c-Jun氨基末端激酶信号转导通路与蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛关系的研究进展

脑血管痉挛（cerebral vasospasm,CVS）是蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage,SAH）后最严重的并发症之一,其发生率高达30%~90%。常引起严重局部脑组织缺血或迟发性缺血性脑损害,导致严重的神经功能障碍,成为SAH致死、致残的重要原因。

黄连碱预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠JNK/p38MAPK信号通路的影响

目的:探讨黄连碱预处理对心肌缺血再灌注(MI/RI)大鼠c-Jun氨基末端激酶(JNK)/促分裂素原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路的影响。方法:将60只大鼠随机分为MI/RI组、假手术组、黄连碱低剂量组(黄连碱-L组,50 mg/kg黄连碱)、黄连碱中剂量组(黄连碱-M组,100 mg/kg黄连碱)、黄连碱高剂量组(黄连碱-H组,200 mg/kg黄连碱)及黄连碱-H+激活剂组(50 mg/kg黄连碱+25 mg/L JNK/p38MAPK通路激活剂茴香霉素),每组10只。除假手术组外,其余各组均进行冠状动脉结扎构建MI/RI大鼠模型,造模后,观察血流动力学参数左室内压最大上升(LVdp/dt_(max))、左室内压最大下降速率(LVdp/dt_(min))、收缩压以及舒张末压变化;采集大鼠腹部主动脉血,评估心肌损伤程度指标肌酸激酶同工酶(CK-MB)及乳酸脱氢酶(LDH)含量;分离心肌组织,检测心肌组织病理学变化、细胞凋亡、炎性因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)]水平及JNK/p38MAPK通路相关蛋白表达。结果:与假手术组比较,MI/RI组存在大量炎性细胞浸润、组织结构紊乱,病理损伤严重,LVdp/dt_(max)、LVdp/dt_(min)、收缩压均降低,但凋亡率、舒张压、LDH、CK-MB、TNF-α、IL-6含量、p-JNK/JNK、p-p38MAPK/p38MAPK表达增加(P<0.05);与MI/RI组比较,黄连碱-L组、黄连碱-M组、黄连碱-H组病理损伤得到改善,LVdp/dt_(max)、LVdp/dt_(min)、收缩压均增加,凋亡率、舒张压、LDH、CK-MB、TNF-α、IL-6含量、p-JNK/JNK、p-p38MAPK/p38MAPK表达降低(P<0.05);与黄连碱-H组比较,黄连碱-H+激活剂组病理损伤进一步加剧,LVdp/dt_(max)、LVdp/dt_(min)、收缩压均降低,但凋亡率、舒张压、LDH、CK-MB、TNF-α、IL-6含量、p-JNK/JNK、p-p38MAPK/p38MAPK表达增加(P<0.05)。结论:黄连碱预处理可通过抑制JNK/p38MAPK通路减轻MI/RI大鼠心肌损伤。

阿托伐他汀钙对甲状腺功能减退大鼠甲状腺功能、免疫应答及JNK/p38 MAPK信号通路的影响

目的探讨阿托伐他汀钙对甲状腺功能减退大鼠甲状腺功能、免疫应答及c-Jun氨基末端激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶(JNK/p38 MAPK)信号通路的影响。方法将30只健康成年雄性SD大鼠随机分为对照组(control组)、甲状腺功能减退组(PTU组)以及阿托伐他汀钙治疗组(ACT组),每组10只。PTU组及ACT组大鼠每天颈背皮下注射PTU,连续28 d;control组每只大鼠皮下注射0.3 mL生理盐水代替PTU。PTU处理2周后,ACT组大鼠灌胃阿托伐他汀钙生理盐水溶液3 mL(含阿托伐他汀钙5 mg/kg),每天给药1次;对照组按相同方法灌胃等量生理盐水。每周测量大鼠体质量、进食及饮水量的变化。通过组织病理切片观察各组大鼠甲状腺组织病理变化。酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠血清中三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、促甲状腺激素(TSH)、干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)水平;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测IFN-γ、IL-10、Foxp3和IL-4的mRNA水平;蛋白免疫印迹(Western blot)检测p-JNK/JNK和p-p38/p38 MAPK水平。结果与control相比,PTU诱导的甲状腺功能减退大鼠体质量降低,食物和水消耗减少,差异有统计学意义(P<0.05)。阿托伐他汀钙治疗2周后,PTU大鼠体质量损失受到抑制,食物和水的消耗改善,差异有统计学意义(P<0.05)。阿托伐他汀钙可提高甲状腺功能减退大鼠血清T3、T4水平,降低血清TSH水平,差异有统计学意义(P<0.05)。阿托伐他汀钙治疗可减轻PTU诱导的滤泡细胞增生及相关肥厚变化等组织病理学改变,增加卵泡大小,差异有统计学意义(P<0.05)。阿托伐他汀钙治疗后增加了PTU大鼠的脾脏质量,降低了甲减大鼠IFN-γmRNA的表达,但增加了IL-10 mRNA、Foxp3 mRNA和IL-4 mRNA的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。阿托伐他汀钙治疗后,甲状腺功能减退大鼠甲状腺组织中p-JNK/JNK和p-p38/p38 MAPK水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论阿托伐他汀钙治疗甲状腺功能减退症具有促使甲状腺激素失衡正常化、平衡Th1/Th2细胞因子、抑制JNK/p38 MAPK信号通路活化的功能。

细胞外组蛋白H4对淋巴细胞凋亡的影响及其与MAPKs信号通路的调控关系

目的探讨细胞外组蛋白H4对小鼠淋巴细胞Raw264.7细胞凋亡的影响及其与促分裂素原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路的调控关系。方法收集Raw264.7细胞分为低浓度刺激组、高浓度刺激组及对照组,分别加入50μg/m L、100μg/m L组蛋白H4及不做任何处理,采用FCM法检测各组细胞凋亡率,选取既能诱导细胞凋亡又具有较低细胞毒性的组蛋白刺激浓度进行后续实验。组蛋白H4在去除脂多糖污染后,使用筛选浓度刺激Raw264.7细胞,分别在刺激开始0、5、10、30、60、120 min收取细胞,Western blotting法检测细胞磷酸化ERK(p-ERK)、p-JNK、p-p38蛋白表达。分别使用ERK通路抑制剂、JNK通路抑制剂、p38通路抑制剂、DMSO细胞冻存液预处理Raw264.7细胞1 h,作为ERK抑制组、JNK抑制组、p38抑制组、阴性对照组,另设空白对照组正常培养不做处理,每组分别给予或不给予筛选浓度的组蛋白刺激,采用FCM法检测各组给予或不给予组蛋白刺激的细胞凋亡率。结果低浓度刺激组、高浓度刺激组细胞凋亡率均高于对照组(P均<0.05),低浓度刺激组、高浓度刺激组细胞凋亡率比较差异无统计学意义,但高浓度刺激组晚期细胞凋亡率及死亡率较低浓度刺激组增高(P均<0.05)。考虑到细胞毒性,选取50μg/m L作为组蛋白H4的刺激浓度。p-ERK蛋白表达在组蛋白刺激10 min及30 min时均高于0 min时,且在30 min时达到高峰,在60 min及120 min时降至初始水平;p-JNK蛋白表达在组蛋白刺激10 min及30 min时均高于0 min时,且在10 min时达到高峰,在60 min及120 min时降至初始水平(P均<0.05);p-p38蛋白表达在各时点差异均无统计学意义。空白对照组、阴性对照组组蛋白刺激的Raw264.7细胞凋亡率均高于没有组蛋白刺激的细胞(P均<0.05),ERK1、JNK及p38抑制组组蛋白刺激、不刺激的细胞凋亡率比较差异均无统计学意义。结论细胞外组蛋白H4刺激可促进淋巴细胞凋亡,其作用可能通过激活MAPKs信号通路中ERK和JNK信号分子来实现。

木犀草素对慢性肾衰竭大鼠c-Jun氨基末端激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路及肾小球基膜增生的影响

目的探讨木犀草素对慢性肾衰竭(CRF)大鼠肾小球基膜(GBM)增生及c-Jun氨基末端激酶(JNK)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路的影响。方法将50只SD大鼠分为模型组、木犀草素低、中、高剂量组、阳性对照组,每组各10只,建立CRF大鼠模型。造模结束后,木犀草素低、中、高剂量组大鼠分别以50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg木犀草素灌胃,阳性对照组大鼠以2 mg/kg贝那普利灌胃。另取10只大鼠作为正常组,正常组和模型组大鼠以生理盐水灌胃,6组均连续灌胃28 d。记录6组大鼠实验前后体质量、24 h尿量、24 h尿蛋白并比较,采用HE染色、Masson染色观察6组大鼠肾脏组织结构变化。检测各组大鼠实验后SCr、BUN、UA、FN、ColⅣ水平并比较。采用蛋白质免疫印迹法检测肾脏组织中JNK、p-JNK、p38 MAPK、p-p38 MAPK水平并比较。结果实验后,模型组大鼠精神状态较差,体质量低于同期正常组,24 h尿量、24 h尿蛋白水平均高于同期正常组(P<0.05);木犀草素中、高剂量组、阳性对照组大鼠精神状态较同期模型组均有一定程度改善,体质量较同期模型组均升高,24 h尿量、24 h尿蛋白较同期模型组均降低(P<0.05)。光镜下可见模型组肾脏组织GBM增生,肾小管萎缩,局部灶紊乱明显,肾小球和肾小管纤维化明显;木犀草素低、中、高剂量组、阳性对照组大鼠精神状态、病理情况均有一定程度改善。与正常组比较,模型组SCr、BUN、UA、FN、ColⅣ水平均升高(P<0.05);与模型组比较,木犀草素中、高剂量组、阳性对照组SCr、BUN、UA、FN、ColⅣ及肾脏组织中p-JNK/JNK、p-p38 MAPK/p38 MAPK水平均降低(P<0.05)。与正常组比较,模型组肾脏组织中p-JNK/JNK、p-p38 MAPK/p38 MAPK水平均升高(P<0.05)。结论木犀草素可缓解CRF导致的GBM增生现象,可能是通过抑制JNK/MAPK信号通路实现的。

砷通过c-Jun氨基端激酶及蛋白激酶B信号传导通路对mdig基因表达的影响

mdig基因（mineraldust-inducedgene）亦称为mina-53及核蛋白52,2005年首先从煤矿工人的肺巨噬细胞中分离[1-3].在肺癌、乳腺癌、结肠癌、食道癌、胃癌、肝细胞癌、淋巴瘤及肾细胞癌等恶性肿瘤高表达,是一种潜在的新的致癌基因[4].砷（As）或砷化物是广为人知的致癌物[5],但砷致癌的机制尚不清.现有资料提示三氯化砷可通过激活促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）[6]、转录激活因子AP-1[7]、p53[8]及核因子-κB[9]等信号通路而发挥致癌作用.二氧化硅粒子及烟草烟雾可诱导人支气管上皮细胞中mdig基因高表达,但砷化物与mdig基因表达的关系目前尚不清.本研究探讨三氯化砷与mdig基因表达的关系、职业性及环境性三氯化砷暴露致癌的发病机制.

基于JNK/c-Jun与p38MAPK信号通路的肝再生调控的双向平衡

肝细胞有效再生以代偿肝功能是促进肝衰竭良好转归的生理基础。肝再生调控机制复杂而精密,肝细胞大面积死亡后触发的肝再生进程能否动态平衡并适时终止,直接关系到肝再生速率及再生肝组织正常功能的实现。丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是最为经典的丝/苏氨酸蛋白激酶信号系统,具有广泛的生物学功能,其下游可通过c-Jun氨基末端激酶(JNK)/c-Jun与p38MAPK信号途径参与肝脏的生理与病理进程。本文从JNK/c-Jun与p38MAPK信号途径入手,剖析其在肝衰竭肝再生过程中的变化特点,以理解肝再生调控的复杂性及其双向平衡的基本特质。

CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型肝纤维化逆转与MAPK信号通路的研究

目的通过检测CCl4诱导肝纤维化大鼠逆转恢复各时期MAPK信号通路蛋白动态变化,研究其在肝纤维化恢复期可能的调控作用。方法采用CCl4皮下注射SD大鼠12周,复制肝纤维化模型,分别于注射12周,停药后2、4、6、8周取材。通过检测各组ALT、AST、Hyp、LN、PⅢNP的含量变化和肝脏病理组织切片Masson染色,加以验证。采用West-ern blot法检测各组肝组织中MAPK通路蛋白表达。结果 ALT、AST、Hyp、LN、PⅢNP等反映肝损伤和纤维化进程的指标在第12周最高,即模型组最高,并且随着肝纤维化逆转而含量逐渐降低,Masson染色结果与之一致,表明大鼠肝纤维化模型期与各恢复期模型建立完成。p-ERK1/2在模型组表达明显降低,与正常组相比差异有显著性(P<0.01),恢复4周表达明显升高,与模型组相比差异有显著性(P<0.01),以后逐渐降低。p-JNK1/2在模型组表达明显降低(P<0.01),恢复期逐渐升高(P<0.05)。p-p38在模型组表达明显升高(P<0.01),恢复期逐渐降低(P<0.05)。p-ERK/ERK与Hyp相关系数r=-0.46,P=0.003;p-JNK/JNK与Hyp相关系数r=-0.53,P=0.0004;p-p38/p38与Hyp相关系数r=0.81,P=0.0001。结论 MAPK信号通路中的ERK、JNK和p38信号通路在肝纤维化逆转中发挥重要作用。

阿魏酸钠对肺结核模型大鼠JNK/P38MAPK信号通路的调节作用及巨噬细胞凋亡的抑制作用研究

目的探讨阿魏酸钠对肺结核模型大鼠c-Jun氨基末端激酶(JNK)/P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)信号通路的调节作用,以及对巨噬细胞凋亡的抑制作用。方法将90只SD大鼠随机法分为对照组(A组),模型组(B组),阿魏酸钠低、中、高剂量组(C1组、C2组、C3组)及阳性对照组(D组),每组15只。除A组外,其余大鼠均尾静脉注射结核杆菌悬液建立肺结核模型,C1组、C2组、C3组大鼠分别按50,100,150 mg/kg剂量灌胃给药,D组大鼠按10 m L/kg剂量灌胃康复新液,A组及B组大鼠灌胃等量生理盐水,所有大鼠均1天给药1次,连续给药12周。采用酶联免疫吸附法检测大鼠的血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)水平,肺组织超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)水平,采用Annexin V-FITC/PI细胞凋亡法检测肺泡巨噬细胞凋亡率,采用苏木精-伊红染色法检查大鼠肺组织的病理学变化,采用实时荧光定量聚合酶链式法检测大鼠肺组织JNK和P38MAPK mRNA水平,采用蛋白质免疫印迹法检测大鼠肺组织JNK、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、P38MAPK、磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶(p-P38MAPK)蛋白水平。结果与B组比较,C1组、C2组、C3组、D组大鼠血清TNF-α,IL-6,IL-1β水平,肺组织MDA,JNK mRNA,P38MAPK mRNA,JNK,p-JNK,P38MAPK,p-P38MAPK水平,以及肺组织巨噬细胞凋亡率均显著降低,肺组织SOD活性均显著升高(P <0.05);B组大鼠肺组织可见增生型肺结核结节、肺间质水肿及大量炎性细胞浸润、坏死细胞脱落,C1组、C2组、C3组、D组大鼠肺组织结构恢复,炎性细胞浸润及细胞脱落明显减轻。结论阿魏酸钠能明显降低肺结核模型大鼠炎性反应水平及肺组织氧化应激损伤程度,抑制肺泡巨噬细胞凋亡,改善大鼠肺组织病理学,其作用机制可能与调节JNK/P38MAPK信号通路有关。

JNK信号通路研究进展

c-Jun氨基末端激酶(JNK)家族是促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)超家族成员之一,以JNK为中心的JNK信号通路可被细胞因子、生长因子、应激等多种因素激活,大量实验提示JNK信号通路在细胞分化、细胞凋亡、应激反应以及多种人类疾病的发生与发展中起着至关重要的作用。现对JNK信号通路的基本构成、调节方式及其与胞内其他信号通路间相互作用进行综述。

TGF-β/Smad、p38MAPK及JNK/SAPK信号通路在糖尿病肾病发生发展中作用机制的研究进展

糖尿病肾病(DKD)是糖尿病常见的微血管并发症,由细胞因子介导的相关信号传导通路在DKD损伤过程中发挥显著作用,其中TGF-β/Smad、p38MAPK、JNK/SAPK是DKD发生发展过程中重要的信号分子。TGF-β/Smad是诱导足细胞凋亡、损伤,介导肾小球硬化及肾间质纤维化的经典信号通路。p38MAPK、JNK/SAPK信号通路可以通过氧化应激、触发炎症因子及活化炎症途径等过程,参与足细损伤,导致肾脏功能性及器质性改变,引起蛋白尿和肾小球硬化。

骨关节炎相关信号通路的研究进展

骨关节炎是一种严重影响患者生活质量的关节退行性疾病,其病因及发病机制尚不完全清楚。目前,国内外大量研究已证实骨关节炎的病理变化过程与众多信号通路有密切联系,其中部分信号通路与介导骨关节炎软骨破坏及调控软骨细胞凋亡有关,如p38丝裂原活化蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶、Toll样受体等信号通路等;还有部分信号通路对骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡具有双重调节作用,如细胞外调节蛋白激酶、Notch、Wnt等信号通路。本文就骨关节炎相关信号通路的研究进展进行了综述。

橄榄苦苷对脑缺血再灌注损伤大鼠神经元凋亡及JNK/p38 MAPK信号通路的影响

目的研究橄榄苦苷对脑缺血再灌注损伤大鼠神经元凋亡及c-Jun氨基末端激酶(JNK)/促分裂素原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路的影响。方法SD大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组(0.5 mg/kg)及橄榄苦苷高、低剂量组(40、20 mg/kg),每组14只。连续灌胃给药14 d,末次给药结束后采用线栓法建立脑缺血再灌注损伤模型,进行2 h缺血后再灌注24 h,测定神经症状评分、脑梗死面积、脑组织含水量、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关的x蛋白(Bax)mRNA表达及磷酸化的JNK(p-JNK)、磷酸化的p38 MAPK(p-p38)蛋白表达等指标。结果与模型组比较,橄榄苦苷高、低剂量组大鼠神经症状评分、脑梗死面积及橄榄苦苷高剂量组脑组织含水量均显著降低(P<0.05);与模型组比较,橄榄苦苷高、低剂量组大鼠Caspase-3、Bax mRNA及p-JNK、p-p38蛋白表达均明显降低(P<0.05),而Bcl-2 mRNA表达明显增加(P<0.05)。结论橄榄苦苷对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,该作用与抑制JNK/p38 MAPK信号通路的活化进而减少神经元凋亡有关。

补肾活血汤对系膜增生性肾小球肾炎大鼠肾功能及JNK/p38 MAPK信号通路的影响

目的:探讨补肾活血汤对系膜增生性肾小球肾炎大鼠的肾功能及c-Jun氨基末端激酶(JNK)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路的影响。方法:建立系膜增生性肾小球肾炎大鼠模型,56只成功造模大鼠按随机数字表法分成4组:模型组、缬沙坦组(10.3 mg/kg)、补肾活血汤低剂量组(5 g/kg)、补肾活血汤高剂量组(10 g/kg),每组14只;另取14只大鼠不做任何处理设为对照组;各药物组大鼠灌胃相应药物,模型组和对照组大鼠灌胃蒸馏水。给药4周后,检测大鼠24 h尿蛋白、血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、肾组织JNK、p38 MAPK信使核糖核酸(mRNA)和蛋白表达水平,苏木素伊红染色观察肾组织病理结构。结果:对照组肾小球结构正常;模型组可见明显弥漫性系膜细胞增生,伴大量中性粒细胞浸润,可见明显轻度纤维化;缬沙坦组及补肾活血汤高剂量组系膜细胞增生减少,内皮细胞轻度增生,中性粒细胞浸润减少;补肾活血汤低剂量组仍然可见肾小球肿胀增生。与对照组比较,模型组24 h尿蛋白、血清SCr、BUN、肾组织JNK、p38 MAPK mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,缬沙坦组和补肾活血汤低、高剂量组24 h尿蛋白、血清SCr、BUN、肾组织JNK、p38MAPK mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05),且补肾活血汤高剂量组24 h尿蛋白、血清SCr、BUN、肾组织JNK、p38MAPK mRNA和蛋白表达水平低于补肾活血汤低剂量组(P<0.05);补肾活血汤高剂量组和缬沙坦组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:补肾活血汤对系膜增生性肾小球肾炎大鼠具有肾保护作用,可改善大鼠肾功能和肾组织病理反应,其机制可能与补肾活血汤抑制JNK、p38 MAPK mRNA和蛋白的表达进而抑制JNK/p38 MAPK信号通路的激活有关。

基于JNK/p38 MAPK信号通路探讨加味春泽汤治疗脊髓损伤尿潴留大鼠的机制

目的:探讨加味春泽汤对脊髓损伤尿潴留大鼠及c-Jun氨基末端激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶(JNK/p38 MAPK)信号通路的影响。方法:70只SD雌性大鼠造模前随机选出10只大鼠作为空白组,10只大鼠作为假手术组,剩余50只用脊髓横断法制备脊髓损伤尿潴留模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、加味春泽汤低、高剂量组和抑制剂组。造模结束后,空白组、假手术组和抑制剂组给予生理盐水2 mL灌胃,加味春泽汤高、低剂量组分别给予加味春泽汤28.8、14.4 g·kg^(-1)灌胃,抑制剂组每周给予JNK抑制剂SP600125腹腔注射2次15 mg·kg^(-1),各组大鼠均灌胃28 d。尿流动力学检测和膀胱肌拉力条检测评价大鼠膀胱功能;苏木素-伊红(HE)染色观察膀胱平滑肌组织形态;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测JNK、磷酸化(p)-p38 MAPK、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和胱天蛋白酶-3(Caspase-3)含量;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测膀胱逼尿肌p-JNK、p-p38 MAPK、转录激活因子ETS样蛋白-1(ELK-1)、激活蛋白1(AP1)蛋白表达;免疫荧光检测p-JNK、p-p38 MAPK、AP1表达量;原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡率。结果:与空白组和假手术组比较,模型组最大膀胱容量和膀胱顺应性显著增加,漏尿点压力显著降低,最小收缩力显著增加,收缩频率显著降低(P<0.01),膀胱平滑肌结构混乱,存在大量空泡细胞和组织水肿,有单核细胞浸润和明显的出血,结缔组织呈纤维化趋势,TUNEL阳性细胞明显增多,p-JNK、p-p38 MAPK、AP1和ELK-1蛋白表达显著增加(P<0.01);与模型组比较,各干预组的尿流动力学和膀胱肌条收缩检测均有明显改善,加味春泽汤低剂量组p-p38 MAPK含量显著降低(P<0.01),Caspase-3含量减低(P<0.05);高剂量组JNK、p-p38和Caspase-3含量显著降低(P<0.01),Bcl-2含量显著增加(P<0.01);p-JNK、p-p38 MAPK和AP1蛋白表达水平显著降低(P<0.01),ELK-1蛋白表达水平降低(P<0.05),p-JNK、AP1受体阳性率显著降低(P<0.01),阳性细胞率显著降低(P<0.01),而加味春泽汤高剂量组药效位于加味春泽汤低剂量组和抑制剂组之间,与抑制剂组之间比较差异无统计学意义。结论:加味春泽汤能改善脊髓损伤尿潴留,增强膀胱平滑肌收缩力,该作用与抑制JNK/p38 MAPK信号通路活化进而减少膀胱平滑肌细胞凋亡有关。

表皮生长因子对Hela细胞紧密连接蛋白3表达的影响及其可能机制

目的探讨表皮生长因子(EGF)对宫颈癌Hela细胞紧密连接蛋白3(Claudin-3)表达的影响及其可能机制。方法培养Hela细胞至贴壁,接种至3组6孔板,分别进行如下处理:(1)以0.0、0.5、5.0、10.0及100.0 ng/ml EGF处理8 h,测评不同浓度EGF对Claudin-3蛋白及其信使RNA(m RNA)的影响;(2)培养基中加入10 ng/ml EGF,分别于培养0 min、10 min、30 min、1 h、2 h、4 h、8 h、24 h,测评Claudin-3蛋白及m RNA水平、EGF相关作用通路各蛋白磷酸化情况;(3)分别以EGF受体(EGFR)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3-K)、促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)、p38、c-Jun氨基末端激酶(JNK)阻断剂干预1 h,随后加入含EGF 10 ng/ml的培养基培养,测评Claudin-3蛋白及m RNA水平。结果 EGF对Hela细胞Claudin-3蛋白及m RNA的表达有促进作用,且10 ng/ml EGF的促进作用最明显,该促进作用随EGF刺激时间的延长而增强。EGF刺激后,EGFR、蛋白激酶B(AKT)、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、p38、JNK均发生磷酸化,各阻断剂均能特异性阻断EGF诱导的上述磷酸化现象。阻断EGFR、PI3-K、MAPK、p38及JNK信号通路均能有效抑制Claudin-3蛋白的表达。结论 EGF能够增加Hela细胞Claudin-3的表达,其机制可能涉及EGFR、PI3-K、MAPK、p38及JNK信号通路。

四羟基壬烯对前列腺癌雄激素拮抗作用的机制研究

目的:探讨四羟基壬烯(4-HNE)通过雄激素受体(AR)-促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在前列腺癌雄激素拮抗作用中的机制。方法:将前列腺癌LNCaP细胞分为野生型组(对照组)和转染组,转染组又分为空载体转染组(NC-L7组)及GSTA4基因转染组(A0718,GSTA4-OE组)。GSTA4-OE组给予LNCaP细胞培养、GSTA4质粒转染构建LNCaP的4-HNE稳转细胞系,对照组给予LNCaP细胞培养、未做GSTA4质粒转染。通过不同浓度4-HNE(0、40、80、120μmol/L)刺激前列腺癌细胞,活化AR信号通路,采用Western印迹检测AR、MAKP、AKT、PKCα蛋白的表达。选择60例患者前列腺癌组织及60例患者良性前列腺增生组织,采用免疫组化染色技术测定以上组织中4-HNE的阳性表达率,分析4-HNE阳性表达与肿瘤Gleason分级以及前列腺癌进展为CRCP的相关性。结果:GSTA4-OE组细胞内4-HNE的水平受到抑制。Western印迹检测结果显示:与对照组相比,GSTA4-OE组细胞PKCα蛋白表达水平显著降低(P<0.05),AR、AKT蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。40、80、120μmol/L 4-HNE处理前列腺癌细胞后,与对照组相比,处理组AKT的表达量显著降低(P<0.01),MAKP(P<0.01)、PKC(P<0.01)、AR(P<0.01)的表达量显著升高。免疫组化结果显示,60例良性前列腺增生组织中4-HNE阳性率为5.0%,60例前列腺癌组织中4-HNE阳性率为63.3%,差异有统计学意义(P<0.01)。在Gleason分级1~5级中4-HNE阳性率分别为41.2%、50.0%、63.6%、81.8%、100.0%,随着Gleason分级越高,4-HNE阳性率越高,差异有统计学意义(P<0.05)。随访10~35个月,其中33例患者进展为CRCP,27例患者未进展为CRCP,4-HNE在2组中的阳性表达率差异有统计学意义(P<0.01)。结论:在4-HNE作用下AR-MAPK通路相关蛋白表达上升,4-HNE可能通过AR-MAPK通路对前列腺癌进展起到促进作用,有望成为CRPC新的治疗靶点。

对叶百部总生物碱对人肺癌A549细胞凋亡、PI3K/Akt和JNK/p38 MAPK信号通路的影响

目的:探讨对叶百部总生物碱对人肺癌A549细胞凋亡及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)和c-Jun氨基末端激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶(JNK/p38 MAPK)信号通路的影响。方法:以人肺癌A549细胞为研究对象,设置空白组和不同质量浓度(100、150、200、250、300 mg·L^(-1))对叶百部总生物碱组。利用噻唑蓝(MTT)比色法、平板克隆实验观察对叶百部总生物碱对A549细胞增殖的影响;采用Hoechst 33258染色法和流式细胞术膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(AnnexinV-FITC)/碘化丙锭(PI)双染法观察细胞凋亡;蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)和Bcl-2表达及PI3K、磷酸化(p)-PI3K、Akt、p-Akt、JNK、p-JNK、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白的表达。结果:与空白组比较,对叶百部总生物碱组(150、200、250、300 mg·L^(-1))细胞增殖抑制率显著增高(P<0.01);对叶百部总生物碱组(150、200、250、300 mg·L^(-1))细胞克隆抑制率显著升高,细胞克隆形成率显著降低(P<0.01)。与空白组比较,对叶百部总生物碱组细胞出现染色质凝聚,荧光反应加强等典型的细胞凋亡特征。与空白组比较,对叶百部总生物碱组细胞凋亡率显著升高(P<0.01);对叶百部总生物碱(150、200、250、300 mg·L^(-1))能够明显上调Caspase-3、Bax蛋白表达(P<0.05,P<0.01),显著下调Bcl-2蛋白表达(P<0.01);对叶百部总生物碱对PI3K、Akt、JNK、p38 MAPK总蛋白表达无明显影响,对叶百部总生物碱(150、200、250、300 mg·L^(-1))能够明显下调PI3K、Akt磷酸化水平(P<0.05,P<0.01);明显上调p38 MAPK磷酸化水平(P<0.05,P<0.01);对叶百部总生物碱(200、250、300 mg·L^(-1))能够明显上调JNK磷酸化水平(P<0.05,P<0.01)。结论:对叶百部总生物碱可抑制人肺癌A549细胞的增殖,并能诱导A549细胞凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路和激活JNK/p38 MAPK信号通路有关。

基于JNK/p38 MAPK信号通路探究龙盘止咳方对甲型流感病毒肺炎大鼠肺组织损伤的影响

目的探讨龙盘止咳方对甲型流感病毒(IV)肺炎大鼠肺组织损伤的影响及其对C-Jun氨基末端激酶(JNK)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路的调节作用。方法将120只SPF级Wistar大鼠按照随机数字表法分为6组,分别为正常对照组、空白模型组、龙盘止咳方低剂量组(简称低剂量组)、龙盘止咳方中剂量组(简称中剂量组)、龙盘止咳方高剂量组(简称高剂量组)和奥司他韦阳性对照组(简称阳性对照组),每组20只。除正常对照组外,其余5组大鼠适应性饲养1周后建立甲型IV感染大鼠模型,造模后第1天开始灌胃给药,均每日1次,共5 d。在6组中分别随机选取大鼠10只,每天观察大鼠的体质量、生存状态、临床症状和疾病体征,并评价其生存情况,包括存活率和存活时间,自给药前1天开始观察,连续观察15 d。每组剩余的10只大鼠给药5 d后处死并采集样本,测量体质量和肺湿重,并计算肺指数,检测肺组织病理变化、病毒载量、炎症细胞因子、血栓素A2(TXA2)、前列腺素E2(PGE2)、JNK、p38 MAPK mRNA水平及p-JNK/JNK、p-p38 MAPK/p38 MAPK值。结果正常对照组大鼠在研究期间无临床症状或死亡,体质量逐日增加。空白模型组大鼠第3天开始体质量明显下降,平均存活时间最短,且均在15 d内死亡,与正常对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);低、中、高剂量组和阳性对照组大鼠的体质量、平均存活时间和存活率均高于空白模型组(P<0.05),其中高剂量组大鼠体质量最高(P<0.05)。感染后第6天,正常对照组大鼠未见组织学改变;与正常对照组比较,空白模型组组织病理评分、肺指数和肺内IV的相对定量,肺匀浆中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和干扰素-γ(IFN-γ)、TXA2、PGE2、JNK、p38 MAPK mRNA水平及p-JNK/JNK、p-p38 MAPK/p38 MAPK值均显著增高(P<0.05);低、中、高剂量组和阳性对照组的上述指标均显著降低(P<0.05),其中高剂量组降低最显著(P<0.05)。结论龙盘止咳方能明显减轻甲型IV感染大鼠的临床症状,增加体质量,延长存活时间,显著缓解肺部病变,提高存活率。龙盘止咳方可能通过抑制JNK/p38 MAPK信号通路阻断甲型IV感染大鼠体内细胞因子的产生并抑制病毒性肺炎的进展。

大黄酸通过MAPK信号转导通路诱导HK-2细胞凋亡

目的:研究大黄酸诱导人肾小管上皮细胞系HK-2细胞凋亡作用及其凋亡机制。方法:将密度为4×104个/m L的HK-2细胞悬液接种于96孔板,培养24 h后分别加入不同浓度大黄酸(0,25,50,100μmol·L-1)作用12,24,48 h,MTT法检测大黄酸对HK-2细胞活性的抑制作用;利用Hoechst 33258染色法和流式细胞术检测大黄酸诱导HK-2细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测细胞原癌基因c-jun,活化转录调控因子2(ATF-2),半胱天冬氨酸酶3(Caspase-3)基因表达水平;Western blotting检测细胞磷酸化c-jun氨基末端激酶(p-JNK),c-jun氨基末端激酶(JNK),磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK),p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)和活化型半胱天冬氨酸酶3(Cleaved Caspase-3)蛋白的变化,并利用JNK抑制剂SP600125,p38抑制剂SB203580进一步验证JNK和p38所介导的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路在HK-2细胞凋亡中的作用。结果:大黄酸能够呈剂量依赖性和时间依赖性抑制HK-2细胞活性。大黄酸作用下HK-2细胞凋亡率明显增加。大黄酸作用于HK-2细胞c-jun,ATF-2及Caspase-3基因的mRNA均明显上调;p-p38,p-JNK及Cleaved Caspase-3蛋白表达显著性增加,JNK和p38总蛋白表达无明显变化。JNK特异性抑制剂SP600125与p38特异性抑制剂SB203580均能显著降低大黄酸诱导的HK-2细胞的凋亡率。结论:大黄酸能够诱导HK-2细胞凋亡,其作用机制可能是通过影响MAPK信号转导通路实现的。