转录因子MAZ对c1orf109基因转录表达调控的体外研究

目的:本文旨在研究转录因子Myc相关锌指蛋白(MAZ)在体外对人类1号染色体开放阅读框109(c1orf109)基因的转录表达调控。方法:体外条件下,采用凝胶电泳迁移实验筛选c1orf109基因启动子区MAZ的结合位点,并利用本室构建的由c1orf109启动子驱动的增强型绿色荧光蛋白报告载体与MAZ和转录因子特化蛋白1(Sp1)的表达质粒共转染He La细胞,24 h后,用激光共聚焦显微镜和流式细胞术检测c1orf109基因的转录表达情况。结果:c1orf109启动子区可与MAZ结合,且有与Sp1共享的结合位点;MAZ与Sp1皆可抑制c1orf109的转录表达,且Sp1的抑制作用大于MAZ(P<0.05)。结论:MAZ与Sp1两个转录因子共同调控c1orf109基因在生理及病理条件的表达,且调控方向一致。

C1orf194基因Ile122Asn突变致腓骨肌萎缩症的病理机制

目的初步探讨C1orf194基因内Ile122Asn突变导致常染色体显性遗传腓骨肌萎缩症(CMT)的分子机制。方法通过PCR克隆构建人野生C1orf194基因和携带Ile122Asn突变的C1orf194基因,分别导入人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞内进行表达,通过稳定同位素标记氨基酸免疫沉淀分析和液相色谱确定候选相互作用蛋白,通过免疫印迹分别确定与野生c1orf194蛋白或突变c1orf194蛋白相互作用的蛋白。结果在SH-SY5Y细胞内野生c1orf194蛋白与TBA1C、AACT及HSPA4L等3种蛋白存在相互作用,携带Ile122Asn突变的c1orf194蛋白则失去与这3种蛋白的相互作用。结论C1orf194基因内的Ile122Asn突变影响c1orf194蛋白与相互作用蛋白的结合,或许影响其调控的分子路径,使患者表现为常染色体显性遗传腓骨肌萎缩症,这对进一步研究c1orf194蛋白功能有重要意义。

2型糖尿病患者二甲双胍相关基因SLC47A1和C11orf65多态性研究

目的研究2型糖尿病患者的SLC47A1和C11orf65两个基因位点的基因多态性。方法以2016年11月-2019年1月新泰市人民医院就诊的2型糖尿病进行二甲双胍基因检测的95例患者为研究对象,采用原位杂交荧光染色分析技术检测SLC47A1和C11orf65的基因多态性。结果SLC47A1基因位点基因型频率由高到低为GA型、AA型和GG型,A等位基因频率高于G等位基因,基因型的构成比有性别差异(P<0.05),G等位基因与A等位基因频率比较上无明显性别差异(P>0.05);C11orf65基因位点基因型频率由高到低为AC型、CC型和AA型,C等位基因频率高于A等位基因,基因型的构成比性别差异不明显(P>0.05),且C等位基因与A等位基因频率比较上无明显性别差异(P>0.05)。结论SLC47A1基因位点基因型构成比性别差异明显,G等位基因与A等位基因频率比较上无明显性别差异;C11orf65基因位点基因型构成比性别差异不明显,C等位基因与A等位基因频率比较上无明显性别差异。

羊口疮病毒甘肃流行株的分离鉴定及其ORF059基因和ORF109基因的序列分析

利用羊睾丸(lamp testicles,LT)细胞从采自甘肃省玉门市疑似羊口疮病羊的病料中分离病毒,并对其进行培养和PCR鉴定;结果,从疑似病料中成功分离到1株流行于我国甘肃省的羊口疮病毒,遂将其命名为ORFV/GSYM/2012/China。然后对分离株的ORF059基因(编码F1L蛋白)和ORF109基因(编码EEV糖蛋白)进行克隆、测序并进行遗传进化分析和编码蛋白的二级结构预测。序列分析表明,F1L基因长1 017bp,共编码338个氨基酸,与ORFV Jilin、Jilin-Nongan、Shanxi、GanS和NA1-11株的核苷酸同源性分别为97.9%、99.8%、96.2%、97.3%和99.9%。遗传进化分析结果表明,此分离株与我国Jilin-Nongan、GanS株,意大利Ov-7、Ov-C2株及新西兰NZ2分离株的亲缘性较近,表明不同地区分离毒株的F1L基因差异不大。该分离毒株ORF109基因长495bp,编码164个氨基酸。ORF109基因序列分析表明,此分离株与德国D1701株的相似性最高;经预测,ORF109蛋白的二级结构中含1个跨膜区,属于亲水性膜蛋白。

CDHR1和C2orf71基因新变异相关的视锥视杆细胞营养不良

目的观察并分析视锥视杆细胞营养不良(CORD)患者基因突变和临床表型。方法家系调查研究。2021年2月于宁夏回族自治区人民医院宁夏眼科医院就诊的2个CORD家系中的2例患者及其家系成员6名纳入研究。患者分别来自2个无血缘关系家系,均为先证者。采集病史并行最佳矫正视力(BCVA)、色觉、裂隙灯显微镜、间接检眼镜、眼底彩色照相、光相干断层扫描(OCT)、自身荧光(AF)、荧光素眼底血管造影(FFA)、视网膜电图(ERG)检查。采集患者及其父母外周静脉血,提取全基因组DNA,行Trio全基因组外显子测序,对可疑致病突变位点进行Sanger验证及家系共分离检测。根据遗传规律,分析家族史,确立其遗传类型。参照美国医学遗传学和基因组学学会(ACMG)指南和4个在线工具对突变位点致病性进行分析。结果2个家系均为常染色体隐性遗传CORD。家系1先证者,女,49岁。双眼视力下降伴畏光9年,夜盲4年。右眼、左眼BCVA分别为0.03、0.06。ERG检查,双眼暗适应0.01 b波和暗适应3.0 a、b波振幅轻度降低,明适应3.0 a、b波振幅重度降低。家系2先证者,男,30岁。双眼视力下降4年;否认夜盲史。右眼、左眼BCVA分别为0.3、0.2。ERG检查,双眼暗适应0.01 b波和暗适应3.0 a、b波振幅轻度降低,明适应3.0 a、b波振幅重度降低。双眼视盘颜色淡红,黄斑区萎缩,中心凹反光消失,周边视网膜点状色素沉着。2例患者眼底主要改变为黄斑区萎缩。基因检测结果显示,家系1先证者携带CDHR1基因c.439-2A>G(M1)、c.676delT(p.F226fs)(M2)复合杂合突变;其父亲、母亲分别携带M2、M1杂合突变。家系2先证者携带C2orf71基因c.2665dupC(p.L889fs)(M3)、c.878T>C(p.L293P)(M4)复合杂合突变;其父亲、母亲分别携带M4、M3杂合突变。根据ACMG指南和在线工具分析结果,提示4个突变均为新的致病性变异。结论CDHR1基因M1、M2和C2orf71基因M3、M4是CORD新的致病性突变位点;患者均表现为视力下降伴有黄斑区萎缩的临床表型。