结晶型硫化镍诱发BALB/c-3T3细胞恶性转化

采用细胞灶法测定结晶型硫化镍对ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３诱发细胞转化的活性，结果表明当硫化镍浓度≥０．２５μｇ／ｃｍ２时转化率增高（Ｐ＞０．０５），且有剂量反应关系。各剂量组转化灶细胞共６份经软琼脂培养试验均获阳性结果，而对照细胞则为阴性，提示硫化镍诱发的转化细胞具有锚着不依赖性，即恶性特征。

硫酸镍诱发BALB/c-3T3细胞转化

采用细胞灶法测定硫酸镍对ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３细胞诱发转化的活性，结果表明当硫酸镍浓度≥１００μｍｏｌ／Ｌ时转化率增高（Ｐ＜０．０５），且有剂量反应关系。本文首次报道硫酸镍可诱发ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３细胞转化，并与我们最近报道的氯化镍对该细胞的作用作了比较。

镍化物诱导的BALB/c-3T3转化细胞中端粒酶的表达

为了探讨镍化物诱导BALB/c- 3T3 细胞转化过程中的分子毒作用, 本研究采用TRAP—银染法检测镍对转化细胞端粒酶活性的影响。结果显示, 硫化镍、氯化镍和硫酸镍在中等细胞毒性反应剂量水平诱导的BALB/c- 3T3细胞转化过程中的端粒酶活性均表现为阳性。提示, 镍对细胞端粒酶的阳性表达与细胞转化作用密切相关,

木尘提取液诱发体外培养BALBA/c-3T3细胞微核和多核

为探讨木尘的诱变性 ,选择硬木和软木各一种 ,分别为榉木和桦木 ,制备成木尘水提取液和有机提取液 ,进行BALB/c 3T3细胞微核和多核诱导试验。结果显示榉木尘和桦木尘两种提取液均存在细胞毒性 ,并可引起BALB/c 3T3细胞微核和多核细胞率的明显升高 ,剂量反应关系成立。

番茄红素或与维生素E合用对苯并(a)芘诱导BALB/c-3T3细胞转化的影响

[目的 ]观察不同浓度的番茄红素 (lycopene ,Ly)或与维生素E(VitaminE)合用对苯并 (a)芘 (benzo(a)pyrene ,BaP)诱导BALB/c 3T3细胞转化的影响。 [方法 ]每组 14瓶 ,每瓶接种 10 4个细胞 ,2 4h后加受试物及苯并 (a)芘 ,3d后 2瓶用结晶紫方法测定细胞毒性 ,其余 12瓶换含DMEM/F12转化表达培养液。每周换液 2次 ,2 5d后 10瓶固定 ,计数直径>2mm转化灶 ;其余 2瓶用定量的双抗体夹心ELISA方法测定细胞中p5 3蛋白的含量。 [结果 ]各种受试物及其混合物的细胞相对存活率均 >90 %。 0 .5、1、5 μmol/L的番茄红素可以阻止苯并 (a)芘诱导的细胞转化作用 ,细胞中p5 3蛋白的含量处在较低水平。然而当番茄红素浓度升高至 10 μmol/L时 ,番茄红素反而降低了抗转化的效果 ,细胞中p5 3蛋白的含量增加。维生素E存在能增强番茄红素抗苯并 (a)芘导致转化作用。 [结论 ]番茄红素阻止苯并 (a)芘诱导的细胞转化作用与其抗氧化作用方式相似 ,未发现番茄红素有类似 β 胡萝卜素的辅致癌作用 ;维生素E能增强番茄红素抗转化效果。

氯化镍诱发BALB/c-3T3细胞转化

为探讨氯化镍对不同靶细胞转化作用的差异，采用细胞灶法测定氯化镍对ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３细胞诱发转化的活性，结果表明当氯化镍浓度在＞５０μｍｏｌ／Ｌ时转化率增高（Ｐ＜０．０５），且有剂量反应关系。本文报道氯化镍诱发ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３细胞转化的实验结果。

小檗碱与梓醇及其配伍对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞葡萄糖转运子4蛋白及C-Cb1相关蛋白表达的影响

目的观察梓醇与小檗碱及其配伍对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗及这一过程中葡萄糖转运子4(Glut4)和C-Cb1相关蛋白(CAP)表达的影响。方法采用高糖联合高胰岛素诱导3T3-L1脂肪细胞产生胰岛素抵抗(IR),分别给予小檗碱、梓醇、小檗碱+梓醇、盐酸罗格列酮进行干预,以葡萄糖氧化酶法检测培养液中葡萄糖消耗量,以Western Blotting法检测Glut4和CAP蛋白的表达。结果与模型组相比,小檗碱能增加培养液中葡萄糖的消耗,但对Glut4蛋白的表达无影响;梓醇、小檗碱+梓醇均能显著增加培养液中葡萄糖的消耗,并使细胞中Glut4蛋白的表达增强,且小檗碱+梓醇组的效应优于梓醇组及小檗碱组;与模型组相比,小檗碱与梓醇及其配伍对CAP的表达没有显著性影响。结论小檗碱、梓醇及其配伍能改善IR 3T3-L1脂肪细胞的胰岛素活性,其作用机制与罗格列酮不同。

丹参对转化生长因子β_1刺激的NIH/3T3细胞表达Ⅰ型胶原和c-fos mRNA的影响

目的:观察丹参对TGFβ_1刺激的NIH/3T3成纤维细胞功能的影响。方法:将丹参灌胃给正常大鼠,分离含药血清,温育TGFβ_1刺激的成纤维细胞。RT-PCR法检测Ⅰ型胶原和c-fos的基因表达。结果:经TGFβ_1刺激后,细胞Ⅰ型胶原和c-fos的mRNA表达明显增加,丹参含药血清可分别抑制由TGFβ_1引起的细胞Ⅰ型胶原和c-fos的mRNA表达的增加,结论:丹参可能通过抑制c-fos的基因表达进而抑制Ⅰ型胶原的基因表达。

青石棉诱发BALB／c－3T3细胞恶性转化

用国产青石棉染毒ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３细胞７２ｈ后继续培养５ｗｋ，观察其恶性转化．试验结果表明，从１．０μｇ·ｃｍ－２剂量组开始转化率比阴性对照组增高（Ｐ＜０．０５），且有剂量反应关系．将各剂量组转化灶的细胞分别作软琼脂生长试验，结果均有细胞增殖成克隆；将２０μｇ·ｃｍ－２剂量组－转化灶的细胞分别接种至裸鼠皮下，ｗｋ４即形成接种部位包块，所有包块经病理组织学检查证实为纤维肉瘤．本研究首次证明青石棉可诱发ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３细胞恶性转化．

甲基丙烯酸环氧丙酯对BALB/c 3T3细胞恶性转化的实验研究

利用建立的 BALB/c 3T3细胞转化系统进行甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)的细胞转化和裸鼠诱癌的实验研究。实验结果表明:GMA 可诱导 BALB/c 3T3细胞形态转化,并呈剂量-反应关系;从转化灶分离扩增细胞,经电镜扫描观察到转化细胞表面形态改变,可被植物凝集素 ConA凝集,并在半固体琼脂生长,在同品系裸鼠皮下形成了肿瘤,病理组织检查结果为分化程度较低的纤维肉瘤。GMA 有很强的诱导细胞恶性转化的能力,提示 GMA 有潜在的致癌危险性。

水体有机物和蓝藻对BALB/c3T3细胞的毒性作用

目的 研究水体有机物和蓝藻提取物的毒作用机理。方法 通过形态学观察、MTT法和中性红摄入法 ,从多个终点检测二者对BALB/c 3T3细胞的毒性作用。结果 二者达一定浓度时 ,可引起细胞形态改变 ;有机物在各个浓度、各个培养时相均可引起细胞的存活率下降 ,有明显的剂量 -时间 -效应关系 ;而藻毒素在低浓度短时间染毒下可引起细胞数目的增加 ,在高浓度或长时间作用下 ,细胞存活率却明显下降。结论 两种比色法可敏感检测有机物及藻毒素对BALB/c 3T3细胞的毒性作用 ,两者对细胞膜均有损伤作用 ;有机物对线粒体有损伤作用 ,而藻毒素对线粒体具有刺激和损伤的双重作用。

蛋白激酶C对3T3-L1脂肪细胞抵抗素表达的影响

目的:观察蛋白激酶C转导途径对3T3-L1脂肪细胞抵抗素表达的影响。方法:3T3-L1脂肪细胞诱导分化为成熟的脂肪细胞后,分别于培养瓶中加入浓度为50 nmol/L的12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯(PMA)和浓度为5μmol/L马来酰亚胺甲磺酸盐(Ro-31-8220),培养24 h,用RT-PCR的方法检测3T3-L1脂肪细胞抵抗素mRNA的表达,用W estern b lotting检测3T3-L1脂肪细胞抵抗素表达。结果:PMA组可以明显提高3T3-L1脂肪细胞抵抗素基因及蛋白的表达,明显高于对照组,两者的差异显著(P<0.01);Ro-31-8220组其表达低于对照组,两者的差异显著(P<0.01)。结论:蛋白激酶C转导途径可以调控3T3-L1脂肪细胞抵抗素的表达。

熊果酸对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型CAP表达的影响

目的:观察熊果酸对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型葡萄糖消耗、摄取及细胞分化的影响,并探讨其作用机制。方法:将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞,用高糖、高胰岛素联合诱导胰岛素抵抗模型。使用葡萄糖氧化酶法检测3T3-L1细胞葡萄糖消耗量,氚标葡萄糖法检测其葡萄糖摄取量,以评价模型建立情况。用四唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测不同浓度熊果酸对3T3-L1脂肪细胞活力的影响以确定实验药物浓度。加入不同浓度熊果酸分组干预,用氚标葡萄糖法检测脂肪细胞葡萄糖摄取量;用油红O染色法检测3T3-L1脂肪细胞分化情况;用实时荧光定量聚合酶链反应法、蛋白质印迹法分别观察熊果酸对3T3-L1细胞胰岛素抵抗模型细胞分化相关蛋白脂肪细胞脂类结合蛋白、基质金属蛋白酶1和原癌基因Cb1相关蛋白(c-Cbl-associated protein,CAP)表达的影响。结果:在成功建立胰岛素抵抗模型的基础上,使用MTT法检测细胞活力,确定熊果酸的作用浓度在4～20μmol/L。与模型组相比,低、高剂量熊果酸组(10、20μmol/L)及罗格列酮组(5μmol/L)葡萄糖摄取均明显升高(P<0.01);低、高剂量熊果酸组3T3-L1脂肪细胞分化程度低于对照组和罗格列酮组。熊果酸可明显上调3T3-L1细胞胰岛素抵抗模型CAP mRNA及蛋白的表达(P<0.01)。结论:熊果酸改善3T3-LI脂肪细胞胰岛素抵抗模型糖代谢的同时可抑制其分化,这一机制可能与熊果酸上调脂肪细胞CAP的表达有关。

氯化镉在Balb/c3T3细胞转化过程中对细胞凋亡的影响

目的探讨氯化镉(CdCl2)在Balb/c 3T3细胞转化过程中对细胞凋亡的影响及其分子机制。方法N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)启动后,CdCl2持续处理Balb/c 3T3细胞14 d,建立两阶段细胞转化模型。苔盼蓝排染法检测CdCl2的细胞毒性,AnnexinV-FITC/PI双染色结合流式细胞仪检测细胞凋亡率,小鼠毒理基因芯片检测CdCl2促癌作用过程中的基因表达变化。结果1 mg/L MNNG启动后,324μg/L CdCl2持续处理能诱导细胞转化灶的出现。CdCl2处理2 d后细胞存活率降低,凋亡率显著升高。同时基因表达谱分析筛选出的差异表达基因中,有11个基因的功能与细胞凋亡有关,10个基因的功能与细胞抗氧化机制有关。结论CdCl2在促癌过程能诱导Balb/c 3T3细胞凋亡,同时影响凋亡和抗氧化相关基因的表达。

BALB/c 3T3细胞中性红摄取试验预测化合物急性毒性的验证研究

目的探讨BALB/c 3T3细胞中性红摄取试验预测化合物急性毒性的可行性,为建立细胞毒性试验预测急性毒性试验平台,开展化合物急性毒性筛查提供理论依据。方法选取11种受试物,开展BALB/c 3T3中性红摄取试验,以IC50结果与急性毒性试验LD50进行线性回归,将拟合的曲线与RC模型曲线进行比较。同时,将受试物的IC50值代入RC模型方程获得急性毒性LD50的预测值,依据GHS急性毒性分级法进行分级,与急性毒性试验的LD50和分级进行比较,同时对结果进行相关性分析。结果阳性对照十二烷基硫酸钠的结果符合试验质量控制的要求。受试物拟合曲线与RC模型曲线几乎平行,11种受试物中,LD50预测值与急性经口毒性试验分级一致的有9种。BALB/c 3T3细胞中性红摄取试验IC50值与急性毒性试验LD50值存在相关性(Pearson r=0.997,P<0.01)。受试物分级结果与实际分级具有等级相关性(Spearman r=0.905,P<0.01)。结论在本试验体系下,BALB/c 3T3细胞中性红摄取试验能够较好地预测急性毒性。既可以作为化合物急性毒性的快速初筛,又可为动物试验起始剂量的选择提供依据。

芦根复方提取液体外3T3中性红摄取光毒性试验研究

通过乙醇提取方法,以芦根、甘草、当归、丹参、山茱萸及地骨皮为组方,制备芦根复方提取液,生药质量浓度为0.05 g/m L。采用体外3T3中性红摄取试验,评估制备的芦根复方提取液潜在的光毒性。比较3T3中性红摄取试验中受试样品和阳性对照盐酸氯丙嗪(CPZ)在无光照及光照条件下对Balb/c 3T3细胞的IC_(50)值、光刺激因子(PIF)和平均光效应(MPE),以此评价样品预期产生光毒性的可能。结果显示,阳性对照品CPZ存在明显光毒性,而芦根复方提取液样品预期无光毒性。

BALB／c－3T3细胞的体外微核试验

利用已建立的ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３哺乳类细胞株，对苯并（ａ）芘、环磷酰胺、２－氨基蒽、２．硝基芴、亚硝化煤尘提取物和纸烟烟雾凝聚物，用微核试验作了遗传毒性的测试。结果表明：ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３细胞能活化某些前诱变物和前致癌物。看来ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３细胞微核试验，不需加外源性活化系统，作为体外遗传毒性测试系统十分有用。ｐ＜０．０１，以下同。表２环磷酰胺诱发ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３细胞微核试验结果表３２－氨基蒽和２－硝基芴诱发ＲＡＬＲ／Ｃ－３Ｔ３细胞微核试验结果处理时间为４８ｈ表４亚硝化煤尘和纸烟烟雾提取物诱发ＢＡＴＢ／Ｃ３Ｔ３细胞微核试验结果煤尘组浓度以原有煤尘量表示。５０μｌ纸烟烟雾凝聚物贮备液加入１０ｍｌ培养液。１，２和４支／ｍｌ相当于每平皿加入１／２０，１／１０和１／５支烟的烟雾，处理时间均为４８ｈ。三、讨论细胞中微核的形成是罕见的细胞遗传学现象。体内微核试验中，微核细胞分布呈负二项或泊松分布［１１］。但是，体外微核试验中微核细胞的分布情况尚无报道。根据我们溶剂对照组的资料，大多数实验中均数大于方差，故在这些体外试验中微核细胞的分布似乎并不服从于负二项或泊松分布。为了确定准确的分布类型还需要更多的实验资料。?

3T3中性红摄取光毒性试验的验证研究

目的验证3T3成纤维细胞中性红摄取实验检测化学物质光毒性试验方法的可行性。方法使用两种盲样对3T3成纤维细胞进行染毒,用中性红摄取法测定细胞活性。结果 1号样品预测有潜在光毒性,2号样品预测无潜在光毒性。结论 3T3成纤维细胞中性红摄取实验可用于检测化学物质的光毒性。

非促分裂酸性成纤维细胞生长因子抑制由放线菌素D诱导的Balb/c3T3细胞的凋亡

目的探讨非促分裂酸性成纤维细胞生长因子(nmaFGF)对放线菌素D(ActD)诱导Balb/c3T3成纤维细胞凋亡的保护作用。方法利用放线菌素D诱导3T3细胞凋亡的模型,将实验分为空白对照组、ActD处理组和nmaFGF处理组,采用DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪两种分析方法测定nmaFGF对3T3细胞凋亡的影响。并利用Western免疫印迹检测nmaFGF作用于3T3细胞后Akt信号通路中p-Akt分子的表达。结果空白对照组的凋亡率为1.53%;ActD处理组3T3细胞发生明显的细胞凋亡,凋亡率为33.83%;而nmaFGF处理组的细胞凋亡受到显著抑制,凋亡率分别下降到18.97%,15.17%和12.83%,凋亡下降率分别为14.86%,18.66和21.00%。Western半定量检测结果显示,在0.1～10μg/ml的浓度下,随着nmaFGF剂量的增加,p-Akt的表达水平有所增加,3T3细胞的凋亡率随之下降。结论nmaFGF可以通过AKT途径显著抑制由放线菌素D诱导的Balb/c成纤维细胞的凋亡。

海地瓜硫酸软骨素对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响

目的研究海地瓜硫酸软骨素(Acaudina Molpadioideschondroitin sulfate,AM-CHS)对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响,并探讨其作用机制。方法采用传统的鸡尾酒诱导剂诱导分化3T3-L1前脂肪细胞,以MTT法检测AM-CHS对3T3-L1前脂肪细胞及不同分化阶段3T3-L1细胞增殖活性的影响;分别采用油红O染色和甘油三酯(triglycerides,TG)含量测定法评价其对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。采用RT-PCR法检测脂肪细胞中过氧化物酶体增殖体激活受体γ(peroxisome proliferators-activated receptors gamma,PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer bind-ing protein alpha,C/EBPα)、固醇调节元件结合蛋白-1c(ste-rol regulatory element binding protein-1c,SREBP-1c)等分化相关基因的mRNA表达水平。结果 AM-CHS能明显抑制3T3-L1前脂肪细胞和成熟脂肪细胞的增殖,抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化过程,以对分化早期的抑制作用最强。RT-PCR结果表明,AM-CHS能明显降低脂肪细胞PPARγ、C/EBPα和SREBP-1c mRNA的表达。结论海地瓜AM-CHS能明显抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖和分化,其作用机制与下调分化相关基因PPARγ、C/EBPα和SREBP-1c的表达有关。