痢疾菌体内诱导基因表达文库的构建

目的构建筛选痢疾菌福氏2a体内诱导基因的融合基因表达文库。方法以自杀载体pGP704为骨架,用氯霉素乙酰转移酶基因作为报告基因,构建了用于筛选体内诱导基因的载体pGP-cat。把痢疾菌福氏2a基因组DNA的随机酶切片段0.6-1kb亚克隆到pGPcat载体报告基因上游的BglⅡ位点,构建了融合基因文库。结果与痢疾菌福氏2a2457T结合转移后,获得融合基因表达文库。以氯霉素为选择标记,经过体外初步筛选,得到3.2%的具有氯霉素抗性的菌株。结论构建的融合基因表达文库适用于筛选福氏2a痢疾菌的体内诱导基因。

Ⅱ型猪链球菌体内诱导基因表达文库的构建

为构建用于筛选Ⅱ型猪链球菌体内诱导基因的融合基因表达文库。采用自杀载体pGP704为骨架，将无启动子的cat基因作为报告基因克隆到自杀载体pGP704上，构建报告质粒pGPT04-cat将Ⅱ型猪链球菌基因组DNA的500～1000bp酶切片段克隆到报告质粒pGP704-cat中cat基因的上游，转化受体菌获得融合基因文库；将文库质粒电转化Ⅱ型猪链球菌，得到融合基因表达文库。结果表明：构建的融合基因表达文库以氯霉素作为选择标记，经体外培养，获得2％的菌株具有氯霉素抗性，融合基因表达文库存在可以启动cat基因表达的启动子序列，cat基因在体外可以表达。构建的融合基因表达文库可以用于Ⅱ型猪链球菌体内诱导基因的筛选。

酵母单杂交系统分离胡萝卜生长素应答元件结合因子

高等植物胚根发育过程中,生长素是植物细胞进行分裂、延伸和分化的信号,对根的形成等起着不可缺少的促进作用.生长素应答元件（AuxRE）存在于很多生长素诱导基因的启动子中,并具有对生长素作用的应答活性.本研究构建了特定发育时期的胡萝卜体细胞胚cDNA-AD融合表达文库,同时构建了含有生长素应答元件的重组报告质粒.以生长素应答元件为诱饵,通过酵母单杂交系统筛选获得1个阳性克隆,该阳性克隆在酵母中表达的AxRF1蛋白能够在体外结合实验中与生长素应答元件结合,对AxRF1是否有可能参与胡萝卜体细胞胚中生长素诱导基因的表达调控进行了讨论.