应用Super SMART cDNA合成技术扩增哮喘嗜酸性粒细胞总RNA

目的应用Super SMART cDNA 合成技术从嗜酸细胞微量总RNA扩增大量双链cDNA。方法利用Percoll密度梯度离心分离哮喘病人血嗜酸性粒细胞,用Trizol试剂盒提取细胞总RNA,利用Super SMART cDNA合成技术合成cDNA第1链及优化扩增第2链。通过梯度电泳鉴定cDNA产品质量,通过对获得的cDNA定量来评估扩增效能。结果从20 ng总RNA成功扩增出双链cDNA 7.155 μg,电泳结果显示cDNA质量及纯度较高。结论Super Smart cDNA 合成技术可实现从微量总RNA高效扩增高质量的cDNA,为进一步从基因水平研究哮喘机制奠定了基础。

应用SMART cDNA合成技术富集鸡脾脏微量RNA

以鸡脾脏中提取的20ng微量RNA为起始样本,应用SMART cDNA合成技术合成cDNA第一链及扩增第二链,并在原有基础上做了适当的优化和改进。同时与传统cDNA合成方法进行了比较。最终,从20ng总RNA中成功扩增出双链cDNA6.03μg,而采用传统方法只合成出0.03μg cDNA,且前者cDNA的质量和纯度明显高于后者。结果表明,通过SMART cDNA合成技术,可使鸡脾脏微量RNA得到有效地富集。

文昌鱼头部cDNA文库的构建

采用cDNA合成技术制备文昌鱼头部cDNA基因文库 .以mRNA为模板 ,用NotIprimer Adaptor为引物 ,在反转录酶的作用下 ,合成第一链cDNA ,进而合成第二链cDNA .含有EcoRI和NotI粘性末端的双链cDNA在T4DNA连接酶作用下与λgt1 1EcoRI/NotI臂相连 ,包装蛋白包装 ,得到噬菌体颗粒 ,即原始的文昌鱼头部cD NA文库 .经X Gal/IPTG板测定 ,该文库滴度为 7.8× 1 0 5 pfu/cm3 ,重组率为 70 % .