023)。敲除MYH9抑制细胞增殖(P<0.001),促进细胞凋亡(P<0.05),增加对顺铂的化学敏感性。此外,MYH9的耗竭显著抑制了体内肿瘤生长(P<0.001)。分子机制表明,敲除MYH9使AKT/c-Myc轴失活(P<0.05),从而抑制BCL-2样蛋白1的表达(P<0.05),促进BH3相互作用结构域死亡激动蛋白和凋亡调节剂BAX的表达(P<0.05),并激活胱天蛋白酶3和胱天蛋白酶9(P<0.05)。结论MYH9通过AKT/c-Myc轴调节细胞凋亡,从而促进NSCLC进展。

急性髓系白血病患者骨髓细胞c-Myc基因的表达及其临床意义

目的 研究急性髓系白血病(AML)患者骨髓细胞c-Myc基因的表达及其临床意义。方法 选取2018年9月—2020年9月新疆医科大学第一附属医院143例初治AML患者为研究对象。对照组来自20名志愿者的正常骨髓样本。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测AML患者骨髓细胞中c-Myc基因的表达,分析其与临床特征及疗效的关系;采用Sanger测序法检测AML患者C-kit 8/17、NPM1、FLT3-TKD/ITD、CEBPa基因突变情况。影响因素的分析采用单因素Cox和多因素逐步Cox回归模型。结果 初治AML患者的c-Myc基因相对表达量高于对照组(P <0.05)。143例AML患者中基因突变患者98例,检出率为68.5%(98/143)。c-Myc基因表达与CEBPa基因突变呈正相关(r=0.174,P=0.037)。c-Myc基因高表达组2个疗程的完全缓解率为40.0%(36/90),c-Myc基因低表达组为77.4%(41/53)。单因素和多因素逐步Cox回归分析结果显示,c-Myc基因高表达和染色体核型分析异常的AML患者有较差的无事件生存和总生存期。结论 c-Myc基因异常表达在AML发病中可能起重要作用,可作为AML疗效和预后的不良分子标志物。

SOX2、C-Myc在晚期食管鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨SOX2、C-Myc在晚期食管鳞状细胞癌组织中的表达情况及其与临床病理参数的关系。方法:收集我院病理科2008-2014年间64例晚期食管鳞状细胞癌患者资料,采用免疫组织化学EnVision法检测SOX2、C-Myc的表达情况。结果:64例晚期食管鳞癌患者中:男性51例(79.7%),女性13例(20.3%),男性患者远多于女性患者。发生了淋巴结转移的患者有44例,转移率为68.8%。患者远处转移率为51.6%(33/64),常见的转移部位有肺、肝、骨、胃、支气管等。免疫组化显示SOX2、C-Myc均定位于细胞核,二者在晚期食管鳞癌组织中的阳性率分别为51.56%、25%。高表达的SOX2与远处转移密切相关(P=0.046),而与其他病理参数无关;C-Myc表达升高与TNM分期密切相关(P=0.018),而与其他病理参数无关。SOX2、C-Myc蛋白共表达与晚期食管鳞癌的TNM分期(P=0.020)、N分期(P=0.027)密切相关。结论:在晚期食管鳞状细胞癌中,高表达的SOX2与远处转移密切相关,希望能成为新的治疗靶点。

胃癌前病变患者病变组织c-Myc蛋白表达情况及其与内镜黏膜下剥离术后复发的关系

目的探讨胃癌前病变患者病变组织c-Myc蛋白表达情况及其与内镜黏膜下剥离术(ESD)后复发的关系。方法回顾性分析143例行ESD治疗的胃癌前病变患者的临床资料,采用免疫组化法检测病变组织及病变旁组织c-Myc蛋白表达情况。术后对患者进行为期1年的随访,根据复发情况将患者分为复发组与未复发组,并比较复发组与未复发组患者病变组织的c-Myc蛋白表达情况。采用多因素Logistic回归模型分析胃癌前病变患者ESD后复发的影响因素。结果胃癌前病变患者病变组织的c-Myc蛋白阳性表达率高于病变旁组织(P<0.05)。随访1年期间,有25例(17.48%)患者复发,复发组患者病变组织的c-Myc蛋白阳性表达率高于非复发组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,胃溃疡病史、吸烟史、服用非甾体抗炎药、主食汤泡饭、进食速度快、c-Myc蛋白高阳性表达均为胃癌前病变患者ESD后复发的危险因素(均P<0.05)。结论胃癌前病变患者病变组织c-Myc蛋白呈高表达,胃溃疡病史、吸烟史、服用非甾体抗炎药、主食汤泡饭、进食速度快、c-Myc蛋白高阳性表达均为胃癌前病变患者ESD后复发的危险因素。

子宫内膜癌PPP2R5A及c-Myc表达与预后的临床关系

目的探讨PPP2R5A与c-Myc在子宫内膜癌(EC)中的表达,确定两者表达强度及其与患者预后的临床关系。方法运用免疫组织化学法检Ⅰ型和Ⅱ型子宫内膜癌、子宫内膜不典型增生及正常增生期各12例中子宫内膜组织PPP2R5A与C-myc的表达,分析PPP2R5A、c-Myc蛋白的表达强度与子宫内膜癌临床指标的关系及对子宫内膜癌预后的影响。结果PPP2R5A在Ⅱ型子宫内膜癌表达强度较其他3组高,差异有统计学意义(P<0.05);Ⅰ型及不典型增生表达强度较正常增生期子宫内膜组织中表达稍强,差异无统计学意义(P>0.05);c-Myc在Ⅱ型EC表达强度较其他3组强高,与正常增生组和不典型增生组相比,差异有统计学意义(P<0.05),与Ⅰ型EC相比,差异无统计学意义(P>0.05);Ⅰ型EC较正常增生组、不典型增生组表达高,差异有统计学意义(P<0.05);PPP2R5A及c-Myc在Ⅰ型和Ⅱ型子宫内膜癌中的表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);子宫内膜癌组织中,PPP2R5A表达与年龄、FIGO分期、淋巴脉管间隙受侵、淋巴结转移情况比较,差异无统计学意义(P>0.05),与组织学分级比较,差异有统计学意义(P<0.05);c-Myc的表达与年龄、FIGO分期比较,差异无统计学意义(P>0.05),与组织学分级、淋巴脉管间隙受侵、淋巴结转移情况比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PPP2R5A高表达和c-Myc高表达是影响子宫内膜癌临床进展和预后的独立因素,PPP2R5A对子宫内膜癌特别是Ⅱ型EC的预后和发展过程有一定的提示意义,c-Myc在肿瘤细胞的发生发展过程中发挥着重要作用,通过检测PPP2R5A和c-Myc的表达能够更加有效地评估子宫内膜癌患者的预后。

探讨骨肉瘤化疗耐药中FoxM1与c-myc的关系及其作用机制

目的 探讨骨肉瘤化疗耐药中FoxM1与c-myc的关系及其作用机制。方法 在骨肉瘤亲本细胞(HOS、U2OS)、筛选稳定顺铂耐药细胞(HOS/R、U2OS/R)、慢病毒转染稳定FoxM1过表达细胞株(HOS/FoxM1、U2OS/FoxM1)及空载体对照(HOS/NC、U2OS/NC)中,采用Western blot法检测FoxM1和c-myc蛋白的表达。应用CCK-8细胞增殖实验检测FoxM1抑制剂RCM-1对骨肉瘤细胞顺铂敏感性的影响;采用生物信息学方法分析FoxM1和c-myc表达与患者预后的关系。结果 FoxM1和c-myc在骨肉瘤顺铂耐药细胞中的蛋白表达比亲本细胞明显升高。与空载体对照组中FoxM1(0.26±0.03 vs 0.37±0.02)、c-myc(0.35±0.07 vs 0.59±0.03)相比,FoxM1过表达细胞中FoxM1(0.81±0.13 vs 0.61±0.01)和c-myc(1.19±0.08 vs 1.61±0.13)蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。采用10μmol/L FoxM1抑制剂RCM-1处理后,顺铂耐药细胞(FoxM1:0.23±0.01 vs 0.19±0.02,c-myc:0.39±0.01 vs 0.31±0.04)和FoxM1过表达细胞中(FoxM1:0.11±0.03 vs 0.10±0.02,c-myc:0.35±0.01 vs 0.36±0.02)FoxM1和c-myc蛋白表达均明显下降。与单独顺铂给药组相比,采用顺铂联合FoxM1抑制剂RCM-1处理,骨肉瘤耐药细胞和FoxM1过表达细胞的增殖能力均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。生物信息学分析发现:FoxM1和c-myc高表达组患者的总生存期低于低表达组(P<0.05)。结论 FoxM1可能通过上调c-myc表达促进骨肉瘤细胞对顺铂耐药,联合运用FoxM1抑制剂能够增强骨肉瘤耐药细胞对化疗的敏感性,了解其分子机制有望为临床逆转骨肉瘤化疗耐药提供新的治疗靶点。