原癌基因c-src通过磷酸化信号转导与转录激活子-3蛋白影响大鼠精原干细胞活性

本文旨在研究原癌基因c-src在体外培养的9日龄大鼠精原干细胞中的表达及其与精原干细胞活性相关的信号通路。用MTT比色法观察反义c-src脱氧寡核苷酸(oligodeoxynucleotides,ODNs)对精原干细胞作用的量效及时效关系;用RT-PCR检测c-src mRNA的表达;用Western blot检测c-src表达产物pp60c-src和磷酸化的信号转导与转录激活子-3(phosphorylatedsignal transducer and activator of transcription-3,p-STAT3)的表达。结果显示,与空白对照组相比,10μmol/L反义c-srcODNs作用12h后精原干细胞活性下降8.1%(P<0.05),且c-src mRNA表达明显下调;Western blot结果显示反义c-src ODNs组pp60c-src、p-STAT3蛋白表达与空白对照组相比分别下降了33.8%、45.3%(均P<0.01)。以上结果提示,原癌基因c-src可能通过p-STAT3蛋白影响精原干细胞的活性。

神经特异型基因c-src产物pp^(60c-src(+))在突触形成中的表达

目的 :为了探索神经特异型基因c src产物 pp60c src(+ ) 在突触形成中的作用机制。方法 :用免疫细胞化学方法检测pp60c src(+ ) 在初代培养鸡胚脊神经节细胞体、突起和生长端内的分布特征。结果 :培养 2 4小时的生长端丝状伪足不断运动改变生长端的形态 ,pp60c src(+ ) 的免疫反应活性分布在神经细胞的核周体、神经突起、生长端部分领域和丝状伪足 ;培养 4 8小时的生长端接近靶细胞 ,丝状伪足的活泼性和运动性明显减弱以至消失 ,在伸长的突起上有pp60c src(+ ) 免疫反应活性较强的串珠样膨体 ,在生长端体部的部分区域和丝状伪足免疫反应活性明显减弱。结论 :( 1 )在生长端向突触前部分化的过程中 ,pp60c src(+ ) 免疫活性曾发生一过性的减低或消失 ,它具有时空特异性 ;( 2 )pp60c src(+ ) 对突触发育具有重要的调控作用。

Src基因产物pp60^（c－src）与胃癌发生关系探讨

用ｃ－ｓｒｃ基因产物ｐｐ６０（ｃ－ｓｒｃ）特异性单克隆抗体（ＭＡｂ３２７）对胎儿胃上皮，成人胃上皮及病变，胃癌等组织进行免疫组化研究。结果：胎儿胃上皮、成人胃上皮炎性增生、肠腺化生、胃癌ｐｎ６０（ｃ－ｓｒｃ）阳性率分别为１００．０％（１２／１２）、１００．０％（３０／３０）、１００．０％（１６／１６）和８３．３％（４０／４８），均高于成人正常胃上皮（６０．０％，１２／２０），有显著性差异（Ｐ＜０．００５）。彼此之间ｐｐ６０（ｃ－ｓｒｃ）表达量也有显著性差异（Ｐ＜０．００５）。肠型及弥漫型胃癌ｐｐ６０（ｃ－ｓｒｃ）阳性率分别为１００．０％（１６／１６）、６８．８％（２２／３２），有显著性差异（Ｐ＜０．０２５），其表达量也有显著性差异（Ｐ＜０．０５），而癌旁组织ｐｐ６０（ｃ－ｓｒｃ）阳性率及表达量则无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。由此表明ｃ－ｓｒｃ基因激活及ｐｐ６０（ｃ－ｓｒｃ）表达量升高与胃上皮细胞增殖更新、转化恶变及胃癌发生有关，也与胃癌的分化和组织学类型有关。

c-Src在乳腺癌抗雌激素受体α治疗过程中的表达变化及其耐药机制的研究

目的:探讨原癌基因c-Src在乳腺癌抗雌激素受体α(estrogen receptor,ERα)治疗过程中的变化及其耐药机制。方法:用雌激素受体阻滞剂三苯氧胺(tamoxifen,TAM)长期处理ERα阳性的MCF-7细胞建立TAM耐药细胞(TAM-R)。用免疫印迹实验检测c-Src、ERα、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)在耐药细胞上的表达,用免疫沉淀法检测这些分子间的相互作用,并用c-Src抑制剂PP2阻断其磷酸化,观察其对耐药的逆转作用。结果:与原生的MCF-7细胞相比,c-Src、ERα、EGFR在TAM-R上的表达量没有改变,但是,c-Src磷酸化水平在耐药细胞上表达明显增高。并且在耐药细胞上,ERα与EGFR之间的相互结合明显增高,PP2可以明显阻断两分子间的相互作用。更重要的是,经PP2处理后耐药细胞的生长可再次被TAM抑制,即PP2可以逆转耐药细胞的耐药性。结论:c-Src是介导ERα与EGFR之间相互作用的关键分子,阻断这种相互作用可以重新获得对TAM治疗的敏感性,提示c-Src抑制剂可以和TAM交替使用来提高乳腺癌的治疗效果。

Src基因产物在贲门腺癌中表达的免疫组织化学观察

求实验用ｃ－ｓｒｃ基因表达产物ＰＰ６０（ｃ－ｓｒｃ）的特异性单克隆抗体ＭＡｂ３２７对５６例贲门腺癌、３６例癌旁组织及２０例淋巴结转移癌进行了免疫组织化学研究。结果发现癌旁正常上皮、增生上皮、腺癌及淋巴结转移癌ＰＰ６０（ｃ－ｓｒｃ）阳性率分别为２９．４％（１０／３４）、９４．４％（３４／３６）、７１．４％（４０／５６）、６０．０％（１２／２０）。腺癌及癌旁增生上皮ＰＰ６０（ｃ－ｓｒｃ）表达量显著高于癌旁正常上皮（Ｐ＜０．００５）。不同组织学类型贲门腺癌ＰＰ６０（ｃ－ｓｒｃ）阳性率分别为乳头状腺癌７５．０％（６／８）、管状腺癌８１．８％（１８／２２）、低分化腺癌５０．０％（１０／２０）粘液腺癌１００．０％（６／６），各组间有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。且粘液腺癌、管状腺癌的表达量高于乳头状腺癌和低分化腺癌（Ｐ＜０．００５）。结果提示，ｃ—ｓｒｃ基因激活表达与贲门腺癌发生发展有关，在其癌变过程中ＰＰ６０（ｃ－ｓｒｃ）表达量升高，并与贲门腺癌的组织学类型、分化和转移有关。

Src基因产物PP60^（C—Src）在食管癌中表达的研究

本实验用Ｃ—Ｓｒｃ基因表达产物ＰＰ６０Ｃ—Ｓｒｃ的特异性单克隆抗体ＭＡｂ３２７对３５例食管鳞癌及２２例癌旁组织进行了免疫组织化学研究。食管鳞癌、癌旁增生及正常鳞状上皮ＰＰ６Ｃ—Ｓｒｃ性率分别为６５．７％（２３／３５）、１００．０％（１５／１５）、５７．１％（４／７），具有显著差异（Ｐ＜０．０５），鳞癌细胞ＰＰ６０Ｃ—Ｓｒｃ表达量高于癌旁增生及癌旁正常鳞状上皮。不同分化程度（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级）鳞癌ＰＰ６０Ｃ—Ｓｒｃ阳性率分别为８０％（８／１０）、６８．４％（１３／１９）、３３．３％（２／６），无显著性差异（Ｐ＞０．００５），分化程度越高，ＰＰ６０Ｃ—Ｓｒｃ表达量越高（Ｐ＜０．０５）。结果提示，Ｃ—Ｓｒｃ基因激活表达与食管鳞癌发生发展有关，在其癌变过程中ＰＰ６０Ｃ—Ｓｒｃ表达量升高，并与食管鳞癌分化有关。

c-Src在TAM治疗耐药的人乳腺癌MCF-7细胞株中的表达及其意义

目的:探讨c-Src在乳腺癌三苯氧胺(TAM)中耐药的表达及意义。方法:用Western blot法检测TAM治疗耐药与敏感的两种人乳腺癌MCF-7细胞中c-Src的表达及其磷酸化水平;用c-Src阻滞剂PP2处理两种细胞后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)及吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双荧光染色法检测细胞凋亡情况。结果:与TAM敏感MCF-7细胞比较,TAM耐药MCF-7细胞c-Src的表达量及其磷酸化水平均明显增高;PP2处理后,TAM敏感MCF-7细胞的富集指数(EF)及细胞凋亡率高于TAM耐药MCF-7细胞(均P<0.05)。结论:c-Src在TAM治疗耐药的人乳腺癌MCF-7细胞株中处于高表达及高活性状态,并可能参与乳腺癌内分泌治疗耐药的机制。

c-Src介导的ERα与EGFR互作关系在乳腺癌三苯氧胺耐药中的作用

目的:探讨雌激素受体(ER)与表皮生长因子受体(EGFR)的关系及其在乳腺癌三苯氧胺(TAM)治疗耐药中的作用与机制。方法:选用TAM治疗敏感(TAM-S)与耐药(TAM-R)的两种人乳腺癌MCF-7细胞,用免疫沉淀(IP)法检测ERα和EGFR在两种细胞中的结合情况,以及c-Src与前两者的结合情况,并用Western blot法检测两种细胞中c-Src的磷酸化水平;c-Src阻滞剂PP2处理两种细胞后,IP法再次检测ERα和EGFR结合情况。结果:ERα和EGFR在两种细胞中均以复合物的形式结合,但在TAM-R细胞中的结合量明显高于TAM-S细胞(P<0.05);c-Src与ERα、EGFR在两种细胞中均以复合物的形式结合,其磷酸化水平在TAM-R细胞中明显高于TAM-S细胞(P<0.05);PP2阻断c-Src的活性后,两种细胞中ERα和EGFR结合量均降低,且在TAM-R细胞中的降低程度明显大于TAM-S细胞(P<0.05)。结论:ERα和EGFR之间存在结合的现象,且两者的互作关系可能在乳腺癌TAM治疗耐药中起了重要作用,而c-Src的活化(磷酸化)是可能是介导了两者结合的关键机制。