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Effects of Calmodulin-dependent Protein Kinase Ⅱ Inhibitor,KN-93,on Electrophysiological Features of Rabbit Hypertrophic Cardiac Myocytes 被引量:2
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作者 柯俊 陈锋 +6 位作者 张存泰 肖幸 涂晶 戴木森 王晓萍 陈兵 陈敏 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2012年第4期485-489,共5页
Cardiac hypertrophy is an independent risk factor for sudden cardiac death in clinical settings and the incidence of sudden cardiac death and ventricular arrhythmias are closely related.The aim of this study was to de... Cardiac hypertrophy is an independent risk factor for sudden cardiac death in clinical settings and the incidence of sudden cardiac death and ventricular arrhythmias are closely related.The aim of this study was to determine the effects of the calmodulin-dependent protein kinase(CaMK) Ⅱ inhibitor,KN-93,on L-type calcium current(I Ca,L) and early after-depolarizations(EADs) in hypertrophic cardiomyocytes.A rabbit model of myocardial hypertrophy was constructed through abdominal aortic coarctation(LVH group).The control group(sham group) received a sham operation,in which the abdominal aortic was dissected but not coarcted.Eight weeks later,the degree of left ventricular hypertrophy(LVH) was evaluated using echocardiography.Individual cardiomyocyte was isolated through collagenase digestion.Action potentials(APs) and I Ca,L were recorded using the perforated patch clamp technique.APs were recorded under current clamp conditions and I Ca,L was recorded under voltage clamp conditions.The incidence of EADs and I ca,L in the hypertrophic cardiomyocytes were observed under the conditions of low potassium(2 mmol/L),low magnesium(0.25 mmol/L) Tyrode’s solution perfusion,and slow frequency(0.25-0.5 Hz) electrical stimulation.The incidence of EADs and I ca,L in the hypertrophic cardiomyocytes were also evaluated after treatment with different concentrations of KN-92(KN-92 group) and KN-93(KN-93 group).Eight weeks later,the model was successfully established.Under the conditions of low potassium,low magnesium Tyrode’s solution perfusion,and slow frequency electrical stimulation,the incidence of EADs was 0/12,11/12,10/12,and 5/12 in sham group,LVH group,KN-92 group(0.5 μmol/L),and KN-93 group(0.5 μmol/L),respectively.When the drug concentration was increased to 1 μmol/L in KN-92 group and KN-93 group,the incidence of EADs was 10/12 and 2/12,respectively.At 0 mV,the current density was 6.7±1.0 and 6.3±0.7 PA·PF-1 in LVH group and sham group,respectively(P>0.05,n=12).When the drug concentration was 0.5 μmol/L in KN-92 and KN-93 groups,the peak I Ca,L at 0 mV was decreased by(9.4±2.8)% and(10.5±3.0)% in the hypertrophic cardiomyocytes of the two groups,respectively(P>0.05,n=12).When the drug concentration was increased to 1 μmol/L,the peak I Ca,L values were lowered by(13.4±3.7)% and(40±4.9)%,respectively(P<0.01,n=12).KN-93,a specific inhibitor of CaMKII,can effectively inhibit the occurrence of EADs in hypertrophic cardiomyocytes partially by suppressing I Ca,L,which may be the main action mechanism of KN-93 antagonizing the occurrence of ventricular arrhythmias in hypertrophic myocardium. 展开更多
关键词 calmodulin-dependent protein kinase KN-93 myocardial hypertrophy ELECTROPHYSIOLOGY perforated patch recording techniques
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MicroRNA-219 alleviates glutamate-induced neurotoxicity in cultured hippocampal neurons by targeting calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ gamma 被引量:2
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作者 Ting Wang Qun Cai +3 位作者 Wen-Jie Yang Hai-Hua Fan Jian-Feng Yi Feng Xu 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2018年第7期1216-1224,共9页
Septic encephalopathy is a frequent complication of sepsis,but there are few studies examining the role of micro RNAs(mi Rs) in its pathogenesis.In this study,a mi R-219 mimic was transfected into rat hippocampal ne... Septic encephalopathy is a frequent complication of sepsis,but there are few studies examining the role of micro RNAs(mi Rs) in its pathogenesis.In this study,a mi R-219 mimic was transfected into rat hippocampal neurons to model mi R-219 overexpression.A protective effect of mi R-219 was observed for glutamate-induced neurotoxicity of rat hippocampal neurons,and an underlying mechanism involving calmodulin-dependent protein kinase II γ(Ca MKIIγ) was demonstrated.mi R-219 and Ca MKIIγ m RNA expression induced by glutamate in hippocampal neurons was determined by quantitative real-time reverse transcription-polymerase chain reaction(q RT-PCR).After neurons were transfected with mi R-219 mimic,effects on cell viability and apoptosis were measured by 3-(4,5-dimethylthiazolyl-2)-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT) assay and flow cytometry.In addition,a luciferase reporter gene system was used to confirm Ca MKIIγ as a target gene of mi R-219.Western blot assay and rescue experiments were also utilized to detect Ca MKIIγ expression and further verify that mi R-219 in hippocampal neurons exerted its effect through regulation of Ca MKIIγ.MTT assay and q RT-PCR results revealed obvious decreases in cell viability and mi R-219 expression after glutamate stimulation,while Ca MKIIγ m RNA expression was increased.MTT,flow cytometry,and caspase-3 activity assays showed that mi R-219 overexpression could elevate glutamate-induced cell viability,and reduce cell apoptosis and caspase-3 activity.Moreover,luciferase Ca MKIIγ-reporter activity was remarkably decreased by co-transfection with mi R-219 mimic,and the results of a rescue experiment showed that Ca MKIIγ overexpression could reverse the biological effects of mi R-219.Collectively,these findings verify that mi R-219 expression was decreased in glutamate-induced neurons,Ca MKIIγ was a target gene of mi R-219,and mi R-219 alleviated glutamate-induced neuronal excitotoxicity by negatively controlling Ca MKIIγ expression. 展开更多
关键词 nerve regeneration brain injury septic encephalopathy miR-219 hippocampal neurons glutamate excitotoxicity apoptosis caspase-3 calmodulin-dependent protein kinase γ luciferase reporter gene system neuroprotection neural regeneration
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Ⅱ型cGMP依赖性蛋白激酶重组腺病毒载体的构建、鉴定及初步应用
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作者 屈睿 刘加宝 +3 位作者 桑建荣 任峰 赵爽 陈永昌 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2010年第1期36-39,51,共5页
目的:构建携带Ⅱ型cGMP依赖性蛋白激酶(PKGⅡ)基因的重组腺病毒载体,并以此初步研究PKGⅡ对增殖相关的MAPK信号转导的影响。方法:将PKGⅡcDNA片段自载体pRC/CMV-GKⅡ(wt)中切出,克隆至穿梭质粒pENTR 1A,用ClonaseⅡ将pENTR-PKGⅡ中的PKG... 目的:构建携带Ⅱ型cGMP依赖性蛋白激酶(PKGⅡ)基因的重组腺病毒载体,并以此初步研究PKGⅡ对增殖相关的MAPK信号转导的影响。方法:将PKGⅡcDNA片段自载体pRC/CMV-GKⅡ(wt)中切出,克隆至穿梭质粒pENTR 1A,用ClonaseⅡ将pENTR-PKGⅡ中的PKGⅡcDNA片段定向克隆到pAd/CMV/V5-DEST中构建pAd/CMV/V5-DEST-PKGⅡ(Ad-PKGⅡ)。重组质粒Ad-PKGⅡ用PacⅠ酶酶切,使其线性化,再用脂质体转染法转染HEK293A细胞进行包装和扩增,微量全细胞病变法检测病毒滴度,蛋白质印迹法检测重组腺病毒Ad-PKGⅡ感染细胞后PKGⅡ的表达以及MAPK通路关键成分胞外信号调节激酶(ERK)活性的变化。结果:重组腺病毒滴度达5×109pfu/ml,蛋白质印迹法检测显示重组腺病毒感染CS54细胞后使其PKGⅡ表达明显增高;在BGC-823胃癌细胞株,PKGⅡ对EGF导致的ERK的激活有明显抑制作用。结论:成功构建了携带PKGⅡ基因的重组腺病毒,初步证明PKGⅡ对细胞增殖相关信号转导有抑制作用,为进一步研究PKGⅡ与肿瘤细胞发生发展的关系提供了基础。 展开更多
关键词 cgmp依赖性蛋白激酶 腺病毒载体 DNA重组 胞外信号调节激酶
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cGMP依赖性蛋白激酶Ⅱ对胃癌细胞BGC-823迁移的影响
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作者 任峰 高倩 +4 位作者 陶燕 桑建荣 杨小明 范少华 陈永昌 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2010年第2期113-116,共4页
目的:研究cGMP依赖性蛋白激酶Ⅱ(cGMP dependent protein kinaseⅡ,PKGⅡ)对胃癌细胞株BGC-823迁移活动的影响,并对其作用机制进行初步探讨。方法:以携带PKGⅡ基因的腺病毒结构Ad-PKGⅡ感染胃癌BGC-823细胞,用蛋白质印迹法及免疫荧光检... 目的:研究cGMP依赖性蛋白激酶Ⅱ(cGMP dependent protein kinaseⅡ,PKGⅡ)对胃癌细胞株BGC-823迁移活动的影响,并对其作用机制进行初步探讨。方法:以携带PKGⅡ基因的腺病毒结构Ad-PKGⅡ感染胃癌BGC-823细胞,用蛋白质印迹法及免疫荧光检测感染病毒后PKGⅡ的表达。用特异性PKGⅡ激活剂8-pCPT-cGMP作用感染病毒的细胞,通过Boyden槽迁移率、刮除迁移分析法分析PKGⅡ高表达和活性增高对Ras同源性蛋白A(Ras homologA,RhoA)激动剂溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)诱导的胃癌细胞迁移的影响。结果:胃癌细胞株BGC-823在感染Ad-PKGⅡ后高表达PKGⅡ,经cGMP类似物8-pCPT-cGMP激活后,使RhoA活化诱导的细胞迁移活动受到明显抑制,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PKGⅡ能明显抑制胃癌细胞株BGC-823的迁移。 展开更多
关键词 cgmp依赖性蛋白激酶 胃癌细胞 细胞迁移
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Ⅱ型cGMP依赖性蛋白激酶抑制VEGFR2介导的人胃癌HGC-27细胞增殖
5
作者 章伟慧 伍敏 +4 位作者 庞吉 蓝婷 陶燕 吴燕 陈永昌 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2016年第2期108-112,118,共6页
目的:探讨Ⅱ型c GMP依赖性蛋白激酶(typeⅡc GMP-dependent protein kinase,PKGⅡ)对血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)介导的人胃癌HGC-27细胞增殖的影响及其作用机制。方法:应用编码PKGⅡ... 目的:探讨Ⅱ型c GMP依赖性蛋白激酶(typeⅡc GMP-dependent protein kinase,PKGⅡ)对血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)介导的人胃癌HGC-27细胞增殖的影响及其作用机制。方法:应用编码PKGⅡc DNA的腺病毒(Ad-PKGⅡ)感染HGC-27细胞,使其高表达PKGⅡ,并以特异性激动剂8-p CPTc GMP激活PKGⅡ。应用血管内皮生长因子-A(vascular endothelial growth factor A,VEGF-A)激活VEGFR2。MTT法检测细胞增殖;蛋白质印迹法检测p-VEGFR2、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated-protein kinase B,p-PKB/p-Akt)和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(phosphorylated-extracellular signal-regulated kinase,p-ERK1/2)表达;免疫共沉淀法检测PKGⅡ与VEGFR2的结合;免疫沉淀法联合蛋白质印迹法检测PKGⅡ对VEGFR2丝氨酸/苏氨酸(Serine/Threonine,Ser/Thr)的磷酸化作用。结果:VEGF-A可促进HGC-27细胞增殖,并诱导胞内p-VEGFR2、p-Akt和p-ERK1/2表达水平明显升高;以Ad-PKGⅡ感染HGC-27细胞使其高表达PKGⅡ并激活后,VEGF-A引起的细胞增殖受到明显抑制,pVEGFR2、p-Akt和p-ERK1/2表达水平显著降低;PKGⅡ可与VEGFR2相互作用,使后者丝氨酸/苏氨酸磷酸化。结论:激活的PKGⅡ可通过使VEGFR2发生丝氨酸/苏氨酸磷酸化抑制人胃癌HGC-27细胞的VEGFR2酪氨酸磷酸化,进而抑制其下游的增殖相关信号转导,最终抑制该细胞的增殖。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子受体-2 cgmp依赖性蛋白激酶 细胞增殖 胃癌HGC-27细胞
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ISO通过CaMKⅡ和PKA激活RyR2诱发心肌细胞凋亡
6
作者 张旭 王伟 汪和贵 《沈阳医学院学报》 2023年第2期121-126,共6页
目的:探讨异丙肾上腺素(ISO)持续激活Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)和蛋白激酶A(PKA)后对心肌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:将H9C2心肌细胞分为Control组、ISO组、ISO+KN93(CaMKⅡ抑制剂)组、ISO+H-89(PKA抑制剂)组,经不... 目的:探讨异丙肾上腺素(ISO)持续激活Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)和蛋白激酶A(PKA)后对心肌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:将H9C2心肌细胞分为Control组、ISO组、ISO+KN93(CaMKⅡ抑制剂)组、ISO+H-89(PKA抑制剂)组,经不同药物干预后,通过CCK-8法检测心肌细胞活力,Annexin V-FITC/PI细胞凋亡试剂盒和流式细胞术检测心肌细胞凋亡,Western blot法检测CaMKⅡ、PKA、兰尼碱受体2(RyR2)及凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase3、Bax、Bcl-2的表达情况,荧光显微镜观察细胞形态变化和钙荧光强度。结果:与Control组比较,ISO组细胞活性降低,CaMKⅡ、PKA和RyR2的磷酸化水平增加,凋亡蛋白Cleaved-Caspase3、Bax/Bcl-2表达增加,胞内钙含量增多,细胞凋亡率增多,差异均有统计学意义(P<0.01);与ISO组比较,ISO+KN93和ISO+H-89组细胞活性增高,CaMKⅡ、PKA和RyR2的磷酸化水平降低,凋亡蛋白Cleaved-Caspase3、Bax/Bcl-2表达减少,胞内钙含量减少,细胞凋亡率减少,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:ISO通过CaMKⅡ和PKA共同介导RyR2途径的磷酸化激活,并诱发心肌细胞凋亡。 展开更多
关键词 异丙肾上腺素 钙调蛋白依赖性蛋白激酶 蛋白激酶A 兰尼碱受体2 细胞凋亡
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慢性铝暴露对大鼠海马神经元PKC、CaMKⅡ、Ng的影响 被引量:9
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作者 邢伟 王彪 +4 位作者 郝凤进 许金华 赵岩 刘素媛 时利德 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期410-414,共5页
通过研究慢性铝暴露对大鼠学习记忆和海马长时程增强(long-term potentiation,LTP)的影响,并检测海马神经元蛋白激酶C(protein kinasec,PKC)活性及Ca2+-钙调蛋白激酶Ⅱ(Ca2+-calmodulin dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)和神经颗粒素... 通过研究慢性铝暴露对大鼠学习记忆和海马长时程增强(long-term potentiation,LTP)的影响,并检测海马神经元蛋白激酶C(protein kinasec,PKC)活性及Ca2+-钙调蛋白激酶Ⅱ(Ca2+-calmodulin dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)和神经颗粒素(neurogranin,Ng)蛋白表达的变化,探讨铝暴露损害学习记忆的作用机制.选用断乳后Wistar大鼠,以含有不同浓度AlCl3的蒸馏水进行饲养.3个月后,测定铝暴露组大鼠脑内和血中的铝含量;测量记录大鼠海马群体峰电位(population spike,PS)LTP;用改良Takai法测定海马神经元PKC活性变化;Western印迹法检测CaMKⅡ和Ng的蛋白表达.结果显示,与对照组相比,铝暴露组的PKC活性降低,差异有统计学意义(P<0·01);与对照组相比,铝暴露组的CaMⅡ蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0·05);与对照组相比,铝暴露组的Ng蛋白表达降低,且差异有统计学意义(P<0·05).实验结果说明:慢性铝暴露可以降低大鼠海马神经元PKC的活性及Ng和CaMKⅡ的蛋白表达,可能影响Ng磷酸化水平,从而影响CaM与Ng之间的亲和性,也影响Ca2+-CaM对CaMKⅡ的调节,抑制LTP的形成,损害学习记忆的功能. 展开更多
关键词 蛋白激酶C(PKC) Ca^2+-钙调蛋白激酶(CaMK) 神经颗粒素(Ng) 学习记忆
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左卡尼汀通过抑制钙/钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ信号通路抑制过氧化氢诱导的大鼠心肌细胞凋亡 被引量:8
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作者 戴红良 贾桂枝 +4 位作者 刘堃 梁春光 张林 张志刚 王洪新 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1250-1254,共5页
目的:观察左卡尼汀对过氧化氢(H2O2)诱导的大鼠心肌细胞凋亡的保护作用及其机制。方法:利用200μmol/L H2O2刺激12 h,建立体外原代培养新生乳鼠心肌细胞凋亡模型。Ca2+螯合剂1,2-双(2-氨基苯氧基)乙烷-N,N,N',N'-四乙酸(BAPTA)... 目的:观察左卡尼汀对过氧化氢(H2O2)诱导的大鼠心肌细胞凋亡的保护作用及其机制。方法:利用200μmol/L H2O2刺激12 h,建立体外原代培养新生乳鼠心肌细胞凋亡模型。Ca2+螯合剂1,2-双(2-氨基苯氧基)乙烷-N,N,N',N'-四乙酸(BAPTA)、钙调素依赖蛋白激酶II(CaMKII)特异性抑制剂KN93及左卡尼汀分别于加入H2O2前30 min或1 h加入,以检测这3种药物对H2O2刺激下心肌细胞活力、细胞凋亡、细胞内静息钙浓度([Ca2+]i)及磷酸化CaMKII(p-CaMKII)表达的影响。利用MTT比色法检测心肌细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;利用激光共聚焦扫描检测[Ca2+]i;蛋白质免疫印迹法检测cleaved caspase-3及p-CaMKII的表达。结果:模型组经200μmol/L H2O2作用12 h后,细胞活力显著下降,细胞凋亡率显著增加。BAPTA、KN93及左卡尼汀预处理显著抑制上述细胞损伤。进一步研究发现,H2O2诱导的[Ca2+]i水平升高、cleaved caspase-3及p-CaMKII的表达增加均可被上述3种药物不同程度地抑制。结论:左卡尼汀可抑制H2O2所致的心肌细胞凋亡,该心肌保护作用可能与其抑制Ca2+/CaMKⅡ信号通路有关。 展开更多
关键词 肉碱 过氧化氢 心肌细胞 细胞凋亡 钙调素依赖蛋白激酶
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姜黄素对快速老化小鼠学习与记忆功能及海马Ca^(2+)/CaMKⅡ水平的影响 被引量:7
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作者 孙臣友 戚双双 +3 位作者 孙淑红 周鹏 崔怀瑞 唐茂林 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期376-380,共5页
目的探讨不同浓度的姜黄素对快速老化小鼠(senescence-accelerated mouse,SAM)学习与记忆的影响和可能的机制。方法 将小鼠随机分为SAMR1正常对照组,SAMP8模型对照组,SAMP8+溶剂(花生油)对照组以及SAMP8+低、中、高浓度姜黄素处理组,... 目的探讨不同浓度的姜黄素对快速老化小鼠(senescence-accelerated mouse,SAM)学习与记忆的影响和可能的机制。方法 将小鼠随机分为SAMR1正常对照组,SAMP8模型对照组,SAMP8+溶剂(花生油)对照组以及SAMP8+低、中、高浓度姜黄素处理组,灌胃持续25天。实验结束次日,通过Morris水迷宫测试各组小鼠学习和记忆成绩的变化;测定各组小鼠海马组织[Ca2+]i浓度;通过Western blot和RT-PCR观测Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)和钙调蛋白(calmodulin,CaM)mR-NA在海马组织的表达情况。结果 SAMP8模型对照组小鼠隐蔽平台的逃避潜伏期明显延长;海马组织[Ca2+]i明显增高;海马膜中CaMKⅡ表达量降低;海马组织CaMmRNA的水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。经中、高浓度姜黄素处理的SAMP8小鼠隐蔽平台的逃避潜伏期显著缩短(P<0.01)。经低、中和高浓度姜黄素处理的SAMP8组小鼠海马组织[Ca2+]i均明显降低;海马组织膜中CaMKⅡ表达量均明显增加;海马组织CaMmRNA水平均明显增高(P<0.05,P<0.01)。结论 姜黄素能够通过降低海马组织[Ca2+]i超载,增加海马组织CaMmRNA水平及海马膜上CaMKⅡ表达来改善SAMP8小鼠的学习和记忆能力,此作用呈剂量依赖效应。 展开更多
关键词 快速老化小鼠 姜黄素 学习和记忆 钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶
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慢性强迫游泳应激抑郁模型大鼠行为学及海马Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ的变化 被引量:8
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作者 王海涛 刘昊 +2 位作者 徐爱军 阚泉 高俊玲 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期881-885,共5页
目的探讨慢性强迫游泳应激(CFSS)模型大鼠行为学的改变和海马神经元Ca2+/钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的表达变化。方法成年健康雄性Wistar大鼠60只,随机分为对照组(30只)和慢性强迫游泳应激组(30只)。慢性强迫游泳组强迫游泳4周,制备... 目的探讨慢性强迫游泳应激(CFSS)模型大鼠行为学的改变和海马神经元Ca2+/钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的表达变化。方法成年健康雄性Wistar大鼠60只,随机分为对照组(30只)和慢性强迫游泳应激组(30只)。慢性强迫游泳组强迫游泳4周,制备慢性强迫游泳应激模型;糖水偏好实验、开场实验和Morris水迷宫检测大鼠行为学改变;荧光探针标记法测定海马神经元内Ca2+浓度;胶体金免疫电镜、免疫印迹和RT-PCR检测CaMKⅡ的表达变化。结果慢性强迫游泳应激组糖水消耗量和糖水偏好百分比分别为4.114±0.644和86.610±4.450,对照组为8.157±1.105和94.930±2.893,差异有统计学意义(P<0.01);开场实验中慢性强迫游泳应激组和对照组的直立次数分别为1.75±0.96和6.00±0.82,差异有统计学意义(P<0.05);水迷宫实验逃避潜伏期分别为(20.762±3.236)s和(5.632±1.065)s,差异有统计学意义(P<0.01);海马神经元内游离Ca2+浓度分别为(498.94±40.45)nmol/L和(288.91±32.42)nmol/L,差异有统计学意义(P<0.01);CaMKⅡ蛋白和mRNA相对表达水平均高于对照组(P<0.01)。结论海马Ca2+及CaMKⅡ的表达上调,可能是抑郁模型大鼠情感行为异常的病理生理基础之一。 展开更多
关键词 慢性强迫游泳应激 海马 钙离子 钙调蛋白依赖性激酶 免疫电镜 免疫印迹 反转录-聚合酶链式反应 大鼠
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脾气虚大鼠骨骼肌组织钙调蛋白信号通路中CaM及CaMKⅡ基因表达变化 被引量:6
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作者 成映霞 段云燕 +9 位作者 段永强 程卫东 杨晓轶 杜娟 刘靓 朱立鸣 梁玉杰 安耀荣 高建德 田茸 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第13期3489-3491,3492,共4页
目的探讨脾气虚大鼠骨骼肌组织钙调蛋白信号通路中钙调蛋白(Ca M)、钙调素依赖蛋白激酶(Ca MK)Ⅱ基因表达变化规律。方法受试动物随机分为空白组、脾气虚模型组(7 d、14 d、21 d组),每组10只。除空白组外,其余受试动物采用复合法(苦寒... 目的探讨脾气虚大鼠骨骼肌组织钙调蛋白信号通路中钙调蛋白(Ca M)、钙调素依赖蛋白激酶(Ca MK)Ⅱ基因表达变化规律。方法受试动物随机分为空白组、脾气虚模型组(7 d、14 d、21 d组),每组10只。除空白组外,其余受试动物采用复合法(苦寒破气法、力竭法及饥饮失常法)成功建立脾气虚证大鼠模型后,在观察各组大鼠一般生存状态、脾虚证宏观证候积分、平均每日摄食量、平均每日体重增加量和负重游泳耐力的同时,采用实时荧光定量PCR技术检测骨骼肌组织Ca M信号通路中Ca M、Ca MKⅡ基因表达水平的变化。结果与空白组比较,脾气虚7 d、14 d、21 d组大鼠一般生存状况较差,脾虚宏观证候积分显著升高(P<0.05),平均每日摄食量、平均每日体重增加量和负重游泳耐力降低(P<0.05),骨骼肌组织Ca M、Ca MKⅡ基因相对表达量显著降低,且以脾气虚模型21 d组变化显著(P<0.05)。结论脾气虚大鼠骨骼肌组织Ca M信号通路中Ca M、Ca MKⅡ基因表现为低表达水平。 展开更多
关键词 脾气虚证 钙调蛋白信号通路 钙调蛋白 钙调素依赖蛋白激酶
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CaMK Ⅱ途径在慢性心衰模型触发性心律失常产生中的作用 被引量:6
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作者 方雁 张存泰 +3 位作者 刘念 蔡少艾 周仑 张敏 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期706-709,共4页
目的研究异丙肾上腺素和高频率刺激对心衰心肌细胞晚发后除极(DADs)产生的影响以及钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)途径在DADs产生中的作用。方法制备家兔慢性心衰模型,酶解法分离心室肌细胞,将细胞分为正常对照组(Ctl组)、正常对照+异丙肾上腺... 目的研究异丙肾上腺素和高频率刺激对心衰心肌细胞晚发后除极(DADs)产生的影响以及钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)途径在DADs产生中的作用。方法制备家兔慢性心衰模型,酶解法分离心室肌细胞,将细胞分为正常对照组(Ctl组)、正常对照+异丙肾上腺素干预组(Ctl+ISO组)、慢性心衰组(CHF组)、慢性心衰+异丙肾上腺素干预组(CHF+ISO组)、慢性心衰+异丙肾上腺素干预+KN93干预组(KN93组)。应用全细胞膜片钳技术记录动作电位(AP),采用含1μmol/L异丙肾上腺素的正钙蒂罗德液灌流心室肌细胞,在1~2Hz电刺激下,诱发心肌细胞产生DADs。在此基础上用KN93(1μmol/L)灌流心衰心肌细胞,观察CaMKⅡ的特异抑制剂KN93对DADs发生率、DADs的幅值、联律间期和发生个数的影响。结果灌流正钙蒂罗德液,并在1Hz电刺激下,Ctl组、Ctl+ISO组、CHF组、CHF+ISO组的DADs发生率分别为15.0%(3/20)、45.0%(9/20)、26.7%(12/45)、92.3%(36/39)。以含1μmol/L异丙肾上腺素和1μmol/L KN93的蒂罗德液灌流心衰心肌细胞,在1Hz电刺激下,KN93组的DADs诱发率为50%(7/14);再给予2Hz的刺激,记录到DADs的幅值为(1.82±0.78)mV、联律间期为(524.62±390.91)ms、个数为(2.42±0.90)。结论异丙肾上腺素和高频率刺激均可诱发心衰心肌细胞DADs的产生;模型应激状态下,KN93可以抑制慢性心衰心肌细胞DADs,CaMKⅡ信号转导途径可能是慢性心衰触发性心律失常产生的重要途径。 展开更多
关键词 慢性心衰 钙调蛋白激酶 晚发后除极 膜片钳技术
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丹参酮ⅡA注射液对急性心肌梗死大鼠钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ表达及心肌收缩力的影响 被引量:14
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作者 苏亚平 卜琳琳 +5 位作者 李平平 周利 高毓文 沈睿 卜斌 吴胜英 《中国中医急症》 2016年第2期204-207,共4页
目的观察丹参酮ⅡA注射液对急性心肌梗死大鼠钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)m RNA表达及心肌钙调蛋白(CaMK)的影响,分析其与心肌收缩力之间的相互关联及其机制。方法 40只大鼠按随机数字表法分为对照组,模型组,丹参酮A、B组,除对照组... 目的观察丹参酮ⅡA注射液对急性心肌梗死大鼠钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)m RNA表达及心肌钙调蛋白(CaMK)的影响,分析其与心肌收缩力之间的相互关联及其机制。方法 40只大鼠按随机数字表法分为对照组,模型组,丹参酮A、B组,除对照组外,模型组,丹参酮A、B组均采用结扎左侧冠状动脉前降支30 min再复灌30 min的方法建立大鼠急性心肌梗死动物模型。造模后丹参酮A、B组分别按2 m L/kg和2 m L/kg尾静脉注入丹参酮ⅡA磺酸钠注射液,1周后记录心电图病理性Q波出现次数,断头取心测定左心室缺血区组织CaMKⅡm RNA及CaMK表达,用Langendorff离体心脏灌流器灌流离体心脏以测定心肌收缩张力(IT)、舒张张力(DT)、心率(HR)。结果与模型组比较,丹参酮A、B组CaMKⅡm RNA表达及CaMK明显降低,心肌梗死缺血区范围缩小,IT明显增高、DT下降,病理性Q波出现次数减少(P<0.05),差异均有统计学意义,HR无变化,丹参酮A、B两组组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论丹参酮ⅡA注射液可能通过下调急性心肌梗死后心肌细胞CaMKⅡm RNA、Ca M表达,抑制Ca^(2+)与Ca M-CaMKⅡ信号转导途径,阻断Ca^(2+)过多内流使心肌正常除极而避免由钙超载诱导心肌梗死、扩张冠状动脉达到心肌缺血的保护作用。 展开更多
关键词 急性心肌梗死模型 丹参酮A注射液 钙调蛋白依赖性蛋白激酶 钙调蛋白 钙超载 心肌收缩力
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磷酸化钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ在大鼠脊髓背角C-纤维诱发电位长时程增强的诱导和维持中的作用 被引量:6
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作者 信文君 黎明涛 +5 位作者 杨红卫 张红梅 胡能伟 胡晓东 张彤 刘先国 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期83-88,共6页
实验旨在探讨钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin—dependent protein kinase Ⅱ,CaMKⅡ)在脊髓背角C-纤维诱发电位长时程增强(long-term potentiation,LTP)的诱导和维持中的作用。用Western blot技术分别检测LTP形成30 mi... 实验旨在探讨钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin—dependent protein kinase Ⅱ,CaMKⅡ)在脊髓背角C-纤维诱发电位长时程增强(long-term potentiation,LTP)的诱导和维持中的作用。用Western blot技术分别检测LTP形成30 min和3 h脊髓背角(L4-L6)CaMK Ⅱ的含量及其磷酸化水平。同时观察脊髓局部给予CaMK Ⅱ选择性抑制剂KN-93后对脊髓背角LTP和CaMK Ⅱ磷酸化的影响。观察结果如下:(1)诱导LTP后30 min.CaMK Ⅱ的磷酸化水平明显高于对照组,而CaMKⅡ的总量无变化;诱导LTP后3 h CaMK Ⅱ的磷酸化水平进一步升高,而且CaMK Ⅱ的总量也明显增加(n=4);(2)强直刺激前30 min 于脊髓局部给予CaMK Ⅱ的特异性抑制剂KN-93(100μmol/L),可阻断LTP的诱导,同时明显抑制CaMK Ⅱ的磷酸化水平;(3)诱导LTP后30 min给予KN-93,可显著抑制LTP的维持,同时CaMKⅡ的磷酸化水平与未用药组相比也明显降低(n=3);(4)LTP 3 h后给予KN-93,LTP的幅值不受影响,磷酸化的CaMKⅡ的含量与用药前相比也无差别(n=3)。根据上述实验结果可以认为,CaMK Ⅱ的激活参与脊髓背角C-纤维诱发电位LTP的诱导和早期维持过程。 展开更多
关键词 钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CaMK) KN-93 电位长时程增强(LTP) 脊髓背角 蛋白质印迹(Weterm blot)
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大鼠脑缺血后P-CaMKⅡ的表达与Ca^(2+)浓度的关系 被引量:6
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作者 李燕华 李吕力 +1 位作者 王铁建 董艳玲 《中国急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期436-438,共3页
目的探讨脑缺血后脑组织Ca2+浓度和磷酸化钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(P-CaMKⅡ)表达的变化及其相关关系。方法采用大鼠大脑中动脉阻断模型,干湿质量法测量脑组织含水量,免疫组化方法检测P-CaMKⅡ的表达,Fura-2/AM荧光法测定水肿周围Ca2+... 目的探讨脑缺血后脑组织Ca2+浓度和磷酸化钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(P-CaMKⅡ)表达的变化及其相关关系。方法采用大鼠大脑中动脉阻断模型,干湿质量法测量脑组织含水量,免疫组化方法检测P-CaMKⅡ的表达,Fura-2/AM荧光法测定水肿周围Ca2+浓度。结果与对照组相比,脑缺血后6 h,P-CaMKⅡ的表达、Ca2+浓度和脑含水量均开始上调,在脑缺血2~3 d表达最强;Ca2+浓度的变化与P-CaMKⅡ的表达强度呈正相关。结论脑缺血后由于细胞内Ca2+超载,导致CaMKⅡ磷酸化作用增强,它们可能共同参与了缺血性脑水肿的形成。 展开更多
关键词 脑缺血 脑水肿 钙离子 磷酸化钙调蛋白依赖性蛋白激酶
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阿尔茨海默病海马CaMKⅡ-α神经元表达的变化 被引量:9
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作者 王月菊 陈贵海 +1 位作者 周江宁 王芬蝶 《安徽医药》 CAS 2007年第1期64-66,共3页
目的观察钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ-α(Calcium/calmodulin-dependentProteinKinase-α,CaMKⅡ-α)在阿尔茨海默病(AD)患者海马的表达,了解AD患者海马表达CaMKⅡ-α改变与AD学习记忆丧失的可能关系。方法利用免疫组织化学和体视学方法定量分... 目的观察钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ-α(Calcium/calmodulin-dependentProteinKinase-α,CaMKⅡ-α)在阿尔茨海默病(AD)患者海马的表达,了解AD患者海马表达CaMKⅡ-α改变与AD学习记忆丧失的可能关系。方法利用免疫组织化学和体视学方法定量分析10例女性AD患者及年龄、性别等与之匹配的10例老年对照组海马不同区域CaMKⅡ-α神经元数目和染色强度的差异。结果AD海马CA1区CaMKⅡ-α阳性神经元数目显著减少,残存神经元免疫反应性显著增强。结论CaMKⅡ-α的表达在AD海马CA1区选择性受损,这可能与AD学习记忆丧失相关。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 钙调素依赖性蛋白激酶 海马
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铝暴露对大鼠海马CA1区长时程增强及α-CaMKⅡ活性的影响 被引量:3
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作者 宗志红 陈井阳 +3 位作者 孟晓娜 王彪 时利德 邢伟 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期636-637,共2页
目的:探讨慢性铝暴露对海马CA1区长时程增强(LTP)及钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(α-CaMKⅡ)活性的影响。方法:选择断乳后Wistar大鼠,分别以含有0.2%、0.4%、0.6%(W/V)的氯化铝(AlCl3)蒸馏水饲养。3个月后,测定脑铝、血铝的含量;用电极刺激... 目的:探讨慢性铝暴露对海马CA1区长时程增强(LTP)及钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(α-CaMKⅡ)活性的影响。方法:选择断乳后Wistar大鼠,分别以含有0.2%、0.4%、0.6%(W/V)的氯化铝(AlCl3)蒸馏水饲养。3个月后,测定脑铝、血铝的含量;用电极刺激海马的CA1区,记录单脉冲刺激引起的峰电位(PS),观察高频刺激前后各组的变化;用Westernblot方法,检测α-CaMKⅡ活性。结果:高频刺激后,铝暴露组PS幅值明显低于对照组(P<0.01);铝暴露组α-CaMKⅡ的活性和对照组相比明显降低(P<0.01)。结论:慢性铝暴露抑制大鼠CA1区LTP的形成,这种抑制可能与其抑制α-CaMKⅡ的活性有关。 展开更多
关键词 钙调素依赖性蛋白激酶 长时程增强 学习记忆
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沙土鼠脑缺血和再灌流后钙调素蛋白激酶Ⅱ活性变化及其与脑电图的关系 被引量:6
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作者 唐放鸣 张光毅 +1 位作者 赵文君 赵升皓 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 1992年第4期339-342,共4页
结扎蒙古沙土鼠双侧颈总动脉制作急性脑缺血模型,观察了急性脑缺血和再灌流后钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaM-PKⅡ)和蛋白磷酸酶(CaM-PrP)活性的变化以及脑电图(EEG)的表现。结果表明:(1)CaM-PKⅡ活性随缺血时间延长而逐渐降低,缺血10min... 结扎蒙古沙土鼠双侧颈总动脉制作急性脑缺血模型,观察了急性脑缺血和再灌流后钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaM-PKⅡ)和蛋白磷酸酶(CaM-PrP)活性的变化以及脑电图(EEG)的表现。结果表明:(1)CaM-PKⅡ活性随缺血时间延长而逐渐降低,缺血10min酶活性即显著降低;(2)缺血10min再灌流,CaM~PKⅡ活性可部分恢复;(3)急性脑缺血时CaM-PrP活性无明显改变;(4)缺血10min再灌流,EEG在1h基本恢复正常,缺血20min再灌流,EEG在3h仍未恢复正常。上述结果提示:CaM-PKⅡ活性对缺血非常敏感,而CaM-PrP活性对缺血不敏感,脑缺血再灌流后EEG的表现与CaM-PKⅡ活性有一定的相关性。 展开更多
关键词 脑缺血 GaM-PK 脑电图
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不同睡眠剥夺时间对大鼠海马和前额皮层Ng、PKC、CaMKⅡ mRNA表达的影响 被引量:9
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作者 张娜 刘洪涛 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期1355-1359,共5页
目的:探讨不同睡眠剥夺时间对大鼠海马和前额皮层神经颗粒素(Ng)、蛋白激酶C(PKC)、Ca2+-CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ) mRNA表达的影响。方法:雄性Wistar大鼠随机分为3组,即24h实验组、48h实验组和72h实验组,每组再分为睡眠剥夺组(SD组... 目的:探讨不同睡眠剥夺时间对大鼠海马和前额皮层神经颗粒素(Ng)、蛋白激酶C(PKC)、Ca2+-CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ) mRNA表达的影响。方法:雄性Wistar大鼠随机分为3组,即24h实验组、48h实验组和72h实验组,每组再分为睡眠剥夺组(SD组)和对照组(C组)。利用睡眠剥夺箱建立大鼠SD模型,Trizol一步法提取海马和前额皮层总RNA,用SYBR AgreenⅠ荧光定量RT-PCR测定Ng、PKC和CaMKⅡ mRNA水平。结果:(1)大鼠海马Ng mRNA水平在睡眠剥夺24h、48h和72h后,较对照组均显著降低(P<0.05),PKC和CaMKⅡ mRNA水平在睡眠剥夺48h和72h后显著降低(P<0.05);(2)在睡眠剥夺24h和48h后,大鼠前额皮层Ng、PKC和CaMKⅡ mRNA水平较对照组有降低趋势,在睡眠剥夺72h后均显著降低(P<0.05)。结论:睡眠剥夺可以使大鼠海马和前额皮层Ng、PKC和CaMKⅡ mRNA表达水平降低,且随着睡眠剥夺时间的延长,降低更为明显,这可能是睡眠剥夺损害认知功能的原因之一。 展开更多
关键词 睡眠剥夺 神经颗粒素 蛋白激酶C Ca2+-钙调蛋白依赖性蛋白激酶
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钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ在盐酸布比卡因诱导SH-SY5Y细胞损伤中的作用 被引量:2
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作者 文先杰 仲吉英 +4 位作者 张涛 赖晓红 刘洪珍 王汉兵 杨承祥 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1133-1136,共4页
目的探讨钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)抑制剂KN93对盐酸布比卡因诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)损伤的影响。方法 SH-SY5Y细胞随机分为4组(n=6):正常培养组(C组);KN93组(K组,KN93终浓度1μmol/L孵育24 h);布比卡因组(B组,... 目的探讨钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)抑制剂KN93对盐酸布比卡因诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)损伤的影响。方法 SH-SY5Y细胞随机分为4组(n=6):正常培养组(C组);KN93组(K组,KN93终浓度1μmol/L孵育24 h);布比卡因组(B组,盐酸布比卡因终浓度1 mmol/L孵育24 h);KN93+布比卡因组(KB组,KN93终浓度1μmol/L和盐酸布比卡因终浓度1 mmol/L孵育24 h)。孵育24 h后在显微镜下观察各组细胞形态改变及免疫印迹法检测各组细胞Cav3.1亚型T型钙通道(Cav3.1)蛋白的表达;在孵育前(T1)、孵育后1 h(T2)、6 h(T3)、12 h(T4)、24 h(T5)MTT法检测细胞活力及流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 SH-SY5Y细胞经1 mmol/L盐酸布比卡因处理后,细胞突触消失,胞体变圆;细胞活力降低;细胞凋亡率升高;Cav3.1蛋白的表达上调;1 mmol/L的KN93则可以减少盐酸布比卡因所致的上述改变的幅度。结论 Ca MKⅡ可能参与盐酸布比卡因所致的SH-SY5Y细胞损伤,且与上调Cav3.1蛋白的表达有关。 展开更多
关键词 细胞培养 钙调素依赖性蛋白激酶 盐酸布比卡因 细胞毒性
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