基于肌醇需求激酶1α/c-Jun氨基末端激酶信号通路探讨胆宁片干预非酒精性脂肪性肝病的作用及机制

目的基于肌醇需求激酶1α/c-Jun氨基末端激酶(IRE1α/JNK)信号通路,探讨胆宁片对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型大鼠的作用及机制。方法将32只SD大鼠随机分为正常饮食组(A组,等体积生理盐水,8只)和高脂饮食组(24只);高脂饮食组大鼠喂养10周复制NAFLD模型成功后,再随机分为模型组(B组,等体积生理盐水)、多烯磷脂酰胆碱组[C组,142.5 mg/(kg·d)]和胆宁片组[D组,562.5 mg/(kg·d)],各8只。各组小鼠均灌胃相应药物干预6周。测定大鼠的体质量、血糖(GLU);采用苏木精-伊红染色(HE)法观察大鼠肝组织病理形态变化,采用油红染色法观察肝组织脂质沉积;检测血清胰岛素(INS)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、游离脂肪酸(NEFA)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;采用免疫印迹(Western blot)法检测肝组织IRE1α、JNK1、磷酸化胰岛素受体底物1(p-IRS1)的蛋白表达水平。结果与B组比较,D组大鼠血糖和TC,TG,LDL-C,NEFA,ALT,AST水平均显著降低(P<0.01),血清INS和HDL-C水平显著升高(P<0.01);脂肪变性程度及细胞肿胀明显减轻,脂滴空泡体积缩小,数量减少;肝脏IRE1α,JNK1,p-IRS1蛋白表达水平均显著降低(P<0.01)。结论胆宁片可能通过下调IRE1α/JNK信号通路,减轻肝脏脂肪变性,从而改善NAFLD。

凋亡信号调节激酶1通过c-Jun氨基末端激酶通路调控高糖诱导的视网膜神经节细胞损伤

目的研究细胞凋亡信号调节激酶1(apoptosis signal-regulating kinase1,ASK1)对高糖诱导的视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)损伤的保护作用及其可能的机制。方法建立大鼠RGC细胞的分离培养和体外高糖(50 mmol/L葡萄糖)损伤模型。转染ASK1 siRNA沉默ASK1的表达。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ASK1 mRNA表达水平;Western blot检测ASK1、JNK蛋白表达量和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)磷酸化水平;MTT和CCK-8方法、Ki67染色分别检测RGC生长活力和增殖情况;Annexin-V FITC/PI方法和TUNEL检测RGC凋亡情况;试剂盒方法检测Caspase-3活性。结果 RGC高糖环境下培养4d,细胞生长活力降低明显(P<0.05);ASK1表达水平在高糖损伤的RGC中明显上升(P<0.05);ASK1 siRNA的转染实验结果显示:ASK1的表达水平明显下降(P<0.05),说明沉默表达实验成功;ASK1表达被抑制后RGC的生长活力(P<0.05)和增殖能力(P<0.05)明显上升,RGC的凋亡(P<0.01)和Caspase-3的活力(P<0.01)明显降低。沉默ASK1的表达有效地降低JNK蛋白的磷酸化水平。结论抑制ASK1的表达对RGC的高糖损伤有保护作用,其机制可能与抑制JNK通路有关。

基于JNK-p62/SQSTM1信号通路探讨糖肾煎对2型糖尿病肾病大鼠足细胞的保护作用

目的 基于c-Jun氨基末端激酶(JNK)-p62/螯合体(SQSTM1)信号通路探讨糖肾煎对2型糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞的保护作用。方法 SD大鼠随机分成正常组、DN组、糖肾煎低、中、高[生药5、10、20 g/(kg·d)]剂量组(糖肾煎-L、M、H组)、二甲双胍组[100 mg/(kg·d)]。除正常组外,其余各组通过喂养高脂高糖饲料和腹腔注射链脲佐菌素(STZ)进行DN模型构建。药物干预结束后,检测大鼠血生化指标空腹血糖(FBG)、负荷后2 h血糖(P2 h BG)、血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)水平;苏木素-伊红(HE)、六胺银(PASM)染色观察肾组织病理学变化;透射电镜(TEM)观察肾小球基底膜损伤和足细胞变化情况;Western印迹检测肾组织中微管相关蛋白1A/1B-轻链(LC)3、p-JNK、JNK、p62/SQSTM1、肾病蛋白(Nephrin)蛋白表达。结果 与正常组比较,DN组FBG、P2 h BG、SCr、BUN水平及p62/SQSTM1蛋白表达明显升高,LC3-Ⅱ、Nephrin蛋白表达和p-JNK/JNK明显降低(P<0.05);光镜下观察到肾小球缩小、管丛系膜明显扩张,并有基底膜增生增厚等现象;TEM下观察到肾小球基底膜增厚、足细胞排列紊乱、形态改变、足突融合等现象。与DN组比较,糖肾煎-L、M、H组和二甲双胍组FBG、P2 h BG、SCr、BUN水平及p62/SQSTM1蛋白表达明显降低,LC3-Ⅱ、Nephrin蛋白表达和p-JNK/JNK明显升高(P<0.05);并且肾小球基底膜增厚、足细胞足突融合等情况均获得一定程度减轻。结论 糖肾煎对2型DN大鼠足细胞具有一定保护作用,可能是通过调控JNK-p62/SQSTM1信号通路,提高足细胞自噬,从而起到肾脏保护功效。

c-Jun氨基末端激酶-激活蛋白1信号通路调控血管紧张素Ⅱ诱导的单核细胞趋化蛋白1表达

目的 探讨c Jun氨基末端激酶 激活蛋白 1信号通路在肾小球肾炎单核细胞趋化蛋白1表达中的作用。方法 实验性肾炎应用兔抗鼠肾小球基底膜肾毒血清制备。应用凝胶电泳迁移率、超迁移实验和非放射性激酶活性检测法检测实验性肾炎肾组织和体外培养的肾小球系膜细胞内激活蛋白 1活化及其组成以及c Jun氨基末端激酶活性 ,应用核酸酶保护法检测体外培养的肾小球系膜细胞中单核细胞趋化蛋白 1表达。结果 实验性肾炎大鼠肾组织中c Jun氨基末端激酶和激活蛋白 1活性明显增强 ,分别是正常对照组的 (3 82± 0 5 8)倍和 (5 36± 0 6 1)倍 ,活化的激活蛋白 1主要含有c Jun和c Fos亚基 ;c Jun氨基末端激酶和激活蛋白 1活化与单核细胞趋化蛋白 1表达呈显著正相关。血管紧张素Ⅱ可诱导体外培养的肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白 1表达、c Jun氨基末端激酶和激活蛋白 1活化 ,其作用呈剂量依赖性增加 ,10 0nmol/L血管紧张素Ⅱ诱导单核细胞趋化蛋白 1表达、c Jun氨基末端激酶和激活蛋白 1活性增加分别是对照组的 (2 0 99± 4 71)倍、(6 91±1 6 5 )倍和 (7 82± 1 32 )倍 ;应用c Jun氨基末端激酶特异性抑制剂SP6 0 0 12 5显著抑制血管紧张素Ⅱ诱导激活蛋白 1活化和单核细胞趋化蛋白 1表达。结论 血管紧张素Ⅱ可通?

细胞外信号调节激酶/c-Jun氨基末端激酶在炭黑诱导的人胚肺成纤维细胞毒性中对激活蛋白-1信号通路的作用

目的探讨细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinases, ERK)/c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinases, JNK)在炭黑诱导的人胚肺成纤维细胞(human embryonic lung fibroblasts, HELF)毒性中对激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)信号通路的作用。方法分别在含0、15、30、60、120和240μg/mL炭黑的RPMI 1640培养液中培养HELF细胞24 h,用噻唑蓝比色法确定炭黑致HELF细胞毒性的剂量。100μg/mL炭黑分别处理HELF细胞(CB)、转染ERK显性失活突变体质粒(DN-ERK)HELF细胞(CB-DN-ERK)、转染JNK显性失活突变体质粒(DN-JNK)HELF细胞(CB-DN-JNK),同时设立细胞不做任何处理的对照组。CB组在染毒0、1、2、4、8、12、24和36 h用Western blot实验检测ERK、JNK、p38、c-Jun、c-Fos及其磷酸化水平,用荧光素酶法检测其AP-1活性。CB-DN-JNK和CB-DN-JNK组在染毒24 h用荧光素酶法检测AP-1活性,用Western blot实验检测ERK、JNK、c-Jun、c-Fos及其磷酸化水平。结果 CB组ERK和p-ERK蛋白表达水平在1~36 h各时间点均大于0 h时,而p38蛋白在1~36 h各时间点均小于0 h时;AP-1活性在8 h时下调至最低(0.72±0.12),在36 h时则上调至峰值(1.38±0.11);c-Fos、p-c-Fos、c-Jun蛋白表达水平在染毒1~24 h各时间点均大于0 h时,且p-c-Jun蛋白表达水平在1、2、4、8和36 h也大于0 h时。CB组AP-1活性,以及ERK、JNK、p38、c-Fos及其磷酸化蛋白水平变化呈双相模式。与CB组HELF细胞相比,虽然CB-DN-ERK组(1.02±0.04)及CB-DN-JNK组(1.09±0.10)AP-1活性差异均无统计学意义(分别为:t=0.16,P=0.88;t=0.73,P=0.50),但CB-DN-JNK组c-Fos(t=5.31,P=0.01)、p-c-Fos(t=4.33,P=0.01)、p-c-Jun(t=10.95,P<0.01),以及CB-DN-ERK组c-Fos蛋白表达水平(t=42.72,P<0.01)均显著降低。结论在炭黑诱导HELF细胞ERK、c-Jun、c-Fos及其磷酸化蛋白表达水平增高过程中,JNK正调控c-Fos、p-c-Fos、p-c-Jun蛋白表达水平,ERK正调控c-Fos蛋白表达水平。

解毒通利方对肺癌荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用及ASK1/JNK通路的调节作用

目的研究解毒通利方对肺癌荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用及对凋亡信号调节激酶(ASK)1/c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路的调节作用。方法采用接种NCI-H358细胞法建立肺癌荷瘤小鼠模型,小鼠随机分为生理盐水组、解毒通利方低、中、高剂量组及顺铂组各6只,解毒通利方低、中、高剂量组分别按照10、20、40 g/kg(以生药含量计)灌胃给予小鼠解毒通利方,顺铂组按照5 mg/kg腹腔注射给予顺铂,生理盐水组灌胃给予生理盐水,1次/d,连续30 d,末次给药24 h后,分离肿瘤组织,测定肿瘤体积及重量,苏木素-伊红(HE)染色法检查肿瘤组织病理学,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)染色测定肿瘤组织细胞凋亡率,实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)及Western印迹测定肿瘤组织ASK1、JNK mRNA及蛋白水平,免疫组化法测定肿瘤组织ASK1及JNK的平均积分光密度(IOD)值。结果与生理盐水组比较,解毒通利方低、中、高剂量组及顺铂组肿瘤体积及重量显著降低,而肿瘤组织细胞凋亡率、肿瘤组织ASK1及JNK mRNA及蛋白水平、肿瘤组织ASK1及JNK免疫组化水平均显著升高(均P<0.05),小鼠肿瘤组织病理学改变明显。结论解毒通利方能够显著抑制肺癌荷瘤小鼠肿瘤组织生长,促进肿瘤细胞凋亡,其机制可能与调节ASK1/JNK通路有关。

溃疡性结肠炎小鼠结肠组织中miR-21及JNK/AP-1信号通路相关标志物的表达

目的探讨溃疡性结肠炎(UC)小鼠结肠组织中微小RNA-21(miR-21)及c-Jun氨基末端激酶(JNK)/转录激活蛋白1(AP-1)信号通路相关标志物的表达。方法将16只C57BL/6小鼠随机分为对照组和模型组各8只。模型组小鼠自由饮用2.5%葡聚糖硫酸钠水溶液6 d建立急性UC模型,对照组小鼠自由饮用双蒸水。观察小鼠一般情况,按Cooper法进行小鼠疾病活动度(DAI)评分。造模第11天处死小鼠,取结肠组织,量取结肠长度。RT-PCR法检测结肠组织中miR-21、JNK1、JNK2、c-Jun mRNA表达,Western blotting法检测结肠组织中p-JNK、p-Ser63、p-Ser73蛋白表达,采用染色质免疫共沉淀实验检测结肠组织中miR-21与c-Jun的相互作用。结果与对照组比较,模型组造模第2天开始DAI评分持续升高,直至实验结束;模型组小鼠结肠长度短于对照组(P<0.01)。与对照组比较,模型组结肠组织中miR-21相对表达量高(P<0.01),JNK1、JNK2 mRNA相对表达量低(P均<0.01),c-Jun mRNA相对表达量高(P<0.01),p-JNK、p-Ser63、p-Ser73蛋白相对表达量高(P均<0.01)。染色质免疫共沉淀实验结果显示在AP-1孔处并未出现条带,表明c-Jun蛋白并未与miR-21启动子区AP-1位点结合。结论UC小鼠结肠组织中miR-21呈高表达;JNK/AP-1信号通路相关标志物JNK1、JNK2呈低表达,c-Jun、p-JNK、p-Ser63、p-Ser73呈高表达。但JNK信号通路并未直接通过下游转录因子c-Jun调节miR-21的表达。

JNK信号通路介导MDR1/P-gp调控人结肠癌多药耐药

目的:探讨在人结肠癌多药耐药细胞株HCT8/V中JNK信号传导通路与多药耐药1(MDR1)基因表达的关系.方法:MTT法检测人结肠癌多药耐药细胞株HCT8/V及其敏感株HCT8细胞对多种抗肿瘤药物的敏感性;抑制JNK信号通路的激活后,采用双荧光素酶活性报告基因检测MDR1启动子转录活性的表达;实时荧光定量PCR检测MDR1mRNA的表达;Westernblot分析对P-糖蛋白(P-gp)表达的影响.结果:HCT8/V细胞对长春新碱(VCR)的耐药倍数为10.49倍.加入JNK特异性抑制剂sp600125(20μmol/L)抑制后,HCT8/V细胞对VCR的半数抑制浓度(IC50)由191.08mg/L±18.18mg/L降低到50.34mg/L±15.71mg/L,逆转指数为3.80(P<0.01).HCT8/V细胞加入JNK抑制剂后,MDR1启动子活性从0.03647±0.00191降低到0.01362±0.00196,下降了2.52倍(P<0.01).实时荧光定量PCR、Westernblot检测结果提示,抑制JNK通路的激活后,HCT8/V细胞的MDR1mRNA从0.34275±0.0339下降到0.13625±0.0196(P<0.01),P-gp表达从0.88132±0.1026下降到0.56174±0.1014(P<0.01).结论:JNK信号通路通过介导MDR1/P-gp调控人肠癌多要耐药,抑制JNK信号通路可降低MDR1/P-gp的水平,逆转人结肠癌HCT8/V细胞的多药耐药性.

α-苦瓜素经LRP1受体介导的JNK信号通路诱导肝细胞L02早期凋亡的机制研究

目的:探讨α-苦瓜素诱导肝细胞L02(简称"L02细胞")早期凋亡的信号通路。方法:制备并纯化α-苦瓜素。采用流式细胞术检测0(阴性对照)、160、80μg/mLα-苦瓜素作用L02细胞2～8 h后的细胞凋亡率。小干扰RNA(siRNA)沉默低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP1)得到LRP1-siRNA细胞,然后采用液相芯片分析术检测α-苦瓜素(160μg/mL)分别作用L02细胞(正常组)和LRP1-siRNA细胞(沉默组)0、0.25、0.5、1、2 h后c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路中促调蛋白磷酸化JNK(p-JNK)、磷酸化凋亡前体蛋白(p-Bad)、胱天蛋白酶9(Caspase-9)及抑调蛋白磷酸化蛋白53(p-p53)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化B淋巴细胞瘤2(p-Bcl-2)、Caspase-8的表达情况,分析α-苦瓜素对L02细胞JNK信号通路的作用。结果:制备并纯化得到α-苦瓜素(纯度>97%);与阴性对照组比较,160μg/mLα-苦瓜素作用8 h时,可显著诱导细胞早期凋亡(P<0.05),80μg/mLα-苦瓜素诱导的早期凋亡不明显(P>0.05);与0 h比较,作用后0.25 h促调蛋白p-JNK、p-Bad和Caspase-9表达量显著增加(P<0.05),而抑调蛋白pp53、p-Akt、p-Bcl-2和Caspase-8表达量无变化;与正常组相比,沉默组各时间点的p-JNK、p-Bad和Caspase-9的表达均显著减少(P<0.05)。结论:α-苦瓜素可能通过LRP1受体介导JNK信号通路诱导肝细胞凋亡,为揭示其肝毒性提供了参考。

基于c-JNK/CXCL1信号通路研究椎间盘丸对腰椎间盘突出症大鼠脊髓炎症的抑制作用

目的观察椎间盘丸对腰椎间盘突出症大鼠脊髓炎症的抑制作用,并探讨其通过c-Jun氨基末端激酶(c-JNK)/趋化因子配体1(CXCL1)信号通路的作用机制。方法将85只大鼠随机选取70只建立腰椎间盘突出症大鼠模型。将模型复制成功的60只大鼠随机分为模型组,椎间盘丸低、高剂量组,阳性对照组,每组15只;剩余15只为假手术组。模型复制2 h后,椎间盘丸低、高剂量组和阳性对照组分别灌胃1.85、3.70 g·kg^(-1)椎间盘丸溶液和0.77 mg·kg^(-1)美洛昔康溶液,假手术组和模型组灌胃生理盐水。干预7 d后,观察实验大鼠的一般情况,测定痛反应阈值,酶联免疫吸附法(ELISA)测定脊髓背角组织白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)水平,HE染色观察大鼠背根神经节组织病理学变化,Western Blot法检测脊髓背角组织离子钙接头蛋白(Iba-1)、c-JNK、p-c-JNK、CXCL1蛋白相对表达水平。结果与假手术组比较,模型组干预1 d与7 d痛阈明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,椎间盘丸低、高剂量组和阳性对照组干预1 d与7 d痛阈均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。与假手术组比较,模型组IL-6、IL-1β水平均明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,椎间盘丸低、高剂量组和阳性对照组IL-6、IL-1β水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。假手术组大鼠背根神经节中神经元细胞核位于中央,核仁清晰,胞质内有排列均匀的颗粒状物尼氏小体,无细胞肿胀及炎性细胞浸润;模型组大鼠背根神经节中神经元细胞核不规则,核仁不清晰,胞质中尼氏小体排列不均匀,细胞明显肿胀,神经元细胞胞浆呈空泡样变化;椎间盘丸低、高剂量组和阳性对照组有所改善。与假手术组比较,模型组Iba-1、p-c-JNK、CXCL1蛋白相对表达水平均明显升高(P<0.01);与模型组比较,椎间盘丸低、高剂量组和阳性对照组Iba-1、p-c-JNK、CXCL1蛋白相对表达水平均降低(P<0.05,P<0.01)。c-JNK蛋白相对表达水平组间比较的差异无统计学意义(P>0.05)。结论椎间盘丸对腰椎间盘突出症大鼠脊髓炎症具有抑制作用,且可能是通过抑制c-JNK/CXCL1信号通路发挥作用。

肾脏缺血再灌注损伤大鼠肾组织JNK/ATF-2信号通路表达及意义

目的探讨JNK/ATF-2信号通路在肾脏缺血再灌注损伤(IR)中的作用。方法将60只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(对照组)和缺血再灌注组(IR组),每组30只。IR组制备IR模型。各组分别于再灌注0、10、30 min及1、24 h各处死6只大鼠,取其肾组织,采用免疫组化及RT-PCR法检测不同时间点肾小管上皮细胞JNK、ATF-2磷酸化蛋白及mRNA表达水平。结果 IR组JNK、ATF-2 mRNA及蛋白表达早期即有增加,再灌注30min出现高峰,再灌注1 h表达略减弱,24 h仍有高表达,与假手术组比较,差异均有统计学意义。结论肾脏缺血再灌注后JNK/ATF-2信号通路在肾小管上皮细胞表达明显上调,抑制其表达可减轻肾脏损伤。

骨关节炎相关信号通路的研究进展

骨关节炎是一种严重影响患者生活质量的关节退行性疾病,其病因及发病机制尚不完全清楚。目前,国内外大量研究已证实骨关节炎的病理变化过程与众多信号通路有密切联系,其中部分信号通路与介导骨关节炎软骨破坏及调控软骨细胞凋亡有关,如p38丝裂原活化蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶、Toll样受体等信号通路等;还有部分信号通路对骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡具有双重调节作用,如细胞外调节蛋白激酶、Notch、Wnt等信号通路。本文就骨关节炎相关信号通路的研究进展进行了综述。

糖尿病小鼠内皮细胞功能进行性减退中丝裂原激活蛋白激酶信号通路改变

为了探讨在糖尿病进展过程中，丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）对内皮细胞功能减退所发挥的特定的作用，并探讨MAPK阻断剂及激动剂是否可以改善内皮细胞功能，研究者分别评估了3个月和9个月的糖尿病模型小鼠及对照组小鼠肠系膜动脉中，p38、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和细胞外信号调节激酶（Erk）表达激活水平。

黄曲霉毒素诱导大鼠肝细胞癌变中JNK1的变化

目的观察黄曲霉毒素诱导大鼠肝细胞癌变过程中JNK的变化,进一步了解JNK1信号转导通路在肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)发生发展过程中的作用。方法取雄性4周龄SD大鼠77只为研究对象,随机分为实验组66只,空白对照组11只。实验组应用黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)诱发大鼠肝细胞癌,空白对照组大鼠,按正常饲养方法饲养,两组大鼠分别于实验第12、20、36、46周进行肝组织活检,58周时处死取肝。所有标本均进行常规病理组织学检测,并应用RT-PCR、Western blot分别检测癌组织及肝组织JNK1 mRNA及JNK1活性蛋白质水平。结果实验组大鼠46周时发现首例肝癌,存活至实验结束并发生肝癌的大鼠共24只,6只无任何肿瘤发生,空白对照组大鼠11例均未发生肿瘤。实验组及空白对照组大鼠均可检出不同程度的JNK1 mRNA表达,其中肝癌组织较癌旁组织及正常肝组织明显增强(P<0.05)。West-ern blot结果显示,实验组中无癌大鼠20周、出癌大鼠36周始即有不同程度p-JNK1活性表达,并随着AFB1作用时间延长阳性率明显增加,且无癌大鼠p-JNK1检出的时间较出癌大鼠早;半定量分析表明无癌大鼠肝组织p-JNK1活性较同期出癌大鼠肝组织及肝癌组织增强,在实验第46周及58周时尤其明显(P<0.01)。结论在AFB1诱导肝细胞癌的过程中JNK信号通路处于激活状态,JNK信号通路的激活可能起到抑制HCC的作用,如JNK信号通路激活时间较早、强度较大可阻止HCC的发生。

PCB118诱发大鼠胰岛素抵抗及对骨骼肌细胞功能的影响

目的探讨多氯联苯(PCB)118诱发大鼠胰岛素抵抗及对骨骼肌细胞功能的影响。方法将40只Wistar大鼠随机分为正常组,PCB118低、中、高剂量组〔10、100、1000μg/(kg·d)〕,每组10只。连续给药13 w后,测定每组大鼠空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹胰岛素水平(FINs),同时计算胰岛素敏感指数(ISI)及抵抗指数(IRI),检测骨骼肌组织中肌醇激酶(IRE)1α/c-Jun氨基末端激酶(JNK)/胰岛素受体底物(IRS-1)信号通路相关蛋白mRNA及蛋白的表达。结果与正常组比较,PCB118低、中、高剂量组FBG、HbA1c、FINs及IRI提高(P<0.05),ISI降低(P<0.05),IRE1α、JNK1/2、IRS-1 mRNA表达量上调(P<0.05),葡萄糖转运蛋白(GLUT)-4 mRNA表达量下调(P<0.05),p-IRE1α、p-JNK1/2、p-IRS-1表达量上调(P<0.05),GLUT-4蛋白表达量下调(P<0.05)。结论PCB118能够诱发大鼠胰岛素抵抗,与激活IRE1α/JNK/IRS-1信号通路有关。

基于JAK2/STAT3和JNK信号通路研究蒲公英甾醇对急性重型肝炎的保护作用

目的:研究蒲公英甾醇对急性重型肝炎小鼠的肝保护作用并基于酪氨酸激酶2/转录因子3/c-Jun氨基末端激酶(JAK2/STAT3/JNK)信号通路探讨其作用机制。方法:60只昆明小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、水飞蓟素120 mg/kg组、蒲公英甾醇2.5、5、10 mg/kg组,每组10只。各组灌胃相应药物或生理盐水,1次/d,连续15 d,末次药后2 h后,正常对照组小鼠腹腔注射生理盐水,其余各组小鼠腹腔注射D-氨基半乳糖(D-GalN)500 mg/kg和脂多糖(LPS)10μg/kg建立急性重型肝炎模型,腹腔注射体积为4 mL/kg,禁食不禁水6 h后,取血并收集小鼠肝脏。生化法检测小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)以及肝组织中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)以及总超氧化物歧化酶(T-SOD)含量或活力;ELISA法检测肝组织中白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、IL-1β含量;HE染色观察肝组织的病理变化程度;Western blot法检测细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)、转录因子3(STAT3)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组小鼠血清中ALT、AST活力和肝组织中MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β含量显著升高,T-SOD和GSH-Px的活力显著降低(P<0.01),肝组织p-STAT3和p-JNK蛋白表达显著上调(P<0.01);与模型对照组相比,蒲公英甾醇和水飞蓟素可不同程度地改善小鼠急性重型肝炎发展进程,其中蒲公英甾醇10 mg/kg可显著降低小鼠血清中的ALT、AST活力以及肝组织中MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β的含量(P<0.01),提高肝组织中T-SOD和GSH-Px的活力,下调p-STAT3、p-JNK蛋白表达,显著上调SOCS3的蛋白表达(P<0.01)。结论:蒲公英甾醇对D-GalN/LPS致急性重型肝炎小鼠肝脏具有保护作用,其保肝机制可能通过上调SOCS3从而调控JAK2/STAT3及JNK信号通路,进而抑制炎症反应相关。

红景天苷对糖尿病大鼠心肌组织中JNK/AP-1信号通路和TGF-β1 mRNA表达的影响

目的:观察红景天苷对糖尿病模型大鼠心肌组织中J N K/A P-1信号通路及转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA表达的影响并探讨其可能的心脏保护机制。方法:50只SD大鼠单次腹腔注射链脲佐菌素(STZ)(55mg/kg)结合高糖高脂饲料喂养4周制备糖尿病大鼠模型,将成模大鼠随机分为模型组、SP600125组(SP,15mg/kg)、低剂量红景天苷组(LSDS,25mg/kg)、中剂量红景天苷组(MSDS,50mg/kg)、高剂量红景天苷组(HSDS,100mg/kg),并设对照组。相应剂量药物灌胃12周,处死大鼠取左心室组织,HE及Masson染色观察心肌组织病理学改变,Western blot检测p-JNK、p-c-Jun及p-c-Fos蛋白表达情况,RT-PCR检测TGF-β1mRNA表达水平。结果:模型组大鼠心肌组织中p-JNK、p-c-Jun、p-c-Fos及TGF-β1 mRNA表达较对照组明显上升(P﹤0.01),中、高剂量红景天苷组p-JNK和p-c-Jun蛋白表达水平较模型组显著下降(P﹤0.05),低、中、高剂量红景天苷组p-c-Fos及TGF-β1 mRNA表达较模型组显著下降(P﹤0.05,P﹤0.01)。结论:红景天苷可能通过抑制心肌组织中JNK/AP-1信号通路激活,下调TGF-β1 mRNA表达,发挥糖尿病大鼠心脏保护作用。

基于MEKK1/SEK1/JNK1/AP-1通路探讨三七总皂苷对4T1乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤模型的影响

目的:通过研究三七总皂苷对4T1乳腺癌荷瘤小鼠促分裂原激活的蛋白激酶的激酶1(MEKK1)/应激激活的蛋白激酶/细胞外信号调节的蛋白激酶(SAPK/Erk激酶,SEK1)/c-Jun氨基末端激酶1(JNK1)/激活蛋白-1(AP-1)通路的影响,探讨三七总皂苷抑制肿瘤的可能机制。方法:建立4T1乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤模型,将48只造模成功的小鼠随机分为三七总皂苷低、中、高剂量组(10,20,40 mg·kg^-1)和模型组,每组12只,三七总皂苷各剂量组腹腔注射剂量为10 mL·kg^-1,模型组给予相同剂量的生理盐水,连续给药28 d。给药结束后分离肿瘤组织、称质量、切片、匀浆等,采用脱氧核苷酸末端转移酶(TdT)介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)染色检测肿瘤细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肿瘤组织MEKK1,SEK1,JNK1,AP-1 mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测4T1乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤组织MEKK1,SEK1,JNK1,AP-1蛋白表达。结果:与模型组比较,三七总皂苷中、高剂量组的肿瘤质量明显下降(P<0.05);肿瘤细胞凋亡数量随三七总皂苷剂量的升高明显升高(P<0.05);三七总皂苷中、高剂量组肿瘤组织中MEKK1,SEK1,JNK1,AP-1 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:三七总皂苷对4T1乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤模型具有抑制作用,其作用机制可能与激活MEKK1/SEK1/JNK1/AP-1信号通路有关。

羟氯喹对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞基质金属蛋白酶-1表达的影响

目的探讨羟氯喹(hydroxychloroquine,HCQ)对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-1表达的调控作用及分子机制。方法对数生长期MH7A细胞分为空白组(细胞正常培养)、TNF-α组(细胞培养基中加入10μg/L TNF-α)、HCQ联合A组(细胞培养基中加入2.5μmol/L HCQ+10μg/L TNF-α)、HCQ联合B组(细胞培养基中加入5μmol/L HCQ+10μg/L TNF-α)、HCQ联合C组(细胞培养基中加入10μmol/L HCQ+10μg/L TNF-α)。5组细胞培养24h,采用ELISA法检测细胞培养上清液MMP-1水平,采用实时荧光定量PCR法检测细胞MMP-1mRNA相对表达量,采用Western blot法检测细胞c-Jun氨基末端激酶(Jun N-terminal kinase,JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)蛋白相对表达量。将MH7A细胞分为对照组和茴香霉素组,对照组细胞按HCQ联合C组培养方法培养24h;茴香霉素组细胞培养基中先加入10μg/L茴香霉素培养2h后,再按HCQ联合C组的培养方法继续培养至24h;采用实时荧光定量PCR法检测2组MMP-1mRNA相对表达量。结果TNF-α组[(791.32±175.40)ng/L、6.89±1.20]、HCQ联合A组[(366.71±224.44)ng/L、4.12±0.71]、HCQ联合B组[(283.22±154.86)ng/L、2.99±0.18]、HCQ联合C组[(173.44±36.25)ng/L、2.01±0.80]、空白组[(133.13±62.19)ng/L、1.00±0.00]细胞MMP-1水平和MMP-1mRNA相对表达量均依次降低(P<0.05);TNF-α组(2.02±0.07)、HCQ联合A组(1.31±0.09)、HCQ联合B组(0.86±0.09)、HCQ联合C组(0.56±0.05)、空白组(0.43±0.03)细胞p-JNK蛋白相对表达量依次降低(P<0.05),而TNF-α组(2.30±0.16)、HCQ联合A组(2.16±0.13)、HCQ联合B组(2.03±0.05)、HCQ联合C组(2.16±0.16)、空白组(2.23±0.11)JNK蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);茴香霉素组细胞MMP-1mRNA相对表达量(5.13±1.43)高于对照组(2.01±0.80)(P<0.05)。结论HCQ能通过JNK信号通路调控MH7A细胞MMP-1的表达。

银杏内酯B对肌萎缩侧索硬化细胞模型的保护作用及其机制

目的:探讨银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对肌萎缩侧索硬化细胞模型c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路及细胞凋亡的影响。方法:通过含过表达人突变超氧化物歧化酶1(SOD1)G93A基因(hSOD1G93A)和过表达人野生SODWT基因(hSOD1WT)与空质粒的慢病毒感染NSC34细胞,经一定浓度的嘌呤霉素筛选,倒置荧光显微镜下观察慢病毒的转染效率和细胞形态的变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检验感染细胞是否过表达SOD1蛋白,建立hSOD1G93A-NSC34细胞系后给予GB,细胞培养分组为正常组、模型组、不同浓度GB组(25,50,75,100 mg·L-1)组,48 h后噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,筛选出最佳药物浓度,后续实验分组为以正常组,模型组,75 mg?L-1 GB组,SP600125组,75 mg·L-1GB+SP600125组,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷酸化(p-)JNK,c-Jun,p-c-Jun,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白的表达。结果:与正常的NSC34细胞比较,hSOD1G93ANSC34组细胞胞体变圆,突触减少、变短,而hSOD1WT NSC34组细胞和空质粒组细胞形态学未发生明显变化,与正常组比较,hSOD1G93ANSC34组,hSOD1WTNSC3组细胞内SOD1蛋白水平显著升高(P<0.01),肌萎缩侧索硬化(ALS)细胞模型成功建立。与正常组比较,模型组细胞存活率显著降低(P<0.01);与模型组比较,给予不同浓度GB后,细胞存活率均显著升高(P<0.01),药物质量浓度为75 mg·L-1时细胞存活率显著升高(P<0.01)。后续实验,与正常组比较,模型组凋亡率,p-JNK,p-c-Jun,cleaved Caspase-3蛋白表达量显著升高(P<0.01);与模型组比较,75 mg·L-1GB组,SP600125组,75 mg·L-1GB+SP600125组凋亡率,p-JNK,p-c-Jun,cleaved Caspase-3蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:GB对肌萎缩侧索硬化细胞模型具有抑制细胞凋亡的保护作用,这种保护作用可能是通过JNK信号通路实现的。