cDNA芯片表面核酸固定化的优化

cDNA芯片技术表面核酸固定化影响因素众多 ,其中涉及选择载体、固定于玻片的DNA片段浓度、玻片DNA片段的固定方法、玻片预处理方法、DNA片段的变性、溶解DNA片段的点样液等等 .针对这些因素进行了优化筛选实验 ,以便于提高cDNA芯片技术检测基因表达的效率 .

基因芯片—玻璃表面两种不同DNA探针固定化方法的比较研究

研究了基因芯片相关的DNA探针在芯片表面最佳固定化方法.用两种不同的双功能试剂1,4-苯二异硫氰酸酯和戊二醛分别把5＇-端氨基衍生的21-mer寡脱氧核苷酸探针直接共价固定到玻片表面,固定化的寡脱氧核苷酸探针与5＇-端FITC标记的互补靶序列进行分子杂交,杂交后用配有CCD的Ⅸ70型荧光倒置显微镜成像检测.结果表明,两种固定化方法的效果都比较好,能检测到靶序列的最低终浓度为1.5×10-9 mol/L优化了探针固定化时间、杂交时间、杂交温度等对DNA芯片分析性能的影响,为构建高灵敏度基因芯片打下良好基础.

基因芯片制备方法研究进展

基因芯片是融微电子学、生命科学和物理学为一体的技术，目前广泛应用于疾病的基因诊断、基因表达研究、基因组研究、发现新基因以及病原体的诊断，具有广阔的应用前景。基因芯片的制备主要可分为原位合成、合成后交联二种方法。本文综述了基因芯片的制备方法并分析了各自的优缺点。

玻璃表面cDNA微阵列的制备与优化

对DNA进行荧光标记,确定简单、实用和有效的固定化方法和筛选出合适的杂交条件 ,是制备DNA阵列的几个关键步骤。在PCR的过程对cDNA进行标记 ,不同的掺入比例可以得到不同的标记效率,Cyedye -dCTP/dCTP的比例在1:3～1:4较好。将DNA固定到玻璃表面 ,poly -l-lysine方法是一种不需要对DNA进行修饰的有效方法。其中UV照射的能量以600mJ效果最好 ;水合(rehydrate)温浴过程的温度以65°C最佳。在固化过程中所用探针的浓度0.2 -0.5mg/ml对杂交信号影响不多 ,也就是芯片表面固定的探针DNA应选在此范围内。杂交信号与所用的靶DNA的浓度成正相关 ,且在一定的范围内呈正比例关系。

基因表达研究方法的进展

信使RNA的发现 ,遗传密码的破解 ,人们对蛋白质合成的基因调节有了更深入的理解 ,在此基础上提出了基因表达的现代概念。随之出现了全球性的基因表达研究的热点。在检测和定量分析基因表达水平的过程中 ,出现了很多种方法和技术 ,本文就Northern杂交法、S1核酸酶保护法、差减杂交技术、差异显示法、cDNA文库的序列测定、基因表达的系列分析。