中药菩人丹对OLETF大鼠视网膜磷酸化c-Jun氨基末端激酶和半胱氨酸天冬氨酸激酶-3表达的干预作用

目的探讨菩人丹超微粉(PRD)对糖尿病大鼠视网膜磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)和半胱氨酸天冬氨酸激酶-3(Caspase-3)表达的影响。方法以自发性雄性2型糖尿病大鼠模型OLETF大鼠和其同系非糖尿病对照鼠LETO雄性大鼠为实验对象,血糖峰值>16.7 mmol/L和负荷后120 min血糖>11.1 mmol/L作为成模标准,将24只成模雄性OLETF大鼠随机分为模型组、菩人丹超微粉治疗组,每组12只,同周龄12只雄性LETO大鼠为空白对照组。模型成功建立后,菩人丹超微粉治疗组大鼠给予菩人丹超微粉[1.8 g·(kg·d)-1]灌胃2个月。HE染色观察视网膜形态结构的变化;采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测大鼠视网膜神经细胞的凋亡情况;SP免疫组织化学染色法和Western blot法检测视网膜磷酸化JNK(p-JNK)、Caspase-3蛋白的表达;采用逆转录聚合酶链法(RT-PCR)检测大鼠视网膜Jnk、caspase-3 mRNA的表达。结果糖尿病模型组大鼠视网膜出现明显的病理变化,神经细胞凋亡指数p-JNK、Caspase-3蛋白及mRNA的表达明显高于正常对照组大鼠(P<0.01)。菩人丹超微粉治疗组大鼠视网膜的病理变化明显减轻,神经细胞凋亡指数、p-JNK、Caspase-3蛋白及mRNA的表达明显低于模型组大鼠(P<0.01)。结论菩人丹超微粉可以改善糖尿病视网膜病变中神经组织的损伤,表现为神经细胞凋亡的减少,这可能与下调p-JNK、Caspase-3的表达相关。

热休克蛋白70对心肌细胞内质网应激半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-12、C／EBP同源蛋白和c-Jun氨基末端激酶信号通路的影响

目的观察热休克蛋白70（HSP70）表达对心肌细胞内质网应激半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-12、C／EBP同源蛋白（CHOP）和c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路的影响。方法应用腺病毒基因表达技术诱导热休克蛋白70（HSP70）基因在SD乳鼠心肌细胞的表达和应用HSP70反义寡核苷酸导人技术抑制HSP70的表达，建立细胞培养和心肌细胞缺氧模型，测定细胞凋亡，提取内质网测定，采用免疫组织化学和Westernblot方法测定转染前后HSP70的表达水平及HSP70的表达对内质网应激导致的细胞凋亡、Caspase-12、CHOP、JNK通路引起的凋亡信息传递的改变。结果对照组细胞凋亡率（9．28±0．83）％、晚期（28．60±1．83）％，HSP70基因转染组早期细胞凋亡率（4．30±0．72）％、晚期（11．6±1．66）％，HSP70反义寡核苷酸处理组早期细胞凋亡率（29．3±2．54）％、晚期（34．4±2．43）％，免疫组织化学和Westernblot证实HSP70基因成功转染人心肌细胞内表达；HSP70表达抑制细胞凋亡，但HSPT0反义寡核苷酸则促进；HSPT0显著抑制Caspase-12和CHOP的表达，HSP70增加JNK的表达；HSP70反义寡核苷酸组明显增加CHOP的表达。结论转染HSP70表达通过调节内质网应激Caspase-12、CHOP和JNK信号通路调控心肌细胞凋亡。

瑞芬太尼调节JAK2/STAT3信号通路对小鼠视网膜缺血再灌注损伤的影响

目的探讨瑞芬太尼(RFTN)调节JAK2/STAT3信号通路对小鼠视网膜缺血再灌注(RIRI)损伤的影响。方法将小鼠分为Sham组、Model组、RFTN低剂量组(RFTN-L)、RFTN高剂量组(RFTN-H)和RFTN-H+Colivelin组(JAK2激活剂)组。HE染色观察各组小鼠视网膜形态;TUNEL染色法检测视网膜组织细胞凋亡;ELISA法检测小鼠视网膜组织TNF-α、IL-10和IL-1β水平;商品化试剂盒检测小鼠视网膜组织SOD、MDA、CAT水平;Western blot检测视网膜组织中NLRP3、caspase-1、JAK2、STAT3、cleaved caspase-3蛋白表达水平。结果与Sham组相比,Model组小鼠视网膜组织有明显损伤,GCL厚度和RGC数量、视网膜组织细胞凋亡率、TNF-α和IL-1β水平、MDA含量、NLRP3、caspase-1、cleaved caspase-3、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3蛋白表达水平显著升高,视网膜组织IL-10水平、SOD和CAT活性显著降低(P<0.05);与Model组相比,RFTN-L组和RFTN-H组小鼠视网膜组织损伤明显减轻,GCL厚度和RGC数量、视网膜组织细胞凋亡率、TNF-α和IL-1β水平、MDA含量、NLRP3、caspase-1、cleaved caspase-3、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3蛋白表达水平显著降低,视网膜组织IL-10水平、SOD和CAT活性显著升高(P<0.05);Colivelin可减弱RFTN对RIRI小鼠的保护作用(P<0.05)。结论RFTN可降低RIRI小鼠炎症、氧化应激和视网膜组织细胞凋亡,减轻视网膜损伤,可能与抑制JAK2/STAT3信号通路有关。

红景天苷对脑外伤大鼠海马神经元损伤及JNK3/caspase-3信号通路的影响

目的研究红景天苷(Sal)对脑外伤大鼠海马神经元损伤及c-Jun氨基末端激酶3/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(JNK3/caspase-3)信号通路的影响。方法取6周龄雄性SD大鼠,参照改良Feeney法制备脑外伤大鼠模型,随机分为模型组、Sal低剂量组50 mg/(kg·d)灌胃、Sal中剂量组100 mg/(kg·d)灌胃、Sal高剂量组200 mg/(kg·d)灌胃,每组8只;另设假手术组、正常对照组,每组8只。正常对照组、模型组、假手术组均予以等量生理盐水灌胃,均持续12周。12周末处死,检测各组SD大鼠脑海马组织神经细胞形态变化及凋亡情况、氧化应激指标,包括超氧化物歧化物(SOD)、丙二醛(MAD),免疫印迹(WB)检测海马组织中p-JNK3/JNK3、cleaved-caspase-3蛋白表达水平。结果正常对照组与假手术组大鼠海马神经细胞形态正常,排列整齐,层次丰富,包膜完整。模型组大鼠海马区神经细胞萎缩,排列稀疏,层次减少。Sal低、中、高剂量组大鼠海马区神经细胞形态较模型组依次明显改善。与正常对照组、假手术组比较,模型组大鼠海马神经细胞凋亡、MDA含量、p-JNK3/JNK3、caspase-3蛋白水平显著增加(P<0.05),SOD活性降低(P<0.05);与模型组比较,Sal低、中、高剂量组神经细胞凋亡率、MDA含量、p-JNK3/JNK3、cleaved-caspase-3蛋白水平依次降低(P<0.05),SOD活性依次升高(P<0.05)。结论红景天苷可减轻脑外伤大鼠海马神经元氧化应激损伤,抑制其细胞凋亡,可能与抑制JNK3/caspase-3信号通路有关。

银杏叶提取物对甲状腺癌细胞PI3K/Akt信号通路的影响及意义

目的探讨银杏叶提取物对甲状腺癌TPC-1细胞株磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路相关蛋白表达的影响及意义。方法培养甲状腺癌TPC-1细胞株,用96孔和6孔培养板将其分为空白组、银杏叶低、中、高剂量组(5、10、20μmol/L),实验分为3个时间点:培养24 h、48 h和72 h。通过噻唑蓝(MTT)实验、免疫组织化学法和实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测甲状腺癌TPC-1细胞株的增殖活性、PI3K/Akt信号通路相关蛋白PI3K、Akt、磷酸化(p)-Akt和凋亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3的蛋白含量及mRNA水平。结果银杏叶提取物能够抑制甲状腺癌TPC-1细胞株的增殖,且随时间延长和剂量的增加效果更为显著,各时间点间、各剂量组间均差异显著(P<0.05);与空白组比较,银杏叶低、中、高剂量组PI3K和p-Akt的蛋白含量及mRNA水平均显著降低且随剂量增加效果更显著(P<0.05),银杏叶低、中、高剂量组caspase-3的蛋白含量及mRNA水平均显著升高且随剂量增加效果更显著(P<0.05),银杏叶低、中、高剂量组Akt蛋白含量及mRNA水平未见显著差异(P>0.05)。结论银杏叶提取物抑制甲状腺癌TPC-1细胞株的增殖,可能与调控PI3K/Akt信号通路和促进细胞凋亡密切相关,且可见浓度依赖趋势。

P38MAPK信号通路对缺血预处理减轻神经元凋亡作用机制的研究

目的探讨通过缺血预处理抑制P38丝裂素活化蛋白激酶(P38MAPK)信号通路以减轻神经元凋亡的机制.方法将原代培养的神经元及星形胶质细胞进行缺血预处理,将常规条件下培养的星形胶质细胞培养基作为条件培养基1(ACM1);在分泌GDNF最多时,将星形胶质细胞培养基制备成条件培养基2(ACM2);GDNF基因经转染质粒沉默后提取其培养基,作为条件培养基3(ACM3),将P38MAPK的抑制剂SB203580加入ACM3中,制备成ACM4.将对照组、预处理组、预处理+缺血组、缺血组神经元孵育在不同条件培养基中,AO/EB荧光染色检测神经元凋亡情况,Western blot法检测神经元p-P38MAPK及Caspase-3的表达.结果预处理+缺血组和缺血组神经元凋亡率明显增高(P<0.05),加入ACM2后神经元凋亡较ACM1和ACM3两组均减少(P<0.05).预处理+缺血组和缺血组凋亡的神经元明显多于另外两组(P<0.05),加入ACM1和ACM3两种培养基后凋亡率高于ACM2组(P<0.05).预处理+缺血组及缺血组p-P38MAPK及Caspase-3的蛋白表达均明显高于对照组和预处理组(P<0.05),预处理+缺血组p-P38MAPK及Caspase-3的蛋白表达均较缺血组低(P<0.05),加入ACM2组的p-P38MAPK及Caspase-3蛋白表达低于另外两组(P<0.05).结论星形胶质细胞经过缺血预处理后GDNF分泌增多,通过抑制P38MAPK信号通路及Caspase-3的表达减少神经元凋亡,进而发挥内源性神经保护机制.

促红细胞生成素衍生肽通过PI3K/Akt信号转导通路对小鼠肾缺血再灌注损伤保护作用

目的:探究促红细胞生成素衍生肽对小鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用及对PI3K/Akt信号转导通路的影响。方法:将小鼠分为假手术组、模型组和研究组,复制肾缺血再灌注损伤动物模型,在手术前6 h模型组腹腔注射促红细胞生成素衍生肽,假手术组和模型组腹腔注射生理盐水。使用苦味酸速率法检测各组小鼠血清中血肌酐(serum creatinine,Scr),使用酶学速率法检测各组小鼠血清中尿氮素(blood urea nitrogen,BUN)水平;病理切片检查肾脏病理变化;原位末端标记法分析肾脏细胞凋亡;Western blot检测肾脏蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-Akt)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cysteine aspartate protease,Caspase-3)蛋白表达水平。结果:模型组小鼠血清中的Scr和BUN水平明显高于假手术组,研究组小鼠血清中的Scr和BUN水平明显低于模型组(P<0.05);研究组肾脏的病理损伤程度明显弱于模型组,仅有少部分肾小管上皮细胞出现肿胀,少见肾小管上皮细胞坏死脱落,肾小管管腔正常,模型组小鼠的肾脏病理损伤评分明显大于假手术组,研究组小鼠的肾脏病理损伤评分明显小于模型组(P<0.05);模型组小鼠的肾小管上皮细胞凋亡评分明显大于假手术组,研究组小鼠的肾小管上皮细胞凋亡评分明显小于模型组(P<0.05);模型组小鼠肾脏中Caspase-3蛋白表达水平明显高于假手术组,Akt和p-Akt蛋白表达水平明显低于假手术组(P<0.05);研究组小鼠肾脏中的Caspase-3蛋白表达水平明显低于假手术组,Akt和p-Akt蛋白表达水平明显高于假手术组(P<0.05)。结论:促红细胞生成素衍生肽对肾缺血再灌注有明显改善作用,该作用可能是通过调控PI3K/Akt信号转导通路调控机体凋亡蛋白的表达来实现的。

白藜芦醇对急性心肌梗死大鼠心肌保护及Akt/JNK3/caspase-3信号通路的影响

目的探究白藜芦醇(Res)对急性心肌梗死(AMI)大鼠氧化应激及对p-Akt、p-JNK3、caspase-3的影响。方法将大鼠分为假手术组、模型组、法舒地尔组、Res低剂量组、Res中剂量组、Res高剂量组;检测血清中肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白I(TnI)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的活性及白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;TTC染色检测心肌梗死面积;HE染色检测心脏组织病理学变化;采用TUNEL检测心肌细胞凋亡;蛋白免疫印迹检测心肌组织中p-Akt、p-JNK3、caspase-3表达情况。结果HE染色结果表明,模型组心肌细胞排列紊乱,心肌纤维肿胀、断裂;与模型组相比,法舒地尔组和Res组心肌细胞和肌纤维排列相对整齐,炎性细胞浸润情况减轻,且心肌梗死面积和细胞凋亡指数显著低于模型组(P<0.05);与模型组相比,法舒地尔组和Res组SOD的活性显著增高(P<0.05),血清中CK、CK-MB、TnI、MDA的活性及IL-1β、IL-6、TNF-α的含量显著低于模型组(P<0.05),且法舒地尔组和Res组心脏组织中p-Akt表达水平显著高于模型组(P<0.05),p-JNK3、caspase-3表达水平显著低于模型组(P<0.05);与法舒地尔组相比,Res高剂量组血清中CK、CK-MB、TnI、MDA的活性,血清中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量,心肌梗死面积和细胞凋亡指数,以及心肌组织中p-Akt、p-JNK3、caspase-3表达水平等,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 Res对AMI大鼠心肌具有保护作用,推测这一作用是通过调控Akt/JNK3/caspase-3信号通路从而抑制心肌细胞凋亡。

红芪多糖对线粒体途径介导的膀胱癌细胞凋亡的影响

目的:观察红芪多糖对线粒体途径介导的膀胱癌细胞凋亡的影响,并探讨可能机制。方法:取对数期T24细胞,随机分为对照组(常规培养)、红芪多糖组(加入红芪多糖0.8μg/L)、SP600125组(加入SP60012510μmol/L)、联合组(加入红芪多糖0.8μg/L、SP60012510μmol/L)。MTT法检测细胞增殖能力;双染法检测细胞凋亡率;JC-1法检测细胞线粒体损伤;免疫印迹法检测细胞相关蛋白表达。结果:与对照组比较,红芪多糖组24、48、72 h吸光度值、线粒体膜电位、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达量降低;凋亡率,Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达量,p-c-Jun氨基末端激酶(JNK)/JNK、p-c-Jun/c-Jun升高(均P<0.05)。SP600125组24、48、72 h吸光度值,线粒体膜电位、Bcl-2蛋白表达量升高;凋亡率,Bax、Caspase-3蛋白表达量,p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun降低(均P<0.05)。与红芪多糖组比较,联合组24、48、72 h吸光度值、线粒体膜电位、Bcl-2蛋白表达量升高;凋亡率,Bax、Caspase-3蛋白表达量,p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun降低(均P<0.05)。结论:红芪多糖可抑制膀胱癌T24细胞增殖,并通过介导线粒体途径促进其凋亡,作用机制可能与激活JNK/c-Jun信号通路有关。

穿心莲内酯调节NLRP3/caspase-1信号通路对腹泻型肠易激综合征大鼠肠道炎症的影响

目的探讨穿心莲内酯(andrographolide,AND)对腹泻型肠易激综合征(irrita blebowel syn-drome,IBS-D)大鼠肠道炎症的影响及对NLRP3/caspase-1信号通路的调节机制。方法利用低浓度乙酸联合束缚应激建立IBS-D大鼠模型后,将大鼠分为对照组、模型组、阳性药物组、AND低剂量(AND-L)组、AND中剂量(AND-M)组、AND高剂量(AND-H)组,每组10只。检测各组大鼠粪便性状评分及粪便含水量;对各组大鼠的腹部收缩反射(abdominalwithdrawal reflex,AWR)进行评分;酶联免疫吸附实验(enzyme linked im-munosorbent assay,ELISA)检测各组大鼠结肠组织中肿瘤坏死因子-α(tumornecrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin6,IL-6)、白介素-1β(interleukin1β,IL-1β)、白介素-18(interleukin18,IL-18)水平;Western blot检测各组大鼠结肠组织中NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达水平。结果对照组大鼠粪便评分为2.43±0.19、粪便含水量为31.76±2.81、AWR评分为0.43±0.02、TNF-α为123.49±12.35、IL-6为76.45±6.23、IL-1β为195.76±15.14、IL-18为167.31±13.92,蛋白表达水平NLRP3为0.96±0.06、ASC为1.01±0.08、caspase-1为0.94±0.06。模型组大鼠粪便性状评分为6.12±0.58、粪便含水量为65.24±4.13、AWR评分为2.42±0.18,与对照组相比均升高(P<0.05);模型组大鼠TNF-α为315.73±19.47、IL-6为231.97±14.65、IL-1β为435.83±28.67、IL-18为382.56±26.84,蛋白表达水平NLRP3为2.41±0.18、ASC为2.23±0.15、caspase-1为2.15±0.16,与对照组相比均升高(P<0.05)。AND低、中、高剂量组大鼠的粪便性状评分分别为5.38±0.46、4.57±0.38、3.31±0.27,粪便含水量分别为54.68±3.67、46.87±3.75、38.11±3.10,AWR评分分别为1.79±0.16、1.35±0.10、0.69±0.04,与模型组相比均降低(P<0.05);AND低、中、高剂量组大鼠TNF-α分别为268.65±17.23、224.91±16.36、178.16±14.65IL-6分别为187.74±14.57、159.64±11.39、124.18±8.62,IL-1β分别为369.51±21.96、314.72±23.64、263.93±16.82,IL-18分别为334.72±25.17、280.16±21.43、235.67±19.32,蛋白表达水平NLRP3分别为1.94±0.15、1.56±0.12、1.25±0.09,ASC分别为1.89±0.14、1.61±0.13、1.28±0.10,caspase-1分别为1.76±0.14、1.49±0.11、1.20±0.09,与模型组相比均降低(P<0.05)。结论AND可能通过抑制NLRP3/caspase-1信号通路减轻IBS-D大鼠的肠道炎症。

三七总皂苷对脑缺血再灌注后神经元凋亡及凋亡线粒体途径和c-Jun氨基末端激酶表达的影响

目的:研究三七总皂苷对小鼠脑缺血再灌注后神经元凋亡及凋亡的线粒体途径相关蛋白细胞色素C(CytC),半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9),caspase-3和磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK1/2)表达的影响,探讨其抗脑缺血后神经元凋亡的机制。方法:C57BL/6小鼠随机分成假手术组、模型组、三七总皂苷组及依达拉奉组,连续给药4 d后结扎双侧颈总动脉造成脑缺血20 min,再灌注24,48 h,用Tunel法检测神经元凋亡,Western-blot法检测脑组织caspase-9,caspase-3,CytC和p-JNK1/2蛋白的表达。结果:脑缺血再灌注后24,48 h,模型组神经元凋亡率增加,脑组织CytC,caspase-9,caspase-3,p-JNK1/2蛋白表达均显著增强,与假手术组比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。三七总皂苷组神经元凋亡率显著下降,脑组织CytC,caspase-9,caspase-3,p-JNK1/2蛋白表达均显著降低,与模型组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:三七总皂苷可抑制脑缺血再灌注后神经元凋亡,其机制可能与其抑制JNK信号转导蛋白激活、抑制线粒体凋亡途径有关。

大豆异黄酮对阿尔茨海默病大鼠海马RAGE介导的信号转导通路的影响

目的观察大豆异黄酮(soybean isoflavones)对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)大鼠高级糖化终产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)介导的信号转导系统的影响。方法采用β淀粉样蛋白25-35片段(amyloidβ25-35,Aβ25-35)双侧海马注射建立AD大鼠模型,60只大鼠随机分为模型组、大豆异黄酮高剂量组[30mg/(kg·d)]、大豆异黄酮低剂量组[10mg/(kg·d)]、雌激素组[0.4mg/(kg·d)]及假手术组,每组12只。大豆异黄酮高、低剂量组和雌激素组造模后3天灌胃给药(2mL/只),模型组与假手术组给予等体积的0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)灌胃,连续21天。酶联免疫吸附法观察各组大鼠海马组织RAGE、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的含量。分光光度法检测大鼠海马组织天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cysteine-containing aspartate-specific protease-3,Caspase-3)活性。免疫组织化学法观察大鼠海马组织磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(phosphorylation extracellular signal-regulatedkinase1/2,P-ERK1/2)的表达。结果与模型组比较,大豆异黄酮可显著降低AD大鼠海马RAGE蛋白、IL-6含量、Caspase-3活性及ERK1/2蛋白磷酸化水平(P<0.01)。结论大豆异黄酮对AD大鼠海马组织RAGE介导的炎症信号通路具有下调作用,减弱炎症反应,降低Aβ的神经毒性,抵抗海马神经元凋亡。

Caspase-3抑制剂抑制长春碱诱导的人乳腺癌细胞凋亡及IκΒ-α降解

目的:本实验通过阻断caspase-3途径,观察长春碱诱导的肿瘤细胞凋亡及胞浆内IκΒ-α蛋白降解的影响,以探索长春碱诱导肿瘤细胞凋亡的信号转导途径。方法:用二甲基亚砜对照、100μmol/L caspase-3抑制剂(DEVD-CHO)预处理乳腺癌Bcap37细胞3h后,加入不同浓度的长春碱,以MTT法检测肿瘤细胞增殖能力,以细胞DNA片段分析及PI染色法检测肿瘤细胞凋亡,以蛋白免疫印迹法检测pro-caspase-3和IκΒ-α蛋白的变化。结果:蛋白免疫印迹法证实长春碱可诱导pro-caspase-3蛋白的降解。经MTT法、DNA凋亡梯状条带法及流式细胞仪PI染色法证实,DEVD-CHO能减弱由长春碱所诱导的肿瘤细胞凋亡。两组的IC50分别为56.8μmol/L和87.4μmol/L。蛋白免疫印迹实验表明,DEVD-CHO能抑制由长春碱所诱导的IκΒ-α蛋白磷酸化降解。结论:在长春碱诱导肿瘤细胞凋亡过程中,NF-κΒ/IκΒ信号转导途径起着重要作用,caspase-3途径参与调节。阻断该途径将减弱长春碱所诱导的肿瘤细胞凋亡和IκΒ-α磷酸化降解。

甘草酸对缺血/再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响及机制探讨

目的观察甘草酸对缺血/再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响,并探讨其机制。方法将50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组及甘草酸低、中、高剂量组5组,各10只。后四组制备缺血/再灌注大鼠模型,假手术组只穿线不结扎左冠状动脉降支,甘草酸低、中、高剂量组在缺血前半小时分别于股静脉注射30、60、90 mg/kg的甘草酸,假手术组与模型组注射同体积生理盐水。取各组心肌组织,采用TUNEL染色法测算心肌细胞凋亡率,Western blotting法检测MKK/JNK信号通路蛋白[丝分裂原活化蛋白激酶4/7(MKK4/7)、c-Jun氨基末端激酶1/2/3(JNK1/2/3)、磷酸化MKK4/7(p-MKK4/7)、磷酸化JNK1/2/3(p-JNK1/2/3)]及凋亡相关蛋白[天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)8、B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Caspase-3]的表达,同时观察心肌组织病理改变情况。结果与假手术组相比,模型组细胞凋亡率高,p-MKK4/7、p-JNK1/2/3、Caspase-8、Bax、Caspase-3表达高而Bcl-2表达低(P均<0.05)。与模型组相比,甘草酸中剂量组及甘草酸高剂量组细胞凋亡率低,p-MKK4/7、p-JNK1/2/3、Caspase-8、Bax、Caspase-3表达低而Bcl-2表达高(P均<0.05)。模型组较假手术组大鼠心肌组织中出现较多变性坏死心肌细胞,有较多炎性细胞浸润;甘草酸低、中、高剂量组较模型组心肌细胞水肿程度轻且炎性细胞少。结论甘草酸可减少缺血/再灌注大鼠心肌细胞凋亡及心肌组织损伤;其机制可能为抑制MKK/JNK信号通路中MKK4/7和JNK1/2/3磷酸化,降低Caspase-8、Bax、Caspase-3表达,升高Bcl-2表达。

GLP-1通过SDF-1/CXCR4信号通路调控人脐血内皮祖细胞增殖、分化和凋亡

目的探讨胰高血糖素样肽1(GLP-1)调控人脐血内皮祖细胞(EPCs)增殖、分化与凋亡的分子机制。方法从健康孕妇脐带血分离和培养EPCs,以2×105密度接种于6孔细胞板,分别转染空载体质粒(对照组)、pcD-NA3-GLP-1质粒(GLP-1组)、pcDNA3-GLP-1质粒+AMD3100(GLP-1+AMD3100组)及单纯AMD3100(AMD3100组)。将pcDNA3-GLP-1质粒转染EPCs,以25μmol/L AMD3100阻断体外培养的EPCs的基质细胞衍生因子(SDF-1)/趋化因子受体4(CXCR4)信号通路1 h。采用RT-PCR检测分化和凋亡相关基因PPARγ、C/EBPα与Caspase-3基因表达,MTT比色法检测细胞增殖能力,Caspase-3活性检测试剂盒测定Caspase-3活性。结果与对照组相比,GLP-1过表达显著提高了C/EBPα及PPARγmRNA表达,促进了EPCs细胞增殖,降低了Caspase-3 mRNA表达和Caspase-3活性(均P<0.05)。当SDF-1/CXCR4信号通路被阻断后,GLP-1对C/EBPα及PPARγmRNA表达、EPCs细胞增殖的促进作用,以及对Caspase-3 mRNA表达和Caspase-3活性的抑制作用均明显减弱(均P<0.05)。结论GLP-1可通过调节SDF-1/CXCR4信号通路促进EPCs增殖与分化,抑制其凋亡。

小鼠小肠缺血再灌注损伤早期JNK磷酸化的作用

目的探讨c-Jun氨基端激酶(JNK)活化及其介导凋亡信号通路在小鼠小肠缺血再灌注损伤中的作用。方法C57 BL/6小鼠随机分为假手术组(S)和缺血再灌注不同时间[即刻(0)、0.5、1、4、6、12 h]组,夹闭肠系膜前动脉40 min后再灌注造成小肠缺血再灌注损伤模型,假手术组不夹闭动脉。假手术后及再灌注后不同时间处死小鼠取小肠标本,Western印迹法检测小肠JNK、磷酸化JNK、Cleaved-caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达水平,观察回肠组织病理学改变。结果肠缺血再灌注早期肠组织病理损伤最重,至12 h肠组织结构基本恢复正常。肠缺血及再灌注早期,小肠组织JNK持续活化,与假手术组比较差异有统计学意义(P<0.01);与假手术组比较,再灌注0.5、1 h小肠组织Cleaved-caspase-3明显增加(P<0.01),同时抗凋亡Bcl-2蛋白明显下调(P<0.01),各组间促凋亡蛋白Bax表达无统计学差异。结论肠缺血再灌注早期小肠组织JNK活化、抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调,可能参与了caspase-3依赖的细胞凋亡和组织损害。

p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路特异性阻滞药对癫痫模型大鼠神经细胞的保护作用研究

目的:研究p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路特异性阻滞药SB203580对癫痫模型大鼠神经细胞的保护作用。方法:取大鼠随机分为正常对照组、模型组和SB203580低、中、高剂量(5、10、20mg.kg-1)组,每组10只,后4组腹腔注射戊四唑建立癫痫模型,SB203580各剂量组建模前10min腹腔注射相应药物。建模给药后按Racine分级标准对各组大鼠进行行为学评价,建模给药后2h检测各组脑组织中乳酸脱氢酶(LDH)释放率,采用免疫组化法和免疫印迹法检测海马组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表达。结果:正常对照组无癫痫发作;与正常对照组比较,模型组癫痫发作程度明显增强,LDH释放率明显升高,Caspase-3阳性细胞数及其表达明显增加(P<0.01);与模型组比较,SB203580各剂量组癫痫发作程度明显减轻,LDH释放率明显降低,Caspase-3阳性细胞数及其表达明显减少(P<0.05或P<0.01),且与剂量成正相关。结论:SB203580可能通过间接抑制Cas-pase-3表达实现对癫痫模型大鼠神经细胞的保护作用。

Caspase-3和JNK与脑缺血再灌注后细胞凋亡的关系

缺血性脑血管病是目前神经内科最常见的一种疾病,占全部脑血管疾病的43%-65%,严重威胁人类生命健康,其致残率非常高。对这种疾病的治疗一般是以疏通堵塞的血管改善病变部位的血液供应为主,而当缺血部位的血液供应好转以后就容易发生更加严重的再灌注损伤。

补阳还五汤提取物灌胃对脑出血大鼠脑组织中PI3K、AKT、Caspase-3表达的影响

目的观察补阳还五汤提取物对脑出血大鼠脑组织磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、丝/苏氨酸蛋白激酶(AKT)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)表达的影响,探讨其对脑组织的保护作用机制。方法将72只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组、银杏叶片组各18只,后4组采用Rosenberg法建立脑出血大鼠模型后,分别给予生理盐水、补阳还五汤提取物、银杏叶片连续灌胃35 d。用免疫组化法检测PI3K、AKT、Caspase-3蛋白表达,TUNEL法检测脑组织细胞凋亡情况,干湿重法检测脑组织含水量,甲酰胺法检测血-脑脊液屏障通透性。结果与模型组比较,补阳还五汤组、银杏叶片组PI3K、AKT蛋白表达水平升高,Caspase-3蛋白表达水平降低,脑组织含水量、凋亡细胞数减少,血-脑脊液屏障通透性降低(P均<0.05)。结论补阳还五汤提取物可能通过激活PI3K/AKT信号通路,降低血-脑脊液屏障通透性来保护脑出血大鼠脑组织。

基于JAK2/STAT3和JNK信号通路研究蒲公英甾醇对急性重型肝炎的保护作用

目的:研究蒲公英甾醇对急性重型肝炎小鼠的肝保护作用并基于酪氨酸激酶2/转录因子3/c-Jun氨基末端激酶(JAK2/STAT3/JNK)信号通路探讨其作用机制。方法:60只昆明小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、水飞蓟素120 mg/kg组、蒲公英甾醇2.5、5、10 mg/kg组,每组10只。各组灌胃相应药物或生理盐水,1次/d,连续15 d,末次药后2 h后,正常对照组小鼠腹腔注射生理盐水,其余各组小鼠腹腔注射D-氨基半乳糖(D-GalN)500 mg/kg和脂多糖(LPS)10μg/kg建立急性重型肝炎模型,腹腔注射体积为4 mL/kg,禁食不禁水6 h后,取血并收集小鼠肝脏。生化法检测小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)以及肝组织中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)以及总超氧化物歧化酶(T-SOD)含量或活力;ELISA法检测肝组织中白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、IL-1β含量;HE染色观察肝组织的病理变化程度;Western blot法检测细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)、转录因子3(STAT3)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组小鼠血清中ALT、AST活力和肝组织中MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β含量显著升高,T-SOD和GSH-Px的活力显著降低(P<0.01),肝组织p-STAT3和p-JNK蛋白表达显著上调(P<0.01);与模型对照组相比,蒲公英甾醇和水飞蓟素可不同程度地改善小鼠急性重型肝炎发展进程,其中蒲公英甾醇10 mg/kg可显著降低小鼠血清中的ALT、AST活力以及肝组织中MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β的含量(P<0.01),提高肝组织中T-SOD和GSH-Px的活力,下调p-STAT3、p-JNK蛋白表达,显著上调SOCS3的蛋白表达(P<0.01)。结论:蒲公英甾醇对D-GalN/LPS致急性重型肝炎小鼠肝脏具有保护作用,其保肝机制可能通过上调SOCS3从而调控JAK2/STAT3及JNK信号通路,进而抑制炎症反应相关。