温胃阳汤对功能性消化不良大鼠肥大细胞活化及SCF/c-Kit信号通路的影响

目的:基于肥大细胞活化及干细胞因子(stem cell factor,SCF)/受体酪氨酸激酶c-Kit信号通路探讨温胃阳汤治疗大鼠功能性消化不良的作用机制。方法:将60只SD大鼠随机分为空白组,模型组,雷尼替丁组及温胃阳汤低、中、高剂量组,每组10只。空白组大鼠不予造模,其他各组采用夹尾刺激加不规则喂养复合番泻叶法建立大鼠功能性消化不良模型,模型建立后,空白组及模型组灌胃给予生理盐水,温胃阳汤低、中、高剂量组和雷尼替丁组则分别用温胃阳汤(0.743 g/mL、1.485 g/mL和2.970 g/mL)及盐酸雷尼替丁胶囊(3 g/L)灌胃。治疗结束后,以碳墨推进法测定小肠推进率;采用甲苯胺蓝染色观察大鼠十二指肠组织肥大细胞并计数;ELISA测定大鼠十二指肠中肥大细胞类胰蛋白酶(mast cell tryptase,MCT)和组胺(histamine,HA)的含量;RT-qPCR检测十二指肠中SCF和c-Kit mRNA的表达;Western blot和免疫组化检测十二指肠中SCF和c-Kit蛋白的表达水平。结果:与模型组相比,温胃阳汤治疗显著提高大鼠的小肠推进率(P<0.05);ELISA结果显示,温胃阳汤治疗可减少大鼠十二指肠黏膜组织肥大细胞数量及MCT和HA含量(P<0.05);Western blot和免疫组化结果表明,温胃阳汤治疗可上调大鼠十二指肠组织c-Kit和SCF蛋白的表达水平(P<0.05),增加SCF和c-Kit阳性细胞数(P<0.05);RT-qPCR结果显示,WWYD治疗可上调大鼠十二指肠组织c-Kit和SCF mRNA的表达(P<0.01)。而且,小肠推进率分别与MCT和HA含量呈负相关,与SCF和c-Kit的表达呈正相关。结论:温胃阳汤能促进大鼠十二指肠动力,其作用机制可能与抑制大鼠十二指肠MCT和HA的生成,及激活SCF/c-Kit信号通路有关。

基于SCF/c-kit信号通路探讨理气通便方对气滞型慢传输型便秘大鼠肠道动力的影响

目的 基于SCF/c-kit信号通路探讨理气通便方对气滞型慢传输型便秘(STC)大鼠肠道动力的影响。方法 将36只Wistar雌性大鼠按随机数字表法分为对照组6只和造模组30只。造模组采用“洛哌丁胺混悬液+夹尾刺激”复制气滞型STC大鼠模型,连续刺激14 d。当大鼠表现出激惹、易怒、烦躁等情况,正常喂养饲料时出现大便干硬、排便数量减少等表现时,说明气滞型便秘模型造模成功。将造模成功的大鼠按照随机数字表法分为模型组、西药组、低剂量组、中剂量组和高剂量组各6只,低、中、高剂量组分别按5.15、10.3、20.6 g/(kg·d)给予理气通便方药液灌胃;西药组按0.18 mg/(kg·d)给予琥珀酸普芦卡必利片混悬液灌胃;对照组和模型组按10 mL/(kg·d)给予无菌水灌胃,每日1次,连续灌胃14 d。比较6组末次给药后6 h的粪便排出量、粪便含水量和小肠推进率;HE染色观察结肠组织病理变化;免疫组化检测结肠组织c-kit蛋白表达水平;Western blot检测结肠组织c-kit、SCF蛋白表达量。结果 HE染色显示:对照组大鼠结肠黏膜完整,杯状细胞和腺体排列整齐,未见炎症细胞聚集;模型组结肠黏膜出现肠腺排列欠整齐,黏膜下层间质血管扩张;各给药组结肠黏膜肠腺排列整齐,未观察到明显上皮损伤。与对照组比较,模型组粪便排出量、粪便含水量和小肠推进率均明显降低(P<0.05),结肠组织c-kit蛋白表达水平和c-kit、SCF蛋白表达量均明显降低(P<0.05)。与模型组比较,西药组、中剂量组、高剂量组粪便排出量、粪便含水率和小肠推进率均明显提高(P<0.05),低剂量组粪便排出量和粪便含水率均明显提高(P<0.05);给药组结肠组织c-kit蛋白表达水平均明显提高(P<0.05);低、中、高剂量组结肠组织c-kit蛋白表达量均明显提高(P<0.05),高剂量组SCF蛋白表达量明显提高(P<0.05)。结论 理气通便方可提高气滞型STC模型大鼠结肠组织中ICC的表达及调控SCF/c-kit信号通路,恢复对胃肠道节律的正常调控来改善便秘的症状。

基于SCF/C-kit通路探讨三焦针法对腹泻型肠易激综合征大鼠的影响

目的 观察三焦针法对腹泻型肠易激综合征(irritable bowel syndrome with diarrhea, IBS-D)大鼠胃肠动力异常及结肠组织干细胞因子(stem cell factor, SCF)、酪氨酸激酶受体(tyrosine kinase receptor, C-kit) mRNA和蛋白表达的影响,探讨三焦针法治疗IBS-D的作用机制。方法 wistar雄性大鼠随机分为空白组、模型组、西药组和三焦组,每组6只。除空白组外,其余各组采用“冰醋酸灌肠+束缚应激”建立IBS-D大鼠模型。西药组予匹维溴胺灌胃(15 mg/kg),三焦组针刺膻中、中脘、气海、血海(双侧)及足三里(双侧),诸穴行捻转补法30秒,1次/d,均治疗14天。观察大鼠一般状态;测定体质量、旷场实验(大鼠横向运动和纵向运动)、稀便率、腹壁撤退反射(abdominal retraction reflex, AWR)3分阈值时注水量;RT-PCR法、Western blot法检测结肠组织SCF、C-kit mRNA及蛋白表达。结果 与空白组相比,IBS-D模型大鼠一般状态较差,体质量显著降低(P<0.01),旷场实验检测横向运动距离与纵向运动次数显著降低(P<0.01),稀便率显著增高(P<0.01),AWR3分时注水量显著降低(P<0.01),结肠组织中SCF、C-kit mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,西药组、三焦组大鼠体质量显著升高(P<0.01,P<0.05),横向运动距离与纵向运动次数均显著升高(P<0.05,P<0.01),稀便率显著下调(P<0.01),AWR3分时注水量显著提升(P<0.01),三焦组大鼠结肠组织中SCF、C-kit mRNA及蛋白水平表达均显著降低(P<0.01),而西药组SCF、C-kit mRNA及蛋白表达无统计学意义(P>0.05)。结论 三焦针法可改善IBS-D大鼠症状,可能是与调节结肠组织中SCF、C-kit mRNA及蛋白表达水平有关。

便塞通合剂对慢传输型便秘大鼠结肠SCF/c-Kit信号通路的影响

目的:探讨便塞通合剂(BST)对慢传输型便秘(STC)大鼠结肠干细胞因子(SCF)/c-Kit信号通路的影响。方法:将40只健康SD雄性大鼠分为正常组(NC组,n=10)和造模组(n=30);运用洛哌丁胺复制STC大鼠模型,造模成功后,将造模组大鼠随机分为模型组(MC组)、莫沙比利组(PC组)、便塞通合剂组(BST组),每组各10只。药物干预14 d后,比较各组大鼠一般情况、24 h粪便颗粒数、粪便含水量及肠道炭墨推进率;免疫组化和RT-qPCR检测SCF、c-Kit的表达。结果:与模型组比,BST组大鼠24 h粪便颗粒数、粪便含水量、肠道炭墨推进率均增高(P<0.05);与空白组比,模型组大鼠结肠组织c-Kit、SCF蛋白及mRNA表达水平均降低(P<0.05);与模型组比,BST组大鼠结肠组织c-Kit、SCF蛋白及mRNA表达水平均增高(P<0.05)。结论:BST可有效治疗大鼠慢传输便秘,机制可能与上调肠道SCF及c-Kit表达,加快肠道蠕动有关。

色象中药血清对SCF、c-Kit表达及黑素瘤细胞调控的研究

【目的】探讨色象中药对黑素的体外调控机制。【方法】筛选黑药(首乌、熟地、乌梅、女贞子、黒芝麻、丹参、鸡血藤)和白药(白芷、白附子、白茯苓、白蔹、白芨、白僵蚕、白术),制备各中药含药血清,体外处理人A375黑素瘤细胞16~48 h。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定黑素瘤细胞增殖情况;采用NaOH溶解法测定黑素瘤细胞黑素含量;采用免疫荧光染色法测定黑素瘤细胞干细胞因子(SCF)、c-Kit蛋白表达。【结果】(1)分别含首乌、乌梅、黑芝麻、白茯苓、白术、女贞子、白芷、白附子、白芨、白僵蚕的血清组黑素瘤细胞增殖能力较对照组升高(P<0.05或P<0.01);分别含丹参、白蔹的血清组黑素瘤细胞增殖能力较对照组降低(P<0.01)。(2)分别含熟地、黑芝麻、丹参、鸡血藤、白蔹、白术、首乌、女贞子、白芷、白附子、白芨、白僵蚕的血清组黑素瘤细胞中黑素含量较对照组增加(P<0.05或P<0.01)。(3)与对照组比较,含乌梅血清组SCF、c-Kit蛋白表达量均增加(P<0.01),分别含女贞子、白芷、白茯苓、白蔹的血清组SCF、c-Kit蛋白表达量均减少(P<0.05或P<0.01),分别含首乌、黑芝麻、丹参、白附子的血清组SCF蛋白表达量增加、c-Kit蛋白表达量减少(P<0.05或P<0.01),含白僵蚕血清组SCF蛋白表达量减少、c-Kit蛋白表达量增加(P<0.05或P<0.01),分别含熟地、鸡血藤、白术的血清组SCF蛋白表达量增加(P<0.05或P<0.01)。c-Kit蛋白表达量变化不明显(P>0.05),含白芨血清组SCF蛋白表达量变化不明显(P>0.05)。c-Kit蛋白表达量减少(P<0.01)。【结论】白药与黑药均可通过调控SCF、c-Kit表达,对黑素瘤细胞黑素代谢有双向调节作用。

中医疗法靶向干预SCF/c-kit信号通路治疗功能性消化不良机制研究进展

功能性消化不良(FD)的病理机制尚未阐明,中医治疗FD优势明显,临床疗效确切,其中以中药复方、单味药及其成分和针灸等为代表的中医疗法在FD的临床治疗中具有重要地位。目前,针对FD的研究中干细胞因子(SCF)/c-kit信号转导的重要性日益凸显,并取得一定进展。中医疗法干预SCF/c-kit系统治疗FD的机制可能与其调节胃肠卡哈尔间质细胞、神经细胞和肥大细胞功能异常引起的胃肠动力障碍、十二指肠低度炎症和内脏敏感性增高有关。本文对中医疗法调控SCF/c-kit通路治疗FD进行综述,以期为临床治疗提供依据。

增液承气汤加减通过SCF/c-kit信号通路对慢性传输型便秘的作用机制研究

目的:探讨增液承气汤加减对慢性传输型便秘治疗的作用及其作用机制。方法:健康SD大鼠60只,应用复方地芬诺酯片灌胃构建慢性传输型便秘模型大鼠,造模成功后随机分成模型组、增液承气汤加减高、中、低剂量组(剂量分别为38.88、19.44、9.72 mg/kg)、阳性药组(12.5%的伊托必利混悬液,54 mg/kg),每组10只。另取未经造模的10只SD大鼠作为正常组。正常组和模型组大鼠给予等量的超纯水,各组大鼠连续灌胃7 d。给药期间每日定期监测大鼠体质量变化、活动状态、摄食量、饮水量;给药结束后测定大鼠排便情况、肠道传输功能;ELISA法检测血清中5-HT、VIP、SP水平;Western Blotting法检测大鼠结肠组织SCF、c-kit的表达水平。结果:与模型组比较,增液承气汤加减高、中、低剂量组和阳性药组大鼠在给药期间体质量增长明显(P<0.05),摄食量增加(P<0.05),饮水量增加(P<0.05);大鼠首粒黑便排出时间明显缩短(P<0.05),血清中5-HT、VIP、SP水平明显降低(P<0.05);12 h大便数量、粪便含水量、肠管总长度、碳末推进长度、碳末推进率均明显升高(P<0.05);SCF、c-kit蛋白相对表达水平明显升高(P<0.05)。结论:增液承气汤加减可剂量依赖性地改善大鼠慢性传输型便秘,其机制可能与SCF/c-kit信号通路有关。

SCF/c-kit信号通路对乳腺癌侵袭转移调控的作用及机制研究

目的:探讨SCF/c-kit信号通路对乳腺癌侵袭转移调控的作用及机制研究。方法:采用人乳腺癌细胞株MCF-7构建体外模型。将细胞分为空白对照组、SCF过表达组和SCF抑制组。采用MTT法检测细胞24h、48h、72h的增殖率,采用Transwell实验检测细胞24h、48h、72h的侵袭情况。结果:SCF过表达组在24h、48h、72h的细胞增殖率均显著大于SCF抑制组和空白对照组(P<0.05),且SCF抑制组细胞增殖率显著低于空白对照组(P<0.05);SCF过表达组在24h、48h、72h的细胞侵袭数均显著大于SCF抑制组和空白对照组(P<0.05),且SCF抑制组细胞侵袭数显著低于空白对照组(P<0.05)。结论:SCF/c-kit信号通路的激活可增强乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力,靶向抑制SCF/c-kit信号通路的表达可有效逆转对乳腺癌细胞增殖和侵袭的促进作用。

电针天枢穴对慢传输型便秘大鼠结肠c-kit、SCF基因表达的调节

目的从基因水平探讨电针天枢穴治疗慢传输型便秘(STC)的作用机理,为临床治疗提供实验依据。方法以饲喂复方苯乙哌啶饲料建立慢传输型便秘大鼠模型。将造模成功的实验大鼠随机分为电针组、模型组,每组各6只。予电针组电针双侧天枢穴,疗程14 d。治疗结束后采用RT-PCR法分别检测各组大鼠结肠c-kit和SCF的mRNA表达。结果模型组结肠c-kit和SCF的基因表达率分别是正常大鼠的(0.37±0.03)倍和(0.24±0.09)倍,电针组结肠c-kit和SCF的基因表达率分别是正常大鼠的(0.48±0.06)倍和(0.38±0.07)倍;与模型组相比,电针组大鼠结肠c-kit和SCF的基因表达率都有所上升,有显著性差异(P<0.05)。结论 STC模型大鼠的结肠c-kit和SCF基因表达下调,c-kit/SCF系统受损。电针天枢穴对结肠c-kit和SCF的基因表达有上调作用,可能是针灸治疗慢传输便秘的机制之一。

监测外周血SCF对预测c-kit阳性上皮性卵巢癌化疗耐药的临床价值

目的：：监测卵巢癌患者外周血中游离干细胞因子（ SCF）的浓度变化和c-kit蛋白在卵巢癌组织中的表达,探讨外周血SCF值对早期预测c-kit （＋）上皮性卵巢癌继发性化疗耐药的临床价值。方法：利用量子点双染免疫荧光（ QDs）检测106例卵巢癌组织中c-kit和SCF蛋白表达,ELISA法检测46例上述卵巢癌患者化疗期间冰冻保存的外周血SCF值,分析铂类为主的化疗药物敏感型和耐药型卵巢癌患者外周血SCF值与组织c-kit表达的差异。结果：继发性化疗耐药的上皮性卵巢癌组织中,c-kit（＋）表达率远高于化疗敏感组（29.27％ vs 10.8％,P＜0.05）,c-kit（＋）表达率随着FIGO分期的进展而升高（Ⅰ~Ⅱ期8.7％,Ⅲ~Ⅳ期25％,P＜0.05）。继发性化疗耐药组的外周血SCF值随铂类为主的化疗药物治疗而有升高的趋势,化疗敏感组的SCF值随之有下降的趋势；继发性化疗耐药组的外周血SCF均值高于化疗敏感组（ P＜0.05）。卵巢癌c-kit （＋）的外周血SCF值均值高于c-kit（-）组（P=0.018）,外周血SCF值在卵巢癌c-kit（＋）组随铂类为主的化疗耐药而升高。结论：卵巢上皮癌组织中c-kit蛋白阳性表达可能导致肿瘤对铂类化疗药物耐药；c-kit蛋白在肿瘤间质细胞内的阳性表达,预示卵巢上皮性癌化疗耐药微环境的形成和极差的临床结局。卵巢癌化疗期间,监测外周血SCF值升高可能是早期预测c-kit（＋）卵巢癌继发性化疗耐药的标记物之一。

原发性肝癌C-kit和SCF基因的表达及意义

探讨C -kit、SCF基因编码的蛋白在肝癌(HCC)组织中的表达及其临床病理意义。采用免疫组化SP法检测92例肝癌中C -kit、SCF蛋白表达,同时取对应的癌旁肝组织及30例良性肝病组织作对照。结果显示,HCC中有较强的C -kit和SCF蛋白表达,癌旁组织呈弱表达,良性肝病组织则呈阴性表达。C -kit、SCF阳性率肝癌组织与癌旁组织、良性肝病组织比较差异有非常显著意义(P均<0 . 0 1)。C -kit、SCF蛋白表达与AFP异常、肝癌分级、门脉癌栓有关。C -kit、SCF蛋白过表达可能在原发性肝癌的发生、发展中发挥作用。

祛斑汤对HaCat细胞、黑素细胞SCF/C-kit信号途径的调控研究

目的:研究祛斑汤对Ha Cat细胞、黑素细胞的抑制作用及对SCF/C-kit蛋白表达水平的影响,探讨SCF/C-kit信号通路与黄褐斑发病机制的相关性。方法:MTT法观察0、5、15、25、50、100 mg/m L浓度祛斑汤对Ha Cat细胞、黑素细胞的抑制情况,选取最佳抑制浓度;根据最佳抑制浓度,将Hacat细胞分为1640培养基组、0.03 J/cm2UVB照射组、15 mg/m L祛斑汤组、0.03 J/cm2UVB照射+15 mg/m L祛斑汤组,黑素细胞分为Mel M-2培养基组、0.03 J/cm2UVB照射组、25 mg/m L祛斑汤组、0.03 J/cm2UVB照射+25 mg/m L祛斑汤组;Western blot法检测各组Hacat细胞SCF蛋白表达水平,各组黑素细胞的C-kit受体蛋白表达水平。结果:祛斑汤呈浓度依赖性抑制Hacat细胞/黑素细胞增殖,15 mg/m L时对Hacat细胞的抑制效应达到峰值(P<0.01),25 mg/m L时对黑素细胞的抑制效应达到峰值(P<0.01);祛斑汤抑制Hacat细胞SCF蛋白的表达和黑素细胞C-kit受体蛋白的表达,并下调UVB对Ha Cat细胞、黑素细胞SCF、C-kit蛋白表达的促进作用。结论:祛斑汤能有效抑制Hacat细胞、黑素细胞的增殖,可能与抑制SCF/C-kit信号途径的SCF、C-kit蛋白表达有关。

丹白涂膜剂对黄褐斑大鼠模型抗氧化作用及SCF/C-kit蛋白表达的影响

[目的]观察丹白涂膜剂对肌肉注射黄体酮及紫外(UV)照射导致黄褐斑大鼠模型的皮肤抗氧化作用及对SCF/C-kit蛋白表达的影响。[方法]将大鼠随机分成对照组、模型组、氢醌组、丹白涂膜剂组共4组。用肌肉注射黄体酮及辅助UV照射法建立黄褐斑大鼠模型。测定各组皮肤组织中谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、酪氨酸酶(TYR)、总抗氧化能力(T-AOC),以及丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)及大鼠皮肤病理学检查。用CCK-8试剂盒观察0、5、10、20、40、80 mg/mL浓度丹白提取物对Ha Cat细胞、黑素细胞的抑制情况,选取最佳抑制浓度,将HaCat细胞分为1640培养基组、30 m J/cm^2 UVB照射组、20 mg/mL丹白提取物组、30 mJ/cm^2 UVB照射+20 mg/mL丹白提取物组,黑素细胞分为MeIM-2培养基组、30 mJ/cm^2 UVB照射组、40 mg/mL丹白提取物组、30 mJ/cm^2 UVB照射+40 mg/mL丹白提取物组;Western blot法检测各组Ha Cat细胞SCF蛋白表达水平,各组黑素细胞的C-kit受体蛋白表达水平。[结果]丹白涂膜剂能够显著增加黄褐斑模型大鼠皮肤中GSH-Px、SOD活性、T-AOC能力,降低MDA,抑制TYR增加;丹白提取物对HaCat细胞、黑素细胞的抑制情况呈剂量依赖性最大抑制效应分别为20 mg/mL(P<0.01)和40 mg/mL(P<0.01);丹白提取物能够下调UVB对HaCat细胞SCF蛋白和黑素细胞C-kit受体的促表达作用。[结论]丹白涂膜剂对黄褐斑大鼠模型皮肤具有抗氧化作用,能够抑制与黄褐斑相关的蛋白SCF/C-kit蛋白表达。

SCF/c-kit过度激活在肠易激综合征内脏敏化中的作用

目的研究SCF/c-kit通路过度激活在肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)内脏敏化中的作用。方法用旋毛虫感染大鼠致肠易激综合征模型30只,随机分为3组:IBS组、IBS结肠扩张组和IBS给予甲磺酸伊马替尼(imatinib mesy-late,STI-571)干预加结肠扩张组。另外选择20只正常大鼠,随机分为正常组和正常结肠扩张组。采用免疫荧光组织化学和电生理学的方法观察各组大鼠肠道ICC活化及其腹直肌肌电和骶髓后连合核(dorsal commissural nucleus,DCN)放电频率的变化。结果 IBS结肠扩张组的肠道Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)活化程度、腹直肌肌电变化及DCN放电频率比正常组、正常结肠扩张组、IBS组和IBS结肠扩张并给予STI-571组均显著增强。结论 SCF/c-kit的过度激活导致的ICC发生变化可能是IBS的内脏敏化发生的最为重要的基础。

益气健脾通便方对慢传型便秘大鼠结肠组织ICC及SCF/c-kit信号通路的影响

目的:通过观察益气健脾通便方对慢传输型便秘模型大鼠结肠组织ICC表达的影响及对SCF/c-kit信号通路的修复作用,从理论上揭示益气健脾通便方治疗慢传输型便秘的可能作用机制。方法:采用"复方地芬诺酯灌胃法"复制慢传输型便秘大鼠动物模型,分别运用益气健脾通便方低、中、高剂量干预,并与西药聚乙二醇4000散对比。观察造模及治疗过程中各组大鼠粪便粒数的变化;采用免疫组化法检测大鼠结肠组织ICC的表达量及Western-Blot、RT-PCR法检测大鼠结肠组织c-kit、SCF蛋白的表达及c-kit、SCF mRNA的表达水平。结果:与模型组比较,聚乙二醇组、益气健脾通便方低、中、高剂量组均能明显提高慢传输型便秘大鼠24 h粪便粒数(P<0.05);与模型组比较,聚乙二醇组、益气健脾通便方低、中、高剂量组大鼠结肠组织ICC、c-kit、SCF蛋白及c-kit、SCF mRNA表达水平均显著升高(P<0.05);与聚乙二醇组比较,益气健脾通便方中剂量组大鼠结肠组织ICC及c-kit、SCF蛋白表达均有所升高,但差异无统计学意义(P>0.05);益气健脾通便方中剂量组大鼠结肠组织c-kit、SCF mRNA表达水平较聚乙二醇组明显升高(P<0.05);益气健脾通便方高剂量组大鼠结肠组织c-kit、SCF mRNA表达水平较聚乙二醇组有所升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:益气健脾通便方治疗慢传输型便秘疗效显著,其作用机制可能与其提高结肠组织ICC的表达量及修复SCF/c-kit信号通路有关,从而改善便秘症状,以中、高剂量组疗效最为显著。

槐黄丸对慢传输型便秘大鼠结肠神经递质及SCF/c-kit通路的影响

目的 探讨槐黄丸对慢传输型便秘(STC)大鼠的作用及其对结肠组织神经递质和干细胞因子/酪氨酸激酶受体(stem cell factor/kit proto-oncogene,SCF/c-kit)通路的影响。方法 将60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、槐黄丸低剂量组(30 mg·kg^(-1))、槐黄丸中剂量组(75 mg·kg^(-1))、槐黄丸高剂量组(150 mg·kg^(-1))、莫沙必利组(2 mg·kg^(-1)),每组10只。除正常组外,其他组别均对大鼠进行大黄灌胃处理模拟STC造模,并以相应药物浓度给药。给药2周后,测量24 h首次排便时间、6 h排便粒数及粪便含水量、干重和肠道推进率。采用酶联免疫反应法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测大鼠结肠P物质(Substance P,SP)、乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)、一氧化氮(Nitric Oxide,NO)、血管活性肽(vasoactive intestinal polypeptide,VIP)的含量。RT-PCR法检测大鼠结肠c-kit和SCF的mRNA水平。Western blot检测大鼠结肠c-kit和SCF的蛋白水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠首次排便时间明显延长,排便粒数及干重、粪便含水量明显减少,肠道推进率降低,SP、Ach含量降低,VIP、NO含量增高,SCF和c-kit的表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,槐黄丸低、中、高剂量组能缩短首次排便时间,6 h排便粒数及干重、粪便含水量明显增高,肠道推进率增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与槐黄丸低、中剂量组相比,槐黄丸高剂量组缓解STC的效果最佳,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 槐黄丸对慢传输型便秘大鼠有明显的改善作用,其机制可能与调控结肠神经递质,提高SCF/c-kit信号通路有关。

基于干细胞因子(SCF)/c-kit信号通路探讨和胃理气方治疗功能性消化不良胃肠运动功能障碍的作用机制

【目的】观察和胃理气方对功能性消化不良肝郁模型大鼠胃肠动力及干细胞因子(SCF)/c-kit信号通路的影响,从分子水平探讨其作用机制。【方法】选取敞箱实验和糖水偏好实验评分相似的40只SPF级健康Wistar大鼠,随机分为正常组、模型组、中药组和西药组,每组10只。除正常组外,其他组别采用夹尾刺激+不规则喂养复合因素法建立功能性消化不良肝郁动物模型。成功造模后,中药组和西药组分别用和胃理气方和吗丁啉进行干预治疗。通过敞箱、糖水偏好实验评价大鼠抑郁状态;采用胃排空、小肠推进实验评价胃肠运动情况;分别用免疫组织化学、蛋白免疫印迹法检测大鼠胃窦、小肠组织中c-kit、SCF的蛋白表达水平;采用实时定量聚合酶联反应(RT-PCR)法检测大鼠胃窦、小肠黏膜组织中c-kit、SCF的mRNA表达水平。【结果】与正常组比较,模型组大鼠糖水消耗率下降,敞箱实验水平及垂直运动得分下降,胃排空及小肠推进减慢,胃窦、小肠组织中c-kit、SCF阳性表达细胞光密度值降低,c-kit、SCF的蛋白、mRNA表达水平均下降(均P<0.05)。与模型组比较,中药组和西药组糖水消耗率提高,敞箱实验水平及垂直运动得分增加,胃排空及小肠推进加快,胃窦、小肠组织中c-kit、SCF阳性细胞光密度值升高,c-kit、SCF的蛋白、mRNA表达水平均升高(均P<0.05),且中药组和西药组比较,上述指标均无统计学差异(P>0.05)。【结论】肝郁可致胃肠动力障碍,和胃理气方可以改善功能性消化不良肝郁大鼠抑郁状态,促进胃肠动力,其分子作用机制与上调SCF/c-kit信号通路相关蛋白表达有关。

SCF/c-Kit信号促进膀胱癌T24细胞侵袭作用

目的探讨SCF/c-Kit信号对膀胱癌T24细胞侵袭性的影响。方法采用Western blot检测T24细胞c-Kit表达及经SCF刺激后PI3K途径激活情况;Transwell侵袭实验(直接与间接计数法)观察T24细胞经过SCF(1 ng/ml)刺激前后及使用Wortmannin(特异性PI3K阻断剂)预处理后侵袭性的变化。结果 T24细胞存在c-Kit蛋白的表达并且经SCF(1 ng/ml)作用24 h后,出现明显的磷酸化Akt;与对照组相比,SCF(1 ng/ml)刺激组穿过聚碳酸酯膜的T24细胞数明显增多(P<0.01),而Wortmannin预刺激阻断了SCF的这种效应。结论 SCF/c-Kit信号促进了T24细胞的侵袭性,这一效应是由PI3K途径介导的。

养阴和胃方对糖尿病胃轻瘫大鼠SCF/c-kit系统的影响

目的:观察养阴和胃方对糖尿病胃轻瘫大鼠的疗效及其对SCF/c-kit系统的影响。方法:将40只SD大鼠随机均分为正常对照组,模型对照组,养阴和胃方低、高剂量组,西药组,每组8只。采用腹腔注射注射用链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病胃轻瘫大鼠模型,养阴和胃方低、高剂量组和西药组分别用低、高剂量养阴和胃方和吗丁啉混悬液灌胃。酚红灌胃实验测定胃排空率,Western Blot检测胃窦c-kit蛋白和清干细胞因子(stem cell factor,SCF)蛋白的表达,ELISA测定血清SCF含量。结果:与模型对照组相比,各给药组大鼠的胃排空率、c-kit蛋白、SCF蛋白和血清SCF含量均明显增高,差异有统计学意义(P<0.05),且随着中药浓度的增高,胃排空率、c-kit蛋白、SCF蛋白和血清SCF含量增高更加明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:中药养阴和胃方可上调SCF/c-kit系统的表达,从而逆转DGP胃排空障碍。

c-kit/SCF、VEGF和Oct4在精原细胞瘤中的表达及其意义

c-kit/SCF、血管内皮生长因子、Oct4是新近研究精原细胞瘤的诊断过程中几个热点基因,c-kit是一个癌基因,发生异常极易导致正常睾丸发生恶变向精原细胞瘤发展。Oct4是新型的精原细胞瘤的特异性基因,在精原细胞瘤中的表达率接近100%。血管内皮生长因子是广谱癌基因,在大多数肿瘤中都有表达,且与肿瘤的预后和转移密切相关。这3个基因非常具有代表性,就这些基因与精原细胞瘤的关系及它们在精原细胞瘤中的诊断作用进行综述。