苯海索对局灶性脑缺血-再灌注大鼠大脑皮质Ca^(2+)含量、海马c-fos、c-sis基因表达的影响

目的 观察苯海索对大鼠局灶脑缺血-再灌注损伤后大脑皮质Ca2+含量、海马c-fos、c-sis基因表达的影响。方法 选用高血压大鼠制成大脑中动脉闭塞再灌注模型,大鼠于缺血1 h再灌注2 h断头取脑,用原位杂交技术观察海马c-fos、c-sis基因表达及荧光法测量大脑皮质钙离子的变化。结果 苯海索可显著降低模型大鼠大脑皮质Ca2+含量,海马c-fos、c-sis基因表达。结论 苯海索对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有明显保护作用。

高血压脑动脉硬化大鼠血液流变学、CGRP、ET及c-sis基因表达的研究

目的:为了探讨高血压脑动脉硬化时大鼠血液流变学、CGRP、ET及c-sis基因表达的特点,以它们对高血压脑动脉硬化的影响。方法;用双肾双夹法复制出高血压SD大鼠,14周后比较实验组与对照组大脑中动脉及基底动脉的平滑肌厚度,确定脑动脉硬化存在之后,测定血液流变学、CGRP、ET及c-sis基因表达量。结果:肾血管狭窄后1周开始血压持续升高,至14周时血压至 27.5±3.35kPa。大鼠的大脑中动脉及基底动脉平滑肌增厚、管腔狭窄,血管壁有重构,确定脑动脉硬化存在。血液粘度增高、血浆ET水平和脑组织 c-sis基因表达量明显高于对照组 P<0.01,血浆CGRP水平明显低于对照组P<0.01。结论:高血压引起的大鼠脑动脉硬化可使血液粘度增高以及血浆ET、CGRP合成、分泌不平衡,c-sis基因表达增多。上述因素的变化可能成为高血压及脑动脉硬化发生、发展的重要因素。

血小板源生长因子α亚基受体结构域切除对血管平滑肌凋亡和c-sis基因表达的影响

目的 探讨从血小板源生长因子α(platelet derivedgrowthfactor ,PDGF α)受体水平阻断对肺血管平滑肌细胞凋亡和c sis基因表达的影响。方法 采用两种方法干预肺动脉平滑肌细胞(vascularsmoothmuscularcells ,VSMC) ,一种是在培养液中分别给予不同剂量的受体结构域切除的PDGF α受体腺病毒重组体Ad5CMV PaRtr(ACP) ,另一种是加入固定的中浓度ACP液后再分别加入不同浓度的血小板源生长因子BB(PDGF BB) ,对不同组细胞的细胞周期、凋亡细胞百分率和c sis原癌基因表达进行测定。结果 中、大浓度ACP对细胞增殖有明显的抑制作用 ,且使凋亡细胞百分率明显升高。在中浓度ACP的作用下 ,加入PDGF BB不能促进VSMC的增殖 ,亦不改变细胞的凋亡水平。不同浓度的ACP可使c sismRNA的表达上调。在中浓度ACP的作用下 ,加入PDGF BB可下调c sismRNA的表达。结论 ACP作为细胞增殖的抑制剂 ,能在中、大剂量下明显增加Go/G1期细胞的数量 ,抑制肺VSMC的增殖 ,增加细胞的凋亡率 ,同时使c sismRNA的表达上调。

SiO_2对大鼠肺泡巨噬细胞原癌基因c-sis表达影响的体外研究

目的 探讨SiO2 对大鼠肺泡巨噬细胞原癌基因c sis表达的影响以期进一步了解原癌基因c sis在矽肺发病中的作用。方法 采用支气管肺泡灌洗方法获得肺泡巨噬细胞 (alveolarmacrophage ,AM)。体外予SiO2 对AM进行不同时间的处理 ,利用RT PCR方法检测c sismRNA表达 ,结果用计算机自动分析系统进行定量分析。结果 AM中c sis在SiO2 处理后存在高表达 ,处理时间不同其表达量也不同 ,3 0min即有表达 ,1h表达达高峰 ,以后随处理时间的延长表达量逐渐下降 ,各时间点结果与不加SiO2 处理的同期对照组相比差异均有显著性 (P <0 0 1)。结论 SiO2 可诱导AM原癌基因c sis出现高表达 ,提示原癌基因c sis可能参与矽肺纤维化早期的形成。

预防血管成形术后再狭窄的C-sis反义寡脱氧核苷酸在血清中的稳定性

目的 探讨自行设计合成的C-sis癌基因反义寡脱氧核苷酸(AODN)和C-sis癌基因反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸(PS-AODN)血清稳定性。方法 用小牛血清模拟体内条件于不同时相点进行稳定性试验,用高效液相色谱法测定血清中AODN和FS-ODN。结果 AODN在血清中1小时内降解43.3％,1天降解53.1％。PS-ODN 1 h降解23.7％,第6天降解59.6％。PS-AODN血清中的稳定性明显高于AODN。结论 PS-AODN在血清中有较好的稳定性,提示其具有潜在的临床应用价值。

外源血小板衍生生长因子(PDGF)B链基因在CHO细胞的表达

本文总结应用DNA-磷酸钙盐沉淀的基因转移技术,把含人c-sis cDNA的质粒pSM-1,以单独转染或与pSV_2neo共转染方法转入CHO细胞(中国仓鼠卵巢细胞),经低血清或G_(418)筛选分离得到多个有PDGF表达的细胞株。其中PDGF高表达件——FB_6,细胞形态和生长行为明显改变,可在软琼脂培基上形成集落,细胞生长速率加快,能在低血清(2%)培液中长期传代,细胞的条件培液有刺激静止的NRK细胞(大鼠肾成纤维细胞)DNA合成的活力。RNA点杂交和Southern Blot显示FB_5细胞有??PDGF mRNA的高表达和人c-sis基因的整合,而且,在连续传代7个月后,FB_5细胞基因组中仍然有人c-sis基因存在,说明CHO细胞的不正常生长和转化是由于PDGF基因的稳定整合和高表达所引起。这一稳定转化株(FB_5)是进一步研究PDGF对细胞生长控制和转化功能的理想模型。

加压素对内皮细胞c-sis癌基因表达的影响

目的 观察精氨酸加压素(AVP)对血管内皮细胞c-sis癌基因表达的影响及在高血压发病中的作用。方法 采用人脐静脉内皮细胞培养及原位杂交技术。结果 培养的血管内皮细胞加入1×10^(-7)M的AVP培养液90min,其c-sis癌基因超常表达,明显高于对照组,并具有统计学意义。结论 AVP水平增加使血管内皮细胞c-sis癌基因超常表达和血小板活性生长因子(PDGF)分泌增多,可能是AVP致高血压作用的一个重要机制。

抑制c-sis/PDGF-B原癌基因表达的TFO设计、体外三链形成及功能的检测

血小板衍生生长因子(PDGF)在肿瘤发生、生长, 动脉粥样硬化和炎症反应等病理状态中起着极其重要的作用, 其B链基因为原癌基因c-sis的同源物. 提供了用于抑制c-sis/PDGF-B原癌基因表达的3种TFO(三链形成寡聚脱氧核苷酸triplex-forming oligonucleotide). 凝胶阻滞电泳、DNaseⅠ印迹、体外转录抑制及核蛋白结合抑制等实验证明了这些化合物可与靶位点(c-sis/PDGF-B基因5′上游启动子核心区)形成稳定的三链复合物, 并可抑制其下游基因的转录和转录因子的结合. 它们有望应用于配制治疗肿瘤发生、生长, 动脉粥样硬化和炎症反应等有关疾病的药物.

体外诱导成人脂肪间充质干细胞分化为平滑肌细胞的实验研究

目的体外培养成人脂肪间充质干细胞(ADMSCs),并应用血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)诱导ADMSCs分化为平滑肌细胞。方法采用酶消化法和贴壁培养法分离培养ADMSCs,流式细胞仪对第5代细胞进行表面抗原和细胞周期的检测,然后对第5代细胞进行PDGF-BB诱导,于诱导后2周进行免疫组织化学鉴定。结果体外培养的ADMSCs呈梭形,细胞形态均一,传代稳定。干细胞相关标志CD29,CD44表达阳性,内皮细胞相关标志CD31和造血干细胞相关标志CD34表达阴性。ADMSCs中G0/G1,S,G2/M期的细胞分别占90.14%,3.77%,6.09%。定向诱导后倒置显微镜下观察细胞呈长梭状,胞膜清晰,无空泡,可重叠生长,融合后细胞形成"峰"和"谷"状,免疫荧光化学显示诱导组细胞α平滑肌肌动蛋白表达阳性。结论成人脂肪组织中含有间充质干细胞,且可经PDGF-BB诱导分化为平滑肌细胞。

重组质粒pcDNA3.1/C-sis对大鼠FHF的影响

目的探讨重组质粒pcDNA3.1/C-sis导入大鼠对暴发性肝功能衰竭(FHF)的影响。方法利用流体力学的方法将重组质粒pcDNA3.1/C-sis导入大鼠肝脏,48h后用内毒素(LPS)+D-半乳糖胺(D-GalN)诱导大鼠FHF;利用荧光定量PCR及蛋白质印迹法(Western blotting)检测C-sis表达;利用苏木精-伊红(HE)染色及测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性检测凋亡;利用Western Blotting检测Bcl-2和Bax的表达变化;计算大鼠24h观察期内的死亡率。结果 FHF+C-sis质粒组的C-sis mRNA和蛋白表达水平较正常对照组和FHF+空载质粒组明显增加,差异均有统计学意义(P<0.01)。与正常对照组相比,FHF+林格液注射组和FHF+空载质粒组肝脏细胞凋亡增多;与FHF+空载质粒组相比,FHF+C-sis质粒组肝脏细胞凋亡减少。与正常对照组相比,FHF+林格液注射组大鼠肝脏组织中Caspase-3的表达增多(P<0.01);与FHF+空载质粒组相比,FHF+C-sis质粒组大鼠肝脏组织中Caspase-3的表达减少(P<0.05)。与正常对照组相比,FHF+林格液注射组大鼠肝脏组织中Bcl-2表达明显减少(P<0.01),Bax表达明显增多(P<0.01);而与FHF+空载质粒组相比,FHF+C-sis质粒组大鼠肝脏组织中Bcl-2表达增多(P<0.05),Bax表达减少(P<0.05)。在24h观察期内,正常对照组大鼠均存活,FHF+林格液注射组及FHF+空载质粒组大鼠死亡率分别为70.0%和80.0%;而FHF+C-sis质粒组大鼠仅20.0%死亡。结论 C-sis基因可减弱LPS+D-GalN诱导的大鼠FHF。

缓释血小板衍生生长因子BB的纳米珍珠层/聚乳酸/纤维蛋白胶复合支架修复兔桡骨缺损的实验研究

目的评价缓释血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)的纳米珍珠层/聚乳酸/纤维蛋白胶复合支架对骨缺损的修复作用。方法取24只成年雄性新西兰大白兔建立双侧桡骨15 mm骨缺损模型,随机分为4组,每组6只;分别置入聚乳酸支架(A组),纳米珍珠层/聚乳酸支架(B组)和缓释PDGF-BB的纳米珍珠层/聚乳酸/纤维蛋白胶复合支架(C组),不置入支架材料的为空白对照组。术后4、8、12周取材,通过大体观察、X线检查、骨密度测定、Micro-CT扫描重建和病理组织学评价三组支架材料的成骨作用。结果术后大体观察发现空白对照组骨缺损未修复,骨缺损断端硬化,而其他3组骨缺损均有不同程度修复。各时间点Lane-Sandhu X线评分,C组均优于B组,有统计学差异(P<0.05);B组优于A组和空白对照组,有统计学差异(P<0.01);各时间点C组的骨密度显著高于A与B组,有统计学差异(P<0.05)。Micro-CT和病理组织学结果提示C组骨修复效果较A与B组更好。结论缓释PDGF-BB的纳米珍珠层/聚乳酸/纤维蛋白胶复合支架具有明显促进兔桡骨缺损修复的作用。