cAMP信号通路在5-羟色胺诱导硬壳蛤卵母细胞成熟过程中的作用

采用体外药物诱导的方法,研究了5-羟色胺(5-HT)诱导的硬壳蛤(Mercenariamercenaria)卵母细胞成熟过程中 cAMP 信号通路的作用。结果表明,浓度为0.01～100μM的5-HT 均能够显著地诱导硬壳蛤卵母细胞的成熟,处理60min 时生发泡破裂(GVBD)发生率均可达到70%左右。不同浓度5-HT 的诱导作用表现出时间依赖性,但未表现出浓度依赖效应。咖啡因、茶碱和3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)可以单独抑制卵母细胞的自发成熟,但效果不显著。10mM 的咖啡因和茶碱以及5mM 的 IBMX 能够显著地抑制5-HT的诱导效果。1mM 的 IBMX 对5-HT 的诱导效果影响不显著,1mM 的咖啡因和茶碱能够促进5-HT 的诱导作用,但差异不显著。研究结果表明,cAMP 信号通路参与了5-HT 诱导的硬壳蛤卵母细胞的成熟过程,并且 cAMP 浓度的升高会抑制其成熟,cAMP 信号通路在硬壳蛤卵母细胞的成熟过程中可能起着负调控的作用。

痛泻要方的抗炎镇痛止泻作用及对PGE_2/cAMP信号通路的影响

目的探讨痛泻要方的抗炎镇痛作用机制。方法采用二甲苯致小鼠耳肿胀法观察抗炎作用;采用酶联免疫法测定冰醋酸致痛小鼠血清中前列腺素E2(PGE2)和环磷酸腺苷(cAMP)的浓度;采用大黄致泻法观察止泻作用。结果痛泻要方对二甲苯致小鼠耳肿胀、对冰醋酸致痛小鼠均有显著抑制作用;并明显降低冰醋酸致痛小鼠血清中PGE2和cAMP浓度;能延长小鼠排黑粪的潜伏期,明显减少黑粪排出数量。结论痛泻要方具有良好抗炎镇痛止泻作用,PGE2/cAMP信号通路参与了痛泻要方的抗炎镇痛作用。

氯胺酮与咪达唑仑对巴马猪脑组织cAMP信号通路的影响

为探讨氯胺酮与咪达唑仑对巴马猪中枢神经系统cAMP信号通路的影响及影响情况,研究其中枢作用机制,试验将35头健康巴马猪随机分为对照组、麻醉诱导期、麻醉期和苏醒期四组,在每一期处死取脑组织,用ELISA法分别测定大脑皮质、小脑、丘脑、海马和脑干内cAMP含量。结果:氯胺酮和咪达唑仑分别能够一定程度的降低大脑皮质和小脑中cAMP含量。表明:氯胺酮、咪达唑仑的作用可能通过中枢神经系统cAMP信号通路产生作用,为今后进一步研究提供依据。

外源性硫化氢对吗啡成瘾大鼠海马区cAMP信号通路和学习记忆能力的影响（英文）

目的证实硫化氢能否调节吗啡成瘾大鼠海马区内腺苷酸环化酶通路,改善吗啡成瘾所导致的学习记忆相关的神经行为学影响。方法本实验中,应用Morris水迷宫来评估吗啡成瘾大鼠的学习记忆能力,酶联免疫试剂盒检测海马组织内腺苷酸环化酶、环磷酸腺苷及蛋白激酶A水平,免疫印迹法检测海马内磷酸化的环磷酸腺苷反应元件结合蛋白水平。结果 Morris水迷宫测试结果表明,外源性硫化氢能提高吗啡成瘾大鼠学习记忆能力。酶联免疫及免疫印迹检测结果表明,外源性硫化氢能够明显提高吗啡成瘾大鼠海马组织内腺苷酸环化酶、环磷酸腺苷、蛋白激酶A及磷酸化的环磷酸腺苷反应元件结合蛋白水平。此外,使用胱硫醚β合成酶抑制剂盐酸羥胺的吗啡成瘾大鼠海马组织内腺苷酸环化酶、环磷酸腺苷、蛋白激酶A及磷酸化的环磷酸腺苷反应原件结合蛋白水平与吗啡组大鼠无明显差异。结论外源性硫化氢提高吗啡成瘾大鼠海马组织内腺苷酸环化酶、环磷酸腺苷、蛋白激酶A及磷酸化的环磷酸腺苷反应元件结合蛋白水平,并改善吗啡成瘾大鼠学习记忆能力。

中医药从“阴阳失调”理论调控cAMP/PKA信号通路治疗注意缺陷多动障碍的研究进展

注意缺陷多动障碍(attention deficit hyperactivity disorder,ADHD)难控制、易反复,严重损害儿童运动、情绪及学习生活。ADHD发病机制不明,涉及神经递质传递、神经炎症及氧化应激等,病机本质责之于“阴阳失调”。环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)/蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)信号通路的激活可诱导一系列蛋白底物磷酸化而参与运动及学习记忆的形成,并能促进神经递质合成,抑制促炎因子和活性氧(reactive oxygen species,ROS)的释放而改善ADHD的核心症状,且该通路失调所导致的能量代谢障碍、神经冲动传递异常与中医“阴阳失调”理论不谋而合。中医药通过干预cAMP/PKA信号通路恢复阴阳平衡对儿童ADHD的防治发挥了重要作用,并有效解决了精神类药品在儿童中使用受限的问题。基于ADHD中医药研究的日益增多,本文阐述了cAMP/PKA信号通路的结构、传导及其与ADHD机制、中医病机及辨证分型的关系,归纳了中药复方、单体及单味中药干预cAMP/PKA信号通路治疗ADHD的研究现状,旨在为ADHD的中药药理学研究提供依据,丰富ADHD“阴阳失调”的中医理论内涵,为ADHD的防治提供新见解、新方向。

优化新生脉散方调控β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路对心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响

目的 基于β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路探讨优化新生脉散方对心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响。方法 50只SD大鼠随机分为假手术组10只和手术组40只,采用左冠状动脉前降支结扎法建立心力衰竭大鼠模型。将成模大鼠随机分为模型组、卡托普利组和中药低、高剂量组,每组8只,给药组分别予相应药物灌胃4周。超声心动图测定大鼠左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS),测定心、肺质量并计算心、肺脏器系数,组织病理学观察心肌纤维化程度,ELISA测定血清N端脑利钠肽前体(NT-ProBNP)及心肌组织环磷酸腺苷(cAMP)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)含量,免疫组化检测心肌组织β1肾上腺素受体(β1-AR)、cAMP阳性表达,Western blot检测心肌组织β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路相关蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠LVEF、LVFS明显降低(P<0.01),心、肺脏器系数明显升高(P<0.01);心肌细胞数目减少、胶原容积分数升高、Ⅰ/Ⅲ型胶原纤维占比增加(P<0.01),血清NT-ProBNP和心肌组织ColⅠ、ColⅢ含量明显升高,心肌组织cAMP含量明显降低(P<0.01),心肌组织β1-AR和cAMP阳性表达明显降低(P<0.01),β1-AR、腺苷酸环化酶(AC)1、cAMP、p-蛋白激酶A(PKA)、p-环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)蛋白表达明显降低,p-Smad2、ColⅠ、ColⅢ、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,给药组不同程度增加大鼠LVEF、LVFS,降低心、肺脏器系数;增加心肌细胞数目、减少胶原容积分数和Ⅰ/Ⅲ型胶原纤维占比,下调血清NT-ProBNP和心肌组织ColⅠ、ColⅢ含量,上调cAMP含量,增加心肌组织β1-AR和cAMP阳性表达,上调β1-AR、AC1、cAMP、p-PKA、p-CREB蛋白表达,抑制p-Smad2、ColⅠ、ColⅢ、α-SMA蛋白表达,其中中药高剂量组和卡托普利组作用更明显(P<0.01,P<0.05)。结论 优化新生脉散方能减轻心力衰竭大鼠心肌纤维化程度,改善心肌肥厚和重构,增加左心室收缩力,其机制可能与激活β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路有关。

莫诺苷调节cAMP/PKA信号通路对帕金森病大鼠神经炎症的影响

目的探讨莫诺苷调节环磷腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)信号通路对帕金森病大鼠神经炎症的影响。方法将30只大鼠按照随机数字表法分为正常组、模型组和莫诺苷组,每组各10只。大鼠颈背部皮下注射鱼藤酮构建帕金森病大鼠模型。莫诺苷组灌胃莫诺苷180 mg·kg^(-1)·d^(-1),正常组和模型组灌胃等剂量0.9%氯化钠溶液,各组均每日1次,连续灌胃14 d。采用苏木精-伊红染色观察海马神经元组织学变化;各组大鼠腹腔注射0.5 mg/kg盐酸去水吗啡,诱发大鼠向左侧选择,记录大鼠旋转持续时间和旋转频率;以酶联免疫吸附试验测定脑组织中白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、cAMP和PKA水平;采用实时荧光定量PCR法测定cAMP/PKA mRNA表达;采用蛋白质印迹法测定cAMP/PKA蛋白表达。结果模型组和莫诺苷组大鼠旋转频率和持续时间均高(长)于正常组,莫诺苷组大鼠旋转频率和持续时间均低(短)于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组和莫诺苷组IL-1β、IL-6和TNF-α水平均高于正常组,莫诺苷组IL-1β、IL-6和TNF-α水平均低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组和莫诺苷组cAMP和PKA水平均低于正常组,莫诺苷组cAMP和PKA水平均高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组和莫诺苷组cAMP和PKA mRNA相对表达量均低于正常组,莫诺苷组cAMP和PKA mRNA相对表达量均高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组和莫诺苷组cAMP和PKA蛋白灰度值均低于正常组,莫诺苷组cAMP和PKA蛋白灰度值均高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论莫诺苷可减轻帕金森病大鼠神经炎症,其机制可能与激活cAMP/PKA信号通路有关。

基于神经递质和5-HT_(1A)/Gα_(i/o)/cAMP信号通路研究黄连温胆汤对失眠大鼠的治疗作用及机制

目的研究黄连温胆汤对失眠大鼠的行为学指标、神经递质水平及5-HT_(1A)/Gα_(i/o)/cAMP信号通路的影响,探讨其对失眠大鼠的治疗作用及机制。方法将SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、地西泮组(2 mg·kg^(-1))及黄连温胆汤低、高剂量组(5.85、11.70 g·kg^(-1))。黄连温胆汤低、高剂量组模型复制前给予相应剂量的黄连温胆汤进行预防性治疗8 d。除正常组外,其余各组腹腔注射对氯苯丙氨酸(DL-4-Chlorophenylalanine,PCPA)复制失眠模型,成模后给予相应剂量药物干预治疗8 d。观察大鼠每日状态,监测体质量,进行旷场实验(行为学监测)并称取全脑质量计算全脑系数。ELISA法检测血清中脑源性神经营养因子(BDNF)及神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)含量,脑干中去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、γ氨基丁酸(GABA)及谷氨酸(Glu)含量,下丘脑中5-羟色胺(5-HT)、5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)及环一磷酸腺苷(cAMP)含量。Western Blot法检测下丘脑中5-HT_(1A)受体蛋白和Gα(i)蛋白表达水平。结果①与正常组比较,模型组大鼠活动总距离、总时间均明显增加(P<0.01),中心区域持续时间明显减少(P<0.01);全脑系数明显降低(P<0.01);血清中BDNF含量明显降低(P<0.01),GFAP含量明显升高(P<0.01);脑干中NE、DA、Glu及Glu/GABA水平均明显升高(P<0.01),GABA水平明显降低(P<0.01);下丘脑中5-HT、5-HIAA及cAMP水平均明显降低(P<0.01),5-HT_(1A)受体蛋白表达水平明显下调(P<0.01),Gα(i)蛋白表达水平明显上调(P<0.01)。②与模型组比较,黄连温胆汤各剂量组大鼠活动总距离、总时间均明显减少(P<0.01),高剂量组大鼠中心区域持续时间明显增加(P<0.01);高剂量组大鼠全脑系数明显升高(P<0.01);各剂量组大鼠血清中BDNF含量明显升高(P<0.01),GFAP含量明显降低(P<0.01);各剂量组大鼠脑干中DA及Glu/GABA水平明显降低(P<0.05,P<0.01),高剂量组的NE及Glu水平明显降低(P<0.01)而GABA水平均明显升高(P<0.01);各剂量组大鼠下丘脑中5-HT、5-HIAA、cAMP水平均明显升高(P<0.01),5-HT_(1A)受体蛋白表达水平上调(P<0.05),Gα(i)蛋白表达水平下调(P<0.05,P<0.01)。结论黄连温胆汤可改善大鼠行为学指标,可能通过调控5-HT等神经递质及5-HT_(1A)/Gα_(i/o)/cAMP信号通路相关的蛋白表达,从而改善大鼠失眠症状,减轻大鼠焦虑及躁狂的状态,激发大鼠自发活动和空间探索能力。

解毒通络调肝方干预TGR5/cAMP信号通路靶向NLRP3炎症小体保护胰岛β细胞的作用机制

目的:探讨解毒通络调肝方通过胆汁酸G蛋白偶联受体5(TGR5)/环状磷酸腺苷(cAMP)信号通路靶向NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体保护胰岛β细胞的干预作用。方法:选用32只SPF级雄性db/db小鼠随机分为模型组、解毒通络调肝方低、高剂量组(3.6、7.2 g·kg^(-1))、二甲双胍组(0.2 g·kg^(-1)),8只db/m小鼠作为空白组,药物干预8周,每2周检测各组小鼠空腹血糖(FBG),并在末次给药后,进行口服糖耐量实验(OGTT),酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测空腹胰岛素(FINS)并计算β细胞功能稳态指数(HOMA-β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β水平。苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠胰腺组织病理学改变,免疫荧光测定小鼠胰腺组织胰岛素(Insulin)的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测TGR5/cAMP信号通路和NLRP3炎症小体关键靶点的蛋白、mRNA的表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠FBG、OGTT、FINS、IL-6、TNF-α和IL-1β显著升高(P<0.01);与模型组比较,药物治疗6周后,解毒通络调肝方组和二甲双胍组的FBG水平显著下降(P<0.01);OGTT实验结果表明,与模型组比较,各给药小组小鼠各时间点的血糖均有降低(P<0.05,P<0.01),解毒通络调肝方各剂量组和二甲双胍组FINS、TNF-α和IL-6水平明显降低(P<0.05,P<0.01),解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组IL-1β水平显著降低(P<0.01)。胰腺病理显示模型组小鼠的胰岛形状不规则,分布不均匀,有萎缩的征象,解毒通络调肝方干预后,其细胞计数增加,边界更清晰;免疫荧光结果表示,空白组小鼠的胰岛细胞排列有序,形态饱满,伴有适当的胰岛素分泌,而模型组胰岛细胞形态扭曲,结构萎缩,胰岛素分泌变少,解毒通络调肝方各剂量组和二甲双胍组小鼠的胰岛素含量显著增加。与空白组比较,模型组小鼠胰腺组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶-1(Caspase-1) mRNA表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组促进了TGR5和cAMP mRNA的上调,并下调了NLRP3、ASC和Caspase-1的mRNA表达(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,模型组小鼠TGR5蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组TGR5蛋白显著升高(P<0.01)。与空白组比较,模型组NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白表达显著增高(P<0.01);与模型组比较,解毒通络调肝方各剂量组、二甲双胍组Caspase-1、ASC蛋白表达显著降低(P<0.01),解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组NLRP3蛋白表达显著降低(P<0.01)。与空白组比较,模型组小鼠胰腺组织中cAMP含量显著降低(P<0.01);与模型组比较,解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组小鼠cAMP含量明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:解毒通络调肝方保护db/db小鼠的胰岛β细胞,其作用机制可能与调节TGR5/cAMP信号通路抑制NLRP3炎症小体有关。

基于cAMP与钙信号通路探讨交泰丸干预快速性心律失常作用机制

目的 探讨交泰丸通过干预环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)与钙信号通路治疗心律失常的作用机制。方法 将48只SPF级雄性SD大鼠,随机分为6组:对照组(C组)、模型组(M组)、交泰丸高剂量组(JG组)、交泰丸中剂量组(JZ组)、交泰丸低剂量组(JD组)、胺碘酮组(An组)。交泰丸治疗组大鼠均灌服不同剂量的交泰丸水煎液(JG组、JZ组、JD组分别含生药3.44、1.72、0.86 g/kg);An组大鼠灌胃胺碘酮2.5 g/kg,C组、M组灌胃等容积0.9%氯化钠溶液。各组于造模前14 d开始灌胃给药,每日灌胃1次。最后一次给药后30 min,除C组外,其他各组大鼠均尾静脉注射乌头碱,制造快速性心律失常模型,并记录各组心电图状况。ELISA法测定大鼠血浆cAMP浓度,Western blot法测定大鼠心肌组织兔单抗蛋白激酶A(inhibitory adenylate cyclase g protein,PKA)、兔多抗兰尼碱受体2(ryanodine receptor2,RyR2)、抑制性腺苷酸环化酶Gi(inhibitory adenylate cyclase g protein,Gi)蛋白表达水平,RT-PCR法测定大鼠心肌组织电压依赖性L型钙通道亚单位α-1C(voltage-dependent L-type calcium channel subunit alpha-1C,CACNA1C)表达水平。结果 (1)心电图结果显示:乌头碱造模完成后,除C组外,其他各组均出现不同程度的快速性室性心律失常,以室性早搏、室性二联律和室性心动过速为主,未出现三联律及心房颤动。M组、JG组、An组出现心室颤动,其他组未见室颤发生。与M组相比,JZ组心律失常出现时间明显推迟(P<0.05),二联律持续时间缩短,次数减少(P<0.05);与M组相比,JG组、An组室性早搏持续时间缩短,次数减少(P<0.05);与M组相比,JG组、JZ组室性心动过速时间显著缩短(P<0.01),JD组室性心动过速时间有所缩短(P<0.05)。(2)ELISA法测定大鼠血浆cAMP浓度显示:乌头碱造模完成后,M组血浆cAMP含量较C组显著升高(P<0.01)。JG组血浆cAMP含量较C组降低(P<0.05),JZ组、An组血浆cAMP含量较C组显著降低(P<0.01)。(3)Western blot法测定大鼠心肌组织蛋白显示:在PKA蛋白相对表达量方面,M组较C组显著升高(P<0.01),JG组较M组降低(P<0.05),JZ组、An组较M组显著降低(P<0.01),其中JZ组、An组与C组比较差异无统计学意义(P>0.05)。在RyR2蛋白相对表达量方面,M组较C组显著升高(P<0.01),所有给药组均较M组显著降低(P<0.01),其中JZ组与C组比较差异无统计学意义(P>0.05)。在Gi蛋白相对表达量方面,M组较C组显著降低(P<0.01),JZ组较M组升高(P<0.05),An组较M组显著升高(P<0.01),其中JZ组与C组比较差异无统计学意义(P>0.05)。(4)RT-PCR法测定大鼠心肌组织mRNA显示:在CACNA1C mRNA相对表达量方面,M组较C组显著升高(P<0.01)。JG组较M组降低(P<0.05),JG组、JZ组、An组较M组CACNA1C mRNA相对表达量显著降低(P<0.01),其中交泰丸JZ组与C组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 交泰丸能够显著改善以室性早搏为主的快速性心律失常,表现为延长心律失常发作期起始时间、缩短其持续时长等,其作用机制可能与交泰丸调控心律失常大鼠心肌组织cAMP与钙信号通路相关。

cAMP信号通路在周围神经损伤后轴突再生中的作用研究进展

周围神经损伤后运动和感觉功能的恢复一直是医学界关注的重要问题,而轴突再生并再支配相对应的靶器官是运动和感觉功能恢复的重要前提。环磷酸腺苷(cAMP)是细胞内的第二信使,影响着人体组织的损伤修复。cAMP的下游因子蛋白激酶A(PKA)和cAMP激活的交换蛋白分子(EPAC)与神经再生关系密切,参与着轴突再生的重要环节并起到关键作用。本文围绕cAMP信号通路对周围神经损伤后髓鞘碎片清除、轴突引导、生长锥再生的影响进行综述。

基于cAMP/PKA/CREB信号通路探讨醒脑益髓汤对血管性痴呆大鼠海马神经元的影响

目的探讨醒脑益髓汤对血管性痴呆大鼠海马神经元凋亡及环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)信号通路的影响。方法随机选取10只SD大鼠作为假手术组,取50只SD大鼠采用双侧颈总动脉永久结扎法建立血管性痴呆模型。将造模成功大鼠随机分为模型组、多奈哌齐组及醒脑益髓汤低、中、高剂量组,每组10只。假手术组和模型组给予生理盐水灌胃,多奈哌齐组给予0.45 mg/mL的多奈哌齐溶液灌胃,醒脑益髓汤低、中、高剂量组分别给予0.98 g/mL、1.96 g/mL、3.92 g/mL的醒脑益髓汤灌胃,均1次/d,连续30 d。定位航行实验和空间探索实验观察大鼠行为学改变,TUNEL法检测海马CA1神经元凋亡情况,ELISA法检测海马组织中cAMP及脑源性神经营养因子(BDNF)含量,Western blot法检测海马组织中PKA和CREB表达情况。结果与假手术组比较,模型组大鼠穿越平台所在象限次数和穿过第Ⅲ象限次数均明显减少(P均<0.05),发现平台并爬上平台时间明显延长(P<0.05),第Ⅲ象限游泳时间明显缩短(P<0.05),海马CA1神经元凋亡细胞明显增加,海马组织中cAMP、BDNF含量和PKA、CREB蛋白表达量均明显降低(P均<0.05);与模型组比较,多奈哌齐组及醒脑益髓汤各组大鼠穿越平台所在象限次数和穿过第Ⅲ象限次数均明显增加(P均<0.05),发现平台并爬上平台时间明显缩短(P均<0.05),第Ⅲ象限游泳时间明显延长(P均<0.05),海马CA1神经元凋亡细胞明显减少,海马组织中cAMP、BDNF含量和PKA、CREB蛋白表达量均明显升高(P均<0.05);醒脑益髓汤中剂量组各指标改善更明显,与醒脑益髓汤高、低剂量组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论醒脑益髓汤可以改善血管性痴呆大鼠的学习记忆能力,其机制可能与调控cAMP/PKA/CREB信号通路关键因子的表达,减少神经元凋亡有关。

cAMP/PKA-pCREB信号通路在早期康复训练改善脑梗死患者神经功能中的作用

目的 探讨cAMP/PKA-pCREB信号通路在早期康复训练改善脑梗死患者神经功能中的作用。方法 收集2020年3月至2022年3月间在遵化市人民医院接受治疗的脑梗死康复期患者228例作为研究对象,参照随机数表法将所有入组患者分为对照组、观察组各114例,对照组患者接受康复期常规药物干预,观察组患者在对照组药物使用基础上加入早期康复训练干预,持续干预8周后评估结果。对比两组患者的干预后简易Fugl-Meyer评分法(FMA)、改良Barthel指数(MBI),血清神经功能相关因子[神经元特异性烯醇化酶(NSE)、脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)]水平,外周血单个核细胞(PBMC)c AMP/PKA-pCREB信号通路相关分子(c AMP、PKA、pCREB)表达水平的差异。结果 干预8周后,观察组患者的FMA上肢评分、FMA下肢评分、MBI评分值高于对照组患者,差异有统计学意义(t=17.710、10.134、7.188,P<0.05);血清NSE水平低于对照组患者,BDNF、NGF水平高于对照组患者,差异有统计学意义(t=8.588、7.229、5.535,P<0.05);PBMC的cAMP、PKA、pCREB mRNA表达量高于对照组患者,差异均有统计学意义(t=4.996、1.868、3.320,P<0.05)。结论 早期康复训练可能通过激活cAMP/PKA-pCREB信号通路优化肢体功能、减轻脑损伤,是一种较为理想及必要的干预手段。

清解止抽口服液对抽动障碍大鼠AC/cAMP/PKA信号通路的影响

目的:探讨清解止抽口服液对抽动障碍(TD)大鼠AC/cAMP/PKA信号通路的影响。方法:40只SD大鼠随机抽取30只腹腔注射亚氨基二丙腈(iminodipropionitrile,IDPN)7 d造模成TD大鼠,将30只TD大鼠随机分为B、C、D组,未造模处理的SD大鼠为A组。随后进行药物治疗,其中A组和B组灌胃灭菌蒸馏水,C组灌胃氟哌啶(haloperidol),D组灌胃清解止抽口服液,持续14 d。记录大鼠造模7 d和灌胃7、14 d的体质量、刻板行为评分、运动行为评分。治疗14 d后取大鼠纹状体检测DRD1、DRD2、AC、cAMP、PKA含量。结果:灌胃14 d,C、D组运动行为、刻板行为评分均低于B组(P<0.05)。B、C、D组大鼠纹状体中DRD1、DRD2、AC、cAMP、PKA含量均低于A组(P<0.05)。C、D组大鼠纹状体中DRD1、DRD2、AC、cAMP、PKA含量均高于B组(P<0.05)。C、D组大鼠纹状体中DRD1、DRD2、AC、cAMP、PKA含量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:清解止抽口服液能够明显改善TD模型大鼠的运动行为和刻板行为,调节AC/cAMP/PKA信号通路代谢。

特立帕肽通过cAMP/PKA/CREB信号通路调控高糖微环境下的成骨细胞分化

目的探讨特立帕肽对高糖微环境下小鼠胚胎成骨细胞(MC3T3-E1)分化的影响及作用机制。方法将MC3T3-E1细胞分为正常糖组(NG,5.5 mmol/L葡萄糖)、NG+特立帕肽组(5.5 mmol/L葡萄糖+10 nmol/L特立帕肽)、高糖组(HG,25 mmol/L葡萄糖)、HG+特立帕肽组(25 mmol/L葡萄糖+10 nmol/L特立帕肽)和HG+特立帕肽+PKA抑制剂组(25 mmol/L葡萄糖+10 nmol/L特立帕肽+20μmol/L H-89)。CCK-8法检测细胞增殖;ELISA实验检测各组cAMP水平;试剂盒检测碱性磷酸酶(ALP)活性;茜素红染色检测细胞矿化结节生成情况;鬼笔环肽染色后观察细胞骨架;Real-time PCR检测细胞中PKA、CREB、RUNX2和Osx的mRNA表达水平。结果各组细胞增殖能力差异无统计学意义(P>0.05)。与NG组相比,NG+特立帕肽组细胞cAMP水平升高(P<0.05),ALP活性增强(P<0.05),茜素红矿化结节生成能力增强(P<0.05),细胞骨架清晰程度有所提升,PKA、CREB、RUNX2和Osx的mRNA表达上调(P<0.05);与NG组相比,HG组的上述检测结果则呈减弱趋势。与HG组相比,HG+特立帕肽组细胞cAMP水平上升(P<0.05),ALP活性增强(P<0.05),茜素红矿化结节生成能力增强(P<0.05),细胞骨架清晰程度有所提升,PKA、CREB、RUNX2和Osx的mRNA表达上调(P<0.05)。与HG+特立帕肽组相比,HG+特立帕肽+H-89组细胞cAMP水平下降(P<0.05),ALP活性减弱(P<0.05),茜素红矿化结节生成能力减弱(P<0.05),细胞骨架清晰程度下降,PKA、CREB、RUNX2和Osx的mRNA表达下调(P<0.05)。结论特立帕肽可通过激活cAMP/PKA/CREB信号通路有效改善高糖微环境对MC3T3-E1细胞分化的抑制作用。

天心解郁方对抑郁模型大鼠的作用及大脑内CAMP/PKA/CREB/BDNF信号通路的影响

目的:探索天心解郁方对抑郁模型大鼠的作用及大脑内CAMP/PKA/CREB/BDNF信号通路的影响。方法:雄性SD大鼠80只,剔除后随机分为空白组、模型组、天心解郁组、西药组、疏肝组、温肾组和疏肝健脾组7组,每组10只。除空白组外,其余组别按照慢性利血平诱导抑郁模型的方法造模28 d,造模前30 min给药,分别灌胃给药饮用水、天心解郁水煎液、氟西汀溶液、路优泰溶液、巴戟天寡糖胶囊溶液、舒肝解郁胶囊溶液,给药28 d后对各组大鼠的体质量、行为学指标、血清学细胞因子、脑组织相关靶点进行检测。结果:造模28 d后,与模型组相比,天心解郁组旷场实验水平运动得分、垂直运动得分和总路程的增加(P<0.05),强迫游泳不动时间的缩短(P<0.001),且较温肾组、疏肝组、疏肝健脾组更明显。与模型组相比,天心解郁组和温肾组可以增加大鼠血清内的CAMP含量(P<0.001,P<0.01),其余组别则无明显变化(P>0.05)。与模型组相比,天心解郁组可以增加皮层内的PKA表达,促进海马内CREB、BDNF、ADRB2蛋白表达。与模型组相比,温肾组可以增加皮层内的PKA水平,其余组别无明显影响。结论:天心解郁方可能通过影响大脑内CAMP/PKA/CREB/BDNF信号通路,发挥抗抑郁作用,较单纯疏肝、温肾或疏肝健脾的方法,疗效更好,治疗靶点更多元化。

复方柴归方超临界CO2提取物调控cAMP信号通路的抗抑郁作用机制研究

目的从环磷酸腺苷(c AMP)信号通路角度探讨复方柴归方超临界CO2提取物的抗抑郁作用机制。方法采用慢性温和不可预知应激(CUMS)程序对大鼠进行造模,以高、中、低剂量复方柴归方超临界CO2提取物及文拉法辛为干预药物,检测各组大鼠海马组织中c AMP、蛋白激酶A(PKA)、环磷酸腺苷反应原件结合蛋白(CREB)、脑源性神经生长因子(BDNF)水平及其相应m RNA水平。结果与对照组比较,模型组大鼠海马组织中c AMP、PKA、p-CREB、BDNF水平显著下降(P<0.05、0.01),复方柴归方干预后,与模型组比较,各剂量组c AMP、PKA、p-CREB、BDNF水平均出现回调(P<0.05、0.01);同时,模型组大鼠海马组织中酪氨酸激酶B(TrkB)、PKA、p-CREB、BDNF的m RNA水平显著下降(P<0.05、0.01),复方柴归方干预后,与模型组相比,各剂量组Trk B、PKA、p-CREB、BDNF的m RNA水平均出现回调(P<0.05、0.01)。结论复方柴归方超临界CO2提取物可通过调控c AMP-PKA-CREB-BDNF信号通路发挥抗抑郁作用。

cAMP/PKA⁃pCREB信号通路在早期康复训练改善脑卒中患者神经功能中的作用

目的研究环腺苷酸(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)⁃磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(pCREB)信号通路在早期康复训练改善脑卒中患者神经功能中的作用。方法将缺血性脑卒中患者分为进行早期康复训练的观察组、常规康复训练的对照组,干预前及干预后1周时采用简易智能精神状态检查量表(MMSE)、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)、Fugl⁃Meyer运动功能量表(FMA)、Berg平衡量表(BBS)评价神经功能,检测血清cAMP、PKA、肿瘤坏死因子⁃α(TNF⁃α)、白介素⁃1β(IL⁃1β)、白介素⁃6(IL⁃6)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化力(TAOC)、B淋巴细胞瘤⁃2(Bcl⁃2)、Bcl⁃2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶⁃3(Caspase⁃3)含量及外周血pCREB表达水平。结果两组干预后的MMSE、MoCA、FMA、BBS评分均高于组内干预前且观察组高于对照组,差异有统计学意义(t=5.099、3.778、2.658、3.502,P<0.05),血清cAMP、PKA及外周血pCREB表达水平均高于组内干预前且观察组高于对照组,差异有统计学意义(t=3.858、3.958、8.815,P<0.05),血清TNF⁃α、IL⁃1β、IL⁃6含量均低于组内干预前且观察组低于对照组,差异有统计学意义(t=10.338、9.395、5.936,P<0.05),血清MDA含量低于组内干预前且观察组低于对照组、SOD及TAOC含量高于组内干预前且观察组高于对照组,差异有统计学意义(t=5.272、3.714、4.753,P<0.05),血清Bax及Caspase⁃3均低于组内干预前且观察组低于对照组,Bcl⁃2含量高于组内干预前且观察组高于对照组,差异有统计学意义(t=18.669、11.346、9.903,P<0.05)。结论早期康复训练改善脑卒中患者神经功能的作用与激活cAMP/PKA⁃pCREB信号通路并抑制炎症反应、氧化应激、细胞凋亡有关。

米力农对兔脑血管痉挛后NO/cAMP信号通路关键酶的作用研究

目的研究米力农对兔蛛网膜下腔出血(SAH)后脑血管痉挛的作用及潜在机制。方法实验通过枕大池注血建立兔SAH模型。采用CT血管成像(CTA)和经颅多普勒超声(TCD)测量实验动物基底动脉的管径和血流速度,并对动物血浆和脑脊液中一氧化氮(NO)浓度进行测定。结果与对照组相比SAH动物的基底动脉管径变细、血流速度增快,血浆及脑脊液NO浓度降低。同时,SAH动物基底动脉eNOS的表达下降。米力农给药组SAH动物平均基底动脉管径增粗而血流速度下降、血浆及脑脊液中NO浓度升高,基底动脉eNOS接近对照组水平,而L-NAME(NOS阻断剂)可阻断米力农的药理作用。结论 NO/cAMP信号通路在下腔出血后脑血管痉挛的发展中起到重要作用。米力农在一定程度上是通过修复SAH后受损的NO/cAMP信号通路起到缓解脑血管痉挛的作用。此外,NO/cAMP信号通路可做为防治脑血管痉挛的重要靶点。

黄芪甲苷通过影响NogoA/NgR和cAMP/PKA通路改善APP/PS1转基因小鼠认知功能

目的:观察黄芪甲苷(astragaloside Ⅳ, AST Ⅳ)对阿尔茨海默病(Alzheimer disease, AD)模型小鼠认知功能障碍和病理改变的影响,并探讨可能的调控机制。方法:将APP/PS1转基因(APPswe/PSEN1d E9)小鼠随机分为AD+AST Ⅳ组和AD组,并以C57BL/6野生型(wild-type, WT)小鼠作为对照组(WT组),灌胃治疗两个月(n=8)。应用Morris水迷宫和Y迷宫实验评价小鼠空间认知功能(n=8),尼氏染色检测神经元数量与形态,免疫荧光染色观察神经元核抗原(neuronal nuclear antigen, NeuN)和β-淀粉样蛋白(amyloid β-protein, Aβ)水平(n=4),Western blot法检测全脑组织中神经突生长抑制因子A(neurite outgrowth inhibitor A, NogoA)、Nogo-66受体(Nogo-66 receptor, NgR)、p75神经营养因子受体(p75 neurotrophin receptor, p75NTR)、含富亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域蛋白1(leucine rich repeat and immunoglobin-like domain-containing protein-1, LINGO-1)、环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate, cAMP)和蛋白激酶A(protein kinase A, PKA)的表达(n=4)。结果:AST Ⅳ能够显著缓解APP/PS1小鼠的认知功能障碍,提高其学习、记忆和探索功能。与WT组相比,APP/PS1小鼠大脑皮质区和海马区Aβ沉积增加(P<0.01),尼氏小体丢失严重(P<0.05或P<0.01),神经元数量减少(P<0.05);而AST Ⅳ可以显著减少Aβ沉积(P<0.05),减少尼氏小体丢失(P<0.05),增加神经元数量(P<0.05)。与WT组相比,APP/PS1小鼠脑组织NogoA、NgR、p75NTR和LINGO-1表达显著增加(P<0.05或P<0.01),cAMP和PKA表达显著减少(P<0.05或P<0.01);而AST Ⅳ可以显著抑制NogoA、NgR、p75NTR和LINGO-1表达(P<0.05或P<0.01),增加cAMP和PKA表达(P<0.05)。结论:AST Ⅳ通过抑制NogoA及NgR/p75NTR/LINGO-1受体复合物的表达,并上调cAMP/PKA通路,减少APP/PS1小鼠脑组织中Aβ沉积,减轻神经元损伤,从而改善认知功能和缓解学习障碍。