多靶点药物治疗c-ros原癌基因1酪氨酸激酶阳性非小细胞肺癌研究进展

c-ros原癌基因1酪氨酸激酶(ROS1)基因在非小细胞肺癌(NSCLC)中主要与CD74、SLC34A发生融合,其次与SDC4、EZR、TPM3、TFG、ZCCHC8、SLMAP和MYO5C等融合,ROS1融合基因均保留了ROS1的酪氨酸激酶结构域,异常活化时可以激活ROS1酪氨酸激酶区及下游信号通路,导致肿瘤的生长、增殖、迁移和侵袭。ROS1融合阳性NSCLC患者具有发病年龄小、可发生脑转移的特点,我国首次获批用于ROS1融合阳性NSCLC的药物有ROS1酪氨酸激酶抑制剂克唑替尼,但克唑替尼易发生耐药,克唑替尼的耐药机制以及耐药后的ROS1阳性NSCLC如何治疗成为亟需解决的问题,高效、安全的多靶点药物给ROS1阳性NSCLC患者带来曙光。本文就ROS1基因阳性NSCLC的多靶点药物及其耐药机制进行综述。

克唑替尼靶向治疗间变性淋巴瘤激酶与C-ros原癌基因1-受体酪氨酸激酶融合基因阳性晚期非小细胞肺癌患者的效果分析

目的分析克唑替尼靶向治疗间变性淋巴瘤激酶(ALK)、C-ros原癌基因1-受体酪氨酸激酶(ROS1)融合基因阳性晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者的效果。方法选取2020年6月至2022年6月来新疆医科大学附属肿瘤医院就诊的123例ALK阳性(ALK组)、15例ROS1阳性(ROS1组)晚期NSCLC患者为研究对象,所有患者均给予克唑替尼治疗,并纳入同期来本院进行健康检查的50名健康志愿者作为对照组。比较对照组入组时以及ALK组和ROS1组治疗前及治疗1、3个月后的循环肿瘤细胞(CTCs)、循环肿瘤DNA(CTDNA)、循环血液外泌体微小RNA-145(miR-145)、miR-200水平及ALK、ROS1阳性率。结果治疗前ALK组和ROS1组CTCs和CTDNA水平均高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。治疗1、3个月后ALK组和ROS1组患者的CTCs水平逐渐降低,CTDNA水平先升高后降低,与治疗前比较差异均有统计学意义[ALK组:(7.84±0.91)、(5.17±0.87)比(11.53±3.52),(7.19±1.13)、(4.02±0.95)比(5.49±1.17);ROS1组:(8.05±1.16)、(5.86±0.92)比(12.71±4.08),(7.42±1.24)、(4.55±1.14)比(5.66±1.32)](均P<0.05)。治疗前ALK组和ROS1组miR-145水平均低于对照组、miR-200水平均高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。治疗1、3个月后ALK组和ROS1组患者的miR-145水平均升高,miR-200水平均降低,与治疗前比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。对照组ALK、ROS1阳性率均为0。治疗1、3个月后ALK组和ROS1组患者的ALK、ROS1阳性率均低于治疗前,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论克唑替尼靶向治疗ALK、ROS1融合基因阳性晚期NSCLC能够通过调节患者CTCs、CTDNA、miR-145、miR-200水平而降低ALK、ROS1阳性表达率。

非小细胞肺癌MET、KRAS、PIK3CA和BRAF基因突变状态与临床特征的关系分析

目的分析非小细胞肺癌原癌基因(MET)、Kirsten鼠类肉瘤病毒癌基因(KRAS)、磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚单位α(PIK3CA)、鼠类肉瘤病毒癌基因同源物B1(BRAF)基因突变状态与临床特征的关系。方法选择719例非小细胞肺癌患者,通过二代测序(NGS)检测患者的MET、KRAS、PIK3CA、BRAF,分析基因突变状态与临床特征的关系。结果MET基因突变的临床特征:男性患者13例,女性患者12例;<60岁患者8例,≥60岁患者17例;腺癌11例,非腺癌14例。KRAS基因突变的临床特征:男性患者15例,女性患者11例;<60岁患者8例,≥60岁患者18例;腺癌14例,非腺癌12例。PIK3CA基因突变的临床特征:男性患者12例,女性患者10例;<60岁患者9例,≥60岁患者13例;腺癌15例,非腺癌7例。BRAF基因突变的临床特征:男性患者11例,女性患者12例;<60岁患者13例,≥60岁患者10例;腺癌12例,非腺癌11例。结论非小细胞肺癌MET、KRAS、PIK3CA、BRAF基因突变状态与临床特征存在一定关系。

巴戟天含药血清对成骨-破骨细胞共育体系原癌基因、核心结合因子1mRNA表达的影响

目的观察不同浓度巴戟天含药血清对体外培养成骨-破骨细胞共育体系中原癌基因(C-FOS)、核心结合因子(Cbfa)1 mRNA表达的影响。方法提取24 h内新生SD乳鼠颅盖骨分离培养成骨细胞,采用5周龄SD大鼠双侧股骨、胫骨的骨髓基质细胞,加入集落细胞刺激因子(M-CSF)和细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导培养破骨细胞。采用碱性磷酸酶(ALP)染色鉴定成骨细胞,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、骨吸收陷窝甲苯胺蓝染色、电镜扫描等鉴定破骨细胞,体外建立成骨-破骨细胞共育体系,设置低、中、高三种浓度巴戟天含药血清组和不含药血清组,干预3 d后提取各组总RNA,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定各组C-FOS、Cbfa1 mRNA表达量。结果不同浓度巴戟天含药大鼠血清对成骨-破骨细胞共育体系C-FOS有抑制作用,对Cbfa1 mRNA的表达有促进作用。高浓度含药血清组两者的表达差异显著(P<0.05,P<0.000 1)。结论巴戟天含药血清可抑制成骨-破骨细胞共育体系C-FOS的表达,促进Cbfa1 mRNA的表达,从而达到降低破骨细胞分化成熟及骨吸收活性,促进骨形成。

ET-1、ET_A-R、c-fos原癌基因mRNA在子宫肌瘤中的表达

目的 :探讨ET 1及ETA R表达在子宫肌瘤发生中的病理生理作用及其与肌瘤中c fos原癌基因之间的关系。方法 :应用半定量RT PCR方法检测 30例子宫肌瘤组织及邻近正常子宫肌组织中ET 1、ETA R、c fosmRNA的表达强度 ,对照其差异。结果 :( 1)子宫肌瘤组织中ET 1mRNA的表达强度 ( 2 .717± 0 .5 2 0 )与正常子宫肌组织 ( 2 .4 83± 0 .62 3)差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;ETA RmRNA在子宫肌瘤组织中表达为 2 .2 17± 0 .4 68,明显高于正常子宫肌组织的 1.617± 0 .4 86(P <0 .0 0 1) ;c fosmRNA在子宫肌瘤组织中表达为 4 .90 0± 0 .4 0 3,也明显高于正常子宫肌组织的 4 .183± 0 .5 94 ,(P <0 .0 0 1) ;( 2 )相关分析表明 :肌瘤组织中ETA RmRNA与c fosmRNA之间呈正相关 ,而ET 1mRNA与ETA RmRNA、c fosmRNA之间无相关性。结论 :子宫肌瘤组织中ETA R的表达上调对子宫肌瘤细胞的分裂增殖起促进作用 ,ET 1/ETA

原癌基因Bmi-1与干细胞

B细胞特异性莫洛尼氏白血病毒插入位点1（Bmi-1）最早由荷兰癌症中心于1991年在癌细胞中发现,是一种PcG家族的转录抑制因子。Bmi-1基因通过多种途径参与细胞的自我更新/增殖、衰老/永生化、起始转录机制和染色质凝集蛋白相互作用等；其适量表达是个体发育所必需，但高表达则与多种肿瘤的发生、发展、预后密切相关。

原癌基因c-erbB-1和c-erbB-2在人脑胶质瘤中的表达

目的：探讨原癌基因c－erbB－1和c－erbB－2表达与人脑胶质瘤发生发展的关系．方法：采用免疫组化SABC法检测52例人脑胶质瘤，2株人脑胶质瘤细胞系及8例正常人脑组织中c－erbB－1和c－erbB－2蛋白的表达．结果：c－erbB－1蛋白在Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤组织中阳性率分别为50．0％，68．8％，81．8％和92．3％，低恶性度（Ⅰ～Ⅱ级）胶质瘤（60．7％）和高恶性度（Ⅲ～Ⅳ级）胶质瘤（87．5％）间阳性率差异显著（P＜0．05）；c－erbB－2蛋白在Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤组织中阳性率分别为75．0％，87．5％，90．9％和92．3％，低恶性度胶质瘤（82．1％）和高恶性度胶质瘤（91．7％）间阳性率无显著差别（P＞0．05）；c－erbB－1和c－erbB－2表达强度均随胶质瘤恶性程度增高而增强，在高恶性度和低恶性度胶质瘤间差异均极显著（P＜0．01）；c－erbB－1和c－erbB－2在2株人脑胶质瘤细胞系中均有表达，在8例正常人脑组织中均无表达；c－erbB－1和c－erbB－2二者表达密切相关（P＜0．05）．结论：c－erbB－1和c－erbB－2在人脑胶质瘤中普遍表达，并随胶质瘤恶性程度增高而表达增强，c－erbB－1和c－erbB－2共表达可能是人脑胶质瘤发生发展过程中的重要事件．

体外人巨细胞病毒感染与核转录因子AP-1活化及原癌基因c-jun表达的研究

目的 研究人胚肺成纤维 (HEL)细胞感染人巨细胞病毒 (HCMV)后 ,转录激活蛋白 1(AP 1)活化和原癌基因c junmRNA表达的时序性变化 ,探讨其在HCMV感染中的作用。方法 采用原位杂交法检测c junmRNA的表达 ,凝胶电泳迁移率改变试验 (EMSA)检测AP 1活性。结果 HEL细胞感染HCMV后 15min ,c junmRNA即有阳性表达 ,30～ 6 0min达高峰 (P <0 0 1) ,以后逐渐下降 ,正常对照组HEL细胞无c junmRNA表达。HCMV感染后AP 1亦迅速被活化 ,至 2h达高峰 (P <0 0 1) ,其后有所下降 ,维持于一定水平。结论 HEL细胞感染HCMV后 ,c junmRNA表达迅速增加 ,AP 1活化。提示HCMV可能通过刺激原癌基因过度表达而参与细胞的信号传导 ,以干扰细胞增殖和分化的调控 ;AP 1活化为早期病毒基因有效表达所必需 ,并可启动一系列前炎性细胞因子的基因转录与蛋白合成。

人参皂苷Rg1对大鼠血管球囊损伤后原癌基因c-myc表达的影响

目的观察人参皂苷Rg1(Rg1)对大鼠颈动脉球囊损伤后原癌基因c-myc表达的影响,补充说明Rg1对球囊损伤所致血管狭窄形成的防治机制。方法建立大鼠颈总动脉球囊损伤模型,制模后随机分为假手术组、模型组、Rg1低剂量(4 mg/kg)组和Rg1高剂量(16 mg/kg)组。制模次日腹腔注射给药,模型组及假手术组给予等体积生理盐水,连续给药14 d后取损伤侧颈总动脉,行H.E.染色并测量管腔面积(Lumen area,LA)以判定血管腔狭窄程度;采用实时荧光定量RT-PCR(real-time RT-PCR)法检测管壁c-myc mRNA的表达。结果颈总动脉球囊损伤模型组大鼠血管腔面积较假手术组明显狭窄(P<0.01)。Rg1低剂量及高剂量均明显改善球囊损伤所致的颈动脉狭窄,使球囊损伤后狭窄的血管腔面积增大(P<0.05);Rg1高剂量显著下调损伤血管壁的c-myc mRNA表达(P<0.01)。结论 Rg1能减轻球囊损伤所致大鼠颈动脉狭窄,可能与其下调c-myc基因的表达有关。

驱动基因EGFR/ALK/ROS1均阴性的肺腺癌和肺鳞癌的临床病理特征研究

目的:研究驱动基因表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)/间变淋巴癌激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)/原癌基因1受体络氨酸激酶(c-ros oncogene 1 receptor tyrosine kinase,ROS1)均阴性的肺腺癌和肺鳞癌的临床病理特征。方法:回顾性分析96例EGFR/ALK/ROS1均阴性的肺腺癌和肺鳞癌患者临床病理特征及差异。结果:(1)在性别、吸烟史、首发胸闷胸痛症状上,两组均存在差异;(2)鳞状上皮细胞癌抗原(squamous cell carcinoma antigen,SCCA)在鳞癌组中阳性率(50.0%)显著高于腺癌组(9.3%)(P<0.001),细胞角蛋白19片段(cytokeratin 19 fragment,CYFRA21-1)在鳞、腺癌两组阳性率均较高(78.6%vs 51.9%),但鳞癌组阳性率更高(P=0.007);(3)在肺内转移上,腺、鳞两组为40.7%vs 21.4%(P=0.045);(4)腺癌组鼠类肉瘤病毒癌基因(kirsten rat sarcoma viral oncogene,KRAS)(+)与鳞癌组相比为29.6%vs 11.9%(P=0.037);(5)鳞癌组肿瘤突变负荷≥10个突变/Mb的比例明显大于腺癌组(35.7%vs 16.7%)(P=0.033)。结论:EGFR/ALK/ROS1均阴性的肺腺癌和肺鳞癌临床病理特征存在一定的差异,有助于临床诊治。

原癌基因Bmi-1的研究进展

原癌基因Bmi-1属于转录抑制因子基因polycomb家族,通过抑制ink4a位点的表达及调节端粒酶的活性控制细胞的增殖和衰老。Bmi-1基因对成体干细胞及白血病干细胞的自我更新是必需的。最近发现,Bmi-1基因在血液系统恶性肿瘤及多种实体瘤中表达异常,有望成为肿瘤治疗的新靶点。

二代测序对比增强免疫组化检测非小细胞肺癌ROS1基因探索

目的:比较增强免疫组化(Ventana immunohistochemistry,Ventana IHC)检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)C-ros原癌基因1-受体酪氨酸激酶(C-ros oncogene 1 receptor tyrosine kinase,ROS1)蛋白表达和二代测序(next-generation sequencing,NGS)技术检测ROS1基因融合突变的一致性。方法:应用NGS技术在DNA层面检测966例NSCLC患者标本ROS1基因融合突变情况,同时应用Ventana IHC检测其中732例标本ROS1蛋白的表达情况。结果:NGS检测结果显示966例NSCLC患者的ROS1基因融合突变率为1.0%(10/966),阳性样本病理类型为肺腺癌。Ventana IHC检测结果显示ROS1蛋白表达阳性率为17.6%(129/732),阳性样本病理类型主要为肺腺癌。Ventana IHC和NGS两种方法检测结果的一致性为83.6%(612/732),kappa=0.110(P<0.001)。两种方法检测ROS1基因差异具有统计学意义(P<0.001)。结论:作为ROS1基因的检测方法,Ventana IHC法比NGS法更灵敏,两种方法检测结果的一致性较差,两者差异具有统计学意义。Ventana IHC筛查出ROS1阳性样本,可采用NGS进行验证。

非小细胞肺癌EGFR、ALK和ROS1基因联合检测及突变共存分析

目的研究非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)和C-ros原癌基因1-受体酪氨酸激酶(C-ros oncogene 1-receptor tyrosine kinase,ROS1)驱动基因异常的情况及临床病理特征。方法分析西安交通大学第一附属医院116例NSCLC的临床病理资料,采用扩增阻滞突变系统检测3种驱动基因改变情况,统计分析其与临床病理特征的关系。结果 116例NSCLC中,EGFR突变率36.2%,Exon19 del和Exon21为最常见的2种突变,EGFR外显子的双重突变率为7.1%。在女性、腺癌患者中EGFR的突变率较高,分别为52.3%、45.2%。ALK融合基因阳性率为6.9%;在年龄小于60岁组中的发生率较高,为13.5%。ROS1融合基因阳性率为4.3%,均发生于腺癌和晚期NSCLC患者。本研究还检出少见的EGFR和ALK突变共存1例、EGFR和ROS1突变共存1例。结论 NSCLC中EGFR突变或ALK融合基因较常见,ROS1融合基因稍少见,突变常发生于女性、较年轻的、腺癌患者中;NSCLC驱动基因异常并非绝对互斥,特别是在年轻患者中可出现EGFR和ALK或ROS1突变共存;治疗初期时的多驱动基因联合检测,对促进NSCLC多种分子靶向药物联合治疗具有重要意义。

三七总皂甙对甲基硝基亚硝基胍转化的人胃粘膜上皮细胞GES-1原癌基因表达的影响

目的:探讨三七总皂甙(PNS)对转化的人胃粘膜上皮细胞的影响。方法:免疫组织化学法检测 PNS 200 mg/L 对2×10^(-5) mol/L 甲基硝基亚硝基胍(MNNG)转化后的 GES-1细胞(MC 细胞)癌基因蛋白表达的影响,并以维甲酸(RA)10^(-5) mol/L 作为对照。结果:MC 细胞表皮生长因子受体(EGFR)表达与GES-1细胞比较无明显变化(P>0.05),但 C-erbB-2和 Bcl-2表达明显增加(P<0.05,P<0.01)。PNS 作用48 h 能明显降低 MC 细胞的 EGFR、C-erbB-2及 Bcl-2蛋白表达(与 MC 细胞比较,P<0.01)。RA 能显著降低 MC 细胞的 EGFR、C-erbB-2蛋白表达,但对 Bcl-2蛋白表达无明显影响。结论:MNNG 引起 GES-1细胞的转化与某些癌基因的表达增强有关,PNS 则可能通过抑制癌基因的表达来抑制转化细胞生长、促使转化细胞凋亡。

胶质瘤中原癌基因转酮醇酶1和组织蛋白酶D的表达及临床意义

目的:检测胶质瘤中原癌基因转酮醇酶1(TKTL1)和组织蛋白酶D(Cath-D)的表达,观察二者的关系及临床意义。方法:选择我院收治的124例胶质瘤患者术后存档的蜡块组织及临床组织作为观察组,选择脑出血患者出血灶周围正常的脑组织80例作为对照组。应用免疫组化检测2组中TKTL1和Cath-D的表达,观察二者在不同临床病理特征中的表达差异。结果:观察组TKTL1和Cath-D表达的阳性率明显高于对照组,观察组中TKTL1和Cath-D的表达与肿瘤的最大直径、Ki67增殖指数及分级相关。线性相关分析显示观察组中TKTL1与Cath-D的表达无明显相关性。结论:胶质瘤中TKTL1和Cath-D高表达,对病变进展有一定促进作用,二者与肿瘤的生长、增殖及血管密度相关。但是TKTL1与Cath-D之间无协同作用。

乙醛脱氢酶家族18成员A1对结直肠癌预后的判断意义及其对骨髓细胞瘤原癌基因表达的影响

目的观察乙醛脱氢酶家族18成员A1[aldehyde dehydrogenase family 18 member A1,ALDH18A1,又称为吡咯啉-5-羧酸合成酶(pyrroline-5-carboxylate synthetase,P5CS)]在结直肠癌的表达及预后判断意义,探讨ALDH18A1与骨髓细胞瘤原癌基因(myelocytomatosis oncogene,MYC)的相关性及对其表达的影响。方法利用肿瘤基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)和基因表达综合数据库(gene expression omnibus,GEO),比较ALDH18A1在人结直肠癌和正常结肠组织的表达,列联表分析ALDH18A1与临床病理参数的相关性,Kaplan-Meier及Cox回归分析ALDH18A1的预后判断意义;四唑化合物(methyl-thiazolyldiphenyl-sulfophenyl-tetrazolium bromide,MTS)检测下调ALDH18A1表达对结直肠癌细胞增殖的影响;分析ALDH18A1与MYC基因表达的相关性; Real-time PCR和Western blot检测敲低ALDH18A1后MYC基因的表达,基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)探讨ALDH18A1与MYC下游靶基因活化的关系。结果 ALDH18A1在结直肠癌组织高表达,与其临床病理参数及预后相关(风险比为1. 996,95%置信区间为1. 012～3. 939,P=0. 046);下调ALDH18A1表达抑制结直肠癌细胞增殖; ALDH18A1与MYC表达正相关;下调ALDH18A1抑制MYC基因表达;ALDH18A1高表达患者中,c-MYC靶基因显著富集。结论 ALDH18A1可作为结直肠癌患者的预后判断因子,并可能通过调控MYC基因表达而抑制结直肠癌细胞的增殖。

原癌基因Fra-1在乳腺癌中的研究进展

原癌基因Fra-1是Fos基因家族中的一员,由其表达产物组成的活化蛋白-1（activator protein,AP-1）存在于细胞核内,作为第三信使负责细胞核内外的信息传导,介导着正常细胞的生长、发育、分化及凋亡。近年来人们更多的是关注Fra-1与细胞恶性转化的关系,研究证明,Fra-1在多种肿瘤中高表达,并在基因调控、细胞增殖、分化以及肿瘤的形成中起到一定作用,提示其与肿瘤的发生、发展有一定的关系。