胞内cAMP浓度的增加可诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞

目的 :探讨胞内cAMP浓度的增加与骨髓间质干细胞 (MSC)分化为神经元样细胞的关系。方法 :采用Ficoll-Paque液 (1 0 77g/L)离心分离成人MSC ,体外扩增 ,采用含腺苷酸环化酶激动剂Forskolin及磷脂酶抑制剂 3-异丁基 - 1 -甲基黄嘌呤 (IBMX)的无血清DMEM诱导MSC分化为神经元。免疫组化鉴定神经元烯醇化酶 (NSE)、神经丝蛋白 (NF)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达。结果 :成人骨髓间质干细胞在体外扩增原代可获得 5× 1 0 5,1 0代可获得 2× 1 0 1 0 个细胞。加入Forskolin、IBMX以及两者联用诱导后 ,MSC胞体收缩 ,突起伸出 ,呈典型神经元样形态 ;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF -M表达阳性 ,GFAP阴性。结论

基于细胞内第二信使cAMP的检测评估化合物对多巴胺靶点的活性影响

目的 建立一种基于细胞水平的第二信使cAMP检测方法来评估化合物对多巴胺(DA)受体的活性影响。方法 通过构建DA受体真核表达载体,应用Flp-In系统和脂质体转染法构建表达DA受体的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系,反转录PCR(RT-PCR)鉴定DA受体的表达情况;利用TR-FRET cAMP方法检测阳性化合物对DA靶点的激活和抑制作用;毛喉素(Forskolin)是一种有效的腺苷酸环化酶(AC)激活剂,诱导细胞内cAMP的形成。结果 经RTPCR鉴定,宿主细胞中无目的表达,而转染后的细胞多巴胺细胞系中有目的基因表达,成功构建表达多巴胺受体的细胞模型;TR-FRET cAMP方法检测结果显示所构建的多巴胺受体细胞模型可以反映化合物的激动和抑制作用。结论 所构建的DA受体表达细胞系可以通过TR-FRET cAMP方法检测多巴胺受体被激活后胞内产生的第二信使cAMP的浓度变化,进而反映化合物对DA靶点的活性影响,为DA靶点的化合物筛选提供一种简便快捷的方法。

基于CFTR的胞浆内第二信使cAMP检测方法的建立

目的:建立一种基于CFTR可敏感检测胞浆内第二信使cAMP的检测方法。方法:构建CFTR和YFP-H148Q/I152L真核表达载体,应用脂质体转染法构建共表达CFTR和YFP-H148Q/I152L的FRT细胞,倒置荧光显微镜观察其表达情况,流式细胞仪检测细胞纯度;荧光淬灭动力学实验验证细胞模型的有效性;荧光淬灭动力学实验验证细胞模型可筛选CFTR调节剂;放射免疫法检测加入CFTR激活剂后细胞内的cAMP浓度。结果:倒置荧光显微镜下观察到CFTR表达在细胞膜上,YFP-H148Q/I152L表达于胞浆中;成功构建共表达CFTR和YFP-H148Q/I152L的FRT细胞模型;荧光变化斜率值与CFTR调节剂浓度成剂量依赖关系,该模型可筛选CFTR调节剂;荧光变化斜率值可反映胞浆内cAMP浓度,该模型可敏感检测胞浆内cAMP浓度。结论:此细胞模型可以高效敏感检测胞浆内第二信使cAMP浓度,为cAMP信号相关靶点的研究提供一种简便快捷的方法。

前列地尔脂微球载体制剂治疗蓝趾综合征的对照研究

蓝趾综合征是以全身动脉粥样硬化为病理基础的一种特殊类型的急性趾端缺血性疾病。前列地尔具有多种生理作用的活性物质，主要通过调节腺苷酸环化酶和磷酸二酯酶活性，促使细胞内cAMP浓度增加，激活依赖cAMP的一系列蛋白激酶使血管扩张，抑制血小板聚集，增加红细胞变形能力，改善微循环，增加组织血流灌注，

胃泌素受体拮抗剂抑制胃癌细胞生长的可行性研究

目的 探讨应用胃泌素受体拮抗剂治疗胃癌的可行性。方法 在体外条件下观察胃泌素及其受体拮抗剂丙谷胺对胃癌细胞株ＭＫＮ４５ 的细胞活力、细胞内ｃＡＭＰ浓度及细胞凋亡的影响；在体内条件下观察胃泌素受体拮抗剂丙谷胺对胃癌细胞株ＭＫＮ４５ 移植瘤的面积、重量及胃癌细胞ＤＮＡ 的影响。结果 在体外条件下，胃泌素能促进胃癌细胞株ＭＫＮ４５ 的增殖，细胞内ｃＡＭＰ浓度增高，细胞凋亡百分率降低，而丙谷胺能完全阻断胃泌素的作用。在体内条件下，丙谷胺能抑制胃癌细胞株ＭＫＮ４５ 移植瘤的生长，肿瘤面积、重量及胃癌细胞ＤＩ、ＤＮＡ 含量、ＳＰＦ均低于对照组。结论 胃泌素受体拮抗剂能够抑制胃泌素受体阳性的胃癌细胞生长，有望为胃癌的治疗提供一种新手段。