基于MEK/ERK通路研究桂枝茯苓丸改善慢性阻塞性肺疾病小鼠气道重塑的作用与机制

目的:研究桂枝茯苓丸通过丝裂原活化细胞外信号调节蛋白激酶(MEK)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路改善慢性阻塞性肺疾病(COPD)小鼠气道重塑的作用与机制。方法:采用烟熏的方法建立COPD小鼠模型,将32只造模成功小鼠随机分为模型组、桂枝茯苓丸组、PD98059组和桂枝茯苓丸+PD98059组,每组8只。另取8只未烟熏的小鼠为空白组。各组予相应药物灌胃14 d。采用小动物肺功能仪测定小鼠每分钟通气量(MV)、呼气峰值流速(PEF)和吸气峰值流速(PIF),HE染色评估肺组织炎症,Masson染色观察气道重塑改变,Western blotting检测COL1A1、COL3A1、MEK1、p-MEK1、ERK(1/2)和p-ERK(1/2)蛋白相对表达量。结果:模型组小鼠MV、PIF和PEF水平均低于空白组(P<0.05)。与空白组比较,模型组小鼠肺组织出现明显炎症和气道重塑,且肺组织COL1A1、COL3A1、p-MEK1、p-ERK(1/2)、p-MEK/MEK和p-ERK(1/2)/ERK(1/2)均高于空白组(P<0.05)。桂枝茯苓丸组、PD98059组和桂枝茯苓丸+PD98059组小鼠MV、PEF、PIF水平均高于模型组(P<0.05),肺组织COL1A1、COL3A1、p-MEK1、p-ERK(1/2)、p-MEK/MEK和p-ERK(1/2)/ERK(1/2)均低于模型组(P<0.05)。与模型组比较,桂枝茯苓丸组、PD98059组和桂枝茯苓丸+PD98059组小鼠的肺组织炎症和气道重塑改善。桂枝茯苓丸+PD98059组小鼠MV、PIF、PEF水平高于桂枝茯苓丸组和PD98059组(P<0.05)。桂枝茯苓丸组小鼠MV、PIF和PEF水平与PD98059组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。桂枝茯苓丸组小鼠肺组织COL1A1和COL3A1蛋白相对表达量低于PD98059组(P<0.05),高于桂枝茯苓丸+PD98059组(P<0.05)。PD98059组小鼠肺组织COL1A1和COL3A1蛋白相对表达量高于桂枝茯苓丸+PD98059组(P<0.05)。桂枝茯苓丸组小鼠肺组织p-MEK1、p-ERK(1/2)、p-MEK1/MEK1和p-ERK(1/2)/ERK(1/2)低于PD98059组(P<0.05),高于桂枝茯苓丸+PD98059组(P<0.05)。PD98059组小鼠肺组织p-MEK1、p-ERK(1/2)、p-MEK1/MEK1和p-ERK(1/2)/ERK(1/2)高于桂枝茯苓丸+PD98059组(P<0.05)。结论:桂枝茯苓丸能显著改善COPD小鼠气道重塑过程,抑制MEK/ERK通路可能是其作用机制之一。

补阳还五汤调节MEK/ERK通路对糖尿病大鼠坐骨神经细胞凋亡及机械性痛觉超敏的影响研究

目的研究补阳还五汤对糖尿病大鼠坐骨神经细胞凋亡及机械性痛觉超敏的影响,以及对丝裂原活化蛋白激酶(MEK)/细胞外信号相关激酶(ERK)通路的调节作用。方法36只大鼠随机分为正常对照组(6只)及造模组(30只),造模组采用高糖高脂饲料喂养法联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)法建立糖尿病坐骨神经病变大鼠模型,造模完成后,造模组大鼠随机分为模型组、补阳还五汤低剂量组、补阳还五汤中剂量组、补阳还五汤高剂量组及阳性对照组,每组6只。补阳还五汤低、中、高剂量组大鼠分别按照7.5、15.0、30.0 g/kg(以生药含量计)给予补阳还五汤灌胃,1次/d,连续给药12周。阳性对照组大鼠按照0.1 mg/kg腹腔注射给予PD98059,2次/周,连续12周。测定大鼠热缩足潜伏期及后足伸姿推力,使用肌电图仪测定运动神经传导速度(MNCV)及感觉神经传导速度(SNCV),使用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒测定大鼠血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、总抗氧化能力(T-AOC)及坐骨神经谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,采用苏木精-伊红(HE)染色法检查坐骨神经病理学变化,采用缺口末端标记法(TUNEL)测定坐骨神经细胞凋亡率,采用免疫印迹法测定大鼠坐骨神经p-MEK、p-ERK水平。结果与正常对照组比较,模型组大鼠热缩足潜伏期、MNCV、SNCV及T-AOC、GSH、SOD水平均明显降低(P<0.05),后足伸姿推力、坐骨神经细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA、p-MEK、p-ERK水平均明显升高(P<0.05)。与模型组比较,补阳还五汤各剂量组及阳性对照组大鼠热缩足潜伏期、MNCV、SNCV及T-AOC、GSH、SOD水平均明显升高,且补阳还五汤低剂量组<补阳还五汤中剂量组<补阳还五汤高剂量组,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,补阳还五汤各剂量组及阳性对照组大鼠后足伸姿推力、坐骨神经细胞凋亡率及IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA、p-MEK、p-ERK水平均明显降低,且补阳还五汤低剂量组>补阳还五汤中剂量组>补阳还五汤高剂量组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论补阳还五汤能够显著抑制糖尿病大鼠坐骨神经氧化应激损伤及炎症因子水平,修复坐骨神经病理性损伤,改善大鼠坐骨神经功能,抑制坐骨神经细胞凋亡,进而促进糖尿病大鼠坐骨神经损伤的恢复,其机制可能与调节MEK/ERK通路有关。

基于Raf/MEK/ERK信号通路探讨内异康复片对hEM15A细胞的影响

目的探讨内异康复片对子宫内膜异位症(EMT)内膜间质细胞hEM15A的影响。方法制备内异康复片含药血清,将hEM15A细胞分为空白对照组,阴性对照组,5%、10%、20%含药血清组。采用CCK-8法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞迁移,Western blo法检测RKIP及Raf/MEK/ERK通路相关蛋白表达。再将hEM15A细胞分为阴性对照组、10%含药血清组、si-RKIP-1组、si-RKIP-1+10%含药血清组,观察上述检测指标的变化。结果与阴性对照组比较,各浓度含药血清组hEM15A细胞活性降低(P<0.05),凋亡率、RKIP蛋白表达升高(P<0.05);10%及20%含药血清组hEM15A细胞迁移数、p-MEK及p-ERK1/2蛋白表达降低(P<0.05),p-Raf蛋白表达降低(P<0.05)。与阴性对照组比较,si-RKIP-1组hEM15A细胞活性、迁移数升高(P<0.05),RKIP蛋白表达降低(P<0.05),p-Raf、p-ERK1/2、p-MEK蛋白表达升高(P<0.05);与10%含药血清组比较,si-RKIP-1+10%含药血清组hEM15A细胞活性、迁移数升高(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05),RKIP蛋白表达降低(P<0.05),p-Raf、p-MEK、p-ERK1/2蛋白表达升高(P<0.05)。结论内异康复片可能通过调节RKIP及其介导的Raf/MEK/ERK信号通路抑制hEM15A细胞活性和迁移,促进ESC凋亡,发挥改善EMT的作用。

中医药靶向干预RaF/MEK/ERK信号通路治疗肝细胞癌的研究进展

肝细胞癌(HCC)是一种高度恶性肿瘤,具有特殊的多元难治性分子生物学机制。肝细胞癌的病理表现与病变细胞的分化程度有关,因此抑制肝癌细胞的分化、增殖是治疗该病的重要手段。中医药可以通过调控体内蛋白激酶(RaF)、丝原活化蛋白激酶(MEK)、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)及精准干预RaF/MEK/ERK通路来影响肝癌的发生进展,从而发挥治疗HCC的作用。该文主要针对RaF/MEK/ERK信号通路调控HCC发生发展的机制,以及中药单体及复方靶向干预RaF/MEK/ERK信号通路进行综述。

盐酸安罗替尼联合化疗对宫颈癌患者癌组织血管新生能力及MEK/ERK通路的影响

目的研究盐酸安罗替尼联合化疗对宫颈癌患者癌组织血管新生能力及MEK/ERK通路的影响。方法选取苏州大学附属第二医院2020年8月—2022年8月收治的68例宫颈癌患者为研究对象,采用随机数字表法分为试验组(n=34)和对照组(n=34)。对照组接受常规化疗治疗,试验组在此基础上联合安罗替尼抗血管生成治疗。对比两组患者临床疗效,治疗前后血管新生能力[血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤微血管密度(MVD)],治疗后MEK/ERK通路分子水平。结果与对照组总有效率58.82%(20/34)相比,试验组88.23%(30/34)更高(χ^(2)=7.555,P<0.05);治疗后,两组患者VEGF、MVD水平均降低,且相比于对照组,试验组更低[对照组分别为(63.98±5.14)ng·g^(-1)、(13.02±1.65)个·mm^(-2),试验组分别为(48.06±5.35)ng·g^(-1)、(6.68±1.62)个·mm^(-2)](t=12.512、15.987,均P<0.05);与对照组患者相比,试验组患者MEK1、MEK2以及ERK1/2水平更低[对照组分别为(2.06±0.19)ng·mL^(-1)、(2.28±0.14)ng·mL^(-1)、(1.48±0.12)ng·mL^(-1),试验组分别为(1.23±0.21)ng·mL^(-1)、(1.06±0.15)ng·mL^(-1)、(0.84±0.11)ng·mL^(-1)](t=17.089、34.670、22.924,均P<0.05)。结论盐酸安罗替尼联合化疗能够有效抑制宫颈癌患者癌组织血管新生能力以及MEK/ERK通路分子水平,临床疗效较高。

雷公藤红素通过FAK/MEK/ERK信号通路对肝癌细胞耐药性的影响

目的探究雷公藤红素(CSL)对肝癌细胞耐药性的影响。方法采用仑伐替尼(Len)构建耐药人肝癌细胞Huh7/Len,分为对照组,CSL低、中、高浓度组(1、2.5、5μmol/L),CSL高浓度+Zn27[黏着斑激酶(FAK)激活剂]组(5μmol/L CSL+2 nmol/L Zn27),每组设置6个复孔。检测细胞增殖(以吸光度计)和克隆能力、凋亡率、侵袭数、迁移数,以及细胞中活性氧(ROS)水平和磷酸化FAK(p-FAK)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶(p-MEK)、磷酸化胞外信号调节激酶(p-ERK)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(caspase-3)蛋白表达。结果与对照组比较,CSL低、中、高浓度组细胞的吸光度、克隆数、侵袭数、迁移数和p-FAK、p-MEK、p-ERK、Bcl-2蛋白相对表达量均显著降低,细胞凋亡率、ROS水平和Bax、caspase-3蛋白相对表达量均显著升高,且呈浓度依赖性(P<0.05);与CSL高浓度组比较,CSL高浓度+Zn27组细胞中上述指标变化均显著逆转(P<0.05)。结论CSL能增强氧化应激,促进细胞凋亡,抑制肝癌细胞恶性进展和化疗耐药性,其机制可能与抑制FAK/MEK/ERK信号通路有关。

连翘脂素调节Ras/Raf/MEK/ERK信号通路对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 探究连翘脂素(PG)对结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡以及上皮间质转化的影响及机制。方法 培养HCT116结直肠癌细胞,采用10~200μmol/L的连翘脂素处理细胞,检测细胞存活率,筛选最佳实验浓度。将细胞分为对照组(Control组),连翘脂素低、中、高浓度组(PG-L组、PG-M组、PG-H组),连翘脂素高浓度+转染慢病毒阴性对照组(PG-H+NC组),连翘脂素高浓度+Ras慢病毒组(PG-H+Ras组)。平板克隆形成实验检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Transwell小室法检测细胞侵袭;流式细胞术以及Hoechst33258染色法检测细胞凋亡;Western blot法检测上皮间质转化(EMT)标志蛋白E型钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)以及信号通路相关蛋白p-Raf、p-MEK、p-ERK表达;建立荷瘤小鼠模型评价连翘脂素对结直肠癌肿瘤生长的影响。结果 10~200μmol/L的连翘脂素处理HCT116结直肠癌细胞,可以显著抑制细胞存活率,经计算IC50值为(140.4±2.147)μmol/L,选择10、50、100μmol/L连翘脂素进行后续实验;与Control组比较,PG-L组、PG-M组、PG-H组HCT116细胞克隆形成率、划痕愈合率、细胞侵袭个数以及Vimentin、p-Raf、p-MEK、p-ERK表达显著降低,细胞凋亡率以及E-cadherin表达显著升高,且呈浓度依赖性(P<0.05);与PG-H+NC组比较,PG-H+Ras组HCT116细胞克隆形成率、划痕愈合率、细胞侵袭个数以及Vimentin、p-Raf、p-MEK、p-ERK表达显著升高,细胞凋亡率以及E-cadherin表达显著降低(P<0.05);连翘脂素可以显著抑制结直肠癌移植瘤的生长。结论 连翘脂素可以抑制结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡以及上皮间质转化,其作用机制可能与抑制Ras/Raf/MEK/ERK信号通路激活有关。

自分泌IL-6经Ras/MEK/ERK、PI3K/Akt通路促进卵巢癌细胞黏附和侵袭功能的研究

目的探讨内源性IL-6表达改变对卵巢癌细胞黏附和侵袭功能的影响及相关信号转导通路。方法利用以往构建的内源性过表达IL-6的人卵巢癌A2780细胞系和内源性抑制IL-6表达的人卵巢癌SKOV-3细胞,分别采用细胞体外黏附实验、Transwell小室体外侵袭实验、免疫印迹技术等观察IL-6对卵巢癌细胞黏附、侵袭能力的影响,并对其可能的信号通路进行研究。结果与对照组相比,内源性过表达IL-6可促进卵巢癌细胞的体外黏附和侵袭功能;抑制IL-6表达则可抑制卵巢癌细胞的上述功能。过表达或抑制表达IL-6可增加或减少卵巢癌细胞磷酸化ERK、Akt的表达水平,应用ERK或Akt特异性信号阻断剂可显著抑制高表达IL-6的卵巢癌细胞黏附和侵袭作用,提示可能与其活化Ras/MEK/ERK、PI3K/Akt通路有关。结论卵巢癌细胞产生的IL-6可经Ras/MEK/ERK和PI3K/Akt通路增强自身的黏附和侵袭能力,调节IL-6表达及相关信号转导通路可能是未来临床控制卵巢癌进展的一种良好策略。

结直肠癌中MEK2/ERK信号传导通路的研究

目的 研究丝裂原激活化蛋白激酶 (MAPK )中MEK2 /ERK信号传导通路在结直肠癌发生发展中的作用。方法 ( 1)采用Westernblot检测 5 2例结直肠癌组织及其邻近肠黏膜中MEK 2蛋白的表达。 ( 2 )用丝裂原细胞外激酶 (MEK )抑制剂作用于结肠癌细胞系SW 480 ,然后以MTT法检测细胞增殖状态 ;用Westernblot检测MEK2 ,p ERK及其靶基因产物C myc的表达。结果 结直肠癌组织中MEK2蛋白表达水平明显高于邻近的肠黏膜 (P <0 .0 5 ) ,且与肿瘤的分化、Dukes分期及淋巴结转移有关 (P <0 .0 5 )。应用MEK的抑制剂后SW 480细胞中MEK2 ,p ERK ,C myc表达水平随作用时间延长而下降。结论 MEK2活性增高与结直肠癌细胞侵袭力有关 ,阻断MEK2 /ERK信号传导通路可以抑制结肠癌细胞的增殖 ,促进其凋亡。

Ras/Raf/MEK/ERK信号通路参与自噬调控作用的研究进展

自噬是机体保守的自我防御机制,是将细胞内变形坏死的细胞器和多余蛋白降解为小分子,以供循环利用。自噬在生理和病理状态下均发挥重要作用,可通过多条信号通路影响胞内物质的表达。目前已知Ras/Raf/MEK/ERK信号通路不仅广泛参与调控细胞生长、增殖、分化、凋亡等多个生理病理过程,并且参与调控自噬,并具有促进肿瘤细胞发生自噬性死亡的作用,但是其具体参与调控自噬的作用机制尚未完全阐明。本文就Ras/Raf/MEK/ERK信号通路参与调控自噬的作用的研究进展进行详细阐述,以期为研究Ras/Raf/MEK/ERK信号通路调控自噬的作用机制提供参考。

Ras/Raf/MEK/ERK信号传导通路在2型糖尿病大鼠局灶性脑缺血早期作用的研究

目的探讨高血糖加重脑梗死机制与Ras/Raf/丝裂原激活蛋白激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号传导通路的关系。方法通过大鼠尾静脉注射链脲佐菌素(STZ)及大脑中动脉闭塞(MCAO)术造成大鼠糖尿病脑缺血模型。将大鼠分成假手术组、健康大鼠脑缺血组、2型糖尿病(T2DM)大鼠脑缺血组、PD98059组,每组12只。PD98059组于MCAO术前30min尾静脉注射PD98059(3mL/kg)。MCAO术后2h给各组大鼠做神经学评分,取脑组织标本。应用免疫组织化学、蛋白质印迹法(Western blotting)测定大鼠磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白的表达,应用TUNEL检测神经细胞凋亡情况。结果除假手术组外,其他3组均有不同程度的神经功能缺损、神经细胞凋亡,且差异有统计学意义(P<0.01)。p-ERK1/2蛋白在假手术组偶见表达,在健康大鼠脑缺血组、T2DM大鼠脑缺血组表达明显升高(P<0.01),且T2DM大鼠脑缺血组升高更加明显(P<0.01)。PD98059组p-ERK1/2蛋白表达较少。免疫组织化学和Western blotting结果基本一致。结论 Ras/Raf/MEK/ERK信号传导通路在局灶性脑缺血早期能促进神经细胞的凋亡,糖尿病加重脑梗死与Ras/Raf/MEK/ERK信号传导通路有关。

MEK抑制剂阻断小鼠脑缺血后ERK通路的激活和IL-1β mRNA合成

目的 研究细胞外信号调节激酶 (ERKs)在脑缺血中的作用以及U0 12 6对缺血脑组织保护作用的机制。方法 线栓法制作小鼠大脑中动脉栓塞 (MCAO)模型 ,颈内静脉注射U0 12 6 ;Westernblot法和免疫组化法检测 pMEK、pERK1/2和 pElk 1;核糖核酸酶保护测定法检测IL 1βmRNA含量。 结果 注射U0 12 6后的MCAO小鼠 pMEK活性降低 ,其降低幅度与U0 12 6有剂量依赖的关系 ,并在缺血前给药有效 ;U0 12 6注射后pERK1/2和 pElk 1也表现出相似的下降变化。小鼠MCAO后 1到 2hIL 1βmRNA水平上升 ;而注射U0 12 6后IL 1βmRNA在MCAO后 1至 4h内下降。 结论 ERK在小鼠脑缺血中发挥重要作用。静脉注射MEK抑制剂U0 12 6可阻断脑缺血引起的pMEK、pERK1/2和 pElk 1的活性增加。U0 12 6通过阻断ERK通路进而降低IL

基于MEK/ERK信号通路探究丹参酮ⅡA磺酸钠对缺氧复氧心脏微血管内皮细胞的保护作用

目的探究丹参酮ⅡA磺酸钠(STS)对缺氧/复氧(H/R)心脏微血管内皮细胞(CMECs)保护作用的内在机制。方法H/R细胞模型的建立;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测CMECs细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期;Western印迹检测凋亡相关蛋白及促分裂原活化蛋白激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)通路相关蛋白表达;光学显微镜下观测CMECs细胞血管形成能力。结果与对照组比较,H/R组G0/G1期比例明显升高(P<0.05),S期明显降低(P<0.05)。与H/R组比较,低、中、高剂量STS组细胞G0/G1期比例依次降低,S期依次升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,H/R组细胞活力、管的形成、p-MEK、p-ERK2水平显著降低(P<0.05);与H/R组比较,低、中、高剂量STS组细胞活力、管的形成、p-MEK、p-ERK2水平均显著增高,且呈剂量依赖性(均P<0.05)。与对照组相比,H/R组细胞凋亡率、Bax、酶切caspase-3水平显著升高(P<0.05);与H/R组比较,低、中、高剂量STS组细胞凋亡率、Bax、酶切caspase-3水平均显著降低,且呈剂量依赖性(均P<0.05)。结论STS对H/R CMECs损伤的保护作用与其激活MEK/ERK信号通路有关。

GCS通过MEK/ERK通路调控白血病多药耐药细胞凋亡相关基因bcl-2的表达

目的:探讨葡萄糖神经酰胺合成酶(GCS)是否通过MEK/ERK信号通路调控凋亡相关基因bcl-2的表达,从而诱导人白血病K562/A02细胞多药耐药。方法:用小干扰RNA(siRNA)靶向干扰K562/A02细胞中GCS的表达,real-time PCR、Western blotting检测Bcl-2、磷酸化及总ERK水平;用MEK特异性化学抑制剂U0126抑制MEK/ERK信号通路的活化,real-time PCR与Western blotting技术分别检测Bcl-2 mRNA与蛋白水平;CCK-8试剂盒检测细胞存活情况。结果:与阴性对照组比较,GCS siRNA明显抑制K562/A02细胞GCS和Bcl-2的表达,并抑制MEK/ERK信号通路的活化;U0126使Bcl-2 mRNA及蛋白水平呈浓度依赖性下降,并使K562/A02细胞ADM敏感性增加。结论:GCS通过MEK/ERK信号通路调控K562/A02细胞株中凋亡相关基因bcl-2的表达,从而诱导白血病细胞多药耐药。

基于Raf/MEK/ERK信号通路探讨黄芪建中汤治疗大鼠脾胃虚寒型十二指肠溃疡的作用机制

目的探讨黄芪建中汤通过Raf/MEK/ERK信号通路治疗大鼠脾胃虚寒型十二指肠溃疡(DU)的作用机制。方法将60只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、埃索美拉唑组(4.17 mg·kg^(-1))以及黄芪建中汤高、低剂量组(18.54、9.27 g·kg^(-1))。采用“苦寒泻下+劳倦过度”法联合阿司匹林、无水乙醇构建脾胃虚寒型DU大鼠模型。灌胃给药,每天1次,连续4 d。观察大鼠十二指肠黏膜损伤情况并计算溃疡指数和治疗指数;采用HE染色法观察十二指肠黏膜组织病理形态学改变;采用酶联免疫吸附试验检测十二指肠组织中前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素10(IL-10)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;免疫荧光法检测十二指肠黏膜磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-Raf)、磷酸化有丝分裂原活化蛋白激酶激酶1/2(p-MEK1/2)、磷酸化细胞外信号调节激酶1(p-ERK1)蛋白表达。结果与正常对照组比较,模型组大鼠的十二指肠溃疡指数显著升高(P<0.01);小肠绒毛脱落,隐窝脓肿,小肠绒毛长度和隐窝深度均显著降低(P<0.01);肠黏膜PGE2、IL-10含量均明显降低(P<0.01),TNF-α含量显著增加(P<0.01);肠黏膜p-Raf、p-MEK1/2和p-ERK1蛋白表达量均明显增加(P<0.01)。与模型组比较,黄芪建中汤各剂量组的大鼠十二指肠溃疡指数均明显降低(P<0.01);肠黏膜损伤得到明显改善,黏膜形态趋于完整,小肠绒毛长度和隐窝深度均明显增加(P<0.01);肠黏膜PGE2和IL-10含量均明显提高(P<0.01),TNF-α含量显著降低(P<0.01);肠黏膜p-Raf、p-MEK1/2和p-ERK1蛋白表达均显著下调(P<0.01)。结论黄芪建中汤对脾胃虚寒型DU大鼠具有治疗作用,其机制可能与调控PGE2、TNF-α、IL-10等炎症介质水平,抑制Raf/MEK/ERK信号通路活化有关。

复心合剂对心衰大鼠信号通路Raf-MEK-ERK的影响

目的:初步探索复心合剂对信号通路Raf-MEK-ERK的影响。方法:75只Wistar雄性大鼠,随机分为5组,对照组、卡托普利组、复心合剂低剂量组、复心合剂高剂量组均为15只。实验过程中阿霉素干预4周后测定大鼠心功能;6周后应用Western blot法检测大鼠心肌组织中Raf、MEK、ERK蛋白表达情况。结果:(1)与正常对照组比较,模型组大鼠BNP值显著升高(P<0.01),心衰模型成功建立。(2)与正常对照组相比,模型组大鼠心肌组织Raf水平显著升高(P<0.01),复心合剂高剂量组、卡托普利组大鼠心肌组织Raf水平显著降低(P<0.01),与卡托普利组相比,复心汤高剂量组大鼠心肌组织Raf无统计学意义(P>0.05)。(3)与正常对照组相比,模型组大鼠心肌组织MEK水平显著升高(P<0.01),复心合剂高剂量组、卡托普利组大鼠心肌组织MEK水平显著降低(P<0.01)。(4)与正常对照组相比,模型组大鼠心肌ERK蛋白表达明显升高(P<0.01),卡托普利组及复心合剂高剂量组ERK蛋白表达无显著差异性(P>0.05),与模型组相比,复心合剂高剂量组、卡托普利组大鼠心肌组织ERK水平显著降低(P<0.01)。结论:复心合剂对心衰大鼠信号通路Raf-MEK-ERK的蛋白激活具有一定的抑制作用,延缓心衰进程。

异槲皮苷对HepG2细胞中Raf/MEK/ERK信号通路的干预作用

目的研究异槲皮苷对Hep G2细胞中Raf/MEK/ERK信号通路的干预作用。方法采用异槲皮苷(0、40、80、160、320μmol·L^(-1))作用于Hep G2细胞,MTT法检测异槲皮苷对Hep G2细胞增殖的影响;倒置显微镜下观察24、48 h后,细胞形态及生长情况;流式细胞术检测异槲皮苷(0、40、80、160μmol·L^(-1))作用Hep G2细胞48 h后细胞周期情况;荧光定量PCR及Western blot检测异槲皮苷作用Hep G2细胞后Ras、Raf、MEK、ERK mRNA及相关蛋白的表达。结果MTT检测发现异槲皮苷对Hep G2细胞生长有明显抑制作用,且与异槲皮苷的浓度及作用时间呈正相关;不同浓度的异槲皮苷作用Hep G2细胞24、48 h后,倒置显微镜下观察发现随着浓度的增高及作用时间的延长,细胞生存数量逐渐减少,且细胞形态发生明显变化;流式细胞术检测发现随着异槲皮苷浓度的增高,细胞被阻滞在G1期的数量逐渐增加;荧光定量PCR及Western blot结果均表明,与空白组相比,异槲皮苷(80μmol·L^(-1))作用Hep G2细胞后Ras、Raf、MEK、ERK mRNA及其相关蛋白的表达均明显降低(P<0.05),差异有统计学意义。结论异槲皮苷有诱导Hep G2细胞凋亡的作用,其作用机制可能与对Raf/MEK/ERK信号通路中相关因子的干预有关。

Cyclosporin A通过MEK/ERK1/2信号通路调节滋养细胞titin表达

探讨MEK/ERK1/2信号通路在Cyclosporin A(CsA)诱导滋养细胞表达titin中的作用。应用RT-PCR、Western blot检测CsA诱导的滋养细胞titin的表达水平,Western blot检测CsA作用于滋养细胞后ERK1/2的活化程度,并观察MEK特异性抑制剂U0126对其mRNA转录的影响。发现CsA以时间和剂量依赖方式诱导titin表达,并刺激滋养细胞ERK1/2的活化,U0126以剂量依赖方式抑制CsA诱导的titin表达。结果表明CsA通过活化MEK/ERK1/2信号通路诱导滋养细胞titin 的表达,改变其生物学行为,从而有利于胚胎着床及早期发育。

妊娠期糖尿病脂肪细胞转染网膜素1对葡萄糖摄取率的影响及MEK/ERK通路蛋白的参与研究

目的分析妊娠期糖尿病脂肪细胞转染网膜素1对葡萄糖摄取率的影响及MEK/ERK通路蛋白的参与作用。方法构建网膜素1过表达载体转染传代脂肪细胞,分析不同转染浓度(0μg、1.0μg、2.0μg、4.0μg)脂肪细胞的葡萄糖摄取率。采用荧光定量PCR法、Western Blotting法和免疫细胞化学法分析MEK/ERK通路蛋白的表达变化。结果不同网膜素1转染浓度对脂肪细胞葡萄糖摄取率和MEK/ERK通路蛋白及IRS水平有明显影响,且随着网膜素1转染浓度的升高,葡萄糖摄取率逐渐升高(P<0.05),MEK、ERK1/2蛋白(P<0.05)、mRNA(P<0.05)水平逐步降低,而IRS-1蛋白水平明显升高(P<0.05)。结论妊娠期糖尿病脂肪细胞转染网膜素1后细胞的葡萄糖摄取率及IRS明显升高而MEK/ERK通路蛋白表达降低,表明网膜素1过表达和MEK/ERK通路蛋白被抑制与葡萄糖葡萄糖摄取和胰岛素抵抗密切相关。

绿原酸对心肌细胞炎症反应和MEK/ERK信号通路的影响

目的:探讨绿原酸对心肌细胞炎症反应和MEK/ERK信号通路的影响。方法:常规培养心肌细胞,利用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导细胞炎症模型,将细胞分为正常对照组、LPS诱导组、LPS+50μg/mL绿原酸组、LPS+100μg/mL绿原酸组、LPS+200μg/mL绿原酸组;采用CCK8试验分析绿原酸对心肌细胞相对存活率的影响,流式细胞术检测绿原酸对心肌细胞凋亡的影响,ELISA法分析绿原酸对心肌细胞炎症反应的影响,免疫印迹法探讨绿原酸对心肌细胞MEK/ERK信号通路活化的影响。结果:LPS诱导组心肌细胞凋亡率为(52.3±4.2)%,高于正常对照组的(4.6±0.7)%;LPS诱导组炎症因子白细胞介素6(IL-6)为(1702±287)pg/mL,高于正常对照组的(529±102)pg/mL;LPS诱导组肿瘤坏死因子α(TNF-α)为(198±24)pg/mL,高于正常对照组的(81±13)pg/mL;LPS诱导组较正常对照组MEK及p-ERK蛋白表达水平显著上调(P<0.05)。与LPS诱导组相比,绿原酸可以提高细胞的存活率、抑制其凋亡、降低炎症因子IL-6和TNF-α的释放、抑制MEK/p-ERK蛋白的表达,相对于LPS诱导组差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:绿原酸可降低LPS诱导的心肌细胞炎症反应,其机制可能与抑制MEK/ERK信号通路活化有关。