树鼩肝组织cDNA文库的快速构建

为了研究动脉粥样硬化不易感动物树多种载脂蛋白的基因分子结构，我们在国内外首次快速构建了树鼯肝组织ｃＤＮＡ文库。采用一步法提取树鼯肝组织总ＲＮＡ；以寡脱氧胸苷酸纤维素为吸咐介质，柱层析法进一步纯化ｍＲＮＡ。以此为模板。利用改良的ｃＤＮＡ快速合成方法，反转录合成树鼯肝组织ｃＤＮＡ第一、二链。对ｃＤＮＡ双裢末端修饰，连接含双酶切位点的连接子后重组于噬菌体载体，包装后获得２．１ｘ１０６高滴度的树肝组织ｃＤＮＡ文库，放射自显影显示合成的ｃＤＮＡ产物大小在４００－５０００个核苷酸之间，该文库的克隆重组率为９８．５％以上，扩增随机提取的白色噬菌斑ＤＮＡ，电泳鉴定均有ｃＤＮＡ插入片段。以制备的两种多价抗血清为探针，从构建的ｃＤＮＡ文库中筛选克隆出完整的树ａｐｏＡＩ和ａｐｏＣＩ的ｃＤＮＡ核苷酸序列。与常规方法比较，本法简便、快速、重复性好，易于操作和掌握，值得推广使用。