c-FLIP(L)在乳腺癌中表达的意义及对凋亡的调节

目的:检测乳腺浸润性导管癌组织中c-FLIP(L)蛋白的表达,探讨c-FLIP(L)在乳腺癌中的临床病理意义,以及对乳腺癌细胞凋亡、增殖的影响。方法:收集116例乳腺浸润性导管癌标本,应用免疫组化技术分析c-FLIP(L)与乳腺癌临床病理因素的相关性。以TUNEL标记肿瘤细胞凋亡指数,Ki-67标记增殖指数,分析c-FLIP(L)与细胞凋亡、增殖的相关性。结果:c-FLIP(L)蛋白定位于浸润性导管癌癌细胞胞浆中,ER、PR、Ki-67定位于肿瘤细胞胞核,Her-2定位于肿瘤细胞胞膜,TUNEL染色定位于肿瘤细胞胞核。c-FLIP(L)蛋白高表达与患者低年龄(<35岁)、绝经前、未发生远处转移、较早的pTNM分期(Ⅰ～Ⅱ期)密切相关:与家族史、手术方式、肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级和肿瘤复发等临床病理因素不存在显著相关性。在总病例中,ER阳性64例(55.17%),PR阳性43例(37.07%),Her-2阳性19例(16.38%)。c-FLIP(L)高表达与ER、PR之间存在显著相关性(P<0.05),与Her-2表达无关。c-FLIP(L)蛋白表达与乳腺癌凋亡指数正相关(r=0.544,P<0.05),虽然呈现c-FLIP(L)表达越高增殖指数越低的趋势,但二者之间相关系数无统计学意义(r=0.148,P>0.05)。结论:在乳腺癌中,c-FLIP(L)阳性表达提示患者较为良好的临床预后,该因子可能直接或间接参与肿瘤细胞凋亡过程,具有进一步研究的价值。

凋亡相关基因Bax、FasL、c-FLIP在浆液性卵巢癌中的表达

目的:探讨凋亡相关基因Bax、Fas L、c-FLIP在浆液性卵巢癌中的表达及意义。方法:应用免疫组织化学SP法及实时定量PCR法检测卵巢浆液性囊腺瘤(16例)、交界性浆液性囊腺瘤(25例)、浆液性囊腺癌(48例)组织中Bax、Fas L、c-FLIP蛋白及mRNA的表达情况。结果:Bax、Fas L、c-FLIP在卵巢浆液性囊腺瘤组织的细胞浆中未见明显的棕黄色颗粒沉着,而在交界性浆液性囊腺瘤、浆液性囊腺癌组织的细胞浆中可见明显的棕黄色颗粒沉着,其中以浆液性囊腺癌阳性表达最高。与卵巢浆液性囊腺瘤组相比,交界性浆液性囊腺瘤、浆液性囊腺癌中Bax、Fas L、c-FLIP mRNA表达显著增高(P<0.05)。结论:Bax、Fas L、c-FLIP凋亡相关基因在卵巢癌中蛋白及mRNA的表达呈一致升高趋势,可能通过调控凋亡相关途径共同参与了卵巢癌的发生发展过程,为临床上卵巢癌防治提供新靶点。

c-FLIP-L影响乳腺癌MDA-MB-231细胞对TRAIL致凋亡作用的敏感性

目的:观察c-FLIP-L对TRAIL诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响及其具体机制。方法:构建靶向c-FLIP-L的siRNA质粒,转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,RT-PCR、Weston blotting验证基因抑制效果。实验分空白对照组、TRAIL组、c-FLIP-L siRNA组和c-FLIP-L siRNA+TRAIL组共4组,MTT法检测各组MDA-MB-231细胞的增殖情况,流式细胞术检测MDA-MB-231细胞凋亡率,Transwell实验检测MDA-MB-231细胞侵袭能力,RT-PCR、Western blotting检测MDA-MB-231细胞中c-FLIP-L、caspase-3、caspase-8、MMP-2、MMP-9的表达。结果:靶向c-FLIP-L的siRNA质粒转染至乳腺癌细胞株可有效抑制c-FLIP-L mRNA[(37.12±3.02)vs(183.21±8.31),(174.65±10.06);P<0.05]及其蛋白的水平。c-FLIP-L siRNA和TRAIL联合处理MDA-MB-231细胞,与两者单独处理相比,细胞增殖抑制率显著升高[72 h时,(75.51±2.01)%vs(33.75±1.60)%,(34.31±2.01)%;均P<0.05],凋亡率显著升高[72 h时,(76.30±4.11)%vs(38.95±2.14)%,(29.28±1.66)%;均P<0.05],对细胞侵袭能力的抑制也显著增强。c-FLIP-L siRNA和TRAIL联合处理后,与两者单独处理相比,乳腺癌细胞中casepase-3、casepase-8的表达显著增强,而MMP-2、MMP-9的表达明显减弱。结论:抑制c-FLIP-L表达能够增强MDA-MB-231细胞对TRAIL的敏感性,从而提高诱导肿瘤细胞凋亡的能力,其机制可能与caspase-3、caspase-8的表达上调和MMP-2、MMP-9的表达下调有关。

载c-FLIP反义寡核苷酸聚乳酸聚羟乙酸纳米粒的制备及特性评价

目的研究c-FLIP反义寡核苷酸(c-FLIPantisenseoligodeoxynucleotide,c-FLIP ASODN)的聚乳酸聚羟乙酸(PL-GA)纳米粒的制备工艺,并通过实验对纳米粒子进行评价。方法通过二次超声乳化和溶剂挥发技术将PLGA用于基因导入的载体制备,并评价载c FLIP ASODN的PLGA纳米粒的特性,包括粒子形态、包封率和保护作用等。结果制备的纳米粒子外观呈规则的球形,其粒径尺寸平均为95.5nm,平均包封率为48%,载药量为(0.579±0.016)%,体外释放达15d,经过PLGA纳米粒的包裹,对c FLIP ASODN起到保护作用。结论纳米粒包裹的c FLIP ASODN制备工艺简便,粒子性状符合要求,并能有效保护反义寡核苷酸免于核酸酶的降解而延长其作用时间。

凋亡抑制蛋白c-FLIP(L)对肺癌细胞增殖迁移的影响

目的:近来凋亡抑制蛋白c-FLIP(L)作为新的抗肿瘤治疗靶点受到关注,为了探讨c-FLIP(L)在肺癌细胞迁移中的作用,我们建立了c-FLIP(L)高表达稳定细胞株,以比较c-FLIP(L)在肺癌细胞株中表达水平与其细胞迁移能力的关系。方法:采用非小细胞肺癌A549细胞株进行转染c-FLIP(L)真核表达质粒,通过G418筛选出多株c-FLIP(L)高表达单克隆,以此为平台研究c-FLIP(L)在肿瘤细胞迁移过程中的作用。通过实时荧光定量QPCR及Western Blot检测稳定株中c-FLIP(L)表达水平;划痕实验及Transwell法检测cFLIP(L)高表达对肺癌细胞迁移的影响,并通过荧光骨架蛋白染色观察细胞形态的改变。结果:QPCR和Western Blot显示A549稳定细胞株中c-FLIP(L)均为高表达;Wound healing和Transwell实验表明c-FLIP(L)高表达肺癌细胞迁移能力明显上升,并初步探索了c-FLIP(L)表达对细胞骨架的影响。结论:凋亡抑制蛋白c-FLIP(L)的高表达能促进肺癌A549细胞的迁移。

左卡尼汀抑制NF-κB敏化TRAIL诱导神经胶质瘤细胞凋亡

目的探讨左卡尼汀作为TRAIL(tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand)敏化剂,增强TRAIL对神经胶质瘤细胞诱导凋亡的效果,并对其敏化作用的机制进行研究。方法以U87为神经胶质瘤细胞模型,通过CCK-8检测细胞活性,Annexin V-FITC/PI染色、caspase-3表达及活性等指标检测细胞凋亡,通过RT-PCR、Western blot对NF-κB(nuclear factor kappa B)和c-FLIP(FLICE抑制蛋白)的转录与表达进行分析,沉默NF-κB,分析其与c-FLIP的关系。结果 TRAIL与左卡尼汀联用,癌细胞存活率明显下降,凋亡明显上升;联用组与对照组相比,c-FLIP的转录和蛋白表达以及NF-κB的转录均有明显降低;沉默NF-κB证明其为c-FLIP上游因子。结论左卡尼汀与TRAIL可以产生协同作用,诱导U87细胞凋亡,其敏化机制与抑制NF-κB信号通路以及其下游c-FLIP表达有关。

c-FLIP(L)基因的RNAi靶向沉默干扰大肠癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨RNAi靶向沉默c-FLIP(L)基因对大肠癌细胞株SW480凋亡的影响。方法将实验对象分为空白组、实验组、阴性对照组、脂质体组4组,应用RNAi技术将c-FLIP(L)基因对应的SiRNA片段转染入大肠癌细胞中,采用半定量RT-PCR法对前后FLIPmRNA水平变化进行判断,应用Western blot对FLIP蛋白水平变化进行分析,通过分析比较SiRNA片段转染前后TRAIL诱导的大肠癌细胞凋亡情况。结果 c-FLIP(L)基因对于人大肠癌细胞株SW480中的FLIPmRNA水平和FLIP蛋白水平有明显的降低作用,SiRNA片段转染后,有效遏制了大肠癌细胞株SW480的增殖,促进了癌细胞的凋亡,P<0.05,差异具有统计学意义。结论 c-FLIP(L)基因的RNAi靶向沉默能够促进大肠癌细胞的凋亡,具有一定应用前景的医用价值。