过氧化物模拟酶在生物检测中的应用进展

酶是自然界经过长期进化而产生的生物催化剂,天然酶作为大分子蛋白具有催化效率高、专一性强、作用条件严格的优点,被广泛应用于生物医学中。但同时它亦存在纯化难、易失活、不易储存和价格昂贵的问题。设计一种像酶那样具有高度催化功能和特异性的化合物,是科学界一直追求的目标。

JNK3信号介导亚低温治疗对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨JNK3信号通路在亚低温治疗脑缺血再灌注性损伤中的作用及其具体机制。方法:采用四动脉阻断法诱导大鼠全脑缺血,将SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注对照组、亚低温处理组、SP600125(JNK3抑制剂)处理组及溶剂组;采用亚甲基蓝染色检测大鼠缺血再灌注后海马CA1区神经元的损伤情况;采用免疫印迹法检测脑组织中JNK3及c-jun蛋白的磷酸化水平。结果:亚低温处理组、SP600125(JNK3抑制剂)处理组与缺血再灌注对照组相比海马CA1区神经元损伤明显减轻,蛋白JNK3、c-jun磷酸化水平显著降低(P<0.05)。结论:亚低温治疗通过抑制脑缺血再灌注损伤后JNK3的磷酸化激活参与了对海马CA1区神经元的保护性作用。

鬼针草总黄酮对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响

目的 探究鬼针草总黄酮(TFB)对人肝癌HepG2细胞胰岛素抵抗(IR)的影响。方法 取鬼针草,用80%乙醇回流提取,制得TFB。利用棕榈酸体外诱导HepG2细胞复制IR模型,考察低、中、高质量浓度(20、40、80 mg/L)TFB对细胞葡萄糖消耗量的影响;以二甲双胍为阳性对照,考察低、中、高质量浓度(20、40、80 mg/L)TFB对细胞中胰岛素受体底物1(IRS-1)、c-Jun氨基端激酶(JNK)和蛋白激酶C(PKC)表达的影响。采用分子对接技术探讨槲皮素、槲皮苷等8个TFB主要活性成分与IRS-1、JNK、PKC蛋白的相互作用。结果 TFB低、中、高质量浓度组细胞的葡萄糖消耗量均较模型组显著升高(P<0.05或P<0.01)。与正常组比较,模型组细胞中的IRS-1、JNK蛋白的表达量均显著降低,PKC蛋白的表达量显著升高(P<0.01);与模型组比较,TFB低、中、高质量浓度组和二甲双胍阳性对照组能上调IRS-1、JNK蛋白的表达并下调PKC蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。TFB中的海生菊苷与IRS-1蛋白的分子对接能量打分值为-7.9 kcal/mol(1 kcal=4.816 kJ),海生菊苷、芦丁与JNK蛋白的分子对接能量打分值均为-9.3kcal/mol,槲皮苷与PKC蛋白的分子对接能量打分值为-4.9 kcal/mol,成分与蛋白间的相互作用包括形成氢键、疏水键等。结论TFB对HepG2细胞IR有显著的改善作用,其机制可能与调节IRS、JNK、PKC蛋白的表达有关;海生菊苷、芦丁和槲皮苷可能是改善IR的潜在活性成分。

褪黑素对软脂酸诱导L02细胞胰岛素抵抗的防护作用及机制

目的探讨褪黑素(MT)对软脂酸(PA)诱导L02细胞胰岛素抵抗的防护作用及机制。方法培养L02细胞,分别设立对照组(BSA组)、PA组、PA+MT组、PA+维生素C(Vit C)组。各组药物浓度和孵育时间根据不同的实验需要来确定。用荧光比色法测定各组细胞胞内氧自由基(ROS)水平,Western印迹法检测胰岛素刺激后胞内胰岛素信号蛋白磷酸化水平,包括Y-p-胰岛素受体(IR)、Y-p-胰岛素受体底物(IRS)1/2以及应激敏感激酶p-JNK水平。结果用不同浓度的PA处理L02细胞24 h,细胞内ROS生成量呈现明显的浓度依赖关系,差异有统计学意义(P<0.05);用0.3 mmol/L的PA处理L02细胞不同时间,细胞内ROS生成量存在明显的时间依赖关系,在24 h达到最高,并在36 h后仍维持较高水平(P<0.05);与BSA组相比,PA组ROS含量明显升高(P<0.05)PA+MT组ROS含量无明显变化(P>0.05);PA+MT组ROS生成量明显低于PA组(P<0.05)。PA+Vit C组与PA组相比,ROS的生成量减少,但仍高于PA+MT组(P<0.05)。与BSA组相比,PA组Y-p-IR、Y-p-IRS1/2磷酸化水平减少,而p-JNK磷酸化水平升高;与PA组相比,PA+MT组Y-p-IR、Y-p-IRS1/2磷酸化水平显著升高,p-JNK磷酸化水平明显降低(P<0.05)。结论 PA导致细胞内ROS增加,MT能够清除PA产生的过量ROS。MT通过减少JNK的活化,改善因ROS引起的胰岛素信号传递损伤,对PA诱导的胰岛素抵抗具有防护作用。

滋膵饮对2型糖尿病模型大鼠的降糖作用及机制研究

目的:研究滋膵饮对2型糖尿病模型大鼠的降糖作用及其机制,为其临床应用提供理论基础。方法:将80只雄性大鼠高糖高脂饲料喂养4周后,单次腹腔注射链脲佐菌素35 mg/kg复制2型糖尿病大鼠模型,另取10只大鼠作为正常组。将糖尿病模型大鼠随机分为二甲双胍组(阳性对照,0.2 g/kg)、模型组(等体积蒸馏水)和滋膵饮高、中、低剂量组(14.0、7.0、3.5 g/kg),每组10只。连续灌胃给药2周后,采用全自动血糖仪测定各组大鼠空腹血糖值;采用酶联免疫吸附法测定各组大鼠血清胰岛素水平;采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测各组大鼠胰腺组织中c-Jun氨基末端激酶(JNK)、蛋白激酶B(Akt)和胰岛素受体底物1(IRS-1)mRNA表达水平;Western blot法检测各组大鼠胰腺组织中JNK、Akt、IRS-1蛋白的磷酸化程度。结果:与正常组比较,模型组大鼠空腹血糖、胰腺组织中JNK mRNA的表达水平和JNK、IRS-1蛋白的磷酸化程度均显著升高(P<0.05或P<0.01),血清胰岛素含量、Akt mRNA、IRS-1 mRNA的表达水平和Akt蛋白的磷酸化程度均显著降低(P<0.01);与模型组比较,二甲双胍组和滋膵饮高、中剂量组大鼠空腹血糖均显著降低(P<0.05),二甲双胍组和滋膵饮高剂量组大鼠血清胰岛素含量均显著升高(P<0.01),二甲双胍组和滋膵饮各剂量组大鼠胰腺组织中JNK mRNA的表达水平均显著降低(P<0.01)、Akt mRNA、IRS-1 mRNA的表达水平均显著升高(P<0.01);二甲双胍组和滋膵饮高剂量组大鼠的JNK、IRS-1蛋白的磷酸化程度均显著降低(P<0.01)、Akt蛋白的磷酸化程度均显著升高(P<0.01)。结论:滋膵饮具有明显的降糖作用,其作用机制与降低胰岛组织中JNK和IRS-1蛋白磷酸化程度和升高Akt蛋白磷酸化程度有关。

PCB118诱发大鼠胰岛素抵抗及对骨骼肌细胞功能的影响

目的探讨多氯联苯(PCB)118诱发大鼠胰岛素抵抗及对骨骼肌细胞功能的影响。方法将40只Wistar大鼠随机分为正常组,PCB118低、中、高剂量组〔10、100、1000μg/(kg·d)〕,每组10只。连续给药13 w后,测定每组大鼠空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹胰岛素水平(FINs),同时计算胰岛素敏感指数(ISI)及抵抗指数(IRI),检测骨骼肌组织中肌醇激酶(IRE)1α/c-Jun氨基末端激酶(JNK)/胰岛素受体底物(IRS-1)信号通路相关蛋白mRNA及蛋白的表达。结果与正常组比较,PCB118低、中、高剂量组FBG、HbA1c、FINs及IRI提高(P<0.05),ISI降低(P<0.05),IRE1α、JNK1/2、IRS-1 mRNA表达量上调(P<0.05),葡萄糖转运蛋白(GLUT)-4 mRNA表达量下调(P<0.05),p-IRE1α、p-JNK1/2、p-IRS-1表达量上调(P<0.05),GLUT-4蛋白表达量下调(P<0.05)。结论PCB118能够诱发大鼠胰岛素抵抗,与激活IRE1α/JNK/IRS-1信号通路有关。

E3泛素连接酶TRIM6通过合成非锚定K48多聚泛素修饰链促进干扰素受体-IKKε信号通路介导的抗病毒反应

美国西奈山医学院的Adolfo Garcia-Sastre教授以及他的研究团队通过实验发现,E3泛素连接酶TRIM6可以通过合成K48多聚泛素链并且对底物进行非锚定的泛素化修饰参与抗病毒反应。其相关研究成果发表在2014年5月29日的Immunity杂志上。

羟腈裂解酶在合成化学中应用的研究进展

作为少数可以用于不对称催化C−C键合成/裂解的几类酶之一,羟腈裂解酶因其可在相对温和的条件下实现氰醇或β-硝基醇的高对映体选择性合成而受到了合成化学家的青睐.有赖于分子生物学手段和蛋白质工程的快速发展,近年来羟腈裂解酶在不对称合成中的应用得到进一步扩展.本文就近年来耦合蛋白质工程改造后的羟腈裂解酶催化不对称羟氰化和硝基-羟醛缩合在生物活性分子的合成中的代表性应用进行总结,并展望了未来羟腈裂解酶的发展方向.

人细胞色素P450 CYP2C19与CYPOR、CYPb5共表达模型的构建及其抑制剂筛选

目的:获得人细胞色素P450 2C19(CYP2C19)蛋白重组酶,用特征性底物表征重组酶活性,并将该重组酶用于天然产物CYP2C19抑制剂的筛选。方法:构建含人CYP2C19基因的重组杆状病毒穿梭质粒,使用昆虫细胞-杆状病毒表达系统共表达人CYP2C19、细胞色素氧化还原酶(CYPOR)和细胞色素b5(CYPb5);用蛋白印迹分析(Western Blot)鉴定重组酶的表达;以奥美拉唑为底物进行代谢孵育,HPLC分析鉴定酶的活性;并使用该重组蛋白对70种天然产物进行抑制能力的筛选。结果:Western Blot结果显示重组人CYP2C19蛋白在Sf 9细胞中成功表达,该重组酶代谢经典底物奥美拉唑的酶动力学参数分别为:米氏常数Km为(4.99±0.22)μmol.L-1,最大反应速率Vmax为(0.2539±0.0024)μmol.min-1.mg-1蛋白,表观清除率CLint值为0.0509 L.min-1.mg-1蛋白。对70种天然产物的抑制筛选实验显示白藜芦醇、大黄素、异土木香内酯、莪术醇、薄荷脑、鬼臼毒素、补骨脂素、五味子甲素、五味子乙素、新狼毒素B等对人CYP2C19有比较明显的抑制能力。结论:利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统,可获得代谢活性良好的重组人CYP2C19蛋白,该重组酶可进一步用于其他底物的Ⅰ相代谢研究以及各种抑制剂的筛选。

信息之窗

green entia呵护毛孔的绿衣天使高丽雅娜化妆品公司最近推出一款专门护理毛孔的护肤系列。该系列护肤品具有收缩毛孔、(还可收缩由于皮肤老化而松弛的毛孔)调节皮脂、提供营养、增加皮肤弹力、均衡保湿的功能。这些功能主要归功于单宁酸、牛蒡提取物、栗子皮提取物、天然甜菜碱、卵磷脂小麦蛋白质等天然成分。使用后具有清凉、润泽、光滑的感觉。