碱性成纤维细胞生长因子经ERK信号通路抑制卵巢癌CAOV3细胞凋亡

目的:研究卵巢癌CAOV3细胞中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)经MEK/ERK1/2信号转导通路对CREB、Bcl-2表达以及对细胞凋亡的影响作用。方法:无血清饥饿诱导细胞凋亡。分为对照组、bFGF组、bFGF+PD98059组。Annexin-EGFP/PI荧光双染法检测细胞凋亡。Western印迹法检测ERK1/2、CREB以及Bcl-2蛋白表达。RT-PCR法检测Bcl-2的mRNA表达。结果:bFGF可抑制无血清饥饿诱导的细胞凋亡;时效依赖性地诱导ERK1/2活性增高、刺激CREB磷酸化、促进Bcl-2的mRNA及蛋白表达增加。bFGF作用CAOV3细胞15 min时ERK1/2活性达高峰;45 min时CREB磷酸化达峰值;Bcl-2的mREN表达高峰为6h,8h时蛋白表达最高。MEK1抑制剂PD98059可抑制bFGF的上述作用。结论:bFGF可能通过激活MEK/ERK1/2/CREB/Bcl-2信号转导途径抑制卵巢癌CAOV3细胞凋亡。

β-血小板衍生生长因子信号通路在吗啡耐受机制中的作用

目的评价细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)和CAMP反应元件结合蛋白(cyclic AMP response element binding protein,CREB)信号通路在β-血小板衍生生长因子(beta platelet-derived growth factor,PDGF)受体介导的大鼠吗啡耐受中的作用。方法 36只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为6组(n=6):对照组(等渗盐水20μL)、吗啡组(吗啡15μg)、吗啡+伊马替尼组(吗啡15μg+伊马替尼10μg)、吗啡+PDGF-BB组(吗啡15μg+PDGF-BB 10ng)、伊马替尼组(伊马替尼10μg)、PDGF-BB组(PDGF-BB 10 ng)。各组分别鞘内注射药物20μL,1次/d,连续7 d。于给药前1d测定热缩足潜伏期(paw withdrawal latency,PWL)基础值,给药后1、3、5、7 d鞘内注射30 min后测定PWL,计算最大镇痛效应百分比(maximal possible effect,MPE)。第8天,各组大鼠鞘内单独注射吗啡15μg 30 min后测定PWL,计算MPE,测定PWL后取L4-5脊髓,Western blot法测定ERK、p-ERK、CREB和p-CREB的表达水平。结果吗啡组给药后第5、7天MPE值分别为(52.90±8.20)%和(15.1±3.80)%,较第1天[(100.00±0.00)%]明显降低(P<0.05);吗啡+PDGF-BB组给药后第5、7天MPE值分别为(43.51±5.42)%和(14.81±3.60)%,较第1天[(100.00±0.00)%]明显降低(P<0.05);而吗啡+伊马替尼组给药后第1、3、5、7天MPE值无明显变化;第8天单独鞘内注射15μg吗啡后,吗啡组、吗啡+PDGF-BB组和PDGFBB组MPE值分别为(16.22±2.51)%、(15.22±3.50)%(35.21±4.51)%,较对照组[(100.00±0.00)%]均明显降低(P<0.05);6组大鼠脊髓ERK和CREB表达水平差异无统计学意义;吗啡组、吗啡+PDGF-BB组和PDGF-BB组大鼠脊髓磷酸化ERK和磷酸化CREB表达较对照组均上调(P<0.05);吗啡+伊马替尼组大鼠脊髓磷酸化ERK和磷酸化CREB表达较吗啡组均下调(P<0.05)。结论 PDGFR-β信号通路在吗啡耐受过程中具有重要作用,具体机制与激活下游ERK和CREB通路有关。

转录因子CREB3L1在甲状腺癌组织中的表达及生物学意义

目的探讨转录因子环腺苷酸响应元件结合蛋白3-样1(CREB3L1)在甲状腺癌(THCA)组织中的表达及其临床意义。方法从GEO、ArrayExpress、SRA、TCGA等数据库检索下载CREB3L1 mRNA在THCA组织中的表达谱,应用Wilcoxon非参数检验检测CREB3L1 mRNA在THCA组织和正常甲状腺组织中表达水平的差异;计算CREB3L1表达值的标准化均数差(SMD)及汇总受试者工作特征(SROC)曲线下面积等指标,综合评估CREB3L1 mRNA在THCA组织中的表达水平及其对THCA的区分能力。用上述数据集批量获取CREB3L1在THCA组织中的相关过表达基因,应用CistromeDB预测CREB3L1转录靶基因,用clusterProfiler对CREB3L1在THCA组织中的相关过表达基因、CREB3L1转录靶标交集基因进行基因本体和京都基因与基因组百科全书功能注释。在THPA数据库中查看CREB3L1蛋白在THCA组织中的表达水平。结果与正常甲状腺组织比较,THCA组织中CREB3L1蛋白表达水平呈上调趋势。基于基因芯片、高通量测序数据集共纳入1175例THCA组织和791例正常甲状腺组织样本。CREB3L1 mRNA在THCA组织中呈高表达[SMD=0.11,95%可信区间(95%CI):0.01~0.20],集成SROC曲线下面积为0.62(95%CI:0.57~0.66)。CREB3L1蛋白在THCA组织中高表达患者5年生存率比低表达者低。交叉基因主要富集在细胞周期信号通路上,主要生物学功能为细胞器裂解。细胞分裂周期6蛋白(CDC6)与CREB3L1呈正相关。结论CREB3L1在THCA组织中高表达不利于患者的预后,有可能通过靶向基因CDC6参与了THCA的发生、发展。

CREB研究进展

CREB是cAMP应答元件结合蛋白 (cAMPresponseelementbindingprotein)的简称 ,它于80年代后期被发现。CREB由 341个氨基酸残基组成 ,分子量 430 0 0。分子结构分两个区域 ,N端区域与调节转录的功能有关 ,C端区域是与启动子结合的部位。CREB是CREB ATF家族中的一个成员 ,它包括 8种分子亚型 ,其中CREBα和CREBΔα最为重要。CREB是一种细胞核内调控因子 ,它通过自身磷酸化实现调节转录的功能。CREB与学习记忆分子神经机制的关系特别受到注意。CREB能促进果蝇和小鼠等动物长时程记忆的形成。开展对CREB在人类大脑记忆活动中功能的研究 ,是分子神经生物学家感兴趣的课题。

吡仑帕奈对癫痫大鼠ERK/CREB/BDNF信号通路及认知功能的影响

目的观察吡仑帕奈(PER)对癫痫大鼠认知功能的影响,并初步探讨其作用机制。方法将采用戊四氮(PTZ)诱导制备成功的癫痫模型Wistar大鼠随机分为模型组、PER低、中、高剂量组,每组12只,PER低剂量组、PER中剂量组和PER高剂量组分别给予0.3、1.0和3.0 mg/kg PER灌胃处理10 w,1次/d;另选取12只正常大鼠设为对照组,对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃处理。评估各组癫痫发作情况;莫里斯水迷宫(MWM)法检测各组大鼠认知功能变化情况;酶联免疫吸附试验检测各组大脑皮层组织丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-10水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性;尼氏染色法检测各组大鼠大脑皮层神经元细胞状态;Western印迹法检测各组大脑皮层组织细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化(p)-ERK、cAMP反应元件结合蛋白(CREB)、p-CREB和脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达。结果对照组尼氏小体丰富且分布均匀,大脑皮层神经元排列整齐;模型组大脑皮层神经元胞质染色不足,神经元细胞排列紊乱;经PER治疗后,各组大脑皮层组织神经元形态得以恢复。与对照组相比,模型组癫痫发作频率、癫痫持续时间、Racine分级、逃避潜伏期、目标象限停留时间、大脑皮层组织MDA、TNF-α水平显著增加(P<0.05),穿越原平台位置的次数、大脑皮层组织IL-10水平、SOD活性、p-ERK/ERK、p-CREB/CREB和BDNF蛋白表达显著降低(P<0.05)。与模型组相比,PER低剂量组、PER中剂量组和PER高剂量组癫痫发作频率、癫痫持续时间、Racine分级、逃避潜伏期、目标象限停留时间、大脑皮层组织MDA、TNF-α水平依次明显降低(P<0.05),穿越原平台位置的次数、大脑皮层组织IL-10水平、SOD活性、p-ERK/ERK、p-CREB/CREB和BDNF蛋白表达依次明显升高(P<0.05)。结论PER能够改善癫痫大鼠认知功能障碍,可能与促进大鼠大脑皮层组织ERK/CREB/BDNF通路活化,降低氧化应激与炎症反应相关。

“双阴性”T细胞与系统性红斑狼疮

系统性红斑狼疮(SLE)是典型的自身免疫疾病,其发病率、死亡率都较高.炎性因子和自身抗体的产生与SLE发病机制密切相关.研究发现,SLE患者的外周血中TCRαβ^+CD3^+CD4^-CD8^-T细胞(简称“双阴性”T细胞,DN-T细胞)数量明显增多,且与SLE的活动相关,其起源和功能尚不清楚.越来越多的研究认为DN-T细胞中环磷酸腺苷响应元件调节因子α(CREMα)的过表达和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的激活是SLE病理生理中的关键因素.本文主要介绍DN-T细胞的起源、功能特性及在SLE的致病作用,以寻求治疗SLE的新途径.

小强度跑台运动对阿尔茨海默病转基因小鼠海马BDNF/ERK/CREB基因和蛋白表达的影响

目的:探讨小强度跑台运动对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)转基因小鼠海马脑源性神经营养因子(BDNF)、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)1/2和c AMP反应元件结合蛋白(CREB)蛋白及基因表达的影响。方法:实验动物分为野生型小鼠对照组(WtC)、野生型小鼠运动组(WtE)、转基因小鼠对照组(TgC)、转基因小鼠运动组(TgE)。运动组小鼠进行5个月小强度跑台训练,每天以5 m/min的速度开始运动5 min,后以8 m/min的速度持续运动5 min,最后以11 m/min的速度持续运动20 min,共运动30 min。运动训练结束后,检测各组小鼠海马BDNF、ERK1/2和CREB蛋白及基因表达情况。结果:与WtC组比较,TgC组小鼠海马组织中BDNF基因和蛋白表达明显增加(P<0.05)。TgE组小鼠海马BDNF基因和蛋白表达水平明显低于TgC组(P<0.05);TgC组ERK1/2基因和蛋白表达水平明显高于WtC组(P<0.05),但磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白表达明显低于WtC组(P<0.05),TgE组ERK1/2基因和蛋白表达水平明显低于TgC组(P<0.05),p-ERK1/2蛋白表达TgE组明显高于TgC组(P<0.05);CREB基因和蛋白表达与ERK1/2基因和蛋白表达趋势一致,TgC组明显高于WtC组(P<0.05),磷酸化CREB(P-CREB)蛋白表达TgC组明显低于WtC组(P<0.05),TgE组CREB基因和蛋白表达水平明显低于TgC组(P<0.05),P-CREB蛋白表达TgE组明显高于TgC组(P<0.05)。结论:长期小强度跑台运动减少APP/PS1转基因小鼠BDNF代偿性合成增加。ERK/CREB参与调节跑台运动对APP/PS1转基因小鼠学习和记忆损害的保护作用。

一种GLP-1受体激动剂高通量筛选细胞模型

目的构建GLP-1受体激动剂高通量筛选细胞模型。方法构建pEGFP-GLP-1R-3C重组质粒,转染HEK293T细胞,用G418和流式细胞仪进行筛选。所构建的细胞系命名为HEK293T-GLP-1R-3C-eGFP细胞系。Western blot和激光共聚焦检测GLP-1R-3C-eGFP蛋白的表达。将环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)响应元件报告基因转染HEK293T-GLP-1R-3C-eGFP细胞,不同浓度的GLP-1刺激后,用一步法荧光素酶报告基因检测试剂盒检测发光值反映细胞cAMP水平,采用cAMP试剂盒(ELISA)进行验证。结果成功构建HEK293T-GLP-1R-3C-eGFP细胞系。不同浓度GLP-1刺激后,发光值变化趋势与细胞cAMP水平变化趋势相似。本实验中Z′因子的值为0.52。结论本研究建立了基于重组HEK293T细胞株,其可用于GLP-1受体激动剂高通量筛选。

右美托咪定对体外循环后围术期神经认知障碍老龄大鼠海马HPA轴和BDNF-ERK-CREB信号通路的影响

目的评价右美托咪定对体外循环后围术期神经认知障碍老龄大鼠HPA轴和海马BDNF-ERK-CREB信号通路的影响。方法选择老龄健康雄性Sprangue Dwaley大鼠120只,18~20月龄,体重400~550 g。采用随机数字表法将其分为4组(n=30):对照组(C组)、体外循环组(T组)、体外循环+右美托咪定组(D组)、体外循环+生理盐水组(NS组)。C组大鼠不做任何处理,T组大鼠仅建立体外循环模型,D组大鼠腹腔注射50μg/kg右美托咪定后进行体外循环手术,NS组大鼠腹腔注射等剂量的生理盐水后进行体外循环手术。采用Morris水迷宫检测大鼠空间学习和记忆能力,采用穿梭箱实验检测大鼠学习条件反射能力,采用旷场实验检测大鼠在新异环境中的适应能力和认知能力,采用ELISA法测定大鼠血浆中CRH、ACTH和CORT浓度;采用蛋白印迹法测定大鼠海马内BDNF、ERK及CREB的表达,采用免疫组化法测定海马BDNF、ERK及CREB的阳性神经元计数。结果与C组比较,T组、D组、NS组大鼠术后各时点逃避潜伏期延长,穿越原平台次数减少,主动回避反应次数减少,主动及被动回避反应潜伏期延长,直立次数减少,中央格停留时间延长,血浆中CRH、ACTH和CORT浓度升高,海马BDNF、ERK及CREB蛋白的表达和阳性神经元计数降低(P<0.05);与T组、NS组相比较,D组大鼠术后各时点逃避潜伏期缩短,穿越原平台次数增加,主动回避反应次数增加,主动及被动回避反应潜伏期缩短,直立次数增多,中央格停留时间缩短,血浆中CRH、ACTH和CORT浓度降低,海马BDNF、ERK及CREB蛋白的表达和阳性神经元计数升高(P<0.05)。结论右美托咪定可改善体外循环手术老龄大鼠围术期神经认知障碍,其机制可能与抑制HPA轴、激活海马BDNF-ERK-CREB信号通路有关。

有氧运动对大鼠海马和前额叶皮层ERK/CREB/BDNF信号通路的影响

为探讨有氧运动对大鼠海马和前额叶皮层ERK/CREB/BDNF信号通路的影响.将20只8周龄健康雄性SD大鼠随机分为空白对照组(C组)和运动组(E组).C组常规饲养,不加任何干预;E组进行3周无负重游泳.采用Western Blotting方法检测大鼠海马和前额叶皮层中P-ERK1/2、CREB、P-CREB、BDNF蛋白的相对表达.结果显示:E组大鼠海马和前额叶皮层P-ERK1/2、CREB、P-CREB、BDNF蛋白相对表达量较C组均明显增加(P<0.01).表明3周游泳运动可以增加大鼠海马和前额叶皮层神经元保护性蛋白的表达,增强神经元的可塑性,从而起到保护神经元免受损伤、参与神经损伤后修复.

MPP^＋抑制PC12细胞BDNF表达

研究MPP+(1-methyl-4-phenylpyridinium)对PC12细胞的毒性作用及机制。采用MTT法检测细胞存活率,Western blotting检测蛋白变化及双荧光素酶报告基因系统检测转录因子活性。结果表明,MPP+能够显著抑制细胞存活率,且呈剂量依赖性;而且MPP+能够降低PC12细胞神经营养因子BDNF(brain-derived neurotrophic factor)的蛋白水平,并能够抑制ERK(extracellular signal-regulated proteinkinase)的磷酸化,而对CaMKⅡ活性无影响,同时能够显著抑制BDNF的转录因子CREB(cAMP response element binding protein)的磷酸化,并抑制其转录活性。因此MPP+可能通过抑制ERK活性而抑制其下游转录因子CREB的活性,最终导致BDNF的表达减弱。