C-kit原癌基因在白血病细胞上的表达分析

目的 研究C kit(CD117)原癌基因在白血病细胞上的表达规律和意义。方法 采用CD4 5 SSC双参数 (对数 )散点图设门法进行三色流式细胞术分析。结果 急性髓细胞白血病 (AML)患者CD117表达率为 5 9 6 % ;慢性髓细胞白血病 (CML)CD117表达率为 16 7% ,且都为急变期 ;急性淋巴细胞性白血病 (ALL)极少表达 ,慢性淋巴细胞性白血病 (CLL)不表达 ;干细胞性白血病 (AUL)、双表型白血病 (BAL)高表达。结论 CD117有助于鉴别诊断髓系白血病 。

c-kit原癌基因及其配体干细胞因子的造血调控功能

c-kit原癌基因及干细胞因子(SCF)是一对受体及配体,相当于小鼠W/W^v和Sl/Sl^d的缺陷,二者对造血功能十分重要,c-kit受体表达于造血干/祖细胞,因此SCF能调节骨髓细胞,淋巴细胞及肥大细胞的生成,且与造血细胞粘附于骨髓基质有关,SCF且能动员干/祖细胞。c-kit受体及SCF与一些血液病的关系甚为密切,二者有临床应用前景,可能有助于基因治疗。

胃肠道间质瘤中C-kit原癌基因突变体的构建及功能研究

目的:构建含突变C-kit基因cDNA的真核表达质粒并行进一步的功能分析。方法:用RTPCR方法从人胎脑组织克隆野生型C-kit基因蛋白编码区cDNA。根据胃肠道间质瘤中检测出的Ckit基因突变序列,体外突变野生型CkitcDNA得到突变型CkitcDNA,与pcDNA3重组成真核表达质粒,并用脂质体法稳定转染人胚胎肾细胞(humanembryonickidneycell,HEK)293细胞系,G418加压筛选出阳性克隆;用Western印迹法检测转染细胞KIT蛋白表达,绘制细胞生长曲线,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测转染HEK细胞后细胞周期改变,并观察稳定转染突变型重组质粒人胚肾细胞在裸鼠内的成瘤性。分别设转染pcDNA3空白质粒和野生型的CkitcDNA真核表达质粒的HEK细胞做为对照。结果:构建了突变型C-kitcDNA与pcDNA3的真核表达质粒;功能检测分析表明:细胞生长曲线显示与对照组相比,实验组的生长速度明显增快;MTT比色显示,与对照组相比实验组细胞增殖活性显著增强;细胞周期检测结果显示,处于增殖期细胞(S+G2-M)比例显著高于对照组;体内结果显示转染突变型C-kit基因的HEK细胞在裸鼠体内成瘤。结论:C-kit原癌基因突变体可促使人类细胞生长加快,增殖活性明显增强,并可以使更多的细胞由静止期进入增殖期,并可使人胚胎肾细胞发生恶性转化,提示C-kit基因突变有可?

乳腺肿瘤组织C-kit原癌基因产物表达的研究

为探讨C kit原癌基因产物的表达与乳腺肿瘤之间的关系 ,用免疫组化技术对 5 6例乳腺癌组织 ,5 8例良性乳腺肿瘤组织及 2 0例正常乳腺组织的C kit原癌基因产物进行检测。结果 :正常乳腺导管上皮细胞和腺泡细胞膜和胞液C kit原癌基因产物高度表达 ,正常乳腺组织C kit原癌基因产物表达的免疫反应积分为 6 2 1± 2 10 ,在良性乳腺肿瘤组织中 ,C kit原癌基因产物免疫反应积分明显降低 (3 31± 2 42 ) ,而乳腺癌组织C kit原癌基因产物表达几近消失 ,其平均免疫反应积分为 1 33± 1 70。本研究结果说明C

原癌基因c-kit mRNA在自身免疫性睾丸炎中的表达及意义

【目的】探讨原癌基因c-kitmRNA在自身免疫性睾丸炎中的表达及意义。【方法】建立并分析自身免疫性睾丸炎动物模型:42只BALB/c小鼠随机分为6个实验组和1个对照组。6个实验组小鼠分别给予KM小鼠睾丸混悬液皮下注射,每周1次最多者4次,在第1次给予抗原注射后1,2,3,4,6,8周各取一组小鼠的睾丸组织,用RT-PCR检测其c-kitmRNA的变化。【结果】在第1次给予抗原注射后第1周开始c-kitmRNA转录水平开始降低,第2周起明显低于对照组(P<0.05),至第3,4周降至最低,第6周逐渐开始恢复,至第8周其水平与对照组相比差异已经没有统计学意义(P>0.05)。【结论】c-kit基因与生精功能密切相关,c-kit基因mRNA的低表达可能参与自身免疫性睾丸炎导致不育的发病机制。

小细胞肺癌组织中c-kit蛋白的表达及其原癌基因的检测

目的:探讨c-kit蛋白在小细胞肺癌(Small cell lung cancer,SCLC)组织中的表达及c-kit原癌基因第9和11号外显子突变状态,及其与临床病理特点之间的关系。方法:采用免疫组化方法检测13例手术切除SCLC组织标本中c-kit蛋白的表达,并用PCR扩增和基因测序的方法检测其第9和11号外显子序列。结果:c-kit蛋白的阳性表达率为69·2%(9/13)。13例SCLC组织中,1例(7·7%)c-kit基因9号外显子突变,5例(38·5%)c-kit基因11号外显子突变。突变方式有点突变和插入突变。结论:c-kit蛋白表达与SCLC发生发展密切相关,c-kit原癌基因第9和11号外显子均检测到突变,为临床靶向治疗SCLC提供依据。

原癌基因C-Kit与胃肠道间质瘤

胃肠道间质瘤 (gastrointestinalstromaltumors ,GISTs)是一类发生于胃肠壁最常见的间叶源性肿瘤 ,其组织形态学特征是由不成熟的梭形或上皮样细胞构成 ,GISTs内存在着C Kit基因突变及过表达。胃肠道间质瘤 (gastrointesti nalstromaltumors ,GISTs)是一类发生于胃肠壁最常见的间叶源性肿瘤 ,其组织学形态是由不成熟的梭形或上皮样细胞构成 ,它既不是典型的平滑肌瘤 ,又不是神经鞘瘤。GISTs内存在着C

原癌基因c-kit在免疫性生精障碍模型中的表达研究

目的:探讨原癌基因c-kit在免疫性生精障碍模型中的表达及意义。方法:建立免疫性生精障碍模型,在建模过程中对模型进行分析:在第1次给予抗原注射后1,2,3,4,6,8周各取1组小鼠的睾丸组织,用RT-PCR检测其c-kit mRNA的变化,用免疫组化法检测其蛋白的变化。结果:在第1次给予抗原注射后第1周开始c-kit mRNA转录水平开始降低,第2周起明显低于对照组(P<0.05),至第3,4周降至最低,第6周逐渐开始恢复,至第8周其水平与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化结果提示随着建模时间的推移,管腔内c-kit阳性细胞的数目有减少的趋势。结论:c-kit基因与生精功能密切相关,c-kit基因的低表达可能参与免疫性生精障碍导致不育的发病机制。

髓系白血病患者SHP-1与c-kit基因检测的临床意义

目的探讨造血细胞磷酸酶(SHP-1)基因与原癌基因c-kit在髓系白血病患者中的表达,以及其与白血病发生和预后的关系。方法用半定量逆转录-聚合酶链反应法检测67例髓系白血病患者(患者组)及33例正常对照组的白细胞SHP-1与c-kitmRNA表达。结果患者组中,急性髓系白血病(AML)、慢性粒细胞白血病慢性期(CML-CP)和急变期(CML-BP)患者的SHP-1平均表达水平均低于对照组(P<0.05);CML-CP患者的c-kit平均表达水平高于对照组,CML-CP和CML-BP患者比较有统计学差异(P<0.05);34例初治AML患者中,SHP-1+的完全缓解率高于SHP-1-,而c-kit则相反。SHP-1+c-kit+的完全缓解率高于SHP-1-c-kit+。结论SHP-1可能作为潜在的抑癌基因与c-kit基因参与白血病的发病,检测SHP-1与c-kit基因表达可作为判断髓系白血病患者预后的指标。

胃肠道间质瘤中c-kit和PDGFRA基因突变多态性分析

目的探讨胃肠道间质瘤(gastrointestinal stomal tumors,GIST)中c-kit基因和PDGFRA基因的突变多态性。方法对93例GIST标本采用PCR扩增和基因测序的方法检测c-kit基因9、11、13、17号外显子和PDGFRA基因12、18号外显子序列。结果在93例GIST中共检测到c-kit基因突变64例(68.82%),其中11号外显子突变56例,占全部病例的60.22%(56/93);9号外显子突变4例,占全部病例的4.30%(4/93);13号外显子突变3例,占全部病例的3.23%(3/93);17号外显子突变1例,为与11号外显子共突变,占全部病例的1.08%(1/93)。11号外显子突变方式以缺失突变最常见,占55.36%(31/56),其次是点突变(26.79%,15/56)和插入突变(串联重复)(14.29%,8/56),再次是伴点突变的缺失突变(3.57%,2/56);突变绝大多数为杂合性突变,少数为纯合性突变。突变位点多集中在5'端的经典热点,其次为3'端的框内串联重复。PDGFRA基因突变共检测到4例,其中1例为与c-kit共突变,其余3例占无c-kit突变病例的10.34%(3/29),占CD117阴性病例的37.5%(3/8),且均为18号外显子突变。结论大部分GIST中存在c-kit或PDGFRA基因的突变,少部分病例存在c-kit基因不同外显子双突变或c-kit基因和PDGFRA基因双突变共存型,其基因突变分型能指导伊马替尼的肿瘤靶向治疗。

恶性上皮性肿瘤中c-kit基因蛋白表达意义探讨

目的：了解恶性上皮性肿瘤c-kit基因蛋白表达分布及其意义。方法：回顾我院及南京军区福州总医院2005-08～2006-08共634例外科手术切除病检标本，免疫组化检测CD117在恶性上皮性肿瘤表达。结果：CD117阳性癌症患者共16例。胃肠道癌8例，其中1例为复发性癌，乳腺癌6例，肺癌2例。结论：少数恶性上皮性肿瘤c-kit基因蛋白表达，可能提示部分恶性上皮性肿瘤的格列卫用药指征。

血小板第4因子抑制巨核细胞系膜结合型c-kit的表达(英文)

细胞表面受体c-kit与干细胞因子(SCF)对维持血细胞的生成起重要作用。血小板第4因子(PF4)能特异性地抑制巨核细胞生成。在本实验中研究了PF4对两个巨核细胞系HEL和Dami的c-kit表达影响。结果显示,经PF4处理的两株细胞,其c-kit mRNA表达量均下降,细胞表面受体数量降低,SCF与c-kit的结合量亦下降,两组差异有显著意义。在对细胞膜CD34表达影响方面,PF4与TGFβ1的作用相反,PF4促进CD34的表达,而TGFβ1抑制CD34的表达。研究表明,PF4抑制巨核细胞生长的机理,部分途径可能是通过抑制c-kit/SCF而产生。

内脏高敏感大鼠结肠Cajal间质细胞C-KIT表达增加

目的检测内脏高敏感大鼠结肠Cajal间质细胞(ICC)C-KIT表达,探讨ICC在内脏高敏感中的作用。方法取出生后8～21 d的Wistar大鼠,实验组每天直肠注射0.6%的冰醋酸0.3～0.5 mL,对照组给予同样剂量的0.9%氯化钠注射液。8周龄时行直肠扩张评估内脏敏感性,记录腹部回缩反射(AWR)为3分时的注水量。取降结肠组织,行C-KIT免疫组化和Western blot检测。结果与对照组相比,实验组大鼠AWR为3分时的注水量明显减少(P<0.05);C-KIT阳性细胞数在实验组大鼠结肠中(23.37±1.88)较对照组(15.33±1.57)明显增加(P<0.05);C-KIT蛋白表达在实验组(134.5±47.5)较对照组(40.6±30.5)明显增强(P<0.01)。结论 ICC增多可能是内脏高敏感的发病机制之一。

c-kit磷酸化与哮喘气道重塑的关系及布地奈德对其的影响

目的:研究干细胞因子(stemcellfactor,SCF)/c-kit通路在气道重塑中的作用及糖皮质激素影响气道重塑的可能机制。方法:将30只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘气道重塑组、布地奈德干预组,每组10只;鸡卵清蛋白致敏和激发建立哮喘小鼠气道重塑模型;HE染色观察各组气道炎症发生及气道结构改变情况;免疫沉淀/蛋白质印记(IP/Wb)法测定各组小鼠肺组织中c-kit受体磷酸化程度的变化。结果:HE染色提示哮喘组与对照组相比出现黏膜下层和平滑肌增厚,气道管腔狭窄,大量炎细胞浸润的表现,布地奈德组上述改变较哮喘组为轻;IP/Wb检测发现磷酸化的c-kit受体在哮喘组表达较对照组为高(P<0.01),而布地奈德组表达量低于哮喘组(P<0.01)。结论:c-kit受体磷酸化可能在哮喘气道重塑过程中表达上调;布地奈德抑制c-kit受体磷酸化可能是其减轻气道炎症和气道重塑的机制之一。

干细胞因子受体基因在再生障碍性贫血患儿中的表达

目的探讨再生障碍性贫血(再障)患儿造血干细胞因子受体(C-KIT)基因Exon9、11、13的表达和序列构象及与发病机制的关系。方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和聚合酶链反应单链构象多态分析(PCR-SSCP)和序列测定技术,测定再障与正常对照儿童各15例C-KIT基因Exon9、11、13的表达水平和结构是否存在变异。结果1.再障组C-KIT基因Exon9、11、13阳性表达率(40.0%)与正常对照组(46.67%)比较无显著性差异(P>0.05);2.经PCR-SSCP分析和基因序列测定C-KIT基因Exon9、11、13均未见碱基序列改变或碱基数目增多、缺失。结论C-KIT基因Exon9、11、13表达与儿童再障发病关系不大,提示儿童再障的发病可能不是由于Exon9、11、13突变引起。

FLIP、c-kit在妊娠滋养细胞疾病中的表达及其临床意义

目的探讨FLIP凋亡抑制蛋白、c-kit原癌基因蛋白在妊娠滋养细胞疾病中的表达。方法采用免疫组化SP法分别检测20例正常早孕绒毛、30例葡萄胎、15例侵袭性葡萄胎和15例绒毛膜癌中FLIP、c-kit的表达。结果从正常早孕绒毛、葡萄胎、侵袭性葡萄胎到绒毛膜癌,随着疾病恶性程度的增加,滋养细胞的FLIP、c-kit的表达水平呈上升趋势,各组间差异有显著性(P<0.05)。结论FLIP、c-kit的表达可能参与滋养细胞疾病的发生、发展过程。

基因突变与胃肠道间质瘤研究进展

c-kit及血小板源性生长因子受体α(platelet-derived growth factor receptor alpha,PDGFRA)的功能增强性突变是导致胃肠道间质瘤(GIST)的主要原因。c-kit基因及PDGFRA基因的突变位点及突变方式对肿瘤的临床特征有明显影响。笔者就基因突变与GIST的关系进行综述。

干细胞生长因子反义寡核苷酸对肝癌细胞中原癌基因蛋白质c-kit及碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

目的探讨干细胞生长因子(SCF)反义寡核苷酸对肝癌HepG2细胞中原癌基因蛋白质c-kit、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响及意义。方法以脂质体作为转染载体,转染SCF反义寡核苷酸于HepG2细胞。实验分三组:(1)空白对照组;(2)转染SCF反义寡核苷酸组;(3)转染SCF错义寡核苷酸组。Western blot方法检测转染前后肝癌细胞中SCF、bFGF蛋白的表达,RT-PCR检测转染前后肝癌细胞中c-kit与bFGF mRNA的表达,用流式细胞仪检测转染SCF反义寡核苷酸后HepG2细胞凋亡率。结果与转染错义寡核苷酸组相比,SCF反义寡核苷酸对HepG2细胞中c-kit、bFGF的表达有明显抑制作用,转染SCF反义寡核苷酸可明显增加HepG2细胞凋亡率(P<0.01)。结论 SCF在肝癌细胞凋亡中有重要调节作用,SCF/c-kit有可能作为PI3K/Akt信号通路的上游对肝癌细胞bFGF的表达起重要调控作用。

酶消化法获得成年豚鼠膀胱卡哈尔间质细胞样细胞的体外原代培养及其特征鉴定

目的:建立成年豚鼠膀胱卡哈尔间质细胞样细胞的原代培养方法,为进一步观察其电生理特性提供目标细胞。方法:实验于2005-04/08在第三军医大学第一附属医院中心实验室完成。①细胞提取:取1～2个月龄成年豚鼠2只,雌雄不限。麻醉状态下处死,下腹部10g/L碘伏消毒后,即刻由腹部正中切口、于膀胱颈处取出膀胱,于解剖显微镜下仔细剔除膀胱外膜,纵行剖开膀胱、去除膀胱黏膜,将膀胱肌层置入含双抗的磷酸盐缓冲溶液中浸泡10min。将上述处理的肌层组织剪成1mm小块,在含双抗的磷酸盐缓冲溶液中漂洗2次;换3入10g/L胶原酶P溶液,盖紧瓶盖,置入37℃培养箱中消化30min,完全消化溶解后,移入离心管中离心。②细胞培养:细胞沉淀中加入新鲜配制的达尔伯克()氏改良培养基溶液(含体积分数为0.1的胎牛血清),吹打后按每瓶(容积25mL)含(25～30)×10活细胞接种在培养瓶4内,37℃,积分数为0.05的CO2孵箱内静置培养;细胞接种第2天,可体见胞体为梭形并有两个细胞突起的细胞贴壁,平滑肌细胞尚未贴壁。将未贴壁的平滑肌细胞转移至另一培养瓶,孵箱内静置3d后,可见平滑肌细胞贴壁。③培养细胞的观察与鉴定:采用相差显微镜观察和免疫细胞化学方法鉴定。结果:①体外培养第2天可见胞体为梭形且胞体两极有两个细长突起的细胞贴壁,该类细胞酪氨酸蛋白激酶受体免疫细胞化学染色阳性,平滑肌肌动蛋白染色阴性,确认为豚鼠膀胱卡哈尔间质细胞样细胞。②逼尿肌细胞3d后贴壁,呈成纤维形生长,平滑肌肌动蛋白免疫细胞化学染色阳性,酪氨酸蛋白激酶受体染色阴性。结论:用酶消化法可获得成年豚鼠膀胱卡哈尔间质细胞样细胞,并在体外条件下生长,可用于卡哈尔间质细胞样细胞的电生理特性观察。

抗c-kit特异性siRNA对肺泡巨噬细胞介导的炎性因子生成的影响

目的:通过RNA干扰的方法抑制c-kit基因的表达,观察其对由螨变应原活化的肺泡巨噬细胞所介导的炎性因子生成的影响。方法:通过支气管肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞,密度梯度离心法及免疫磁珠分离出血液CD4+T细胞。经螨变应原活化后的肺泡巨噬细胞与CD4+T细胞共培养。采用抗c-kit特异性siRNA抑制其表达,流式细胞术及Weatern blot检测沉默效果,酶联免疫吸附法测定培养上清炎性因子。结果:siRNA在转染剂的介导下可有效转入肺泡巨噬细胞内,明显抑制了c-kit蛋白的表达,同时减少了肺泡巨噬细胞介导的炎性因子的生成。结论:抗c-kit特异性siRNA可有效抑制肺泡巨噬细胞介导的炎性因子的生成。