目的:探讨微小RNA-302c(miR-302c)在肺癌组织中的表达,以及对肺癌侵袭和迁移的影响和作用机制。方法:在线分析GEO数据库中GSE19945和GSE136043两组肺癌数据集中miR-302c的表达情况,通过Human Protein Atlas数据库研究CREB1表达情况;双...目的:探讨微小RNA-302c(miR-302c)在肺癌组织中的表达,以及对肺癌侵袭和迁移的影响和作用机制。方法:在线分析GEO数据库中GSE19945和GSE136043两组肺癌数据集中miR-302c的表达情况,通过Human Protein Atlas数据库研究CREB1表达情况;双荧光素酶实验证明miR-302c和CREB1的关系。正常组细胞不加任何药物,对照组细胞转染miR-302cmimic-NC,实验组细胞转染miR-302c-mimic。通过Transwell小室检测细胞的侵袭与迁移能力,通过小管形成检测细胞的血管生成能力,通过Western blot检测各组细胞中CREB1、p-P53、p-P21的表达水平。结果:生物信息分析显示,与正常组织相比,miR-302c在肺癌组织、肺癌淋巴转移组织中的表达明显降低,肺癌组织中CREB1的表达明显升高;双荧光素酶实验证明miR-302c靶向调控CREB1的表达;与正常组相比,实验组迁移和侵袭的细胞数量、小管生成的数量明显下降,实验组中CREB1的表达明显下降,p-P53、p-P21的表达明显升高(均P<0.05)。结论:miR-302c在肺癌组织表达降低,过表达miR-302c后能明显抑制肺癌细胞的侵袭与转移,这可能与抑制靶基因CREB1的表达,以及激活P53信号通路有关。展开更多
目的:探索顺铂诱导乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)再激活的机制。方法:将稳定表达HBV的肝癌细胞系HepAD38分为2组,即磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)对照组及顺铂(Cisplatin)处理组,分别检测cAMP应答元件结合蛋白质-...目的:探索顺铂诱导乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)再激活的机制。方法:将稳定表达HBV的肝癌细胞系HepAD38分为2组,即磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)对照组及顺铂(Cisplatin)处理组,分别检测cAMP应答元件结合蛋白质-1(cAMP responsive element binding protein 1,CREB1)、乙肝病毒蛋白表达(HBsAg、HBcAg)及病毒复制水平(HBV DNA、HBV mRNA);同样在成功构建稳定敲低CREB1(shCREB1)的HepAD38细胞中,同正常表达HBV的肝癌细胞系HepAD38进行对照,检测经顺铂处理后的HBV复制水平(HBV DNA、HBV m RNA)及蛋白表达水平(HBsAg、HBcAg)。结果:稳定表达HBV的肝癌细胞系HepAD38中,Western blot检测显示,与PBS对照组相比,Cisplatin处理组中CREB1相对表达量为1.355±0.049(P=0.010);HBsAg蛋白相对表达量为1.679±0.060(P=0.003);HBcAg蛋白相对表达量为1.488±0.047(P=0.005)。qRTPCR结果显示经顺铂处理后,HBV DNA绝对表达量为249.600±54.400(P=0.006);HBV m RNA相对表达量为3.084±0.256(P=0.000);以上结果表明在HepAD38细胞中乙肝病毒蛋白表达水平以及病毒复制水平较PBS对照组明显上调,均具有统计学差异;与此同时,选择转入shCREB1质粒的HepAD38细胞,即shCREB1细胞,以及转入对照质粒且能正常表达CREB1的HepAD38细胞,即shControl细胞,2种细胞组内均设置PBS对照组和Cisplatin处理组,分别检测乙肝病毒蛋白表达以及病毒复制水平。qRT-PCR结果显示,HBV DNA在shControl细胞的Cisplatin处理组相对表达量为518.300±3.458;而在shCREB1细胞的Cisplatin处理组相对表达量为265.300±3.125 (P=0.000);HBV m RNA在shControl细胞的Cisplatin处理组相对表达量为2.713±0.318;而在shCREB1细胞的Cisplatin处理组相对表达量为1.263±0.056(P=0.000)。Western blot分析显示shControl细胞的Cisplatin处理组中的HBsAg、HBcAg相对表达量分别为1.254±0.001、2.238±0.041;而在shCREB1细胞的Cisplatin处理组中的HBsAg、HBcAg相对表达量分别为1.121±0.036(P=0.021)、1.681±0.015(P=0.000)。结论:顺铂可以通过CREB1促进乙肝病毒复制水平以及蛋白表达水平上调。展开更多
目的研究miR-483/CREB1轴在桃叶珊瑚苷(aucubin,AU)抑制人退行性髓核(nucleus pulposus,NP)细胞胞外基质(extracellular matrix,ECM)降解中的功能作用。方法AU处理人退行性NP细胞后,检测细胞活性、ECM相关蛋白及cAMP反应元件结合蛋白1(c...目的研究miR-483/CREB1轴在桃叶珊瑚苷(aucubin,AU)抑制人退行性髓核(nucleus pulposus,NP)细胞胞外基质(extracellular matrix,ECM)降解中的功能作用。方法AU处理人退行性NP细胞后,检测细胞活性、ECM相关蛋白及cAMP反应元件结合蛋白1(c AMP responsive element binding protein 1,CREB1)的表达。实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q PCR)和Western blot检测miR-483表达变化对CREB1丰度的影响;双荧光素酶报告实验(luciferase,LUC)检测miR-483和CREB1-3’-UTR的靶向结合;CREB1过表达载体和(或)miR-483 mimics共转染后,AU处理,检测CREB1及ECM相关蛋白的表达。结果AU可显著增强NP细胞活性(P=0.0004),抑制ECM降解酶基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)、血小板反应蛋白解整合素金属肽酶-5(a disintegrin and metalloproteinase domain with thrombospondin motif-5,ADAMTS-5)与CREB1的表达,促进胶原蛋白Ⅱ型胶原α1(collagen type II alpha 1 chain,COL2A1)和miR-483的表达(P<0.001)。miR-483过表达可抑制CREB1的表达(P<0.0001),LUC实验表明miR-483可与CREB1-3’-UTR靶向结合。功能实验结果表明CREB1可削弱AU对NP细胞ECM的降解的抑制作用,而miR-483可部分逆转CREB1对AU的抑制作用。结论AU诱导NP细胞表达miR-483,进而抑制CREB1的表达,增强NP细胞的活性,抑制ECM的降解。展开更多
Objective： To investigate the effect and molecular mechanism of Tiantai No.1 （天泰1号）, a compound Chinese herbal preparation, for the prevention and reduction of neurotoxicity induced by betaamyloid peptides （Ab...Objective： To investigate the effect and molecular mechanism of Tiantai No.1 （天泰1号）, a compound Chinese herbal preparation, for the prevention and reduction of neurotoxicity induced by betaamyloid peptides （Abeta） in vitro and its effects on nuclear factor-κB （NF-κB） and cAMP responsive element-binding protein （CREB） pathways using the gene transfection technique. Methods： B104 neuronal cells were used to examine the effects of Tiantai No.1 on lowering the neurotoxicity induced by Abeta. The cells were pre-treated with Tiantai No.1 at doses of 50, 100,150, or 200μg/mL respectively for 3 days and co-treated with Tiantai No.1 and beta-amyloid peptidel-40 （Aβ 1-40, 10 μmol/L） for 48 h or post-treated with Tiantai No.1 for 48 h after the cells were exposed to beta-amyloid peptides25-35 （Aβ 25-35） for 8 h. In gene transfection assays, cells were treated with Tiantai No.1 at 50 μg/mL and 150μg/mL for 5 days or co-treated with Tiantai No.1 and A 13 1-40 （5 μmo/L） for 3 days after electroporation for the evaluation of NF- κB and CREB expression. Results： Pre-treating and co-treating B104 neuronal cells with Tiantai No.1 lowered the neurotoxicity induced by Abeta, and post-treating with Tiantai No.1 reduced or blocked B104 neuronal apoptotic death induced by Abeta （P〈0.05, P〈0.01）. With a dose-dependent relationship, the same treatments increased the expression of NF-κB or CREB in B104 neuronal cells （P〈0.05, P〈0.01）. Meanwhile, Tiantai No.1 reduced Aβ-40 induced inhibition on NF-κB expression （P〈0.01）. Conclusions： Tiantai No.1 can protect neurons against the neurotoxicity induced by Abeta. The neuroprotective mechanisms may be associated with the activation of NF-κB and cAMP cellular signal pathways.展开更多
文摘目的:探讨微小RNA-302c(miR-302c)在肺癌组织中的表达,以及对肺癌侵袭和迁移的影响和作用机制。方法:在线分析GEO数据库中GSE19945和GSE136043两组肺癌数据集中miR-302c的表达情况,通过Human Protein Atlas数据库研究CREB1表达情况;双荧光素酶实验证明miR-302c和CREB1的关系。正常组细胞不加任何药物,对照组细胞转染miR-302cmimic-NC,实验组细胞转染miR-302c-mimic。通过Transwell小室检测细胞的侵袭与迁移能力,通过小管形成检测细胞的血管生成能力,通过Western blot检测各组细胞中CREB1、p-P53、p-P21的表达水平。结果:生物信息分析显示,与正常组织相比,miR-302c在肺癌组织、肺癌淋巴转移组织中的表达明显降低,肺癌组织中CREB1的表达明显升高;双荧光素酶实验证明miR-302c靶向调控CREB1的表达;与正常组相比,实验组迁移和侵袭的细胞数量、小管生成的数量明显下降,实验组中CREB1的表达明显下降,p-P53、p-P21的表达明显升高(均P<0.05)。结论:miR-302c在肺癌组织表达降低,过表达miR-302c后能明显抑制肺癌细胞的侵袭与转移,这可能与抑制靶基因CREB1的表达,以及激活P53信号通路有关。
文摘目的:探索顺铂诱导乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)再激活的机制。方法:将稳定表达HBV的肝癌细胞系HepAD38分为2组,即磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)对照组及顺铂(Cisplatin)处理组,分别检测cAMP应答元件结合蛋白质-1(cAMP responsive element binding protein 1,CREB1)、乙肝病毒蛋白表达(HBsAg、HBcAg)及病毒复制水平(HBV DNA、HBV mRNA);同样在成功构建稳定敲低CREB1(shCREB1)的HepAD38细胞中,同正常表达HBV的肝癌细胞系HepAD38进行对照,检测经顺铂处理后的HBV复制水平(HBV DNA、HBV m RNA)及蛋白表达水平(HBsAg、HBcAg)。结果:稳定表达HBV的肝癌细胞系HepAD38中,Western blot检测显示,与PBS对照组相比,Cisplatin处理组中CREB1相对表达量为1.355±0.049(P=0.010);HBsAg蛋白相对表达量为1.679±0.060(P=0.003);HBcAg蛋白相对表达量为1.488±0.047(P=0.005)。qRTPCR结果显示经顺铂处理后,HBV DNA绝对表达量为249.600±54.400(P=0.006);HBV m RNA相对表达量为3.084±0.256(P=0.000);以上结果表明在HepAD38细胞中乙肝病毒蛋白表达水平以及病毒复制水平较PBS对照组明显上调,均具有统计学差异;与此同时,选择转入shCREB1质粒的HepAD38细胞,即shCREB1细胞,以及转入对照质粒且能正常表达CREB1的HepAD38细胞,即shControl细胞,2种细胞组内均设置PBS对照组和Cisplatin处理组,分别检测乙肝病毒蛋白表达以及病毒复制水平。qRT-PCR结果显示,HBV DNA在shControl细胞的Cisplatin处理组相对表达量为518.300±3.458;而在shCREB1细胞的Cisplatin处理组相对表达量为265.300±3.125 (P=0.000);HBV m RNA在shControl细胞的Cisplatin处理组相对表达量为2.713±0.318;而在shCREB1细胞的Cisplatin处理组相对表达量为1.263±0.056(P=0.000)。Western blot分析显示shControl细胞的Cisplatin处理组中的HBsAg、HBcAg相对表达量分别为1.254±0.001、2.238±0.041;而在shCREB1细胞的Cisplatin处理组中的HBsAg、HBcAg相对表达量分别为1.121±0.036(P=0.021)、1.681±0.015(P=0.000)。结论:顺铂可以通过CREB1促进乙肝病毒复制水平以及蛋白表达水平上调。
文摘目的研究miR-483/CREB1轴在桃叶珊瑚苷(aucubin,AU)抑制人退行性髓核(nucleus pulposus,NP)细胞胞外基质(extracellular matrix,ECM)降解中的功能作用。方法AU处理人退行性NP细胞后,检测细胞活性、ECM相关蛋白及cAMP反应元件结合蛋白1(c AMP responsive element binding protein 1,CREB1)的表达。实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q PCR)和Western blot检测miR-483表达变化对CREB1丰度的影响;双荧光素酶报告实验(luciferase,LUC)检测miR-483和CREB1-3’-UTR的靶向结合;CREB1过表达载体和(或)miR-483 mimics共转染后,AU处理,检测CREB1及ECM相关蛋白的表达。结果AU可显著增强NP细胞活性(P=0.0004),抑制ECM降解酶基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)、血小板反应蛋白解整合素金属肽酶-5(a disintegrin and metalloproteinase domain with thrombospondin motif-5,ADAMTS-5)与CREB1的表达,促进胶原蛋白Ⅱ型胶原α1(collagen type II alpha 1 chain,COL2A1)和miR-483的表达(P<0.001)。miR-483过表达可抑制CREB1的表达(P<0.0001),LUC实验表明miR-483可与CREB1-3’-UTR靶向结合。功能实验结果表明CREB1可削弱AU对NP细胞ECM的降解的抑制作用,而miR-483可部分逆转CREB1对AU的抑制作用。结论AU诱导NP细胞表达miR-483,进而抑制CREB1的表达,增强NP细胞的活性,抑制ECM的降解。
文摘Objective： To investigate the effect and molecular mechanism of Tiantai No.1 （天泰1号）, a compound Chinese herbal preparation, for the prevention and reduction of neurotoxicity induced by betaamyloid peptides （Abeta） in vitro and its effects on nuclear factor-κB （NF-κB） and cAMP responsive element-binding protein （CREB） pathways using the gene transfection technique. Methods： B104 neuronal cells were used to examine the effects of Tiantai No.1 on lowering the neurotoxicity induced by Abeta. The cells were pre-treated with Tiantai No.1 at doses of 50, 100,150, or 200μg/mL respectively for 3 days and co-treated with Tiantai No.1 and beta-amyloid peptidel-40 （Aβ 1-40, 10 μmol/L） for 48 h or post-treated with Tiantai No.1 for 48 h after the cells were exposed to beta-amyloid peptides25-35 （Aβ 25-35） for 8 h. In gene transfection assays, cells were treated with Tiantai No.1 at 50 μg/mL and 150μg/mL for 5 days or co-treated with Tiantai No.1 and A 13 1-40 （5 μmo/L） for 3 days after electroporation for the evaluation of NF- κB and CREB expression. Results： Pre-treating and co-treating B104 neuronal cells with Tiantai No.1 lowered the neurotoxicity induced by Abeta, and post-treating with Tiantai No.1 reduced or blocked B104 neuronal apoptotic death induced by Abeta （P〈0.05, P〈0.01）. With a dose-dependent relationship, the same treatments increased the expression of NF-κB or CREB in B104 neuronal cells （P〈0.05, P〈0.01）. Meanwhile, Tiantai No.1 reduced Aβ-40 induced inhibition on NF-κB expression （P〈0.01）. Conclusions： Tiantai No.1 can protect neurons against the neurotoxicity induced by Abeta. The neuroprotective mechanisms may be associated with the activation of NF-κB and cAMP cellular signal pathways.
