模拟微重力对猕猴肺组织JNK/c-Jun和c-Fos信号通路的影响

目的探讨模拟微重力对猕猴肺组织结构和JNK/c-Jun和c-Fos信号通路的影响。方法在特殊装置上采用猕猴头低位-10°模型模拟微重力,15只猕猴分为3组,每组5只:对照组(A组)、模拟微重力组(B组)、模拟微重力后恢复组(C组)。HE染色观察各组猕猴肺组织大体结构,Western blotting检测肺组织JNK、cJun、c-Fos及磷酸化表达水平。结果 HE显示,与A组相比,B组和C组猕猴肺组织可见肺泡间隔不同程度的增宽,部分肺泡融合,肺间质内可见炎细胞浸润。C组病理改变较B组稍减轻。Western blotting结果提示,与A组相比,B组和C组JNK、c-Fos和p-c-Fos及p-c-Jun表达增多。结论长期处于微重力状态可引起猕猴肺组织损伤,肺组织中JNK、c-Fos磷酸化和c-Jun磷酸化表达增加,微重力激活JNK/c-Jun和c-Fos信号通路调控其下游特定基因的表达可能是肺损害的机制之一。

锦灯笼对对乙酰氨基酚所致药物性肝损伤大鼠JNK/c-jun/c-fos信号通路的影响

目的:通过检测大鼠血清肝功能指标和肝组织磷酸化的c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、原癌基因(c-jun)、即早基因(c-fos)、高迁移率族蛋白1(HMGB1)蛋白的表达,观察锦灯笼对对乙酰氨基酚(APAP)所致药物性肝损伤(DILI)大鼠的干预作用及机制。方法:将50只wistar大鼠称重后随机分5组,正常组、模型组、阳性药(水飞蓟宾)对照组以及锦灯笼高、低剂量组。给予各用药组相应药液灌胃给药同时,正常组与模型组则灌饲蒸馏水,共计30 d。实验结束时,用生化分析仪检测血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)活性;用Western-Blot技术检测肝组织中p-JNK的蛋白表达情况;用免疫组化法观察c-jun、c-fos、HMGB1蛋白表达。结果:锦灯笼高、低2个剂量组皆能明显地降低模型大鼠的AST、ALT活性及DBIL、TBIL的含量(P<0.05,P<0.01),不同程度下调c-jun、c-fos、HMGB1、p-JNK蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论:锦灯笼各剂量组对DILI大鼠有明显的保护作用,其作用机制可能与抑制c-fos、c-jun、HMGB1及p-JNK蛋白的表达有关,对APAP所致肝损伤起到保护作用。

美托洛尔对急性心肌梗死大鼠心肌损伤及c-fos信号通路的影响

目的从c-fos信号通路探究美托洛尔减轻急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌损伤的作用机制。方法 SPF级SD雄性大鼠150只,其中128只给予结扎左冠状动脉前降支复制AMI动物模型,成功复制90只,死亡38只,将符合AMI模型的90只大鼠随机分为模型组、肝素组及美托洛尔组,每组各30只。另外22只大鼠大仅穿线但不结扎作为假手术组。术后24 h,美托洛尔组大鼠每天同一时间给予0.1%美托洛尔生理盐水10 mg/(kg·d)灌胃,肝素组给予肝素1 250 u/kg皮下注射,其他各组给予等体积生理盐水灌胃,1次/d,共用药4周。术后48 h和4周,分别超声检测大鼠心率(HR)、射血分数(EF)、短轴缩短率(FS)、左心室舒张末期内径(LVIDd)、左心室收缩末期内径(LVIDs)变化。术后4周,Masson法检测心肌梗死面积,TUNEL法检测心肌梗死边缘的凋亡细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测c-fos、ERK1、ERK2 m RNA表达,Western blot检测c-fos、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达。结果术后48 h和4周,与模型组比较,肝素组和美托洛尔组治疗能使大鼠心率下降(P <0.05)。术后4周,与模型组比较,肝素组和美托洛尔组大鼠心脏EF、FS值均升高(P <0.05),且大鼠心脏LVIDd、LVIDs值降低(P <0.05)。治疗后肝素组和美托洛尔组大鼠心肌梗死面积减小(P<0.05)。术后4周,与模型组比较,肝素组和美托洛尔组蓝色胶原减少,心肌纤维化水平降低。TUNEL结果显示,治疗后肝素组和美托洛尔组大鼠心肌梗死周边细胞的凋亡率降低(P<0.05)。qRT-PCR结果显示,治疗后肝素组和美托洛尔组大鼠心肌细胞c-fos、ERK1、ERK2的mRNA表达低于模型组(P<0.05)。Western blot结果显示,ERK1/2蛋白表达各组间比较差异无统计学意义(P>0.05),治疗后肝素组和美托洛尔组大鼠心肌细胞c-fos、p-ERK1/2蛋白表达低于模型组(P <0.05)。结论美托洛尔能明显减轻大鼠AMI后心肌损伤程度,其作用机制可能与p-ERK1/2-c-fos途径受到抑制有关。

芪藤消浊颗粒对慢性肾小球肾炎大鼠Syk/Ras/c-Fos信号通路的调控作用

目的:研究芪藤消浊颗粒对慢性肾小球肾炎大鼠Syk/Ras/c-Fos信号通路关键基因表达的调控作用,探讨其可能的机制。方法:采用尾静脉注射阿霉素复制慢性肾小球肾炎大鼠模型,芪藤消浊颗粒(21.6,10.8,5.4g/kg)组和黄葵胶囊1.0 g/kg给药30天后,HE染色观察慢性肾小球肾炎大鼠肾小球病变情况,测定24h尿蛋白含量,血清中尿素氮和肌酐含量,RT-q PCR检测Syk、Ras、MEK1/2、ERK1/2和c-Fos mRNA表达情况,免疫组化法和Western blot法检测p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2和c-Fos蛋白表达。结果:芪藤消浊颗粒(10.8,21.6g/kg)组可明显降低慢性肾小球肾炎大鼠24h尿蛋白,血清尿素氮和肌酐,肾脏组织中Syk、Ras、MEK1/2、ERK1/2、c-Fos mRNA和p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-Fos蛋白表达量。各治疗组肾脏病变程度较模型组有明显减轻。结论:芪藤消浊颗粒对慢性肾小球肾炎具有治疗作用,其机制可能通过抑制Syk/Ras/c-Fos通路活化,进而减轻肾小球组织炎性反应有关。

miR-324-5p通过抑制Syk/Ras/c-fos通路降低脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖

目的探讨miR-324-5p调控Syk/Ras/c-fos信号通路对大鼠肾小球系膜(HBZY-1)细胞增殖能力的影响。方法体外培养HBZY-1细胞;设计并合成miR-324-5p mimics,miR-324-5p mimics-NC片段;采用Lipo3000试剂盒瞬时转染miR-324-5p mimics,miR-324-5p mimics-NC片段至脂多糖(LPS)诱导的HBZY-1细胞内,RT-qPCR验证转染效率;将HBZY-1细胞分为对照组(生理盐水),LPS组(LPS 0.5μg/mL),LPS+mimics组(LPS 0.5μg/mL+miR-324-mimics),LPS+mimics-NC组(LPS 0.5μg/mL+miR-324-mimics-NC);MTT法检测各组HBZY-1细胞增殖活性;RT-qPCR法检测各组细胞miR-324-5p及Syk、Ras、MEK1/2、ERK1/2、c-fos mRNA的表达;Western blot和免疫荧光法检测各组细胞p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-fos蛋白的表达。结果MTT结果显示,LPS组细胞增殖水平较正常组显著升高,与LPS组及LPS+mimics-NC组相比,LPS+mimics组细胞增殖能力降低;RT-qPCR结果显示,LPS+mimics组中miR-324-5p表达明显高于LPS组及LPS+mimics-NC组,且LPS+mimics组中Syk、Ras、MEK1/2、ERK1/2、c-fos mRNA的表达显著低于LPS组及LPS+mimics-NC组,差异具有统计学意义(P<0.05);Western Blot结果显示,与LPS组及LPS+mimics-NC组相比LPS+mimics组中p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-fos蛋白表达显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05);免疫荧光结果显示,与LPS组及LPS+mimics-NC组相比,LPS+mimics组p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-fos蛋白标记细胞数目明显减少。结论miR-324-5p可通过抑制Syk/Ras/c-fos信号通路降低LPS诱导的慢性肾小球肾炎细胞的增殖活性,miR-324-5p有望成为慢性肾小球肾炎诊断和治疗的潜在靶标。

芪甲柔肝方及其拆方调控VEGF/SRF/c-FOS通路与改善肝纤维化大鼠肝窦毛细血管化的机制研究

基于血管内皮生长因子(VEGF)/血清应答因子(SRF)/原癌基因c-FOS(c-FOS)通路及肝窦毛细血管化揭示芪甲柔肝方及其拆方抗肝纤维化的机制。将大鼠随机分为空白组(6只)和造模组(28只),造模组大鼠采用皮下注射40%四氯化碳(CCl_4)橄榄油的方法建立肝纤维化模型。确定造模成功后,将造模组剩余大鼠分为模型组(7只)、芪甲柔肝全方组(6只)、拆方益气养血药组(6只)、拆方化瘀通络药组(6只),芪甲柔肝全方组、拆方益气养血药组、拆方化瘀通络药组分别采用中药灌胃治疗,空白组与模型组给予生理盐水灌胃。灌胃28 d后处死大鼠,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)判断肝功能,肝组织苏木素-伊红(HE)染色、马松(Masson)染色观察肝脏炎症及纤维化,检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(collagenⅠ)判断肝星状细胞激活,检测肝组织血管内皮生长因子A(VEGFA)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)、SRF、c-FOS、分化抗原簇31(CD31)、血管性血友病因子(vWF)的表达水平,扫描电镜观察肝窦内皮细胞窗孔形态以揭示各组药物抗肝纤维化的机制。结果显示,与模型组相比,芪甲柔肝方及其拆方益气养血药、化瘀通络药均能减轻肝组织病理损伤,降低肝纤维化大鼠ALT、AST和肝指数(P<0.01);各治疗药物均能降低肝组织α-SMA和collagenⅠ表达(P<0.01),降低肝纤维化大鼠肝组织CD31和vWF的表达(P<0.05),维持肝窦内皮细胞窗孔形态;各治疗药物均能降低VEGFA、SRF、c-FOS的表达(P<0.05),恢复VEGFR-2的表达(P<0.05)。其中,芪甲柔肝全方在改善大鼠肝损伤与血清肝功能,抑制肝窦毛细血管化,以及调控VEGF/SRF/c-FOS信号通路方面优于拆方的益气养血药及化瘀通络药(P<0.05)。综上,芪甲柔肝方及其拆方均能够改善肝纤维化大鼠肝功能,减轻病理损伤,抑制肝星状细胞激活,减轻肝纤维化及肝窦毛细血管化,其机制与调控VEGF/SRF/c-FOS信号通路有关。单用化瘀通络药不及联合益气养血药的芪甲柔肝全方,提示荣通并治在肝纤维化及肝窦毛细血管化的积极意义。