沉默cFLIP在重症急性胰腺炎肺损伤中的作用机制研究

目的探讨沉默细胞型Fas相关死亡区域蛋白样白介素-1β转换酶抑制蛋白(cFLIP)对重症急性胰腺炎(SAP)导致的肺损伤的影响及其可能的作用机制。方法分别取12只SD大鼠,随机分为对照组、cFLIPL(或cFLIPS)siRNA1组、cFLIPL(或cFLIPS)siRNA2组和cFLIPL(或cFLIPS)siRNA3组,筛选抑制率最高的cFLIPL siRNA和cFLIPS siRNA。50只SD大鼠随机分成假手术组、模型对照组、cFLIP siRNA-NC组、cFLIPS siRNA组、cFLIPL siRNA组,每组各10只。通过胰胆管内逆行注射3%牛磺胆酸钠溶液建立SAP模型,建模成功后,cFLIPS siRNA、cFLIPL siRNA和cFLIP siRNA-NC组大鼠尾静脉注射对应siRNA溶液,其余组注射等量0.9%NaCl溶液。HE染色检测肺组织病理学变化;ELISA检测IL-6、IL-1β和TNF-α含量;全自动分析仪检测静脉血白细胞数、中性粒细胞数;流式细胞术检测中性粒细胞凋亡;Western blotting检测中性粒细胞RIP1和caspase-8蛋白表达。结果cFLIPL siRNA2组以及cFLIPS siRNA1组干扰效率最明显,因此选择这2组进行后续实验(后续称为cFLIPL siRNA组和cFLIPL siRNA组)。与模型对照组大鼠相比,cFLIPL siRNA组和cFLIPS siRNA组大鼠肺泡结构损伤减轻,肺泡壁变薄,炎症细胞浸润减少;与模型对照组相比,cFLIPL siRNA组和cFLIPS siRNA组IL-6、IL-1β和TNF-α含量均明显降低,静脉血白细胞数、中性粒细胞数明显降低,中性粒细胞凋亡率明显升高,cFLIPL、cFLIPS和RIP1蛋白表达量明显降低,caspase-8蛋白表达量明显升高;以上差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论本研究结果表明,靶向沉默cFLIP可能通过上调caspase-8和抑制RIP1的表达,促进中性粒细胞凋亡,减少炎症介质IL-6、IL-1β和TNF-α释放,抑制肺组织中的中性粒细胞浸润,缓解SAP导致的肺损伤,在SAP中发挥保护作用。

cFLIP基因在子宫内膜腺癌组织中的表达

背景与目的:细胞FLICE抑制蛋白(cellularFLICEinhibitoryprotein,cFLIP)是一种新发现的凋亡抑制因子,研究表明它在多种肿瘤中表达增高,对肿瘤的发生发展起重要作用。本研究检测cFLIP蛋白在子宫内膜腺癌中的表达及其与临床病理特征和增殖细胞核抗原标记指数(proliferatingcellnuclearantigen-labelingindex,PCNA-LI)的关系,初步探讨cFLIP在子宫内膜腺癌发生、发展中的意义。方法:采用免疫组织化学法检测cFLIP蛋白在42例子宫内膜腺癌、20例正常增生期子宫内膜和40例子宫内膜增殖症组织(其中伴和不伴不典型增生分别为10和30例)中的表达水平及子宫内膜腺癌中的PCNA-LI。结果:cFLIP蛋白在增生期子宫内膜、子宫内膜增殖症及子宫内膜腺癌中表达的阳性率分别为(55.0±11.4)%、(72.5±7.1)%和(83.3±5.8)%,经免疫组化染色半定量分析显示,cFLIP蛋白在子宫内膜腺癌中的表达水平显著高于增生期子宫内膜(P<0.01)和子宫内膜增殖症组织(P<0.05),而在后两种组织中其表达无统计学差异。子宫内膜腺癌cFLIP表达-、+、++、+++的各组中,PCNA标记指数分别为(12.01±2.07)%、(20.26±6.99)%、(27.10±3.01)%、(41.65±10.16)%,其与cFLIP表达水平密切相关(r=0.7471,P<0.01)。不同临床分期。

GnRH激动剂对子宫内膜异位症患者卵巢颗粒细胞细胞周期及抗凋亡蛋白cFLIP表达的影响

目的探讨GnRH激动剂(GnRHa)治疗对子宫内膜异位症(EMs)患者卵巢颗粒细胞细胞周期以及抗凋亡蛋白cFLIP表达的影响。方法共45例接受体外授精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的患者,其中EMs患者19例,随机分配至GnRH-a治疗组(A组,n=11)和常规长方案治疗组(B组,n=8例),另26例管性因素不孕的常规长方案治疗患者为对照组(C组)。各组取卵时收集卵泡液颗粒细胞,采用流式细胞仪检测细胞周期,Western blotting测定颗粒细胞cFLIP蛋白含量。结果三组的受精率、临床妊娠率、种植率及流产率差异均无统计学意义(P>0.05)。三组患者G0/G1期细胞比例的差异无统计学意义(P>0.05);A组和B组S期细胞比例显著高于C组,G2/M期细胞比例显著低于C组(P<0.05),凋亡峰显著高于C组(P<0.05);但A组与B组细胞周期各时相差异均无统计学意义(P>0.05)。C组卵巢颗粒细胞cFLIP蛋白表达水平显著高于A和B组(P<0.05),A、B两组cFLIP蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 EMs患者卵巢颗粒细胞凋亡升高,且细胞周期异常;延长的GnRH-a治疗并不改善这种异常以及抗凋亡蛋白cFLIP的低表达状态。

Fas、FasL及cFLIP在宫颈病变中的表达与宫颈癌发生发展相关性的初步探讨

背景与目的:虽然机体有一系列免疫监视机制,但肿瘤仍能发生并持续发展。本研究通过检测Fas、Fas配体(FasL)、cFLIP在宫颈癌及宫颈上皮内瘤样病变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)中的表达,探讨其在宫颈癌发生发展中作用。方法:应用免疫组织化学染色的方法,检测40例宫颈癌、20例CIN及20例正常宫颈上皮中Fas、FasL和cFLIP的表达,并进行相关临床病理因素分析。结果:Fas在宫颈癌和CIN中的阳性表达率(47.5%,45.0%)明显低于在正常宫颈组织的表达率(90.0%,P<0.05),其阳性表达率的高低与CIN的分级、临床分期及组织学分级有关(P<0.05);FasL在宫颈癌和CIN中的表达率(50.0%,40.0%)则明显高于正常宫颈组织中的表达率(5.0%,P<0.05),其阳性表达率的高低与CIN的分级,临床分期,及组织学分级有关(P<0.05),且有淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者(P<0.05);cFLIP在宫颈癌和CIN中的表达率(92.5%,70.0%)明显高于在正常宫颈组织中的表达率(10.0%,P<0.05),cFLIP的表达与CIN的分级有关(P<0.05),与宫颈癌的临床分期、组织学分级、病理类型、淋巴结是否转移无关(P>0.05)。Fas与FasL的表达呈负相关(ra=-0.69,P<0.05),cFLIP与Fas的表达密切相关(ra=0.368,P<0.05)。结论:宫颈癌细胞通过Fas低表达和FasL、cFLIP高表达逃避机体免疫监视并进行免疫反击以促使肿瘤发生、发展及转移。

结肠肿瘤cFLIP基因表达与p53突变的关系

目的:检测 cFIP_(short/long)在结肠肿瘤和癌旁组织的表达状况及其与p53基因突变的关系,初步探讨cFLIp在结肠肿瘤发生发展中的意义及p53对其调控作用。 方法:采用免疫组织化学法检测cnLIP在45例结肠腺癌、癌旁组织和42例结肠腺瘤组织中的表达,同时对以上45例结肠腺癌组织行免疫组化染色检测突变p53的表达状况。 cFLIP_(short/long)在结肠腺癌、癌旁组织和腺瘤中的表达差异采用多个样本两两比较的秩和检验(Nemenyi法),cFLIP_(short/long)和突变p53的表达关系采用t检验分析。 结果:cFLIP_(short/long)在结肠腺癌、癌旁组织和腺瘤中都有阳性表达,其染色记分均数分别为3.28±0.37、1.25±0.64和1.13±0.64。结肠腺癌组织的表达强度明显高于癌旁正常组织(3.28±0.37 vs 1.25±0.64,p<0.01)和腺瘤组织(3.28±0.37 vs 1.13±0.64,P<0.01)。60％结肠腺癌突变型p53呈阳性表达,cFLIP_(short/long)在突变型p53阳性组结肠腺癌中的表达水平明显高于突变型p53阴性组(3.74±0.35 vs 2.58±0.59,P<0.01)。 结论:cFLIP_(short/long)特异性高表达于结肠腺癌组织且在结肠肿瘤转化过程中是一较晚期事件,可能与肿瘤的进展有关。P53突变可使结肠腺癌cFLIP_(short/long)表达水平升高。

凋亡相关蛋白cFLIP及Caspase-8在宫颈鳞癌组织中的表达及意义

目的探讨凋亡相关蛋白cFLIP及Caspase-8的表达与宫颈癌发生、发展及浸润、转移的关系。方法应用免疫组化SP法检测46例宫颈鳞癌组织、21例上皮内瘤变(CIN)及26例正常宫颈黏膜组织中cFLIP及Caspase-8蛋白表达。结果宫颈鳞癌组织中cFLIP蛋白表达与癌的组织学分级、TNM分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05);Caspase-8蛋白表达与临床分期密切相关(P<0.05);在宫颈鳞癌癌变过程中cFLIP蛋白在癌组织、CIN组织及正常黏膜组织中的表达率依次降低,分别为76.09%(35/46)、47.62%(10/21)、15.38%(4/26),组间比较差异具有统计学意义(P<0.01);而Caspase-8蛋白在癌组织、CIN组织及正常黏膜组织中的表达率依次升高,分别为19.57%(9/46)、61.90%(13/21)、65.38%(17/26),组间比较差异具有统计学意义(P<0.01),cFLIP及Caspase-8的表达呈负相关关系。结论 cFLIP及Caspase-8在宫颈癌癌变过程中起着重要作用,可能成为宫颈鳞癌早期诊断和判断预后的分子指标。

cFLIP在早期自然流产绒毛组织的表达及意义

目的:检测早期正常妊娠及自然流产绒毛组织中细胞凋亡抑制蛋白cFLIPmRNA及其蛋白产物的表达,分析并探讨cFLIP与自然流产的关系。方法:应用RT-PCR法及免疫组化SP法检测cFLIP mRNA及其蛋白产物在20例自然流产患者(研究组)绒毛组织的表达,以同期正常妊娠要求人工流产20例为对照组。结果:研究组绒毛组织中cFLIP mRNA及蛋白表达明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:细胞凋亡抑制蛋白cFLIP参与维持正常妊娠,绒毛组织中其表达下降可能在自然流产的发生中起重要作用。

非小细胞肺癌组织中cFLIP和P53蛋白的表达

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中cFLIP、P53蛋白的表达及意义。方法采用免疫组化方法检测56例NSCLC组织和16例肺良性病变中cFLIP、P53蛋白表达情况,分析二者在肺癌组织学分型、分化程度、临床分期和淋巴结转移方面表达差异及其相关性。结果56例NSCLC标本中cFLIP和P53阳性表达率分别是58.9%(33/56)、62.5%(35/56),肺良性病变组织标本中阳性率分别是18.75%(3/16)和0%。cFLIP和P53在I、II期、无淋巴结转移组中的表达分别低于III、IV期和淋巴结转移组,而在病理组织学分型和不同分化组间无统计学意义。cFLIP和P53在肺癌组织中的表达呈正相关(r=0.328,P<0.05)。结论cFLIP和P53可以作为肺癌预后的评价指标,P53对cFLIP的表达可能有调控作用。

cFLIP、FADD在宫颈癌组织中的表达及意义

目的:研究cFLIP、FADD在宫颈癌组织中的表达,探讨cFLIP、FADD在宫颈癌发生、发展中的作用及其临床意义。方法:采用免疫组化(SP法)检测64例宫颈癌、15例CIN、12例慢性宫颈炎病例以及10例正常宫颈组织中cFLIP、FADD蛋白的表达,并检测宫颈癌中增殖细胞核抗原标记指数(PCNA-LI)。结果:cFLIP、FADD在宫颈癌中的表达与CIN、慢性炎症组及正常组中的表达差异有显著意义(P<0.01),宫颈癌组织中同时出现cFLIP的高表达和FADD的低表达。cFLIP的表达水平与PC-NA-LI呈正相关(r1=0.7738,P<0.01),FADD的表达水平与PCNA-LI成负相关(r2=-0.8011,P<0.01)。进一步分析发现,在宫颈癌中,肿瘤细胞分化越差,临床分期越晚,以及伴有癌细胞转移的淋巴结中,cFLIP高表达,而FADD低表达。cFLIP、FADD的表达与患者年龄、组织学分型无关。结论:cFLIP、FADD与宫颈癌的发生、发展和转移密切相关,可能是治疗宫颈癌的潜在靶点。

cFLIP在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的探讨肝病变组织中cFLIP与HBX的表达、相互关系及临床意义。方法免疫组织化学SP染色法检测120例肝癌、120例肝硬化组织及40例正常肝组织中cFLIP与HBX的表达情况。结果 cFLIP及HBX在正常肝组织、肝硬化与肝癌组织中的表达均依次增强(P<0.05)。Child A级组与Child B、C级组及肝癌组比较cFLIP表达有显著性差异(P<0.05),肝癌组与Child B、C级组比较无显著性差异(P>0.05)。cFLIP表达阳性率与肝癌病理类型、组织学分级、淋巴结转移及临床分期无关。Child B、C级组中HBX(+)组cFLIP阳性表达率高于HBX(-)组的表达率(P<0.05);肝癌、Child A级肝硬化组织中HBX(+)组和HBX组cFLIP阳性表达率无显著性差异(P>0.05)。结论 cFLIP与HBX在肝癌组织中特异性高表达,cFLIP的特异性高表达是肝癌变的个早期事件,并可能协同HBX在肝癌癌前病变向宫颈癌的发展过程中起重要作用,共同促进肿瘤的发生。

cFLIP在宫颈癌和宫颈上皮内瘤变组织中表达的意义

目的研究cFLIP在宫颈癌和宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)组织中的表达及其临床意义。方法应用SP免疫组化染色法检测40例宫颈癌,40例CIN和20例正常子宫颈组织中cFLIP的表达情况,并与病理类型、组织学分级、临床分期和是否有淋巴结转移等生物学行为进行相关分析。结果宫颈癌、CIN及正常宫颈组织中cFLIP的表达阳性率分别为92.5%、70%和10%,三组间两两比较有显著性差异(P<0.05)。CINⅠ级组与CINⅡ-Ⅲ级组及宫颈癌组比较有显著性差异(P<0.05),宫颈癌组与CINⅡ-Ⅲ级组比较差异无显著性(P>0.05)。cFLIP表达阳性率与宫颈癌病理类型、组织学分级、淋巴结转移及临床分期无关。结论cFLIP的特异性高表达是宫颈癌变的一个早期事件,可能在宫颈癌癌前病变向宫颈癌的发展过程中起重要作用。

胃腺癌组织中cFLIP mRNA的表达及细胞凋亡检测

目的:检测胃腺癌组织中cFLIP mRNA的表达及胃腺癌细胞的凋亡。方法:采用原位杂交技术检测45例胃腺癌、23例癌旁不典型增生及21例正常胃黏膜组织中cFLIP mRNA的表达;运用TUNEL法检测胃腺癌细胞凋亡情况,计算凋亡指数(AI)。结果:胃腺癌组织中cFLIP mRNA的阳性表达率高于正常黏膜及不典型增生组织(χ2=5.818和4.900,P=0.012和0.021)。胃腺癌组织中cFLIP mRNA的表达与其分化程度、浸润深度和淋巴结转移有关(χ2=6.171,16.291和6.799,P均<0.05)。胃腺癌组织中cFLIP mRNA阳性表达组AI值明显低于阴性表达组(t=7.425,P<0.001)。结论:cFLIP与胃腺癌的发生发展和浸润转移密切相关,并可能在抑制胃腺癌细胞凋亡中发挥重要作用。

cFLIP蛋白在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞凋亡的影响

目的检测cFLIP蛋白在胃癌组织中的表达及其与临床病理特征和胃癌细胞凋亡的关系。方法采用免疫组化(SP)法检测45例胃癌组织、23例癌旁非典型增生组织及21例正常胃黏膜组织中cFLIP蛋白的表达;原位末端标记(TUNEL)法检测胃癌细胞凋亡情况。结果 cFLIP蛋白在胃癌组织中的表达在癌旁非典型增生组织及正常胃黏膜组织中的表达差异有显著性(P<0.05)。胃癌组织中出现cFLIP蛋白的高表达和细胞凋亡的低表达,cFLIP蛋白的表达水平与细胞凋亡指数(AI)成负相关(r=-0.0016,P<0.01)。进一步分析发现,在胃癌组织中,肿瘤细胞分化越差,临床分期越晚,以及伴有癌细胞转移淋巴结中,cFLIP蛋白高表达。cFLIP蛋白的表达与患者年龄、组织学分型无关。结论 cFLIP蛋白与胃癌的发生、发展和转移密切相关并可能在抑制胃癌细胞凋亡中发挥重要作用。

Fas,FasL和cFLIP与宫颈癌研究现状

脂肪酸合成酶(Fas)是一种跨膜蛋白,属于肿瘤坏死因子(TNF)超家族。其与配体(FasL)相互作用是诱导细胞凋亡的主要途径之一。研究表明,Fas/FasL异常表达可引起肿瘤组织中细胞凋亡与增殖失衡。细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白细胞介素-1β转换酶抑制蛋白(cFLIP)是一种内源性凋亡抑制蛋白,可抑制多种凋亡受体,如Fas/FasL等诱导的细胞凋亡。近来发现,Fas/FasL、cFLIP在许多肿瘤组织中表达异常,可作为肿瘤治疗新靶点。已开展对三者在宫颈癌中的相关研究,将为宫颈癌诊断、治疗及预后判断提供新思路和手段。

cFLIP在压力超负荷诱导的心肌肥厚及纤维化中的作用

目的利用基因工程小鼠研究细胞型Fas相关死亡区域蛋白样β白介素-1转换酶抑制蛋白基因(cFLIP)在压力超负荷诱导的心肌肥厚及心肌纤维化中的作用。方法 cFLIP杂合子小鼠(heterozygote,HZ)和cFLIP野生型小鼠(wild type,WT)各20只分别随机分为模型组和假手术组,每组10只。主动脉缩窄术建立小鼠心肌肥厚模型,术后4周超声检测小鼠心室腔大小及左室短轴缩短率,组织病理学方法评价心肌肥厚及纤维化程度,实时定量聚合酶链式反应在mRNA水平检测心肌肥厚标志物心钠肽,脑钠肽,β-MHC以及心肌纤维化标志物结缔组织生长因子(CTGF),Ⅰ、Ⅳ型胶原(collagenⅠ,Ⅳ),TGF-β1。结果术后4周,HZ模型组较WT模型组和HZ假手术组心室腔增大,左室短轴缩短率下降(P<0.05,n=10);心肌肥厚及纤维化组织病理学检测及相关标志物表达水平模型组较假手术组升高(P<0.05,n=10),而HZ模型组表达增加程度较WT模型组更为显著(P<0.05,n=10)。结论cFLIP可抑制心肌肥厚及纤维化,对心功能起保护作用。

cFLIP与HPV-16 E7在宫颈组织中的表达及其相互关系

目的检测宫颈病变组织中cFLIP与人乳头瘤病毒-16E7(HPV-16E7)的表达,并研究二者在宫颈组织恶性转化过程中的作用及其相互关系。方法应用免疫组化SP染色法检测40例宫颈癌、40例宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及20例宫颈炎组织中HPV-16E7与cFLIP的表达情况。结果cFLIP在宫颈癌、CIN及宫颈炎组织中的阳性表达率分别为92.50%、70.00%及30.00%,两两比较差异均有统计学意义(均P<0.05);3种宫颈组织中HPV-16E7的阳性表达率分别为82.50%、75.00%及60.00%,两两比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。cFLIP、HPV-16E7表达阳性率与宫颈癌病理类型、组织学分级、淋巴结转移及临床分期无明显关系(均P>0.05)。cFLIP表达与HPV-16E7表达呈正相关(r=0.268,P=0.02)。结论cFLIP在宫颈癌组织中特异性高表达,可能通过抗凋亡作用及逃避免疫监视影响机体对HPV感染的免疫反应,并可能协同HPV-16E7影响细胞生长周期,在宫颈癌的恶性转化过程中共同促进肿瘤的发生、发展。

脂质体介导的cFLIP反义寡核苷酸对肾细胞癌的凋亡作用

目的探讨cFLIP反义寡核苷酸(ASODN)对肾细胞癌的抑制作用。方法设计合成cFLIP的ASODN,按不同浓度在脂质体介导下转染786-0肾癌细胞株,设无义(NSODN)和空白对照组进行比较。观察细胞的生长状态,Western blot检测cFLIP蛋白的表达,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测其凋亡率。结果与NSODN、空白对照组比较,ASODN组cFLIP蛋白表达显著降低(P<0.05),细胞抑制率(分别为10μmol/L组34.20%,20μmol/L组39.50%)显著增高,上述效应呈浓度依赖性;镜下观察ASODN转染细胞代谢衰退,当转染浓度至20μmol/L时,其凋亡率(56.11%)显著高于空白对照组(7.29%)和NSODN(4.69%)组。结论ASODN能特异性封闭肾癌细胞cFLIP基因的表达,并可抑制肾癌细胞的增殖,诱导其凋亡。