脂质体-c-erbB-2反义寡核苷酸对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用

目的 探讨c erbB 2反义寡脱氧核苷酸 (ASODN )对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用。方法 将 15只裸鼠建立人卵巢癌皮下移植瘤模型 ,然后随机分成 3组予以不同条件处理 :对照组 (腹腔注射转染液和脂质体 ) ,正义治疗组 (腹腔注射脂质体 c erbB 2 -SODN ) ,反义治疗组 (腹腔注射脂质体 c erbB 2 -ASODN )。治疗期间定期观测裸鼠体重和肿瘤体积 ,计算抑瘤率及肿瘤缩小率。利用RT -PCR技术比较治疗后各组肿瘤组织中c erbB 2基因水平。结果 反义治疗组与正义治疗组的抑瘤率分别为 71.2 %和 7.6% ,反义治疗组肿瘤缩小率为 2 2 .7% ,与正义治疗组相比较有显著性差异。各组裸鼠体重变化无明显差异。RT -PCR结果显示反义治疗组c erbB 2表达水平降低约 61.0 %。结论 脂质体 c erbB 2 -ASODN对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤有一定的治疗作用 ,可能成为日后卵巢癌基因治疗的重要途径。

Bcl-2反义寡核苷酸增强小细胞肺癌细胞化疗敏感性研究

目的研究Bcl-2反义寡核苷酸是否能增强小细胞肺癌细胞NCI-H69对化疗药物的敏感性。方法将NCI-H69细胞培养传代,细胞共分4组,反义寡核苷酸组、正义寡核苷酸组、无义寡核苷酸组和空白对照组,通过脂质体介导的方法将不同寡核苷酸导入细胞中,Western-Blot法检测Bcl-2蛋白的表达。不同浓度的顺铂与阿霉素作用于4组转染后的细胞,MTT法测定细胞存活分数。结果4组细胞中,与空白对照组相比较,反义寡核苷酸组的Bcl-2蛋白表达明显受到抑制,而正义寡核苷酸组和无义寡核苷酸组细胞的Bcl-2蛋白表达则与空白对照组差别不明显。细胞分别同顺铂与阿霉素作用后,反义寡核苷酸组细胞在各个浓度的存活分数均低于空白组,其差异在统计学上有显著性意义(P<0.01),而转染正义链和无义链组与空白组比较其差异在统计学上无显著性意义。结论Bcl-2反义寡核苷酸能有效封闭Bcl-2基因的表达,增强小细胞肺癌细胞对化疗药物的敏感性。

bcl-2反义寡核苷酸与VP16协同抑制小细胞肺癌细胞增殖的研究

目的研究bcl-2反义寡核苷酸与足叶乙甙(VP 16)联用对小细胞肺癌细胞NC I-H 69增殖的影响。方法通过脂质体将不同寡核苷酸导入NC I-H 69细胞中,分为反义寡核苷酸组、正义寡核苷酸组、无义寡核苷酸组和空白对照组4组,W estern B lot法检测细胞bcl-2蛋白的表达。不同浓度的VP 16作用于4组转染后的细胞,M TT法测定细胞存活分数。结果4组细胞中,与空白对照组相比较,反义寡核苷酸组的bcl-2蛋白表达明显受到抑制。bcl-2反义寡核苷酸转染细胞与VP 16作用后,反义寡核苷酸组细胞在各个浓度的存活分数均低于对照组,且有统计学意义(P<0.01)。结论bcl-2反义寡核苷酸与VP 16能协同抑制小细胞肺癌细胞的增殖。

PKC对小鼠受精卵发育的调控作用

为研究 TPA及 PKC的反义寡核苷酸对 1 -细胞期鼠受精卵发育的影响 ,采用免疫细胞化学法标记 PKC(α及 β亚型 ) ,并用激光扫描共聚焦显微镜测定卵内 PKC荧光强度 ;同时利用显微注射法注射 PKC的反义寡核苷酸 ,观察其对受精卵分裂的影响 . 1 0 0 μg/ L TPA对 1 -细胞期受精卵的发育具有完全抑制作用 .TPA处理 1 2 h后 ,对照组受精卵停留在 1 -细胞期 ,而未经 TPA处理的1 -细胞期卵可以分裂到 2 -细胞期 .共焦激光显示实验组与对照组相比 ,PKC(α、β亚型 )荧光强度均有下降 (P<0 .0 1 ) .显微注射 PKC antisenseα及 antisenseβ的受精卵 ,分别只有 1 4 .2 %和 3.33%的卵可以发育到 2 -细胞期 .与对照组 (注射 M2培养液 )差异显著 (P<0 .0 1 ) .结果表明 ,(1 ) TPA长期处理 1 -细胞期受精卵 ,抑制 1 -细胞期卵分裂到 2 -细胞期 ;(2 ) PKC的反义寡核苷酸 (α及β亚型 )可以抑制小鼠 1

变蛋中微量铅的催化示波极谱法测定

用催化示波极谱法测定变蛋中微量铅 ,提出在HCl-酒石酸 -KI -抗坏血酸体系中 ,用催化示波极谱法测定变蛋中微量铅。在此体系中 ,Pb(ⅠⅠ )于 -0 54V处产生一个非常灵敏的吸附催化波。铅含量在 0 0 2 5～ 3 μg·mL-1 范围内波高与浓度呈良好线型关系 ,相关系数r为 0 9976,检测限为0 0 2 5μg·mL-1 。样品经HNO3 -HClO4消化和分解 ,蒸至近干后 ,再用HCl溶解 ,在HCl-酒石酸 -KI体系中测定 ,回收率为 ( 98± 2 ) %。此方法具有灵敏、准确、快速等特点 ,适用于变蛋及其他食品。

bcl-2反义寡核苷酸对小细胞肺癌NCI—H69细胞凋亡的影响

目的探讨bcl-2反义寡核苷酸能否增加小细胞肺癌细胞NCI—H69的凋亡。方法将NCI—H69细胞培养传代，细胞共分4组，反义寡核苷酸组、正义寡核苷酸组、无义寡核苷酸组和空白对照组，通过脂质体将不同浓度的寡核苷酸导人细胞中，WesternBlot法检测bcl-2蛋白的表达，流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果与空白对照组比较，反义寡核苷酸组的bcl-2蛋白表达明显受到抑制，而正义寡核苷酸组和无义寡核苷酸组细胞的bcl-2蛋白表达则与空白对照组差异不明显。反义寡核苷酸组细胞在10、20、40umol／L 3个不同浓度时的凋亡率分别是（9．97±1．54）％、（15．28±1．73）％、（21．41±1．85）％，明显高于空白组和正义链、无义链组阴性对照组，且差异有统计学意义（F=7．19～15．48，q=5．21—7．98，P〈0．01），而转染正义链和无义链组与空白组比较则差异无统计学意义。结论bcl-2反义寡核苷酸能有效封闭bcl-2基因的表达，增加小细胞肺癌细胞的凋亡。