MTT法检测Rh-bFGF提高Balb/c3T3细胞酶活性及促细胞增殖作用

以Ｂａｌｂ／ｃ３Ｔ３细胞为靶细胞，采用体外细胞培养方法，观察重组人碱性成纤维细胞生长因子的促分裂和提高酶活性作用。结果发现：重组人碱性成纤维细胞生长因子提高Ｂａｌｂ／ｃ３Ｔ３细胞酶活性的最佳作用浓度为６．２５ｎｇ／ｍＬ（μｇ／Ｌ），而促分裂增殖的最佳作用浓度为１００ｎｇ／ｍＬ（μｇ／Ｌ）。两者分别与应的对照组比较Ｐ＜０．０１，具有统计学意义。从而证实了重组人碱性成纤维细胞生长因子具有促分裂和增强酶活性的作用。

青石棉诱导BALB／c3T3细胞恶性转化

青石棉诱导ＢＡＬＢ／ｃ３Ｔ３细胞恶性转化刘云岗，刘玉清，周谷，彭文珍，汪洋，董奇男，李寿祺，詹承烈（成都华西医科大学劳动卫生学博士研究生６１００４１卫生毒理研究室，分子生物学研究室，劳动卫生教研室）用云南姚安青石棉，以０．２─２０μｇ／ｃｍ２剂量测试...

Balb/c3T3细胞体外转化实验方案的优化

目的:优化Balb/c3T3细胞转化实验。方法:将不同浓度的血清及改良的培养基分别作用于鼠成纤维细胞Balb/c3T3,选择不同的时间点,通过细胞形态学观察和集落实验,对小鼠成纤维细胞Balb/c3T3的致癌效果的分析。结果:改良的操作程序和培养基,培养的细胞-细胞转化时间缩短,表现出更强的集落形成能力,显示出高度的成瘤性。结论:改良的操作程序和培养基的方法可缩短实验周期,节省人、财、物力。

Balb/c3T3细胞转化电化学试验方法的研究

目的:利用伏安行为的电化学方法研究Balb/c3T3细胞转化过程中嘌呤核苷酸代谢变化规律,确定细胞转化的电化学检测指标。方法:利用MNNG与TPA诱导Balb/c3T3细胞体外进行转化,同时利用ITEs进一步加速转化效率,在不同时间点对转化的细胞进行细胞形态学观察、软琼脂克隆实验及伏安行为电化学检测,电化学法跟踪BALB/c3T3细胞转化过程中嘌呤含量的变化。结果:实验第10天开始,转化细胞的嘌呤的信号峰值明显高于对照组(DMSO组),细胞内嘌呤含量增多,同时细胞增殖加速。ITEs可缩短转化时间。结论:嘌呤可作为电化学法检测的生物标记物,伏安行为的的电化学法可以快速检测体外细胞发生恶性转化的过程,与传统方法相比,缩短了检测周期,有望成为一种简单、快速、灵敏、低成本的细胞转化检测新手段。

八氯二丙醚对BALB/c3T_3细胞恶性转化的研究

目的 检测八氯二丙醚 (S2 )的细胞恶性转化作用。方法 采用传代细胞系BALB/c3T3 细胞进行细胞毒性实验确定转化实验的剂量范围 ,再进行细胞转化实验并对转化细胞进行恶性行为鉴定。结果 S2 各剂量组均能诱发该细胞出现典型的细胞转化灶 ,并呈剂量 -反应关系 ;软琼脂培养证明转化细胞为恶性转化细胞。结论 S2 具有致BALB/c3T3 细胞恶性转化作用 ,有必要进行深入研究。

牛血小板衍化生长因子的生物学活性研究——对BALB/c 3T3细胞DNA合成的影响

目的：检测牛血小板衍化生长因子的致丝裂活性。方法：以ＢＡＬＢ／ｃ３Ｔ３细胞为靶细胞，利用３Ｈ－ＴｄＲ掺入合成ＤＮＡ的方法。结果：５ｎｇ／ｍｌ牛血小板衍化生长因子可明显促进处于静止状态的ＢＡＬＢ／ｃ３Ｔ３细胞ＤＮＡ合成，３０ｎｇ／ｍｌ浓度使细胞ＤＮＡ合成达最高峰，并在２４ｈ最为显著；热处理对其致丝裂活性无影响；而经２－巯基乙醇处理后其活性基本丧失。结论：牛血小板衍化生长因子具有良好的致丝裂活性，耐热，２－巯基乙醇可使其丧失活性。

芪白平肺胶囊可降低慢性阻塞性肺疾病钙调磷酸酶和活化T细胞核因子c3(NFATc3)的水平

目的通过建立慢性阻塞性肺疾病(COPD)痰瘀阻肺证大鼠模型,观察益气化痰祛瘀方-芪白平肺胶囊(QPC)对钙调磷酸酶(Ca N)-活化T细胞核因子c3(NFATc3)信号分子表达的影响,探讨QPC对COPD肺血管重构的干预机制。方法雄性SD大鼠60只,随机分为正常组、模型组、高、中、低剂量QPC组和硝苯地平组。采用游泳、烟熏、低氧,建立COPD痰瘀阻肺证大鼠模型;观察QPC对肺功能参数和大鼠的肺血管形态学的影响;通过实时荧光定量PCR检测大鼠肺组织Ca N和NFATc3mRNA的表达、Western blot法检测Ca N和NFATc3的蛋白表达。结果模型组大鼠第0.3秒用力呼气容量(FEV0.3),用力肺活量(FVC)和FEV0.3/FVC等肺功能参数值显著下降,高、中、低剂量QPC组和硝苯地平组的肺功能参数值均有不同程度的上升。模型组大鼠肺血管的管壁增厚,代偿性肺气肿形成。高、中、低剂量QPC组和硝苯地平组也存在血管壁增厚、肺泡扩张,但程度较轻。与正常组相比,模型组肺组织Ca N和NFATc3的mRNA和蛋白表达水平显著增加;与模型组相比,高、中、低剂量QPC以及硝苯地平组的Ca N和NFATc3的mRNA和蛋白表达量显著减低。结论 QPC可降低COPD肺组织Ca N、NFATc3的水平。

桃红四物汤影响ERK磷酸化表达延缓小鼠胚胎成纤维细胞生长的机理研究

目的探讨活血化瘀名方桃红四物汤(THSWD)减缓小鼠胚胎成纤维细胞(BALB/c 3T3,3T3)生长和增殖可能的分子靶点及信号通路。方法在3T3细胞内分别过表达碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、沉默bFGF以及用PD98059阻断细胞内ERK上游信号通路;然后观察桃红四物汤对细胞活性,细胞周期,bFGF、ERK1/2及p-ERK1/2基因或蛋白表达的影响。桃红四物汤含药血清培养基浓度为20%,作用时间48 h。结果与正常对照组比较,桃红四物汤组的3T3细胞活性降低(P<0.01);G0/G1期占比升高(P<0.05,P<0.01),S期占比降低(P<0.05,P<0.01);bFGF和ERK1/2基因表达降低(P<0.01);bFGF和p-ERK1/2蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),ERK1/2蛋白表达的差异无统计学意义(P>0.05)。与bFGF过表达组比较,bFGF过表达+桃红四物汤组的3T3细胞活性降低(P<0.05);G0/G1期占比升高(P<0.01),S期占比的差异无统计学意义(P>0.05);bFGF和ERK1/2基因表达降低(P<0.01);bFGF和p-ERK1/2蛋白表达降低(P<0.01),ERK1/2蛋白表达的差异无统计学意义(P>0.05)。与PD98059组比较,PD98059+桃红四物汤组的3T3细胞活性降低(P<0.05);G0/G1期占比升高(P<0.01),S期占比降低(P<0.01);ERK1/2基因表达的差异无统计学意义(P>0.05);ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表达的差异无统计学意义(P>0.05)。由于bFGF基因的结构独特性及沉默引物设计的方法学缺陷,3T3细胞内未能沉默掉bFGF。结论桃红四物汤在3T3细胞中首先降低bFGF,进而降低ERK信号通路的标志性蛋白p-ERK的表达,减缓3T3细胞的增殖速度。

aFGF特异性结合噬菌体的筛选与鉴定

利用噬菌体7肽库筛选出aFGF特异性结合噬菌体并鉴定其活性.经过四轮淘选,ELISA检测结合活性,然后挑取单克隆测序.竞争抑制试验验证阳性克隆与aFGF的结合活性.MTT法检测阳性噬菌体对aFGF诱导的Balb/c3T3细胞增殖的影响.一系列实验结果显示,筛选出的P8号阳性噬菌体与aFGF结合的特异性很高,对aFGF诱导的Balb/c3T3细胞增殖具有抑制作用.通过本实验,获得了具有与aFGF高度结合的噬菌体短肽,可为抗肿瘤新药提供重要基础.

纳米二氧化钛对小鼠成纤维细胞的毒性作用

目的探究纳米二氧化钛对小鼠成纤维（Balb/3T3）细胞的毒性作用。方法将处于对数生长期的Balb/3T3细胞暴露于含终浓度分别为0（对照）、1、10、50、100μg/ml纳米二氧化钛颗粒（粒径分别为30、50、100 nm）的DMEM完全培养基中培养24 h。采用CCK-8法测定细胞活性,通过测定细胞培养液上清中LDH的活力来检测细胞膜的完整性,并通过测定细胞内ROS含量来探讨细胞毒性的产生机制。结果与对照组比较,10~100μg/ml不同粒径的纳米二氧化钛染毒组Balb/c3T3细胞的存活率均较低,差异有统计学意义（P〈0.05）;且随着纳米二氧化钛染毒浓度的升高和纳米二氧化钛粒径的下降,Balb/c3T3细胞的存活率呈下降趋势。与对照组比较,10~100μg/ml不同粒径的纳米二氧化钛染毒组Balb/c3T3细胞培养液上清中LDH的活力和ROS的含量均较高,差异有统计学意义（P〈0.05）;且随着纳米二氧化钛染毒浓度的升高,Balb/c3T3细胞培养液上清中LDH的活力和ROS的含量均呈上升趋势。结论纳米二氧化钛对小鼠成纤维细胞的毒性作用呈明显的剂量效应和尺寸效应,纳米二氧化钛诱导Balb/c3T3细胞产生大量活性氧（ROS）可能是导致其产生细胞毒性的主要原因。

纳米钴对小鼠胚胎成纤维细胞的毒性

目的探讨纳米钴对小鼠胚胎成纤维细胞(Balb/c3T3)的毒性作用。方法将处于对数生长期的Balb/c3T3细胞暴露于分别暴露于30、50、100 nm的0(对照)、1、5、10、50、100μg/ml纳米钴培养液培养24 h。测定细胞活性、培养液上清中LDH的活力及细胞内ROS的含量。结果与对照组比较,10~100μg/ml的30 nm纳米钴染毒组和50、100μg/ml的50、100 nm纳米钴染毒组Balb/3T3细胞的存活率均较低,差异有统计学意义(P<0.05);且随着纳米钴染毒浓度的升高,不同粒径纳米钴染毒Balb/3T3细胞的存活率均呈下降趋势。与对照组比较,10~100μg/ml的30、50、100 nm纳米钴染毒组Balb/3T3细胞培养液中的LDH活力及细胞内ROS的含量均较高,差异均有统计学意义(P<0.05);且随着纳米钴染毒浓度的升高,不同粒径纳米钴染毒Balb/3T3细胞培养液中的LDH活力及细胞内ROS的含量均呈上升趋势。结论纳米钴对小鼠成纤维细胞的毒性作用与暴露剂量及颗粒直径有关,暴露剂量越大、颗粒直径越小,毒性越大。

不同浓度不同粒径的纳米钴对小鼠成纤维细胞的遗传毒性的研究

目的探讨不同粒径、不同浓度的纳米钴对鼠成纤维细胞的遗传毒性效应。方法分别用含有1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml浓度的30nm、50nm和100nm的钴悬液处理培养的鼠成纤维细Balb/c3T3,24h后,采用单细胞凝胶电泳实验方法检测DNA损伤,评价遗传毒性效应。结果与对照组比较,30nm、50nm和100nm的钴颗粒,当浓度大于1μg/ml时均可对细胞产生遗传毒性效应,差异及显著(P<0.01),且随着浓度的增加毒性作用增强。结论纳米钴对小鼠成纤维细胞具有遗传毒性作用,且遗传毒性与纳米钴浓度呈剂量依赖效应。

不同浓度不同时间的纳米钴对小鼠成纤维细胞的遗传毒性的研究

目的探讨同一粒径、不同浓度的纳米钴在4h、24h和48h对鼠成纤维细胞的遗传毒性效应。方法分别用含有1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml浓度的30nm的钴悬液处理培养的鼠成纤维细Balb/c3T3,4h、24h、48h后,采用单细胞凝胶电泳实验方法检测DNA损伤,评价遗传毒性效应。结果与对照组比较,30nm的钴颗粒,当浓度大于1μg/ml时均可对细胞产生遗传毒性效应,差异及显著(P<0.01),且随着浓度和时间的增加毒性作用增强。结论纳米钴对小鼠成纤维细胞具有遗传毒性作用,且遗传毒性与纳米钴浓度呈剂量依赖效应和时间依赖效应。

基于网络药理学技术研究桃红四物汤延缓成纤维细胞生长的分子靶标

桃红四物汤(Taohong Siwu Decoction,THSWD)作为活血化瘀方,对于延缓肾脏纤维化的进程有一定作用,但作为包含诸多单体成分的中药复方,应对复杂的病理过程,其研究方法的探讨和作用靶点的找寻一直是该方向的研究热点。活血化瘀法在阻滞IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)纤维化进程方面有一定的临床疗效,但作用机制尚不明确。该研究先借助网络药理学方法,研究THSWD干预IgAN纤维化进程的有效活性成分,作用靶点及分子作用机制,在此基础上,通过离体实验,验证THSWD作用于3T3细胞对ERK因子表达的影响。通过中药系统药理学技术平台收集THSWD中的活性成分及作用靶点,筛选得到木犀草素、槲皮素等61个有效活性成分及240个作用靶点,与CTD数据库查找的IgAN相关靶点相交得到185个靶点。利用Cytoscape软件与STRING数据库构建"桃红四物汤-活性成分-靶点"网络和蛋白互作网络,筛选69个核心靶点;通过DAVID对核心靶点的GO富集分析和KEGG通路分析及进行细胞实验,结果表明,ERK因子是THSWD干预IgAN重要的因子,THSWD可以显著降低细胞活性、ERK1/2 mRNA表达、p-ERK1/2蛋白表达。该研究提示,THSWD可能通过影响ERK因子及其磷酸化水平,来延缓成纤维细胞生长。